copia de elaboracin de pno s

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE OPERACIÓN (PNO)

Contenido

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Datos generales del PNO..................................................................................................................1

1.0 Autorizaciones...........................................................................................................................2

2.0 Objetivo.......................................................................................................................................2

3.0 Alcance.......................................................................................................................................2

4.0 Responsabilidades....................................................................................................................2

5.0 Definiciones................................................................................................................................3

6.0 Seguridad................................................................................................................................... 5

7.0 Equipo, materiales y reactivos.................................................................................................5

8.0 Desarrollo del procedimiento...................................................................................................5

9.0 Criterios de aceptación...........................................................................................................10

10.0 Referencias bibliográficas....................................................................................................10

11.0 Formatos y anexos....................................................................................................................

11

1.0 Autorizaciones

Elaboró:

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Datos generales del PNOEQUIPO 5

Nombre del PNO: Hemocultivo

Elaboración y/o actualización del PNO:Responsable: analista

Frecuencia: anual

Fecha de emisión: sábado, 11 de diciembre de 2010

Vigente a partir de: lunes, 13 de diciembre de 2010

Departamento ó Área Bacteriología

Frecuencia de aplicación del PNO: Cada que se recibe y procesa una muestra para

hemocultivo

Próxima revisión: martes, 13 de diciembre de 2011

N° de revisión:“Hemocultivo ”

Laboratorio de Bacteriología

Nombre: Puesto: Firma: Fecha:

Antonio de Jesús Solórzano Calvario

Estudiantelunes, 13 de diciembre de 2010

Revisó y Aprobó:


Q.F.B. Juan Antonio Flores Cornejo

Profesor de la Materia control de calidad

farmacéutico y biológico

lunes, 13 de diciembre de 2010

Revisó y Autorizó:


MQC. Lorena Berenice Godoy Mejía

Responsable del Laboratorio de vinculación

Análisis clínicos y Bacteriológicos


MQC. Ma. Dolores Díaz de León

Responsable del area de Bacteriología.


2.0 ObjetivoIndicar los métodos adecuados para la correcta toma y procesamiento de muestras para Hemocultivo. Describir la técnica de siembra de hemocultivo para el aislamiento de bacterias cau-santes de infecciones del torrente sanguíneo.

3.0 AlcanceSe aplica para el aislamiento bacteriano a partir de hemocultivos en el diagnóstico bacteriológico de infecciones del torrente sanguíneo. Método para la toma de la muestra, conservación y transporte de la misma.

4.0 Responsabilidades4.1 Es responsabilidad del jefe del laboratorio:4.1.1 Planificar las acciones, organizar, controlar y capacitar al personal para cumplir las disposi-

ciones contenidas en el presente PNO4.1.2 Asegurar el control interno de la calidad, la idoneidad del personal, equipos, materiales,

reactivos e instalaciones.4.1.3 Asegurar la correcta disposición de los RPBI´s4.1.4 Asegurar la confiabilidad de los resultados emitidos por los analistas

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4.2 Es responsabilidad del profesional analista encargado, prestadores de servicio social y practicantes profesionales:

4.2.1 Seguir los pasos y recomendaciones indicados en este PNO al realizar un hemocultivo4.2.2 Trabajar con higiene y cuidado para evitar contagios innecesarios4.2.3 Manejar con precaución las muestras biológico-infecciosas4.2.4 Mantenerse actualizado y capacitado en la realización de un hemocultivo

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5.0 Definiciones. Se obtuvieron de una única fuente bibliográfica (10.2.2)5.1 Absceso: Acumulación localizada de pus en un tejido u órgano.

5.2Aeróbico: Un organismo que requiere oxígeno o aire atmosférico para su crecimiento y re-producción.

5.3Aglutinación: Reacción por la que se provoca la agrupación de partículas, bacterias y cé-lulas suspendidas en un medio líquido.

5.4Aislamiento primario: Desarrollo inicial de microorganismos a partir de una muestra clíni-ca

5.5 Antimicrobiano: Agente biológico o químico que inhibe el crecimiento de microorganismos5.6 Asepsia: Desinfección de un tejido vivo o piel.

5.7Bacteria: Microorganismo unicelular microscópico perteneciente a los procariotes que se multiplica por fisión binaria y carece de clorofila. Se diferencian por la coloración de Gram.

