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clase p2 -01 estructura química y clasificación de los colorantes

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Un bloque humedo es dificil de cortar orientación de los bloques tiene q ser la correcta, el caso mas común es la piel.( de mas blando a mas duro es la forma adecuada de cortar) es mejor corar de 4 micrones a q de 2 y se destruya • cuando uno saca una cinta los primeros cortes son mas gruesos (expansión termal) con el tiempo de corte • uniformidad de giro de la manivela • Angulo navaja • condición de la navaja de corte • Entre las consideraciones q afectan el grosor de corte: se debe usar una navaja nueva un angulo de 10. • cortes tibios tienden a generar estatica. • desgaste del bloque se hace en tibio para saber si el tejido es duro o blando, los cortes generalmente sa hacen en frio, pero hay excepciones en tejidos mas celulares, un corte frio va a salir mas parejo y uniforme. la experiencia no la sustituyenada • usar un lado de la navaja con el filo nuevo para cortar y otro sector para desgastar. • cuando no sale la cinta hay q enfriar el corte o bloque (toalla nova con hielo sin ensuciar) • los corte de manera lenta son óptimos • cuando salga un corte no debe parar, se pierde el ritmo y se produce artefacto de corte alternado. • EXPERIENCIASA PARA HACER BUENOS CORTES el baño de flotación debe ser de 5 a 9° C bajo el punto de fusión de la parafina. (54‐58)la T° agua 45° C (hay parafinas de distinto punto de fusión) • asegurarse de q agua este libre de burbujas ( uso de agua bi‐destilada), cuando suben las burbujas estas quedan debajo del a muestra, cuando hay burbujas el tejido no queda adherido a la muestra. Si este tejido se seca se producirán agujeros en la muestra. ( se rompe el tejido antes de procesar) • el lado brillante debe estar hacia abajo, para q no se formen burbujas. • ocupar un porta limpio para dejar tejido y otro para recoger ( limpio) • hay q recoger con un barrido suave en Angulo de 90° • el tejido debe ser analizado en el agua ( ver las imperfecciones del corte) • recoger corte centrado con una cinta y en ángulo recto, asegurándose de q escurra el agua. • se recomienda q el agua este limpia, por q los trozos de parafina hacen q se rompa el tejido o se desprenda • la medida ideal de agua es hasta donde se vea el rotulado en el porta. • tener bien rotulado el porta • sacar adecuadamente el porta objeto con las muestras y dejar en forma vertical 10 min • BAÑO DE FLOTACION secado no debe superar los 65°C • el secado debe ser al menos 1 hora para asegurar q el corte no se desprenda. • el secado en IHQ debe ser toda a noche 24H 37*c ( el secado depende de la temperatura °) • SECADO cuidados están establecidos en el EQ 1.1 EQ1.2 EQ1.3 ambito 5 EQ , ambito 6 INS • (ENCARGARNOS DE LA PREVENCION PREVENTIVA)hacer una extensión de garantía xq la gente q calibra debe ser capacitada. cada ves q ocupo el equipo debe quedar limpio, es a diario.( no limpiar con xilol, daña las piezas de plástico) • Limpiar com,paño seco sin pelusas. • lubricar equipos. • mantención una ves al año. • CUIDADOS CON EL MICROTOMO ERRORES DE CORTE ( mirando al microscopio) Parafina arrastra tejido o corte muy rapido q no permite la dilatación. B) Soluciones no tamponadas - COLORACION • La forma en la cual el colorante se une al tejido son todas las formas de unión. No hay ningun mecanismo de acción distinto a estos excepto el método de impregnación. La coloración es un evento químico q esta mediado por alguna de estas cuatro formas de unión. En cambio la impregnación se caracteriza por ser un método físico ( ej. Nitrato de plata) Fuerzas electromagneticas - Enlaces covalentes - Puentes de hidrogeno - Fuerzas de Van DerWalls - FORMAS DE UNION Una coloracion es un evento quimico mediado por estas cuatro formas de union. Una impregnacion es un metodo fisico ( como las tinciones argenticas) como el nitartode plata y sales metalicas pesada q se posan sobre los tejidos. Los tejidos animales son incoloros. Tincion: es la union molecular del colorante activo con algún componente del tejido. Colorante: sustancia química compleja que confiere color a otro cuerpo modificando químicamente su estructura, lo que significa su resonancia. Acidos - Básicos - Neutros - Indiferentes - Metacromaticos - Tipos de colorantes De acuerdo a sus propiedades químicas TIPOS DE COLORANTES Naturales - Artificiales - Según origen: 1. NATURALES: Los colorantes se extraen de ciertas plantas y animales. ‐ Origen animal: Carmín: viene de la cochilla , tiñe el glicogeno, es algo parecido al PAS ( en una tecnica q se llama carmin de best) ‐ Origen vegetal: Hematoxilina (es el colorante universal de los núcleos y es el mas utilizado en la histologia actual, se extrae de un arbol el campeche. Orceína (utilizado para fibras elasticas y tambien se extrae de un arbol) Orceina unatancer Azafrán: es un colorante que no tiene utilidad en la tecnica histologica ARTIFICILES: Colorantes se obtienen a partir de anilina. Son sales producidas de la unión de una base y un ácido. Genéricamente se les conoce como colorantes derivados de la anilina. La anilina es un compuesto incoloro cuyas modificaciones químicas producidas en el anillo bencénico le confieren a los compuestos nuevos un color determinado. ( benceno un compuesto incoloro q tiene una longitud de onda de 200nm). son todos sales (derivados de la anilina) • DEACUERDO A PROPIEDADES QUIMICAS Acidos - Básicos - Neutros - Indiferentes - Metacromatico - *Colorantes ácidos, Básicos y neutros poseen un componente ácido y uno básico. pero solo uno de ellos se encuentra activado (para ácido y básico); en el caso del neutro, ambos grupos se encuentran activados. *La tinción con colorantes indiferentes es una tinción física, utilizada principalmente en la identificación de lípidos. Ácidos: P roducto de la unión de un cromógeno de baja intensidad débilmente básico al que se le añaden grupos auxocromos fuertemente acido lo que le dan dicho carácter al colorante tiñe estructuras básicas celulares en el citoplasma celula. sal: báse incolora y el componente ácido tiene color ( es activo) - colorantecitoplasmático - carga negativa (‐), - colorante aniónico. - Las sustancias que atraen eléctricamente a los colorantes ácidos se denominan acidófilos. - *Ej: Eosina, Fucsina ácida, Ac. Pícrico, Orange G, safradina , cristal violeta. Básicos: Asociación de un cromógeno de baja intensidad y de carácter débilmente ácido al que se le añade grupos auxocromos catiónicos fuertemente básicos que son los responsables de la carga global del colorante por eso se utilizan para teñir estructuras ácidas. Sal: base es coloreada y su porción ácida es incolora. - Colorante nuclear , afinidad por ácidos nucleicos (DNA, RNA) - Reaccionan con los grupos fosfato de los ácidos nucleicos. - carga positiva (+) - colorante catiónico. - *Ej: Azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno, que debe su propiedad colorante a la base azul de metileno y no al HQ, que es incoloro. *Otros ej. es la laca de Hematoxilina (que es levemente acido pero el mordiente le da la caracteristica básica) , Tionina, Azul de Toluidina, Fucsina básica. Colorantes Neutros: unión colorante ácido y básico para formar un precipitado comúnmente insoluble en agua y muy estable en disolución alcohólica de esta forma siendo su carga floral neutra conservan en parte la propiedad de colorear conjunta o separadamente diferentes estructuras dependiendo de que sean o no capaces de atrapar algunos iones generando cuando la sal se disocia tras ser inestabilizada al colocarla en disolución acuosa. Ejemplo Giemsa. Sal parte básica como la ácida proporcionan color. - Tiñe simultáneamente los componentes nucleares y a los citoplasmáticos. - Son colorantes exclusivamente utilizados para hematalogia - El colorante neutro tiene una particularidad y es que son mezclas de colorantes. - preparar en etanol. - *Ej: Eosinato de azul de metileno (Wright, May Grunwald giemsa, giemsa, papenhem) - giemsa = azul A + azul B + eosinato de sodio entonces los patologos lo ven como solo un colorante que tiñe de distintos colores. - Colorantes Indiferentes: En condiciones normales colorean los tejidos por un mecanismo de impregnación física no poseen carácter ácido, básico o salino definido por ejemplo la tinción argéntica. Compuestos no iónicos incapaces de la disociación electrolítica, no forman sales - No tiene afinidad por ninguna estructura del tejido. (no es ionico) - Mecanismo tinción más bien físico, no químico. - prepara en alcohol de 70º (solvente), son insolubles en agua. - Se disuelven mejor en lípidos que en el solvente Lipofilico (colorantepor