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Rabia
Diagnostico y Perspectivasde Investigación
Rene Edgar CondoriInstituto Nacional de Salud
Que es la rabia?
Rabia es una enfermedadzoonotica que puedeafectar animales(mamiferos) silvestres, domesticos, y humans.
La RabiaProduce encefalomielitis agudaVirus neurotropico,Familia: Rhabdoviridae, genero Lyssavirus, Genotipo Rabia.Genoma ARN de polaridad negativa
El virus de la rabia presenta 2 El virus de la rabia presenta 2 estructuras antigestructuras antigéénicasnicas principales principales
1.1. Interno de naturaleza Interno de naturaleza NucleoproteNucleoproteíícacaque es especificoque es especifico
2.2. Externo de naturaleza Externo de naturaleza glicoproteicaglicoproteica ––responsable de la producciresponsable de la produccióón de n de anticuerpos.anticuerpos.
Diagnóstico
Las técnicas de detección del virus (diagnostico), son importantes para la determinación de la epidemiología de la enfermedad.
Diagnóstico de Rabia humana
Diagnóstico Clínico, de acuerdo a las manifestaciones predominantes se ha clasificado en dos formas (furiosa y paralítica). La única forma de sospechar la enfermedad y hacer el diagnóstico es el antecedente de contacto o mordedura, Diagnóstico diferencial: histeria. psicosis, poliomielitis, encefalitis por herpes simple, encefalitis post-vacunal, tétanos, síndrome de Guillen Barré, mielitis transversa, malaria cerebral y epilepsia, etc.
La enfermedad se diagnóstica ante-mortenpor la determinación de anticuerpos neutralizantes en LCR (Serológico), determinación de antígenos virales (virológico) en saliva o biopsia de piel nuca mediante técnicas de biología molecular y técnica de anticuerpos fluorescentes (biopsia) “constituyen las técnicas más confiable en las primeras fases de la enfermedad”
Diagnóstico de RabiaHumana
Diagnóstico Virológico post-Mortem
Finalidad, identificar la presencia viral – en tejido nervioso (Medula, Cerebelo, y Cerebro) mediante la detección de antígenosInmunofluorescencia Directa (1 – 3 días)Prueba biológica (21 días)Nombre del remitenteLugar y Fecha de recoleccionEspecie, (murcielago)
Importante
Inmunofluorescencia Directa(IFD)
Permite detectar de antígenos virales mediante anticuerpos fluorescente “Inmunofluorescencia Directa (IFD)”Técnica rápida de alta sensibilidad y especificidad,.Experiencia del técnico y calidad del conjugado.
Prueba Biologica
Permite realizar el aislamiento y confirmación del diagnostico de IFD ( 21 días)Aislamientos positivos son útiles para realizar estudios de caracterización antigénica (AcM) y genética (RT – PCR y Secuenciamiento).
Caracterización Antigénica
Finalidad, identificar los reservorios del virus de la rabia presente en una determinada área geográfica se realiza mediante el empleo de un panel de 8 anticuerpos monoclonales (Center for Disease Control And PreventionCDC - USA)
Patrones de reacción de las diferentes variantes antigénicas con los anticuerpos monoclonales
C1C1 C4C4 C9C9 C10C10 C12C12 C15C15 C18C18 1919 AgAg VV
CVSCVS ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ LabLab..