5.8Bacteria Gram negativa: Aquellas bacterias que no retienen el colorante primario (violeta de genciana o cristal violeta) en el método de Gram son decoloradas por el alcohol y toman el color del colorante contraste (safranina o fucsina) dando un color rojizo.

5.9Bacteria Gram positiva: Aquellas bacterias que retienen el colorante primario del método de Gram, resisten la decoloración por el alcohol y no son coloreadas por el colorante de contraste reteniendo el color azul púrpura inicial.

5.10

Bacteriemias: presencia de bacterias en la sangre. Las bacteriemias no demostradas son frecuentes y por lo general desaparecen espontáneamente. El diagnóstico se realiza por hemocultivo; cuando se instaura el tratamiento antibiótico debe ser específico para el organismo detectado y para la localización de la infección de comienzo.

5.11Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad hu-mana y del ambiente frente a diferentes riesgos producidos por agentes biológicos, físicos, químicos o mecánicos.

5.12Cepa bacteriana: Cultivo puro de bacterias formada por los descendientes de un solo ais-lamiento.

5.13Colonia: Crecimiento visible de microorganismos, generalmente en medios sólidos, origi-nado por la multiplicación de un solo organismo. Todos son la progenie de una única bacte-ria preexistente.

5.14Coloración Gram: Método de tinción basado en la propiedad de retener o no el colorante cristal violeta en la pared celular bacteriana debido a su composición bioquímica después de ser sometido a un tratamiento de decoloración

5.15Desinfección: Destrucción de las formas vegetativas de las bacterias en objetos inanima-dos. Se realiza con agentes químicos en estado líquido o con agua a temperaturas superio-res a 75 °C.

5.16 Desinfectante: Agente químico utilizado para el proceso de desinfección.

5.17Esterilización: Proceso validado que permite la eliminación de toda forma de vida micro-biana incluyendo endosporas bacterianas. Puede conseguirse por medio de métodos quí-micos, físicos o gaseosos.

5.18Hemólisis: Presencia de restos de eritrocitos lisados alrededor de una colonia desarrollada en una placa de sangre de carnero.

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5.19Hemólisis alfa: Las colonias están rodeadas por una destrucción parcial de los eritrocitos y pérdida de algo de hemoglobina en el agar lo que resulta en una coloración verde (hemóli-sis incompleta).

5.20Hemólisis beta: Las colonias están rodeadas por una zona de hemólisis completa (clara, transparente) debido a una destrucción total de los eritrocitos.

5.21Incubación: Mantenimiento de cultivos bacterianos en condiciones favorables para su de-sarrollo y multiplicación.

5.22Infección: Invasión y multiplicación de microorganismos en un huésped, pudiendo progre-sar hacia una enfermedad. El término enfermedad infecciosa se aplica cuando aparecen signos y síntomas como resultado de la infección.

5.23Medio de cultivo: Medio artificial de sustancias nutritivas necesarias para el crecimiento y multiplicación de las bacterias in vitro, que puede encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido.

5.24Metabolismo: Proceso de degradación y biosíntesis enzimática que tiene lugar dentro de una célula y por medio del cual se mantienen las actividades nutricionales y funcionales.

5.25Micraerofílico: Organismo que crece y se reproduce mejor en la presencia de una tensión del 5% de oxígeno, 10% de anhídrido carbónico y 85% de nitrógeno.

5.26 Microorganismo viable: Es aquel que es capaz de reproducirse.

5.27

Septicemia: infección sistemática caracterizada por la aparición de patógenos en sangre circulante procede de una infección localizada en cualquier parte del organismo. Se diagnostica por hemocultivo y debe tratarse energéticamente con antibióticos. Típicamente la septicemia produce fiebre, escalofríos, postración, dolor, cefalea, náuseas o diarrea.

5.28Siembra primaria: Inoculación de una muestra a un medio de cultivo simple, selectivo o de enriquecimiento.

5.29Subcultivo: Pasaje de bacterias viables derivadas de otro cultivo a un medio de cultivo nuevo.