solubilidad diferencial mecanismo fisico de tincion). - tiene afinidad por el lipido ( lipofilicos), hidrófobos y no tiene ninguna posibilidad de disolverse en el agua. Entonces hay que probar con distintas graduaciones de alcoholes ej, el OH de 95° se disuelven los colorantes pero disuelve el lipido, en cambio el OH de 70° es un buen solvente de los colorantes, y cuando se han disuelto y estan en contacto con un tejido graso, va haber una competencia entre el OH de 70° y la grasa y el colorante se deposita con mayor facilidad en la grasa. Es una tincion fea pero bastante eficiente, porque dondeuno quiera encontrar grasa se va teñir negro. - *Tiñen sustancias quetienen un poder disolventesuperioral del líquido queha servido para preparar la solución colorante.Tiñen por solubilidad diferencial ( mas solubleen el soluto q en el solvente). *Ej: Sudan negro, Sudan III y IV La importancia de identificar lípidos en el tejido se da en la biopsia muscular (músculo no se contrae en presencia de lípidos. Se analiza si éste conserva glicógeno) y en la biopsia cerebral (ésta se da en casos de autopsia) Biopsias en cortes congelados exclusivamente. - Se usan en cortes congelados. Colorantes Metacromáticos : en condiciones normales la mayor parte de los colorantes tiñen los tejidos con un color parecido a él, esta propiedad es la ORTOCROMASIA, sin embargo cuando se utilizan ciertos colorantes básicos derivado de la anilina algunas estructuras titulares se tiñen con tonos diferentes al que cabria esperar por el colorante usado. Por ejemplo los gránulos de los mastocitos presentan color rojo con el azul de metileno o el azul de toluidina, este efecto es la METACROMASIA y estructuras teñidas LA CROMOTROPAS, los colorantes metacromáticos son sustancias químicamente puras y no de carácter salino. La explicación se cree que se debe a que se produce una polimerización entre las moléculas de colorante adyacente a las estructuras a teñir. Existen estructuras como son por ejemplo glúcidos complejos o cartílago que se observan mejor con estos colorantes metacromáticos. CLASIFICACION Ortocromacia: tejido adquiere una coloración igual a la de la solución empleada. Metacromacia: Son colorantes BASICOS (químicamente sustancias puras) Un componente del tejido se tiñe con un color diferente al color empleado. todos son basicos - Polimeriza y dependen del tejido ya q este tiene q tener moléculas anionicas. - No todos los colorantes basicos son metacromaticos - Son tionina , azul de toluidina, azul de metileno - Existe metacromacia de distintos tipos son 3 (dependedel poli anión q este en el tejido) 1) Alfa ‐‐ >PO4 ( fosfato) ‐‐‐ >azul. A) Beta ‐‐ > COOH ( carboxilo) ‐‐‐ >violeta B) Gama ‐‐ > SO2 , SO3 ( sulfato) ‐‐‐ >rojo C) son 6 los poli aniones'? ANFOTEROS: no son colorantes Neutros son colorantes metacromaticos como el azul de metileno.(basicos). METODOS DE COLORACION QUIMICOS Directos: afinidad directa x el tejido (eosina) x el citoplasma del tejido (electroestatica) Indirectos: Requiere de intermediarios (mordiente) para que la coloración tenga lugar (el mas comun la hematoxilina) C.I 75290 Ej: Hematoxilina. por si sola no tiñe, es un colorante inactivo, hay que oxidarlo para que tiña y un mordiente para que se una al tejido. ( cada ves que se quiera mejorar la tinción y el brillo se aplica un mordiente). Coloración5 HematoxilinaCI: 75290 Se procede a teñir con hematoxilina durante 7 min (este tiempo es relativo ya que depende del estado de la hematoxilina) por si sola la hematoxilina no tiñe, siendo la hemateina una hematoxilina madurada por oxidación con oxido rojo de mercurio, yodato de sodio u otro método de oxidación, natural o químico. Esta hemateina tiene que ser acompañada de un mordiente, el mordiente es el que se une al tejido corresponde a una sal metálica bi o tribalente que le permite al colorante unirse al tejido con más de un enlace. Este es sulfato de K y Al (en Hx de Harris), formando así una laca. Hematoxilina oxidada ( Hemateina + mordentada (Al o cation)) ( quelato + tejido ) = laca mordiente: Un ión metálico polivalenteque forma complejos de coordinación con ciertos tintes. Quelato: Un complejo de coordinación formado entre un ión (cation) de metal polivalente y ciertos tintes. este es soluble en agua si tiene una valencia de 3 (unido a 3 hemateinas y esta estabilizado) HM+ cation + tejido = laca Diferenciación Se realiza con Alcohol Ácido OH‐Cl2 solo un dipping ya que este tiende a sacar mucho el colorante, esto es una extracción selectiva de el exceso de colorante, por lo general 0,5% ‐ ácido clorhídrico 1% en etanol al 70% (alcohol de ácido estándar). Si es suficiente observaremos el (núcleo celular) ya q es este el objetivo, y no teñir toda la muestra de hematoxilina, si nos excedemos lavamos con agua corriente, luego destilada y trataremos de re‐teñir. Y continuamos con la técnica. Azulamiento Cuando se aplica a partir de un medio ácido, como la mayoría de hematoxilinas estas son, el color inicial rojo ladrillo. Este color no es permanente y se debe cambiar a azul. La fase roja de alumbre‐hemateína es soluble, y se filtrará lentamente de las estructuras en cualquier medio, incluso bajo el cubreobjetos. La fase azul es insoluble y generalmente se considera que es permanente El cambio se realiza alterando el pH. Es habitual colocar las secciones teñidas y diferenciados en un medio alcalino por un par de minutos para convertir la mancha, a continuación, a lavar con agua para eliminar todo lo que se utiliza para modificar el pH. El medio más simple es agregar unas gotas de amoniaco sólido con un poco de agua hasta que tenga un pH de aproximadamente 9 a 10, a continuación, colocar las secciones en ella hasta que estén uniformemente azul. Otros agentes azulado son adecuados son la solución 0,1‐1% decarbonato de litio, acetato de sodio al 0,5%, 2% debicarbonato de sodio o una solución más compleja, como sustituto del agua del grifo. En el caso del laboratorio usaremos borax o también llamado borato de sodio durante (30 segundos). Después de azular pasamos por agua destilada continuando con la eosina. Progresivos: cuando la solución de tinción se le deja actuar lentamente hasta alcanzar el efecto deseado. Se hace actuar al colorantehasta quellegue a su punto optimo, este lo determina el usuario. - Se recomienda para tejidos muy celulares, amígdalas, ganglios (se debe conocer el tiempo optimo del colorante). - el problema es q es una tincion demaciado variable - caracter corto 1 min - Regresivo: Se realiza una sobrecoloración y luego se elimina el resto del colorante por medio de diferenciadores (elimina coloración específicamente). se ocupa mas en ellaboratorio - Aquí se sobretiñe el tejido y después se diferencia, aquí se extrae selectivamente el exceso, ejemplo si teñimos por 10 minutos en hematoxilina, sacamos y lavamos en agua destilada, veremos teñidos los núcleos las fibras elásticas, algunas membranas basales débil, tinción citoplasmática también débil, fibras musculares y colágenos muy débiles como celeste, lo que se hace como vamos a aplicar un segundo colorante, necesitamos sacar el exceso de colorante selectivamente sin quitar la tinción del nucleo, por lo que se usa un reactivo, que es la combinación de acido clorhídrico 1% con alcohol de 70ͦ◦ , que nos permite mediante un solo paso sacar el exceso y luego al lavar en agua va a quedar blanco todo lo que no sea nucleo = tinción regresiva concepto muy importante, este proceso nos permite volver atrás y recuperar la tinción en caso de que se me haya olvidado sacar las placas en hematoxilina. También es útil cuando no hay mas tejido y necesito hacer una tinción especial, entonces tomo una placa que esta teñida con H/E y la blanqueo para hacer la nueva tinción. - La eosina se va con el alcohol de 95 entre 10 a 15 minutos. Para desteñir una placa con H/E hago todo el proceso inverso, ej para desmontar dejo la placa en xilol, luego hidratar empezando con alcohol de 100. Es este método que se usa también para teñir una muestra endoscópica antes de la inclusión, con el objetivo de diferenciarla, se quita luego con alcohol y no interfiere con la posterior tinción solo que se deja por menos tiempo en la eosina Simple: Se utiliza solo un colorante para teñir algún componentecelular o tisular. Combinado: compuesta o combinada: Aplicación de varios colorantes con la finalidad de destacar, mediante diferentes colores, estructuras específicas. La coloración compuesta puedeserSimultánea o Sucesiva. Por ejemplo la HE ‐ Simultánea: Se producecuando en una misma solución de coloración se mezclan varios colorantes (todos los ácidos funcionan de esta manera).NO SON NEUTROS ( un solo baño varios colrantes) Son distintos colorantes en un solo baño, generando una tinción variada. En tricromicos podemos usar giemsa scarlett con fucsina acida= 2 clorantes acidos distintos. OJO en tricromicos como veremos mas adelante si hay mezclas pero son neutras. ( ejemplo de simultanea ponceau) ( las células superficiales intermedias de cuello uterino son orageofilicas), tiñen de distintos colores distintos etstratos del epitelio. Sucesiva: Consiste en aplicar a los tejidos soluciones sucesivas de varios colorantes, con la finalidad que ciertos componentes se tiñan con algunos de ellos. - Panoptico: Coloración combinada con colorantes neutros actuando sucesivamente, son variosbaños sucesivos.