Perro/mangostaPerro/mangosta ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- ++ 11
Perro Perro ++ ++ -- ++ ++ ++ -- ++ 22
VampiroVampiro -- ++ ++ ++ ++ -- -- ++ 33
TadaridaTadarida BrasiliensisBrasiliensis -- ++ ++ ++ ++ -- -- -- 44
VampiroVampiro -- ++ VV ++ ++ VV -- VV 55
LasiurusLasiurus cinereuscinereus VV ++ ++ ++ ++ -- -- -- 66
Zorro de ArizonaZorro de Arizona ++ ++ ++ -- ++ ++ -- ++ 77
ZorriloZorrilo Centro/ SurCentro/ Sur -- ++ ++ ++ -- ++ ++ ++ 88
TadTad. . BraBra. Mex.. Mex. ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- 99
ZorrilloZorrillo ++ ++ ++ ++ -- ++ -- ++ 1010
VampiroVampiro -- ++ ++ ++ -- -- -- ++ 1111
Velasco-Villa, 2005 “Molecular epizootiology of rabies associated with terrestrial carnivores in Mexico”
CARACTERIZACION ANTIGENICACARACTERIZACION ANTIGENICA
1 2 3
5
Variantes antigénicas
Rabia urbana
Rabia silvestre
Caracterización GenéticaFinalidad, determinar la variabilidad genética de los virus según reservorio, se realiza mediante técnicas de biología molecular (RT – PCR y secuenciamiento genético ) gen de elección - Nucleoproteínael uso de ensayos moleculares y de la reacción en cadena de la polimerasa no es conveniente en el diagnóstico habitual de la rabia. “ Comité de expertos OMS”
Marcador de Peso
Molecular
Gen Amplificado
Análisis filogenético
Da Rosa, 2006 “Bat-transmitted Human Rabies outbreaks, Brazilian Amazon”
Serología
Solo es útil para determinar la respuestainmune despues de una vacunación y en la primeras fase de la enfermedad (LCR)El metodo a utilizar es la neutralizaciónviral, determina el titulo de anticuerposprotectores (personal de salud)
RED NACIONAL DE LABORATORIOS CAPACITADOS EN DIAGNOSTICO DE RABIA POR
IFD
LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL DE ZOONOSIS VIRALES
LABORATORIO CAPACITADO EN ELDIAGNOSTICO DE RABIA EN EL 2005
LABORATORIOS REGIONALES QUEREALIZAN DIAGNOSTICO DE
RABIA POR INMUNOFLUORESCENCIADIRECTA (IFD)
Perspectivas de Investigaciónen el Peru
Rabia es una encefalitis viral aguda y causaaproximadamente 55,000 muertes por año2007 alrededor del mundo (OMS)
Casos de rabia confirmado 2004 – 2008 (INS)
01
Zorro
350101080118162008
10302010801200201010516462007
92280401040214392006
67040803010301220319032005
570106010322232004
TotalPorcinoOvinoMurcielago
MonoHuman o
FelinoEquinoChoznaCaprinoCanBurroBovinoAlpaca
Epizootiología de la rabiaEpizootiología de la rabia
RESERVORIOS DE LA RABIA EN LAS AMERICASRESERVORIOS DE LA RABIA EN LAS AMERICAS
RABIA URBANARABIA URBANA RABIA SILVESTRERABIA SILVESTRE
RABIA ASOCIADO A MAMIFEROS TERRESTRESRABIA ASOCIADO A MAMIFEROS TERRESTRES
SUSCEPTIBLE SPECIES (DEAD ENDS)SUSCEPTIBLE SPECIES (DEAD ENDS)
Cats
VECTORSVECTORS
Ferrets
Perros
DogsVampire bat Big
brown bat
Silver hair bat
Red bat Free tail bat
Mapaches
Raccoons Gray foxes
Stripped skunkSpotted skunk
Arctic foxesCoyotes
Mongooses
RABIA ASOCIADO A MURCIELAGOSRABIA ASOCIADO A MURCIELAGOS
Cows Goatsand
Sheep
Humans andhorsesPigsBeavers and
woodchucks
Raccoondogs
ENZOOTIC RABIESENZOOTIC RABIES Fuente Diapositiva A. Velasco – Villa CDC -USA
Distribucion Global de rabia en mamiferos, reservorio y vectorRupprecht CE, The Lancet Infectious Diseases Vol 2 June 2002
Como determinar la relación genética de los virus ?
Construcción de árboles
filogenéticos
Ejemplo 1, Carnieli, 2006 “Molecular epidemiology of rabies virus strains isolatedfrom wild canids in Northeastern Brazil”
Ejemplo 2, Paez, 2007, “Molecular epidemiology of rabies in Colombia 1994–2005 based on partial nucleoprotein gene sequences”
Rene E. Condori, Omar Caceres
ANTIGENIC AND MOLECULAR ANTIGENIC AND MOLECULAR CHARACTERIZATION OF RABIES VIRUS CHARACTERIZATION OF RABIES VIRUS ISOLATES FROM HIGHLAND REGION ISOLATES FROM HIGHLAND REGION ““ALTIPLANOALTIPLANO”” IN PERU 1998 IN PERU 1998 –– 20032003