5.30 UFC: Unidad formadora de colonia.

6.0 Seguridad6.1 Medidas de seguridad6.1.1 Observar las precauciones universales al manejar muestras de sangre. 6.1.2 Usar guantes al manejar cualquier fluido corporal.6.1.3 Si es posible hacer todo el procedimiento en cabinas de bioseguridad, o, en su defecto,

utilizar una pantalla transparente para manipular la muestra.6.1.4 Descartar las jeringas, agujas y otros objetos punzantes contaminados en un recipiente

especial.6.2 Equipo de seguridad6.2.1 Cubre boca6.2.2 Cofia6.2.3 Guantes de látex estériles

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6.2.4 Lentes de seguridad6.2.5 Bata

7.0 Equipo, materiales y reactivos

7.1 Equipo7.1.1 Incubadora7.1.2 Mechero Bunsen o Cabina de flujo laminar

8.0 Desarrollo del procedimiento

8.1 FundamentoEl hemocultivo es un procesamiento bacteriológico que se practica en los casos de septicemia, y que trabajado en forma adecuada suele ser de gran ayuda en el diagnóstico de algunas enfermedades de origen bacteriano.

Sin duda alguna el hemocultivo constituye un importante factor diagnóstico en diversas y numerosas infecciones que presentan bacteriemias transitorias e intermitentes, en las cuales las bacterias se encuentran en pequeñas cantidades.Los hemocultivos dan una proporción mas elevada de resultados positivos cuando el muestreo cumple con ciertos requisitos; tal vez sea el procedimiento bacteriológico más exigente en lo que representa a lo que se refiere al muestreo correcto, del cual depende grandemente el éxito del aislamiento de los microorganismos.

Dado que la tasa de mortalidad por septicemia puede ser de 40% o más en ciertos pacientes internados, la recuperación a tiempo de bacterias de la sangre del paciente (bacteriemia) puede tener un gran significado diagnóstico y pronóstico.

8.2 Indicaciones

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8.2.1 Debe obtenerse la muestra antes de iniciar cualquier tratamiento con antimicrobianos.8.2.2 La proporción entre el volumen de sangre obtenida y el volumen de caldo de cultivo

debe estar en una relación de 1:5 – 1:10.8.2.3 Se debe seleccionar un sitio diferente de punción en cada toma de muestra.8.2.4 Evitar sangrar de vía intravenosa o catéter arterial a menos que haya una sospecha de

sepsis por catéter.8.2.5 El volumen de sangre dependerá de la edad del paciente; por cada venopunción se

recomienda:Adultos: 10 – 30 mLNiños: 1 – 5 mLLactantes: 1 – 2 mLNeonatos: 0,5 – 1 mL

8.2.6 En sepsis: Se debe tomar dos o tres muestras de lugares diferentes en un lapso de diez minutos.

8.2.7 En endocarditis aguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes en un lapso de 1 a 2 horas.

8.2.8 En endocarditis subaguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes a intervalos de al menos quince minutos. Si el cultivo es negativo a las 24 horas, obtener tres muestras más.

8.2.9 En fiebre de origen desconocido: Obtener dos o tres muestras de lugares diferentes con diferencia de una hora o más entre una y otra muestra. Si el cultivo es negativo a las 24 horas, obtener dos a tres muestras más.

8.2.10 Pacientes con tratamiento antimicrobiano:a) Extraer 6 muestras durante 48 horas.b) Recolectar muestras inmediatamente antes de la siguiente dosis de antibiótico.

8.2.11 Fiebre de origen oscuro: (abscesos ocultos, fiebre tifoidea, brucelosis):a) Obtener 2 muestras separadas al inicio. Después de 24 a 36 horas obtener 2 más antes del aumento en la temperatura corporal.b) Los rendimientos positivos más allá de 4 hemocultivos son mínimos.

8.2.12 El uso de la botella anaeróbica es una práctica que se recomienda cuando hay sospecha clínica de infección por anaerobios. Según algunos autores, el uso de dos botellas aeróbicas mas el cultivo selectivo por anaerobios puede incrementar en un 6% el número de aislamientos clínicamente importantes.

8.3 Recomendaciones

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8.3.1 Tomar la sangre en el momento en que la temperatura del paciente se encuentra elevada (es decir media hora antes del pico febril) u otros síntomas de infección activa, y lo más cerca del principio clínico de la enfermedad, etapa en la que se haría el muestreo más adecuado

8.3.2 La obtención de rutina de tres hemocultivos en 24 horas nos da como resultado un aumento significativo de resultados positivos.