( colorantes neutros) Pancromica: Utiliza solo colorantes neutros en un solo baño, ejemplo el Giemsa, se usa para tejido hematopoyético, parasitos y microorganismos en general, se pone 30 minutos en el baño, se lava, se pasa por alcoholes, se monta y listo. GIEMSA Ortocromatico : nucleo Azul Metacromatico: prolongacion de las estructuras hematologicas. Si la mezcla no tiene eosinato y metanol, la mezcla no saldra como lo esperamos - Son estos 2 requisitos Eosinato de sodio - Metanol - APRENDERSE : progresiva, regresiva, pancromica y panóptica. Teorías de la coloración. A los radicales químicos responsables de la modificación molecular a la que se debe la aparición del color se le llama grupo cromóforo y se denomina cromógeno al conjunto formado por el grupo cromóforo y el anillo bencénico. Cromógeno no es sinónimo de colorante ya que el cromógeno no siempre tiene apetencia por el tejido o no se une fuertemente al tejido. Etileno --------------------------------------- (>C=C<) Carbonilo --------------------------------------- (>C=O) Tiazólico --------------------------------------- (>C=S) Imino --------------------------------------- (>C=N) Azoico --------------------------------------- ( - N=N - ) Orange G; rojo congo; sudanes; ponceau S Nitroso --------------------------------------- ( - N=O) Nitro --------------------------------------- ( - NO) La conversión del cromógeno en colorante está vinculada a la adicción sobre la molécula cromática de otros grupos atómicos que la confieren o le dan la oportunidad de disociarse electrolíticamente o de formar sales con los diferentes tejidos. Estos radicales se los denomina grupos auxocrómos o potenciadotes del color. Generalmente tienen carga eléctrica es decir posee carácter ácido o básico y son los responsables de que el colorante tenga mayor o menor afinidad por la estructura que va a teñir. Clasificación de los colorantes según los Grupos Cromóforos. • Los grupos auxocrómos de importancia son: el grupo hidroxilo, carboxilo, amino, sulfidrilo y determinados iones derivados del Fe, Cr, Al y del Mb. En función del grupo cromógeno que contienen. Existen 8 grupos de colorantes: Nitrocolor ante Colorante azoico Antraquin ona Acridina Oxacina Azul de nilo Tiacina Azur A; azur B; Azul de metileno; tionina ; azul de toluidina Acina Difenilmetanos; rojo neutro; safranina Trienal metano Fucsina acida; fucsina basica ( rosanilin); Cristal violeta; Xianteno Ftalocianina de Cobre Clasificación de los colorantes según los Grupos Auxocrómos y Apetencia Tisular. • El código - numérico nos remite a lo que se denomina C.I. que es el Índice Calorimétrico del colorante que nos sirve para identificarlo y lleva 5 dígitos. Cinco grupos fundamentales: 1º) Colorantes Básicos: asociación de un cromógeno de baja intensidad y de carácter débilmente ácido al que se le añade grupos auxocromos catiónicos fuertemente básicos que son los responsables de la carga global del colorante por eso se utilizan para teñir estructuras ácidas. Ejemplo: laca de hematoxilina - colorante nuclear. Fucsina básica Galocianina 2º) Colorantes Ácidos: productos de la unión de un cromógeno de baja intensidad débilmente básico al que se le añaden grupos auxocromos fuertemente acido lo que le dan dicho carácter al colorante tiñe estructuras básicas celulares en el citoplasma celular: Eosina - C. Citoplasmática / Fucsina - Ácida. 3º) Colorantes Neutros: unión colorante ácido y básico para formar un precipitado comúnmente insoluble en agua y muy estable en disolución alcohólica de esta forma siendo su carga floral neutra conservan en parte la propiedad de colorear conjunta o separadamente diferentes estructuras dependiendo de que sean o no capaces de atrapar algunos iones generando cuando la sal se disocia tras ser inestabilizada al colocarla en disolución acuosa. Ejemplo Giemsa. Las estructuras así coloreadas adquieren una tonalidad policroma = multicolor. 4º) Colorantes Indiferentes: En condiciones normales colorean los tejidos por un mecanismo de impregnación física no poseen carácter ácido, básico o salino definido por ejemplo la tinción argéntica. 5º) Colorantes Metacromáticos : en condiciones normales la mayor parte de los colorantes tiñen los tejidos con un color parecido a él, esta propiedad es la ORTOCROMASIA, sin embargo cuando se utilizan ciertos colorantes básicos derivado de la anilina algunas estructuras titulares se tiñen con tonos diferentes al que cabria esperar por el colorante usado. Por ejemplo los gránulos de los mastocitos presentan color rojo con el azul de metileno o el azul de toluidina, este efecto es la METACROMASIA y estructuras teñidas LA CROMOTROPAS, los colorantes metacromáticos son sustancias químicamente puras y no de carácter salino. La explicación se cree que se debe a que se produce una polimerización entre las moléculas de colorante adyacente a las estructuras a teñir. Existen estructuras como son por ejemplo glúcidos complejos o cartílago que se observan mejor con estos colorantes metacromáticos. Teoría del Proceso de Coloración o Mecanismos de Coloración • Los métodos de tinción se fundamentan en una serie de procesos fisicoquímicos complicados que venían según los colorantes algunos son todavía desconocidos no se sabe si la coloración se efectúa por procesos físicos o químicos. Aunque ambas teorías intervienen y además se produce una serie de procesos complicados que entran en el campo de la físico - química (aunque el proceso de coloración la - M. Físicos: ligados a las propiedades de disolución e impregnación del colorante sobre el tejido, el colorante es más soluble en el tejido que en el disolvente que actúa como medio de transporte, suele ser agua, un ejemplo: la tinción para grasas, en esta el colorante se disuelve mas fácil en los lípidos titulares que en la solución alcohólica siguiendo reglas de la difusión para el colorante de la solución colorante a las estructuras de su predilección también el proceso de impregnación se basa en m. Físicos en este caso el colorante tiene un gran volumen molecular o bien se hace una precipitación selectiva en forma de agregados insolubles de manera que el colorante queda atrapado entre la mellad e células y fibras que constituyen los tejidos. - M. Químicos : La reacción entre colorante y tejido ocurre por procesos químicos bien definidos de manera que al interaccionar se produce un nuevo cromógeno responsable del color obtenido, los procedimientos que se fundamentan en este mecanismo. Se agrupan en el campo de la histotecnología que estudia la estructura química y la composición de los tejidos mediante reacciones químicas especificas para la localización microscópica de determinadas sustancias. - M. Físico - Químicos : Se basa en la formación de uniones intermoleculares por atracción electrostática (cargas diferentes) de manera que el colorante ácido tiene estructuras básicas y viceversa. VOCABULARIO EN LAS TENICAS DE COLORACIÓN : Coloración progresiva : en ella se deja actuar el colorante hasta que la coloración alcanza la intensidad deseada, se lleva el control exacto de los tiempos y el punto exacto se controla con el microscopio. Coloración regresiva: en ella una se sobrecolorea y luego se elimina el exceso de colorante, a éste último proceso se le llama diferenciación que se puede hacer con agua, con ácidos, alcohol, bases o con soluciones metálicas. Coloración Terminal: Colorea estructuras cuya intensidad es independiente del tiempo que actúa el colorante. Impregnación: en ella se utilizan sales metálicas como cloruro de oro, nitrato de plata y se origina precipitados metálicos en las estructuras. Coloración en Bloque : en ella las piezas se tiñen, se incluyen, se cortan tal cual. Coloración directa : el colorante tiñe por el mismo, necesita mordiente. Coloración indirecta: el colorante no tiñe por si mismo sino que hay que tratar con un mordiente Coloración Topográfica : es aquella que proporciona una visión de conjunto, de manera que se pueden separar todos los componentes