Diego Fernando Lopez Muñoz

Fundamentos de microscopía óptica

Aplicación de la microscopía en el

diagnóstico clínico

Curso 2013

13/02/2013

[2]

Contenidos1. Introducción2. Objetivo de inmersión3. Microbiología

3.1. Coloración de Gram3.2. Coloración de Zielh-Neelsen3.3. Microscopía de fluorescencia3.4. Microscopía de campo oscuro

4. Hematología 4.1. Coloración de Wright4.2. Coloración de gota gruesa

Fundamentos de microscopía óptica

[3]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Microscopía óptica

• Menos costosa• Límite resolución (200nm)• Luz visible• Células vivas, fijadas y teñidas• Objetivos 4x, 10x, 40x, 100x

Campo luminoso

Campo oscuro

Fluorescencia

[4]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Hace pleno uso de la apertura numérica consiguiendo mayor resolución

Objetivo de inmersión 100x

[5]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Objetivo de inmersión 100x

[6]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de GramPermite conocer la morfología celular bacteriana

Bacterias Gram Negativas Bacterias Gram Positivas

[7]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de GramEn función del color podemos conocer:

Forma

Agrupación

Tamaño

Diagnóstico

[8]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de Zielh-Neelsen

Pared celular de las micobacterias

1 Lípidos externos2 Ácido micólico3 Polisacáridos (arabinogalactano)4 Peptidoglicano 5 Membrana plasmática6 Lipoarabinomanano (LAM)7 Fosfatidilinositol manosido.

[9]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de Zielh-Neelsen Observación de

mycobacterium a 100x

[10]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Microscopía de fluorescencia

Fluorocromo

Muestra

Epifluorescencia

[11]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Microscopía de fluorescenciaEpifluorescencia

Diagnóstico de micobacterias Tinción con auramina

[12]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Microscopía de campo oscuro

Detección de espiroquetas (Treponema pallidium o

leptospira)

Bloquea los rayos centrales que alcanza al condensador logrando que el fondo aparezca negro y los especímenes brillantes.

[13]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Microscopía de campo oscuro

Treponema pallidumCausante de sífilis

LeptospiraCausante de Leptospirosis

[14]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de Wright

Tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre

Muy sensible a las variaciones de pH

[15]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de WrightTinción tipo

Romanowsky(Eosina y azul de

metileno)

Núcleos de leucocitos y neutrófilos

Eritrocitos

[16]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de gota gruesa Utilizada para diagnóstico

de malaria

Pueden parasitar al hombre: Plasmodium falciparum,

vivax, ovale y malarie.

[17]Fundamentos de microscopía óptica y electrónica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de gota gruesaTinción GIEMSA

Gameto de plasmodium vivax Formas anulares de plasmodium falciparum

[18]Fundamentos de microscopía óptica

Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología

Coloración de WrightDiagnóstico de anemias

Anemia megaloblástica Anemia drepanocítica

[19]Fundamentos de microscopía óptica

Gracias por su atención