8.3.3 Tomar las tres muestras en periodos diferentes esto es antes, durante y después del pico febril.

8.3.4 En los casos de bacteriemias de ser necesario practicar hemocultivos durante varios días.

8.3.5 Alternativamente, las muestras pueden obtenerse de acuerdo con el caso. Por ejem-plo:• Bacteriemias continuas: en cualquier momento, ejm. Endocarditis.• Bacteriemias intermitentes: Una hora antes del pico febril, ejm. Brucelosis.

Profesional analista

8.4 Toma de la muestra8.4.1 Elegir la vena palpando la piel antes de desinfectarla.8.4.2 Limpiar la piel alrededor del lugar donde se hará la punción, en un círculo

de 5cm de diámetro haciendo la limpieza del centro a la periferia, con alcohol al 70% y menthiolate, frotando vigorosamente.

8.4.3 Aplicar yodo al 2% círculos crecientes comenzando por el centro hasta cubrir con yodo toda la superficie anterior. Deja actuar el yodo durante 1 minuto por lo menos. El tiempo es crítico, debe usarse un reloj o un “timbre”.

8.4.4 Si el sitio deber ser tocado por técnico, éste debe desinfectar sus dedos en la misma forma.

8.4.5 Insertar la aguja en la vena y extraer 10ml de sangre.8.4.6 Una vez extraída la aguja, debe limpiarse el área nuevamente con alcohol

al 70% ya que muchos pacientes son sensibles al yodo.-Transferir la sangre a los frascos a través del diafragma o del tapón previamente desinfectado y seco.

8.4.7 Utilizando los siguientes medios: Medio sólido líquido Infusión de cerebro y corazón con o sin PABA y agar Caldo soya tripticasa Caldo teoglicolato – 135°C Caldo glucosado con 0.05% de líquido

8.4.8 Mezclar la sangre con el medio de cultivo para evitar coagulación.8.4.9 Llevar 1ml de sangre extraída a un tubo conteniendo alguno de los

siguientes medios, fundidos y enfriados a 45°C Agar soya tripticasa Eugonagar Agar Columbia

8.4.10 Mezclar bien y hacer vaciado en placa.

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8.5 TransporteProfesional analista

8.5.1Este proceso debe ser realizado en el laboratorio o por un profesional de la salud con el conocimiento de la técnica.

8.6 ConservaciónProfesional analista

8.6.1Solo para el analista debe conservar los hemocultivos hasta por 30 días antes de dar un resultado negativo


8.7 Procesamiento de la muestra8.7.1 Incubar a 37°C durante siete días observando si existe turbidez en el

medio.8.7.2 Incubar a 37°C las botellas o matraces (en posición inclinada si el medio

es sólido-líquido) y placas a 37°C y en atmósfera de CO2 si se desea o se requiere.

8.7.3 Observar diariamente, agitando los medios líquidos suavemente después de observarlos y colocar el medio sólido-líquido en posición horizontal durante 30 minutos para bañar el medio sólido con la mezcla del medio líquido y sangre y volver a incubarlo en posición vertical.

8.7.4 la observación de los medios de cultivo consiste en: -si se observa turbidez en el caldo y el medio sólido la germinación al frasco se le acopla un tapón o capucha por el cual saldrán solo la cantidad de medio que se requiera sin que se contamine el resto del medio. -cambio de color en la sangre (normalmente depositada bajo la forma de una capa roja en el fondo del recipiente o sobre la superficie del medio sólido en el medio doble). -hemólisis -formación de burbujas en el caldo. -cuando se observe germinación bacteriana, preparar frotis, teñidos al Gram.

8.7.5 conforme los resultados obtenidos en la observación microscópica. Proseguir la identificación mediante subcultivos en agar sangre, medios de aislamiento selectivo diferencial (EMB, agar sulfito de bismuto, agar MacConkey) y medios para las pruebas bioquímicos diferenciales.

8.7.6 Los hemocultivos deben examinarse de menos cada 48 horas. Después de las 24 horas de incubación.

8.7.7 se retira una gota del cultivo, con todas las precauciones de asepsia, con un asa o jeringa pequeña, con este material se siembra en una agar sangre una placa en anaerobiosis y otra en aerobiosis o incluye en CO2 si los cultivos son negativos a las 24 horas.

8.7.8 se repite el estudio a los 14 y 21 días antes de desechar los medios.

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8.7.9 Antes de desechar el frasco del medio sólido-líquido se recomiendo hacer una resiembra en un caldo teoglicolato observar germinación y realizar la identificación.