arquitecturales. Coloración estructural : nos sirve para resaltar ciertas estructuras titulares. Ejemplo: núcleos, fibras elásticas… Quimicamente los colorantes se componen de dos elementos, uno es el cromoforo y otro es el anillo bencenico, si nosotro encontamos una estructura q tenga un doble enlace entre los bencenos, ‐N=N‐ Estamos en presenci ade un colorante azoico. Ej: En este caso es Di‐ azoico ‐N=N‐ Pero deacuerdo al auxocromo Cromoforo: Dado que, por definición, colorantes son compuestos aromáticos su estructura incluye anillos de arilo que han deslocalizado sistemas de electrones. Estos son responsables de la absorción de radiación electromagnética de longitudes de onda variables, dependiendo de la energía de las nubes de electrones. Por esta razón, los cromóforos no hacen tintes de color en el sentido de que les confieren la capacidad de absorber la radiación. Más bien, cromóforos función mediante la alteración de la energía en la nube de electrones deslocalizada del colorante, y esta alteración resulta en que el compuesto absorba la radiación dentro de la gama visible en lugar de fuera de ella. Nuestros ojos detectan que la absorción, y responden a la falta de una completa gama de longitudes de onda por ver el color. Auxocromo: Es el componenteq hace q el anillo bencenico reccione con el tejido. Corresponden a los auxiliares del color, q estan en condiciones de reaccionar. Reaccionan con las fuerzas electroestáticas q son las q mas actuan. ‐NH3 (+) ‐COOH(‐) ‐HSO 3 (‐) ‐OH (‐) El SH Valencia +1 o ‐1 Amino Carboxilo Sulfonico Hidroxilo En algunos casos ‐Cl2 ‐ Br Esta estructura cuando no hay mordiente o si ( quelato) es q hay cumple la funcion de unirse al tejido. Hay axocromos de 2 tipos Acidos - Basicos - Si se une a una estructura x medio de un axocromo diremos q es Axocromo basico tipo azo ‐ N=N ‐ El caso de ( rojo congo) hay q ver la valencia de 8 .. .. .. .. 2 x cara Cromogeno Es cuando no existe auxocromo en la estructura bencenica ( 2 muy importantes) ADB ( diamino bencidina) colorante tipo cromogeno con anillo pero sin auxocromo, no se puede unir s nada, la unica manera es reduciendose, solo por redipuccion cambia de color, HIQ DAB se reduce y tiñe de cafe todas las estructuras. - CROMOTROPO Es el sustrato de los colorantes metacromaticos, si viramos y se tiñe se dice q ese es su cromotropo. Giemsa - Azul toluidina - Metacromaticas basicas - Shif Cuando actua solo sobre los aldehidos ( todos los hidroxilos tenemos q pasarlos a aldehido) - Atp asa - Citocromo oxidasa - Amilasa salibal - EZ - Sustancias cromotropas son las q se tiñen con mucosustancias .??!?. Duda preguntar al profe 42520 ; fucsina basica ( rosanilin) Fucsina basica es una mezla Cada ves q uno ve el tejido tiene q fijarse en tres cosas importantes. ( consideraciones fisicas genrales) leer y marcar …. …. Enlaces conjugados enlaces aislados, y existen independientemente de otros dobles enlaces en la misma molécula. Si los átomos adyacentes tienen dobles enlaces se denominan enlaces dobles conjugados y los bonos interactuar unos con otros. Configuraciones cromóforo existen a menudo como varias unidades, después de haber conjugado dobles enlaces, y son más eficaces cuando lo hacen. Esto es debido a la interacción entre los dobles enlaces, lo que provoca la deslocalización parcial de los electrones que participan en los enlaces. Dependiendo de el tamaño de la partícula y su peso molecular q esta muy relacionado teñiremos diferencialmente distintas estructuras del tejido. Tincion de VAN GIESON ( tricromico) en el lab ocupamos ponseau S y se ocupa fucsina acida. Tincion del musculo ( bajo peso molecular ) acido picrico PM : 229,1 gr/mol CI :10.305 - Ponseau S ( alto peso molecular ) tiñe la colagena PM: 760,6 Gr/mol CI : 27.795 - El sustrato bebe permitir la difusión por algún espacio sub microscopico. . Se hace un efecto bloqueo en la entrada o el cuello de la porosidad. Colorante tiende a colocarse en la parte de afura , el colorante esta mas concentrado afuera. ( la explicación de la tincion y la sobretincion). Esto es lo q eliminamos en la diferenciación, por eso es tan peligrosa. Pregunta Fuerza electro estática A) Puentes hidrogeno B) Enlace covalente C) Fuerzas van der walls D) Métodos químicos? Impregnación ( tinciones argenticas) A) Método físico Pregunta Diferencia entre colorante y tincion? T: union mol.C.act.a. Comp.tej. A) C: sust,quim, conf , col, a, otra estructura mod. Quim, estr, y resonancia. B) Pregunta Colorante A) Termino cromoforo se asocia mas a? Acidos A) Mordientes B) Oxidantes C) El caso de la eosina no es Diferenciación ya q los diferenciadores solo pueden ser ? Combinada...simultaneao sucesiva. A) QUE TIPO DE TINCION ES LA HE? Pregunta Cual es la diferencia entre simultaneo y panoptico? Simultaneo : acidos por lo general u otros, es parte de una combinada. A) Pancromico: solo colorantes neutros B) Barios colorantes en un mismo baño HE A) Tricromicos B) Van gieson C) Masson D) Son simultaneos? Son pancromicos? Giemsa ( colorantes neutros) A) Pregunta Secciones gruesas A) Core sobre agua sucia ( espacios x arrastre tejido) B) Lineas navaja mellada C) Disgregación ( agua muy caliente) D) Corte craquelado ( bloque frio) E) Rugosidad ( navaja no apretada) F) Pliegues ( corte muy caliente ej. Utero) G) Excesiva compresión H) Sobre exposición en flotación I) Burbujas bajo la sección J) Presencia de polvo K) Errores mas apreciables en el tejido? Pregunta Hematoxilina A) Orceina B) Azafran C) Carmin ( animal) D) Son colorantes naturales? Pregunta Eosina A) Fucsina acida B) Ac. Picrico C) Orange G D) Cristal violeta E) Safranina F) Son colorantes acidos? Fucsina basica A) Hematoxilina ( mordentado) B) Tionina C) Azul de toluidina D) azul de metileno E) Colorantes basicos Son colorantes neutros ( mezclas) Wright A) Giemsa B) May grun wald giemsa C) Papenhem D) Colorantes de hematologia Sudan Negro A) Sudan 3 B) Sudan 4 C) Indiferentes ( no ionicos, no forman sales, sin disociación electrolitica) Soluble solo en OH Pregunta Sudan negro , 3 y 4 A) Unico colorante q no se puede pasar a lavar en agua ? Pregunta Solo puede ser con corte congelado A) No lavar en agua si no q solo alcoholes B) Tiñe por solubilidad diferencial. C) Característica de la biopsia en sudan? Pregunta Eosina A) Son ejemplos de ortocromacia ( no importa el origen) es un colorante PANCROMICO? A) giemsa son meta cromáticos ( basicos)? a) azul toluidina b) tionina c) azul de metileno d) basicos Es una coloracion indiferente? a) argenticas b) sudan negro c) sudan 3 y 4 es colorante directo? a) eosina es colorante indirecto (mordiente)? a) hematoxilinas b) harris, mayer, hill, carazzi c) weigert, verhoff color indice de la hematoxilina ? a) 75290 b) tipo natural (no hay cromoforos) oxidante de la hematoxilina A) ox.rojo de mercurio b) NaIO3 (yodato de sodio) mordiente de la hematoxilina A) sulfato de aluminio ( Al2(SO4)3) B) sulfato de Fe ( FeSO4) hematoxilinas aluminicas a) harris b) mayer c) carazzi d) Gill 1,2,3 e) hematoxilinas ferricas a) weigert b) verhoff c) d) CI fucsinabasica O ROSANILIN? a) 42510 unico para reactivo shiff para PAS Triarylmethane CI ac. picrico? a) 10305 (nitro CI fucsina acida 42685 Triarylmethane que significa una valencia 2 ? mordiente unido a 2 moleculas de colorante (quelato) val 3 lo mismo PREGUNTA PROFE diferencia entre enlace covalente y enlace covalente cohordinado? a) laca A) Hm+ cation + tejido quelato a) HM + cation tincion regresiva a) se usa mas b) usa diferenciador hematoxilina A) regresiva b) basica c) HE A) Son tecnicas sucesivas ? Tricromicas A) Ponceaus B) EA50 C) Son de carácter simultáneo? panoptico y pancromica (colorantes neutros)? pancromica 1 baño a) giemsa b)m.g.giemsa c) panoptica varios baños (susesivos) a) B) c) PAP EA50 a) verde luz b) pardo vismark c) eosina coloracion simultanea (acidos mezclas) a) tricromicos b)EA50 Girmsa ( mescla de colorantes) en neutro, es pancromico AzurA ( metacromatico) A) AzurB ( metacromatico) B) Eosinato de sodio (Acido) C) Es una mezcla q se transformo en sal. La gracia es q azur A y azur B son metacromaticos Sucesiva A) HE ES DE CARACTER ? Uno neutro : giemsa A) Otro acido: masson , van gieson B) SIMULTANEO SECONFUNDECOM PANOPTICO Pregunta Giemsa A) Que tincion ocuparia para un paracito y también para hematologicas? Eosina es tipo fluorona Hematoxilina natural DAB A) Un tipico cromogeno Giemsa A) Metacromaticos ( basicos) B) Tipico cromotropo Hematoxilina ? Tamaño partícula colorante PM A) Porosidad del sustrato B) Efecto interfacial C) Tres consideraciones físicas importantes Clase P2 ‐01 Estructura química y clasificación de los colorantes lunes, 19 de mayo de 2014 5:57 p.m.