RenRenéé Condori Condori CondoriCondori, Andrés Velasco Villa, Omar Cáceres Rey, AlbinaDíaz Olivera, Ricardo López Ingunza
Laboratorio de Zoonosis Virales, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud. Capac Yupanqui 1400 – Jesús María. Lima, Perú
Viral and Rickettsial Zoonoses Branch, Division of Viral and Rickettsial Diseases, Centers for Disease Control and Prevention. 1600 Clifton Rd., Mail Stop G33, Atlanta, Georgia 30333, USA
0
20
40
60
80
100
120
140
160
1980 1982 1984 1986 1988 1990 1992 1994 1996 1998 2000 20020200400600800100012001400160018002000
Humanos Bovinos Gatos Otros Canes
Rabia en Perú 1980 - 2002Rabia en Perú 1980 - 2002
1998 1999 2000
2001 2002 2003
Rabies in Perú 1998 - 2003Rabies in Perú 1998 - 2003
LocalizacionLocalizacion de de losloscasoscasos de de rabiarabia en en
el el departamentodepartamento de de PunoPuno 1998 1998 -- 2003 2003
SPECIMENYear
TOTAL
2003
2002
2001
2000
1999
1998
61
04
03
17
05
19
17
Dog
03----------------
070101--------01----
05----------------
82010101020605
21--------0202
2901020403
17----------------
TOTALLlamaCatBatHumanPigCow
Rabies in wild and domestic animals in Peruvian Altiplano 1998-2003
Determinacion de variantes antigenicasDeterminacion de variantes antigenicas
Distribuciòn de casosen el departamento de Puno
Distribuciòn de casosen el departamento de Puno
37451-03dogPnper
7456-98dogPnper
40097-03dogPnper
8801-98dogPnper
40095-03dogPnper
4384-00dogPnper
22144-01cowPnper
8153-98dogPnper
37478-02dogPnper
7314-98dogPnper
7012-01dogPnper
709-99dogPnper
PeruDgAgV104
426-99dogPnper
10104-99pigPnper
1449-99humPnper
9807-99pigPnper
221-99humPnper
4387-00dogPnper
7015-01dogPnper
40787-01dogPnper
48182-03catPnper
44494-03dogPnper
40099-03dogPnper
40781-01cowPnper
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37476-02dogPnper
3851-00humMDper
EBL2
81
25
1
0
0
24
48
31
0.1
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10104-99pigPnper
1449-99humPnper
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8801-98dogPnper
37478-02dogPnper
40095-03dogPnper
37451-03dogPnper
4384-00dogPnper
PeruDgAgV104
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8153-98dogPnper
22144-01cowPnper
709-99dogPnper
40099-03dogPnper
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40787-01dogPnper
40781-01cowPnper
48182-03catPnper
5020-03LamPnper
37476-02dogPnper
7456-98dogPnper
7314-98dogPnper
7012-01dogPnper
32729-04foxPiuper
1766-07ChsMDper
9449-07HumCusper
NMRCD-peru
50031-05BurAyaper
Vampbtperu04
8284-02humMDper
494-99humApuper
179-99humApuper
9965-07goatApuper
9966-07humApuper
3851-00humMDper
42208-02goatPiuper
24938-02dogPiuper
28498-02donkeyPiuper
Duvenhage2
EBL2
51
13
55
68
67
42
60
35
56
2
2
11
7
60
72
57
62
70
20
7
8
0.05
Rabiaurbana
Rabia silvestre
Rabia en PerúRabia en Perú
9807-99pigPnper7015-01dogPnper221-99humPnper1449-99humPnper4387-00dogPnper10104-99pigPnper
8801-98dogPnper40095-03dogPnper8153-98dogPnper4384-00dogPnper
Blv1DgAgV140097-03dogPnper7456-98dogPnper
22144-01cowPnper709-99dogPnper7314-98dogPnper7012-01dogPnper
426-99dogPnper37478-02dogPnper37451-03dogPnperPeruDgAgV104
37476-02dogPnper40781-01cowPnper48182-03catPnper40787-01dogPnper5020-03LamPnper44494-03dogPnper40099-03dogPnper
Blv9DgAgV1Blv2DgAgV1
Blv8DgAgV1Blv4DgAgV1Blv5DgAgV1
ArgBlvDgAgV132729-04foxPiuper
USCAsk87PVRABVgp1NC 001542PV-vacper
CVS91vacperCVSvacperCVS51vacper
Arg1adgAgV2AY340784BlvdgAgV2
BrdgAgV2Blvlike3851-00humMDper
ColdgVG2consColdgVG1b
5530Colputhm0028498-02donkeyPiuper42208-02goatPiuper24938-02dogPiupertxusdg2361
BrhoarybtTdbrCidmtc
1766-07ChsMDper5596Colvalbt02
BrHT-likefromArgChiMxUkbtHtlike
BrTdbr2Brvampbt12
9449-07HumCusperBrvampbt13
179-99humApuper8284-02humMDper494-99humApuper9965-07goatApuper9966-07humApuper
Vampbtperu04ColDr6