8.7.10 Practicar antibiograma a las cepas patógenas aisladas.

8.7.11 No debe de dar por negativo un hemocultivo hasta después de 30 días de no observar crecimiento alguno.


8.8 Reporte de hemocultivos8.8.1 Reporte verbal.

8.8.1.1a) Telefonear inmediatamente después de confirmar un cultivo positivo por Gram.

8.8.1.2b) Indicar el nombre de la persona que llamó, la fecha y hora de la llamada.

8.8.1.3

c) Proveer el máximo de información posible: número de muestras positivas, morfología y arreglo microscópico, cultivos positivos de otros sitios anatómicos. Un reporte de cocos Gram-positivos en cadenas es más útil que uno de cocos Gram-positivos solamente. Un reporte de E. coli a partir de un urocultivo y un bacilo Gram-negativo en el hemocultivo pueden sugerirle al clínico la posible fuente de infección.

8.8.2 Reporte escrito.

8.8.2.1a) Proveer una copia de todos los resultados preliminares (no crecimiento o positivos por Gram).

8.8.2.2 b) Proveer una copia de los resultados finales.

8.8.2.3c) Indicar la duración de la incubación en los reportes negativos: “No crecimiento a los 7 días”

8.8.2.4 d) Reportar identificación y antibiograma de los cultivos positivos.

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9.0 Criterios de aceptación

9.1 Flora normal y flora patógena

FLORA NORMAL FLORA PATÓGENA

GRAM POSITIVOS NegativoCualquier bacteria que se encuentra

GRAM NEGATIVOS NegativoCualquier bacteria que se encuentra

9.2 Valores normales

9.2.1 Negativo

9.2.2Al observar los medios, si no se observan las alteraciones el cultivo es negativo, que son evidentes en los casos positivos.

9.2.3Debe tenerse presente que la incubación prolongada de la sangre en un hemocultivo, usualmente provoca la desintegración de los eritrocitos lo que causa turbiedad y cambios de color, aún en presencia de germinación bacteriana.

9.2.4

Es fácil comprobar la contaminación de un hemocultivo por el aspecto del crecimiento y morfología microscópica de los gérmenes banales, cuyo resultado puede ser la causa de una esterilización incorrecta del equipo, aseo deficiente de la piel, exposición prolongada al aire fuera de la llama, la siembra del medio de cultivo e inoculo.

10.0 Referencias bibliográficas

10.1 Documentos mandatorios

10.1.1NORMA Oficial Mexicana NOM-045-SSA2-2005, Para la vigilancia epidemiológica, prevención y control de las infecciones nosocomiales.

10.1.2Koneman E, Allen S, Dowell V, Sommers H. Diagnóstico microbiológico. 3a ed., Buenos Aires. Editorial Médica Panamericana. 1992.

10.1.3Murray, P. R. (Ed.). Manual of Clinical Mícrobiology, Sixth Edition. 1995. American Society for Microbiology: Washington,D.C.

10.2 Fuentes bibliográficas adicionales consultadas

10.2.1

Miller J. Michael, Holmes H. Specimen collection, transport and storage. En: Murray PR, Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC. Yolken RH. Manual of Clinical Microbiology. 7a ed. Washington DC: American Society for Microbiology; 1999. pp 33 – 63.

10.2.2

Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de infecciones respiratorias agudas. Curso Teórico Práctico. En: Diagnóstico de laborato-rio de infecciones respiratorias agudas y enterovirus. Lima. 1999.

10.2.3Bone, R. C. Gram-negative sepsis: a dilemma of modem medicine. 1993. Clinical Microbiology Reviews, 6:57-68.

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11.0 Formatos y anexos

11.1 FormatosNombre del formato Código

11.2 AnexosAnexo Nombre

A Cuadro 1. Definiciones en la sepsis por Gram-negativos

B Cuadro 2. Factores de nesgo en sepsisC Cuadro 3.Manejo clínico de la sepsisD Cuadro 4. Agentes etiológicos de endocarditis infecciosa

ECuadro5. Sistemas de hemocultivos automatizados y

computarizadosF Cuadro 6. Signos visibles de crecimiento en hemocultivosG Diagrama de flujo

ANEXO APágina 12 de 16



ANEXO BPágina 13 de 16



ANEXO C

ANEXO D

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ANEXO E

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ANEXO F

ANEXO G

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Diagrama de flujo:

MuestraObtenida

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