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  • Unbloquehumedoesdificildecortarorientacindelosbloquestieneqserlacorrecta,elcasomascomneslapiel.(demasblandoamasduroeslaformaadecuadadecortar)

    esmejorcorarde4micronesaqde2ysedestruyacuandounosacaunacintalosprimeroscortessonmasgruesos(expansintermal)coneltiempodecorte

    uniformidaddegirodelamanivelaAngulonavajacondicindelanavajadecorte

    Entrelasconsideracionesqafectanelgrosordecorte:

    sedebeusarunanavajanuevaunangulode10.cortestibiostiendenagenerarestatica.

    desgastedelbloquesehaceentibioparasabersieltejidoesdurooblando,loscortesgeneralmentesahacenenfrio,perohayexcepcionesentejidosmascelulares,uncortefriovaasalirmasparejoyuniforme.

    laexperiencianolasustituyenadausarunladodelanavajaconelfilonuevoparacortaryotrosectorparadesgastar.cuandonosalelacintahayqenfriarelcorteobloque(toallanovaconhielosinensuciar)loscortedemaneralentasonptimoscuandosalgauncortenodebeparar,sepierdeelritmoyseproduceartefactodecortealternado.

    EXPERIENCIASAPARAHACERBUENOSCORTES

    elbaodeflotacindebeserde5a9Cbajoelpuntodefusindelaparafina.(5458)laTagua45C(hayparafinasdedistintopuntodefusin)

    asegurarsedeqaguaestelibredeburbujas(usodeaguabidestilada),cuandosubenlasburbujasestasquedandebajodelamuestra,cuandohayburbujaseltejidonoquedaadheridoalamuestra.Siestetejidosesecaseproducirnagujerosenlamuestra.(serompeeltejidoantesdeprocesar)

    elladobrillantedebeestarhaciaabajo,paraqnoseformenburbujas.ocuparunportalimpioparadejartejidoyotropararecoger(limpio)hayqrecogerconunbarridosuaveenAngulode90eltejidodebeseranalizadoenelagua(verlasimperfeccionesdelcorte)recogercortecentradoconunacintayenngulorecto,asegurndosedeqescurraelagua.serecomiendaqelaguaestelimpia,porqlostrozosdeparafinahacenqserompaeltejidoosedesprenda

    lamedidaidealdeaguaeshastadondeseveaelrotuladoenelporta.tenerbienrotuladoelportasacaradecuadamenteelportaobjetoconlasmuestrasydejarenformavertical10min

    BAODEFLOTACION

    secadonodebesuperarlos65Celsecadodebeseralmenos1horaparaasegurarqelcortenosedesprenda.elsecadoenIHQdebesertodaanoche24H37*c(elsecadodependedelatemperatura)

    SECADO

    cuidadosestnestablecidosenelEQ1.1EQ1.2EQ1.3ambito5EQ,ambito6INS(ENCARGARNOSDELAPREVENCIONPREVENTIVA)hacerunaextensindegarantaxqlagenteqcalibradebesercapacitada.cadavesqocupoelequipodebequedarlimpio,esadiario.(nolimpiarconxilol,daalaspiezasdeplstico)

    Limpiarcom,paosecosinpelusas.lubricarequipos.mantencinunavesalao.

    CUIDADOSCONELMICROTOMO

    ERRORESDECORTE(mirandoalmicroscopio)

    Parafinaarrastratejidoocortemuyrapidoqnopermiteladilatacin.B)Solucionesnotamponadas-

    COLORACION

    Laformaenlacualelcoloranteseunealtejidosontodaslasformasdeunin.Nohayningunmecanismodeaccindistintoaestosexceptoelmtododeimpregnacin.Lacoloracinesuneventoqumicoqestamediadoporalgunadeestascuatroformasdeunin.Encambiolaimpregnacinsecaracterizaporserunmtodofsico(ej.Nitratodeplata)

    Fuerzaselectromagneticas-Enlacescovalentes-Puentesdehidrogeno-FuerzasdeVanDerWalls-

    FORMASDEUNION

    Unacoloracionesuneventoquimicomediadoporestascuatroformasdeunion.

    Unaimpregnacionesunmetodofisico(comolastincionesargenticas)comoelnitartodeplataysalesmetalicaspesadaqseposansobrelostejidos.

    Lostejidosanimalessonincoloros.

    Tincion:eslaunionmoleculardelcoloranteactivoconalgncomponentedeltejido.

    Colorante:sustanciaqumicacomplejaqueconfierecoloraotrocuerpomodificandoqumicamentesuestructura,loquesignificasuresonancia.

    Acidos-Bsicos-Neutros-Indiferentes-Metacromaticos-

    TiposdecolorantesDeacuerdoasuspropiedadesqumicas

    TIPOSDECOLORANTES

    Naturales-Artificiales-

    Segnorigen:1.

    NATURALES:Loscolorantesseextraendeciertasplantasyanimales. Origenanimal:Carmn: vienedelacochilla,tieelglicogeno,esalgoparecidoalPAS(enunatecnicaqsellamacarmindebest)

    Origenvegetal:Hematoxilina (eselcoloranteuniversaldelosncleosyeselmasutilizadoenlahistologiaactual,seextraedeunarbolelcampeche.

    Orcena (utilizadoparafibraselasticasytambienseextraedeunarbol)Orceinaunatancer

    Azafrn:esuncolorantequenotieneutilidadenlatecnicahistologica

    ARTIFICILES:Colorantesseobtienenapartirdeanilina.Sonsalesproducidasdelaunindeunabaseyuncido.Genricamenteselesconocecomocolorantesderivadosdelaanilina.Laanilinaesuncompuestoincolorocuyasmodificacionesqumicasproducidasenelanillobencnico leconfierenaloscompuestosnuevosuncolordeterminado.(bencenouncompuestoincoloroqtieneunalongituddeondade200nm).

    sontodossales(derivadosdelaanilina)

    DEACUERDOAPROPIEDADESQUIMICASAcidos-Bsicos-Neutros-Indiferentes-Metacromatico-

    *Colorantescidos,Bsicosyneutrosposeenuncomponentecidoyunobsico. perosolounodeellosseencuentraactivado(paracidoybsico);enelcasodelneutro,ambosgruposseencuentranactivados.*Latincinconcolorantesindiferentesesunatincinfsica,utilizadaprincipalmenteenlaidentificacindelpidos.

    cidos:Producto de la unin de un cromgeno de baja intensidad dbilmente bsico al que se le aaden grupos auxocromos fuertemente acido lo que le dan dicho carcter al colorante tie estructuras bsicas celulares en el citoplasma celula.

    sal:bseincolorayelcomponentecidotienecolor(esactivo)-colorantecitoplasmtico-carganegativa(),-coloranteaninico.-

    Lassustanciasqueatraenelctricamentealoscolorantescidossedenominanacidfilos.-*Ej:Eosina,Fucsinacida,Ac.Pcrico,OrangeG,safradina,cristalvioleta.

    Bsicos: Asociacin de un cromgeno de baja intensidad y de carcter dbilmente cido al que se le aade grupos auxocromos catinicos fuertemente bsicos que son los responsables de la carga global del colorante por eso se utilizan para teir estructuras cidas.

    Sal:baseescoloreadaysuporcincidaesincolora.-Colorantenuclear ,afinidadporcidosnucleicos(DNA,RNA)-Reaccionanconlosgruposfosfatodeloscidosnucleicos.-cargapositiva(+)-colorantecatinico.-

    *Ej:Azuldemetileno oclorhidratodeazuldemetileno,quedebesupropiedadcolorantealabaseazuldemetilenoynoalHQ,queesincoloro.*Otrosej.esla lacadeHematoxilina(queeslevementeacidoperoelmordienteledalacaracteristicabsica),Tionina,AzuldeToluidina,Fucsinabsica.

    Colorantes Neutros: unin colorante cido y bsico para formar un precipitado comnmente insoluble en agua y muy estable en disolucin alcohlica de esta forma siendo su carga floral neutra conservan en parte la propiedad de colorear conjunta o separadamente diferentes estructuras dependiendo de que sean o no capaces de atrapar algunos iones generando cuando la sal se disocia tras ser inestabilizada al colocarla en disolucin acuosa. Ejemplo Giemsa.

    Salpartebsicacomolacidaproporcionancolor.-Tiesimultneamenteloscomponentesnuclearesyaloscitoplasmticos.-Soncolorantesexclusivamenteutilizadosparahematalogia-Elcoloranteneutrotieneunaparticularidadyesquesonmezclasdecolorantes.-prepararenetanol.-

    *Ej:Eosinatodeazuldemetileno(Wright,MayGrunwaldgiemsa,giemsa,papenhem)-giemsa=azulA+azulB+eosinatodesodioentonceslospatologoslovencomosolouncolorantequetiededistintoscolores.

    -

    Colorantes Indiferentes: En condiciones normales colorean los tejidos por un mecanismo de impregnacin fsica no poseen carcter cido, bsico o salino definido por ejemplo la tincin argntica.

    Compuestosnoinicosincapacesdeladisociacinelectroltica,noformansales-Notieneafinidadporningunaestructuradeltejido.(noesionico)-Mecanismotincinmsbienfsico,noqumico.-preparaenalcoholde70(solvente),soninsolublesenagua.-Sedisuelvenmejorenlpidosqueenelsolvente Lipofilico(coloranteporsolubilidaddiferencialmecanismofisicodetincion).

    -

    tieneafinidadporellipido(lipofilicos),hidrfobosynotieneningunaposibilidaddedisolverseenelagua.Entonceshayqueprobarcondistintasgraduacionesdealcoholesej,elOHde95sedisuelvenloscolorantesperodisuelveellipido,encambioelOHde70esunbuensolventedeloscolorantes,ycuandosehandisueltoyestanencontactoconuntejidograso,vahaberunacompetenciaentreelOHde70ylagrasayelcolorantesedepositaconmayorfacilidadenlagrasa. Esunatincionfeaperobastanteeficiente,porquedondeunoquieraencontrargrasasevateirnegro.