ColDr7BrvampbtArglike
brhm4099VampbtBlv1
Brvampbt10VampbtArg
Brvampbt9NMRCD-peru
5462Colquidg9650031-05BurAyaper
Duvenhage2EBL2
68
80
70
44
94
45
10
20
6
11
13
18
73
5369
48
86
51
68
40
25
23
26
97
77
98
3298
86 5784
99
5352
59
18 18
18
29
43
7980 54
66
50
33
63
60
64
19
27
33
0.05
Casos de rabiaasociado a perros 1998
- 2003
Rabia asociado con animales silvestres
Rab
ia a
soci
ado
a pe
rros
en
el
Rab
ia a
soci
ado
a pe
rros
en
el
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AA
BB
CC
PERPUN9807-99
PERPUN1449-99
PERPUN426-99
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PERPUN5020-03
PERPUN48182-03
PERPUN37476-02
PERPIU32729-04
strain SAD B19
PERPIU28498-02
PERPIU42208-02
PERPIU24938-02
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PERAYA50031-05
PERAPU9965-07
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Duvenhage2
EBL2
10099
95
10093
67
92
74
86
62
67
99
68
0.05
Secuenciamiento parcial de la nucleoproteina
Virus de la rabia asociado a perros Virus de la rabia asociado a perros Puno y Bolivia Puno y Bolivia
Rabia asociado a perros n Rabia asociado a perros n Piura (PerPiura (Perúú))
Rabia asociado a perros Madre de Rabia asociado a perros Madre de Dios (PerDios (Perúú))
Rabia asociado a Rabia asociado a murcielagosmurcielagosPerPerúú
BolivdogAY340759
BolivdogAY340733
BolivdogAY340764
PERPUN8153-98
PERPUN4384-00
BolivdogAY340760
PERPUN9807-99
PERPUN1449-99
PERPUN7456-98
PERPUN709-99
BolivdogAY340758
PeruDgAgV104
PERPUN7314-98
PERPUN7012-01
Blv1DgAgV1
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PERPUN5020-03
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Blv9DgAgV1
Blv2DgAgV1
Blv8DgAgV1
Blv4DgAgV1
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strain SAD B19
Arg1adgAgV2
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BrdgAgV2Blvlike
PERPIU28498-02
PERPIU42208-02
PERPIU24938-02
5530Colputhm00
PERAPU9965-07
PERAPU179-99
Vampbtperu04
ColDr7
ColDr6
brhm4099
VampbtBlv1
PERAYA50031-05
NMRCD-peru
5462Colquidg96
Brvampbt10
Brvampbt9
VampbtArg
BrvampbtArglike
Duvenhage2
EBL2
8576
42
40
5
9
10
13
28
86
33
94
99
9999
96 27
99
6796
41
75
79
87 56
67
63
48
36
59
57
19
21
39
0.05
Secuenciamiento parcial de la nucleoproteina
JULIACA -HUMANA
JULIACA - CAN
JULIACA - CAN
CARACOTO - CAN
JULIACA - CAN
YUNGUYO - CAN
JULIACA - CAN
AZANGARO - CAN05
PICHICANI -CAN04
PUNO - ALPACA 05
PUNO - CAN 06
JULIACA - CAN 04
PUNO - CAN04
JULIACA - CAN03
SAMAN - CAN 04
DESAGUADERO - CAN05
YUNGUYO - CAN04
ZEP[ITA - CAN 03
DESAGUADERO - GATO03
YUNGUYO - CAN02
POMATA - CAN 02
POMATA - HUMANO05
POMATA - CAN06
POMATA - PORCINO 07
PIURA -ZORRO 04
PACASMAYO - CAN 03
ASCOPE - CAN04
SADB19M31046
10Mxyucdg95
412Mxyucdg02
PIURA- CABRA 02
PIURA - CAN 02
PIURA - CAN1 02
LAMBAYEQUE - CAN04
LIMA - CAN04
AF045166PerAmaz96
AF070449DesmodusrotundusBr97
SAN MARTIN - CAN 02
99
9684
99
6599
99
99
99
51
66
83
8456
52
2926
23
58
99
99
96
0.02
Rabia transmitida por perrosINS -CDC
Ayacucho y ApurimacLima, San Martin y
Lambayeque
Pasco - PozuzoMadre de Dios, Puno (ayacucho 2007, Cusco 2003
Amazonas, Cajamarca y San Martin
Desde Amazonas hasta Madre de Dios
Relacionado a Murcielagos insectivoros
Rab
iatr
ansm
itido
por
mur
ciel
agos
Investigacion - Propuesta
Estudio Piloto para determinar nuevosreservorios del virus de la rabia en areas de frontera y enzooticas.Rabia urbana ha disminuidoconsiderablemente, en los ultimos 7 añoshay incremento de los casos de rabiasilvestre.Casos en animales silvestres (Piura y Madre de Dios)
Propuesta de muestreo
San Ignacio – CajamarcaAyapata – PunoTambopata – Madre de DiosLa convencion, Paucartambo – Cusco Vilcashuaman, San Miguel – Ayacucho Chachapoyas – AmazonasTambogrande – Piura Rioja, Moyobamba – San Martin
Zorros pueden mantener y establecer ciclos independientes de transmision.