    -

    *Tiensustanciasquetienenunpoderdisolventesuperioraldellquidoquehaservidoparaprepararlasolucincolorante.Tienporsolubilidaddiferencial(massolubleenelsolutoqenelsolvente).*Ej:Sudannegro,SudanIIIyIV

    Laimportanciadeidentificarlpidoseneltejidosedaenlabiopsiamuscular(msculonosecontraeenpresenciadelpidos.Seanalizasisteconservaglicgeno)yenlabiopsiacerebral(stasedaencasosdeautopsia)Biopsiasencortescongeladosexclusivamente.

    -

    Seusanencortescongelados.

    Colorantes Metacromticos: en condiciones normales la mayor parte de los colorantes tien los tejidos con un color parecido a l, esta propiedad es la ORTOCROMASIA, sin embargo cuando se utilizan ciertos colorantes bsicos derivado de la anilina algunas estructuras titulares se tien con tonos diferentes al que cabria esperar por el colorante usado. Por ejemplo los grnulos de los mastocitos presentan color rojo con el azul de metileno o el azul de toluidina, este efecto es la METACROMASIA y estructuras teidas LA CROMOTROPAS, los colorantes metacromticosson sustancias qumicamente puras y no de carcter salino. La explicacin se cree que se debe a que se produce una polimerizacin entre las molculas de colorante adyacente a las estructuras a teir. Existen estructuras como son por ejemplo glcidos complejos o cartlago que se observan mejor con estos colorantes metacromticos.

    CLASIFICACION

    Ortocromacia:tejidoadquiereunacoloracinigualaladelasolucinempleada.

    Metacromacia:SoncolorantesBASICOS(qumicamentesustanciaspuras)Uncomponentedeltejidosetieconuncolordiferentealcolorempleado.

    todossonbasicos-Polimerizaydependendeltejidoyaqestetieneqtenermolculasanionicas.-Notodosloscolorantesbasicossonmetacromaticos-Sontionina,azuldetoluidina,azuldemetileno-

    Existemetacromaciadedistintostiposson3(dependedelpolianinqesteeneltejido)1)Alfa>PO4(fosfato)>azul.A)Beta>COOH(carboxilo)>violetaB)Gama>SO2,SO3(sulfato)>rojoC)

    son6lospolianiones'?

    ANFOTEROS:nosoncolorantesNeutrossoncolorantesmetacromaticoscomoelazuldemetileno.(basicos).

    METODOSDECOLORACIONQUIMICOS

    Directos:afinidaddirectaxeltejido(eosina)xelcitoplasmadeltejido(electroestatica)Indirectos:Requieredeintermediarios(mordiente)paraquelacoloracintengalugar(elmascomunlahematoxilina)C.I75290

    Ej:Hematoxilina.porsisolanotie,esuncoloranteinactivo,hayqueoxidarloparaquetiayunmordienteparaqueseunaaltejido.(cadavesquesequieramejorarlatincinyelbrilloseaplicaunmordiente).

    Coloracin5

    HematoxilinaCI:75290

    Seprocedeateirconhematoxilinadurante7min(estetiempoesrelativoyaquedependedelestadodelahematoxilina)porsisolalahematoxilinanotie,siendolahemateinaunahematoxilinamaduradaporoxidacinconoxidorojodemercurio,yodatodesodiouotromtododeoxidacin,naturaloqumico.Estahemateinatienequeseracompaadadeunmordiente,elmordienteeselqueseunealtejidocorrespondeaunasalmetlicabiotribalentequelepermitealcoloranteunirsealtejidoconmsdeunenlace.EsteessulfatodeKyAl(enHxdeHarris),formandoasunalaca.

    Hematoxilinaoxidada(Hemateina+mordentada(Alocation))(quelato+tejido)=laca

    mordiente:Uninmetlicopolivalentequeformacomplejosdecoordinacinconciertostintes.

    Quelato:Un complejo de coordinacin formado entre un in (cation) de metal polivalente y ciertos tintes. este es soluble en agua si tiene una valencia de 3 (unido a 3 hemateinas y esta estabilizado)

    HM+ cation + tejido = laca

    Diferenciacin

    SerealizaconAlcoholcidoOHCl2soloundippingyaqueestetiendeasacarmuchoelcolorante,estoesunaextraccinselectivadeelexcesodecolorante,porlogeneral0,5% cidoclorhdrico1%enetanolal70%(alcoholdecidoestndar).

    Siessuficienteobservaremosel(ncleocelular)yaqesesteelobjetivo,ynoteirtodalamuestradehematoxilina,sinosexcedemoslavamosconaguacorriente,luegodestiladaytrataremosdereteir.Ycontinuamosconlatcnica.

    Azulamiento

    Cuandoseaplicaapartirdeunmediocido,comolamayoradehematoxilinasestasson,elcolorinicialrojoladrillo.Estecolornoespermanenteysedebecambiaraazul.Lafaserojadealumbrehematenaessoluble,ysefiltrarlentamentedelasestructurasencualquiermedio,inclusobajoelcubreobjetos.Lafaseazulesinsolubleygeneralmenteseconsideraqueespermanente

    ElcambioserealizaalterandoelpH.Eshabitualcolocarlasseccionesteidasydiferenciadosenunmedioalcalinoporunpardeminutosparaconvertirlamancha,acontinuacin,alavarconaguaparaeliminartodoloqueseutilizaparamodificarelpH.

    ElmediomssimpleesagregarunasgotasdeamoniacoslidoconunpocodeaguahastaquetengaunpHdeaproximadamente9a10,acontinuacin,colocarlasseccionesenellahastaqueestnuniformementeazul.Otrosagentesazuladosonadecuadossonlasolucin0,11%decarbonatodelitio,acetatodesodioal0,5%,2%debicarbonatodesodioounasolucinmscompleja,comosustitutodelaguadelgrifo.

    Enelcasodellaboratoriousaremosboraxotambinllamadoboratodesodiodurante(30segundos).

    Despusdeazularpasamosporaguadestiladacontinuandoconlaeosina.

    Progresivos:cuandolasolucindetincinseledejaactuarlentamentehastaalcanzarelefectodeseado.Sehaceactuaralcolorantehastaquellegueasupuntooptimo, estelodeterminaelusuario.-Serecomiendaparatejidosmuycelulares,amgdalas,ganglios(sedebeconocereltiempooptimodelcolorante).

    -

    elproblemaesqesunatinciondemaciadovariable-caractercorto1min-

    Regresivo:Serealizaunasobrecoloracinyluegoseeliminaelrestodelcolorantepormediodediferenciadores (eliminacoloracinespecficamente).seocupamasenellaboratorio-Aqusesobretieeltejidoydespussediferencia,aquseextraeselectivamenteelexceso,ejemplositeimospor10minutosenhematoxilina,sacamosylavamosenaguadestilada,veremosteidoslosncleoslasfibraselsticas,algunasmembranasbasalesdbil,tincincitoplasmticatambindbil,fibrasmuscularesycolgenosmuydbilescomoceleste,loquesehacecomovamosaaplicarunsegundocolorante,necesitamossacarelexcesodecoloranteselectivamente sinquitarlatincindelnucleo,porloqueseusaunreactivo,queeslacombinacindeacidoclorhdrico1%conalcoholde70,quenospermitemedianteunsolopasosacarelexcesoyluegoallavarenaguavaaquedarblancotodoloquenoseanucleo=tincinregresivaconceptomuyimportante,esteprocesonospermitevolveratrsyrecuperarlatincinencasodequesemehayaolvidadosacarlasplacasenhematoxilina.Tambinestilcuandonohaymastejidoynecesitohacerunatincinespecial,entoncestomounaplacaqueestateidaconH/Eylablanqueoparahacerlanuevatincin.

    -

    Laeosina sevaconelalcoholde95entre10a15minutos.ParadesteirunaplacaconH/Ehagotodoelprocesoinverso,ejparadesmontardejolaplacaenxilol,luegohidratarempezandoconalcoholde100.Esestemtodoqueseusatambinparateirunamuestraendoscpicaantesdelainclusin,conelobjetivodediferenciarla,sequitaluegoconalcoholynointerfiereconlaposteriortincinsoloquesedejapormenostiempoenlaeosina

    Simple:Seutilizasolouncoloranteparateiralgncomponentecelularotisular.Combinado: compuestaocombinada:Aplicacindevarioscolorantesconlafinalidaddedestacar,mediantediferentescolores,estructurasespecficas.LacoloracincompuestapuedeserSimultneaoSucesiva.PorejemplolaHE

    Simultnea:Seproducecuandoenunamismasolucindecoloracinsemezclanvarioscolorantes(todosloscidosfuncionandeestamanera).NOSONNEUTROS(unsolobaovarioscolrantes)

    Sondistintoscolorantesenunsolobao, generandounatincinvariada.Entricromicos podemosusargiemsascarlettconfucsinaacida=2clorantesacidosdistintos.OJOentricromicoscomoveremosmasadelantesihaymezclasperosonneutras.(ejemplodesimultaneaponceau)(lasclulassuperficialesintermediasdecuellouterinosonorageofilicas),tiendedistintoscoloresdistintosetstratosdelepitelio.

    Sucesiva:Consisteenaplicaralostejidossolucionessucesivasdevarioscolorantes,conlafinalidadqueciertoscomponentessetianconalgunosdeellos.

    -

    Panoptico: Coloracincombinadaconcolorantesneutros actuandosucesivamente,sonvariosbaossucesivos.(colorantesneutros)Pancromica:Utilizasolocolorantesneutros enunsolobao, ejemploelGiemsa,seusaparatejidohematopoytico,parasitosymicroorganismosengeneral,sepone30minutosenelbao,selava,sepasaporalcoholes,semontaylisto.

    GIEMSAOrtocromatico:nucleoAzulMetacromatico:prolongaciondelasestructurashematologicas.Silamezclanotieneeosinatoymetanol,lamezclanosaldracomoloesperamos-

    Sonestos2requisitosEosinatodesodio-Metanol-

    APRENDERSE:progresiva,regresiva,pancromicaypanptica.

    Teorasdelacoloracin.

    A los radicales qumicos responsables de la modificacin molecular a la que se debe la aparicin del color se le llama grupo cromforo y se denomina cromgeno al conjunto formado por el grupo cromforo y el anillo bencnico. Cromgeno no es sinnimo de colorante ya que el cromgeno no siempre tiene apetencia por el tejido o no se une fuertemente al tejido.

    Etileno --------------------------------------- (>C=CC=O)Tiazlico --------------------------------------- (>C=S)

    Imino --------------------------------------- (>C=N)Azoico --------------------------------------- (-N=N-) Orange G; rojo congo; sudanes; ponceau S Nitroso --------------------------------------- (-N=O)

    Nitro --------------------------------------- (-NO)

    La conversin del cromgeno en colorante est vinculada a la adiccin sobre la molcula cromtica de otros grupos atmicos que la confieren o le dan la oportunidad de disociarse electrolticamente o de formar sales con los diferentes tejidos. Estos radicales se los denomina grupos auxocrmos o potenciadotes del color. Generalmente tienen carga elctrica es decir posee carcter cido o bsico y son los responsables de que el colorante tenga mayor o menor afinidad por la estructura que va a teir.

    Clasificacin de los colorantes segn los Grupos Cromforos.

    Los grupos auxocrmos de importancia son: el grupo hidroxilo, carboxilo, amino, sulfidrilo y determinados iones derivados del Fe, Cr, Al y del Mb.

    En funcin del grupo cromgeno que contienen. Existen 8 grupos de colorantes:

    Nitrocolorante

    Colorante azoico

    Antraquinona

    Acridina

    Oxacina Azuldenilo Tiacina AzurA;azurB;Azuldemetileno;tionina;azuldetoluidina

    Acina Difenilmetanos;rojoneutro;safranina

    Trienal metano

    Fucsinaacida;fucsinabasica(rosanilin);Cristalvioleta;

    Xianteno Ftalocianina de Cobre

    Clasificacin de los colorantes segn los Grupos Auxocrmos y Apetencia Tisular.

    El cdigo -numrico nos remite a lo que se denomina C.I. que es el ndice Calorimtrico del colorante que nos sirve para identificarlo y lleva 5 dgitos.

    Cinco grupos fundamentales:

    1) Colorantes Bsicos: asociacin de un cromgeno de baja intensidad y de carcter dbilmente cido al que se le aade grupos auxocromos catinicos fuertemente bsicos que son los responsables de la carga global del colorante por eso se utilizan para teir estructuras cidas.

    Ejemplo: laca de hematoxilina - colorante nuclear.

    Fucsina bsica

    Galocianina

    2) Colorantes cidos: productos de la unin de un cromgeno de baja intensidad dbilmente bsico al que se le aaden grupos auxocromos fuertemente acido lo que le dan dicho carcter al colorante tie estructuras bsicas celulares en el citoplasma celular: Eosina-C. Citoplasmtica / Fucsina-cida.

    3) Colorantes Neutros: unin colorante cido y bsico para formar un precipitado comnmente insoluble en agua y muy estable en disolucin alcohlica de esta forma siendo su carga floral neutra conservan en parte la propiedad de colorear conjunta o separadamente diferentes estructuras dependiendo de que sean o no capaces de atrapar algunos iones generando cuando la sal se disocia tras ser inestabilizada al colocarla en disolucin acuosa. Ejemplo Giemsa.

    Las estructuras as coloreadas adquieren una tonalidad policroma = multicolor.

    4) Colorantes Indiferentes: En condiciones normales colorean los tejidos por un mecanismo de impregnacin fsica no poseen carcter cido, bsico o salino definido por ejemplo la tincin argntica.

    5) Colorantes Metacromticos: en condiciones normales la mayor parte de los colorantes tien los tejidos con un color parecido a l, esta propiedad es la ORTOCROMASIA, sin embargo cuando se utilizan ciertos colorantes bsicos derivado de la anilina algunas estructuras titulares se tien con tonos diferentes al que cabria esperar por el colorante usado. Por ejemplo los grnulos de los mastocitos presentan color rojo con el azul de metileno o el azul de toluidina, este efecto es la METACROMASIA y estructuras teidas LA CROMOTROPAS, los colorantes metacromticos son sustancias qumicamente puras y no de carcter salino. La explicacin se cree que se debe a que se produce una polimerizacin entre las molculas de colorante adyacente a las estructuras a teir. Existen estructuras como son por ejemplo glcidos complejos o cartlago que se observan mejor con estos colorantes metacromticos.

    Teora del Proceso de Coloracin o Mecanismos de Coloracin

    Los mtodos de tincin se fundamentan en una serie de procesos fisicoqumicos complicados que venan segn los colorantes algunos son todava desconocidos no se sabe si la coloracin se efecta por procesos fsicos o qumicos. Aunque ambas teoras intervienen y adems se produce una serie de procesos complicados que entran en el campo de la fsico-qumica (aunque el proceso de coloracin la

    - M. Fsicos: ligados a las propiedades de disolucin e impregnacin del colorante sobre el tejido, el colorante es ms soluble en el tejido que en el disolvente que acta como medio de transporte, suele ser agua, un ejemplo: la tincin para grasas, en esta el colorante se disuelve mas fcil en los lpidos titulares que en la solucin alcohlica siguiendo reglas de la difusin para el colorante de la solucin colorante a las estructuras de su predileccin tambin el proceso de impregnacin se basa en m. Fsicos en este caso el colorante tiene un gran volumen molecular o bien se hace una precipitacin selectiva en forma de agregados insolubles de manera que el colorante queda atrapado entre la mellad e clulas y fibras que constituyen los tejidos.

    - M. Qumicos: La reaccin entre colorante y tejido ocurre por procesos qumicos bien definidos de manera que al interaccionar se produce un nuevo cromgeno responsable del color obtenido, los procedimientos que se fundamentan en este mecanismo. Se agrupan en el campo de la histotecnologa que estudia la estructura qumica y la composicin de los tejidos mediante reacciones qumicas especificas para la localizacin microscpica de determinadas sustancias.

    - M. Fsico-Qumicos: Se basa en la formacin de uniones intermoleculares por atraccin electrosttica (cargas diferentes) de manera que el colorante cido tiene estructuras bsicas y viceversa.

    VOCABULARIO EN LAS TENICAS DE COLORACIN:

    Coloracin progresiva: en ella se deja actuar el colorante hasta que la coloracin alcanza la intensidad deseada, se lleva el control exacto de los tiempos y el punto exacto se controla con el microscopio.

    Coloracin regresiva: en ella una se sobrecolorea y luego se elimina el exceso de colorante, a ste ltimo proceso se le llama diferenciacin que se puede hacer con agua, con cidos, alcohol, bases o con soluciones metlicas.

    Coloracin Terminal: Colorea estructuras cuya intensidad es independiente del tiempo que acta el colorante.

    Impregnacin: en ella se utilizan sales metlicas como cloruro de oro, nitrato de plata y se origina precipitados metlicos en las estructuras.

    Coloracin en Bloque: en ella las piezas se tien, se incluyen, se cortan tal cual.

    Coloracin directa: el colorante tie por el mismo, necesita mordiente.

    Coloracin indirecta: el colorante no tie por si mismo sino que hay que tratar con un mordiente

    Coloracin Topogrfica: es aquella que proporciona una visin de conjunto, de manera que se pueden separar todos los componentes arquitecturales.

    Coloracin estructural: nos sirve para resaltar ciertas estructuras titulares. Ejemplo: ncleos, fibras elsticas

    Quimicamenteloscolorantessecomponendedoselementos,unoeselcromoforoyotroeselanillobencenico,sinosotroencontamosunaestructuraqtengaundobleenlaceentrelosbencenos,N=NEstamosenpresenciadeuncoloranteazoico.Ej:EnestecasoesDi azoicoN=N

    Perodeacuerdoalauxocromo

    Cromoforo:

    Dadoque,pordefinicin,colorantessoncompuestosaromticossuestructuraincluyeanillosdeariloquehandeslocalizadosistemasdeelectrones.Estossonresponsablesdelaabsorcinderadiacinelectromagnticadelongitudesdeondavariables,dependiendodelaenergadelasnubesdeelectrones.Porestarazn,loscromforosnohacentintesdecolorenelsentidodequelesconfierenlacapacidaddeabsorberlaradiacin.Msbien,cromforosfuncinmediantelaalteracindelaenergaenlanubedeelectronesdeslocalizadadelcolorante,yestaalteracinresultaenqueelcompuestoabsorbalaradiacindentrodelagamavisibleenlugardefueradeella.Nuestrosojosdetectanquelaabsorcin,yrespondenalafaltadeunacompletagamadelongitudesdeondaporverelcolor.

    Auxocromo:Eselcomponenteqhaceqelanillobencenicoreccioneconeltejido.Correspondenalosauxiliaresdelcolor,qestanencondicionesdereaccionar.Reaccionanconlasfuerzaselectroestticasqsonlasqmasactuan.

    NH3(+)COOH() HSO3 ()OH()ElSHValencia+1o1AminoCarboxiloSulfonicoHidroxiloEnalgunoscasos

    Cl2 Br

    Estaestructuracuandonohaymordienteosi(quelato)esqhaycumplelafunciondeunirsealtejido.

    Hayaxocromosde2tiposAcidos-Basicos-

    Siseuneaunaestructuraxmediodeunaxocromodiremosqes

    AxocromobasicotipoazoN=NElcasode(rojocongo)hayqverlavalenciade8........2xcara

    CromogenoEscuandonoexisteauxocromoenlaestructurabencenica(2muyimportantes)ADB(diaminobencidina)colorantetipocromogenoconanilloperosinauxocromo,nosepuedeunirsnada,launicamaneraesreduciendose,soloporredipuccioncambiadecolor,HIQDABsereduceytiedecafetodaslasestructuras.

    -

    CROMOTROPOEselsustratodeloscolorantesmetacromaticos,siviramosysetiesediceqeseessucromotropo.Giemsa-Azultoluidina-Metacromaticasbasicas-ShifCuandoactuasolosobrelosaldehidos(todosloshidroxilostenemosqpasarlosaaldehido)-Atpasa-Citocromooxidasa-Amilasasalibal-EZ-

    Sustanciascromotropassonlasqsetienconmucosustancias.??!?.Dudapreguntaralprofe

    42520;fucsinabasica(rosanilin)Fucsinabasicaesunamezla

    Cadavesqunoveeltejidotieneqfijarseentrescosasimportantes.(consideracionesfisicasgenrales)leerymarcar

    .

    .

    Enlacesconjugados

    enlacesaislados,yexistenindependientementedeotrosdoblesenlacesenlamismamolcula.Silostomosadyacentestienendoblesenlacessedenominanenlacesdoblesconjugadosylosbonosinteractuarunosconotros.Configuracionescromforoexistenamenudocomovariasunidades,despusdehaberconjugadodoblesenlaces,ysonmseficacescuandolohacen.Estoesdebidoalainteraccinentrelosdoblesenlaces,loqueprovocaladeslocalizacinparcialdeloselectronesqueparticipanenlosenlaces.

    Dependiendodeeltamaodelapartculaysupesomolecularqestamuyrelacionadoteiremosdiferencialmentedistintasestructurasdeltejido.

    TinciondeVANGIESON(tricromico)enellabocupamosponseauSyseocupafucsinaacida.Tinciondelmusculo(bajopesomolecular)acidopicricoPM:229,1gr/molCI:10.305-PonseauS(altopesomolecular)tielacolagenaPM:760,6Gr/molCI:27.795-

    Elsustratobebepermitirladifusinporalgnespaciosubmicroscopico..

    Sehaceunefectobloqueoenlaentradaoelcuellodelaporosidad.Colorantetiendeacolocarseenlapartedeafura,elcoloranteestamasconcentradoafuera.(laexplicacindelatincionylasobretincion).Estoesloqeliminamosenladiferenciacin,poresoestanpeligrosa.

    Pregunta

    FuerzaelectroestticaA)PuenteshidrogenoB)EnlacecovalenteC)FuerzasvanderwallsD)

    Mtodosqumicos?

    Impregnacin(tincionesargenticas)A)Mtodofsico

    PreguntaDiferenciaentrecoloranteytincion?

    T:unionmol.C.act.a.Comp.tej.A)C:sust,quim,conf,col,a,otraestructuramod.Quim,estr,yresonancia.

    B)

    Pregunta

    ColoranteA)Terminocromoforoseasociamasa?

    AcidosA)MordientesB)OxidantesC)

    ElcasodelaeosinanoesDiferenciacinyaqlosdiferenciadoressolopuedenser?

    Combinada...simultaneaosucesiva.A)QUETIPODETINCIONESLAHE?

    PreguntaCualesladiferenciaentresimultaneoypanoptico?

    Simultaneo:acidosporlogeneraluotros,espartedeunacombinada.

    A)

    Pancromico:solocolorantesneutros

    B)

    Barioscolorantesenunmismobao

    HEA)TricromicosB)VangiesonC)MassonD)

    Sonsimultaneos?

    Sonpancromicos?

    Giemsa(colorantesneutros)A)

    Pregunta

    SeccionesgruesasA)Coresobreaguasucia(espaciosxarrastretejido)

    B)

    LineasnavajamelladaC)Disgregacin(aguamuycaliente)D)Cortecraquelado(bloquefrio)E)Rugosidad(navajanoapretada)F)Pliegues(cortemuycalienteej.Utero)

    G)

    ExcesivacompresinH)SobreexposicinenflotacinI)BurbujasbajolaseccinJ)PresenciadepolvoK)

    Erroresmasapreciableseneltejido?

    Pregunta

    HematoxilinaA)OrceinaB)AzafranC)

    Carmin(animal)D)

    Soncolorantesnaturales?

    Pregunta

    EosinaA)FucsinaacidaB)Ac.PicricoC)OrangeGD)CristalvioletaE)SafraninaF)

    Soncolorantesacidos?

    FucsinabasicaA)Hematoxilina(mordentado)B)TioninaC)AzuldetoluidinaD)azuldemetilenoE)

    Colorantesbasicos

    Soncolorantesneutros(mezclas)

    WrightA)GiemsaB)MaygrunwaldgiemsaC)PapenhemD)

    Colorantesdehematologia

    SudanNegroA)Sudan3B)Sudan4C)

    Indiferentes (noionicos,noformansales,sindisociacinelectrolitica)SolublesoloenOH

    Pregunta

    Sudannegro,3y4A)

    Unicocoloranteqnosepuedepasaralavarenagua?

    Pregunta

    SolopuedeserconcortecongeladoA)Nolavarenaguasinoqsoloalcoholes

    B)

    Tieporsolubilidaddiferencial.C)

    Caractersticadelabiopsiaensudan?

    Pregunta

    EosinaA)

    Sonejemplosdeortocromacia(noimportaelorigen)

    esuncolorantePANCROMICO?A)giemsa

    sonmetacromticos(basicos)?a)azultoluidinab)tioninac)azuldemetilenod)basicos

    Esunacoloracionindiferente?a)argenticasb)sudannegroc)sudan3y4

    escolorantedirecto?a)eosina

    escoloranteindirecto(mordiente)?a)hematoxilinasb)harris,mayer,hill,carazzic)weigert,verhoff

    colorindicedelahematoxilina?a)75290b)tiponatural(nohaycromoforos)

    oxidantedelahematoxilinaA)ox.rojodemercuriob)NaIO3(yodatodesodio)

    mordientedelahematoxilinaA)sulfatodealuminio(Al2(SO4)3)B)sulfatodeFe(FeSO4)

    hematoxilinas aluminicasa) harrisb) mayerc) carazzid) Gill 1,2,3e)

    hematoxilinas ferricas a) weigertb) verhoffc)d)

    CIfucsinabasicaOROSANILIN?a)42510unicoparareactivoshiffparaPASTriarylmethane

    CIac.picrico?a)10305(nitro

    CIfucsinaacida42685 Triarylmethane

    quesignificaunavalencia2?mordienteunidoa2moleculasdecolorante(quelato)val3lomismo

    PREGUNTAPROFEdiferenciaentreenlacecovalenteyenlacecovalentecohordinado?a)

    lacaA)Hm+cation+tejido

    quelatoa)HM+cation

    tincionregresivaa)seusamasb)usadiferenciador

    hematoxilinaA)regresivab)basicac)

    HEA)Sontecnicassucesivas?

    TricromicasA)PonceausB)EA50C)

    Sondecarctersimultneo?

    panopticoypancromica(colorantesneutros)?

    pancromica1baoa)giemsab)m.g.giemsac)panopticavariosbaos(susesivos)a)B)c)

    PAPEA50a)verdeluzb)pardovismarkc)eosina

    coloracionsimultanea (acidosmezclas)a)tricromicosb)EA50

    Girmsa(mescladecolorantes)enneutro,espancromico

    AzurA(metacromatico)A)AzurB(metacromatico)B)Eosinatodesodio(Acido)C)

    Esunamezclaqsetransformoensal.

    LagraciaesqazurAyazurBsonmetacromaticos

    SucesivaA)HEESDECARACTER?

    Unoneutro:giemsaA)Otroacido:masson,vangiesonB)

    SIMULTANEOSECONFUNDECOMPANOPTICO

    Pregunta

    GiemsaA)

    Quetincionocupariaparaunparacitoytambinparahematologicas?

    EosinaestipofluoronaHematoxilinanatural

    DABA)Untipicocromogeno

    GiemsaA)Metacromaticos(basicos)B)

    Tipicocromotropo

    Hematoxilina?

    TamaopartculacolorantePMA)PorosidaddelsustratoB)EfectointerfacialC)

    Tresconsideracionesfsicasimportantes

    ClaseP201Estructuraqumicayclasificacindeloscoloranteslunes,19demayode2014 5:57p.m.


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