-
Unbloquehumedoesdificildecortarorientacindelosbloquestieneqserlacorrecta,elcasomascomneslapiel.(demasblandoamasduroeslaformaadecuadadecortar)
esmejorcorarde4micronesaqde2ysedestruyacuandounosacaunacintalosprimeroscortessonmasgruesos(expansintermal)coneltiempodecorte
uniformidaddegirodelamanivelaAngulonavajacondicindelanavajadecorte
Entrelasconsideracionesqafectanelgrosordecorte:
sedebeusarunanavajanuevaunangulode10.cortestibiostiendenagenerarestatica.
desgastedelbloquesehaceentibioparasabersieltejidoesdurooblando,loscortesgeneralmentesahacenenfrio,perohayexcepcionesentejidosmascelulares,uncortefriovaasalirmasparejoyuniforme.
laexperiencianolasustituyenadausarunladodelanavajaconelfilonuevoparacortaryotrosectorparadesgastar.cuandonosalelacintahayqenfriarelcorteobloque(toallanovaconhielosinensuciar)loscortedemaneralentasonptimoscuandosalgauncortenodebeparar,sepierdeelritmoyseproduceartefactodecortealternado.
EXPERIENCIASAPARAHACERBUENOSCORTES
elbaodeflotacindebeserde5a9Cbajoelpuntodefusindelaparafina.(5458)laTagua45C(hayparafinasdedistintopuntodefusin)
asegurarsedeqaguaestelibredeburbujas(usodeaguabidestilada),cuandosubenlasburbujasestasquedandebajodelamuestra,cuandohayburbujaseltejidonoquedaadheridoalamuestra.Siestetejidosesecaseproducirnagujerosenlamuestra.(serompeeltejidoantesdeprocesar)
elladobrillantedebeestarhaciaabajo,paraqnoseformenburbujas.ocuparunportalimpioparadejartejidoyotropararecoger(limpio)hayqrecogerconunbarridosuaveenAngulode90eltejidodebeseranalizadoenelagua(verlasimperfeccionesdelcorte)recogercortecentradoconunacintayenngulorecto,asegurndosedeqescurraelagua.serecomiendaqelaguaestelimpia,porqlostrozosdeparafinahacenqserompaeltejidoosedesprenda
lamedidaidealdeaguaeshastadondeseveaelrotuladoenelporta.tenerbienrotuladoelportasacaradecuadamenteelportaobjetoconlasmuestrasydejarenformavertical10min
BAODEFLOTACION
secadonodebesuperarlos65Celsecadodebeseralmenos1horaparaasegurarqelcortenosedesprenda.elsecadoenIHQdebesertodaanoche24H37*c(elsecadodependedelatemperatura)
SECADO
cuidadosestnestablecidosenelEQ1.1EQ1.2EQ1.3ambito5EQ,ambito6INS(ENCARGARNOSDELAPREVENCIONPREVENTIVA)hacerunaextensindegarantaxqlagenteqcalibradebesercapacitada.cadavesqocupoelequipodebequedarlimpio,esadiario.(nolimpiarconxilol,daalaspiezasdeplstico)
Limpiarcom,paosecosinpelusas.lubricarequipos.mantencinunavesalao.
CUIDADOSCONELMICROTOMO
ERRORESDECORTE(mirandoalmicroscopio)
Parafinaarrastratejidoocortemuyrapidoqnopermiteladilatacin.B)Solucionesnotamponadas-
COLORACION
Laformaenlacualelcoloranteseunealtejidosontodaslasformasdeunin.Nohayningunmecanismodeaccindistintoaestosexceptoelmtododeimpregnacin.Lacoloracinesuneventoqumicoqestamediadoporalgunadeestascuatroformasdeunin.Encambiolaimpregnacinsecaracterizaporserunmtodofsico(ej.Nitratodeplata)
Fuerzaselectromagneticas-Enlacescovalentes-Puentesdehidrogeno-FuerzasdeVanDerWalls-
FORMASDEUNION
Unacoloracionesuneventoquimicomediadoporestascuatroformasdeunion.
Unaimpregnacionesunmetodofisico(comolastincionesargenticas)comoelnitartodeplataysalesmetalicaspesadaqseposansobrelostejidos.
Lostejidosanimalessonincoloros.
Tincion:eslaunionmoleculardelcoloranteactivoconalgncomponentedeltejido.
Colorante:sustanciaqumicacomplejaqueconfierecoloraotrocuerpomodificandoqumicamentesuestructura,loquesignificasuresonancia.
Acidos-Bsicos-Neutros-Indiferentes-Metacromaticos-
TiposdecolorantesDeacuerdoasuspropiedadesqumicas
TIPOSDECOLORANTES
Naturales-Artificiales-
Segnorigen:1.
NATURALES:Loscolorantesseextraendeciertasplantasyanimales. Origenanimal:Carmn: vienedelacochilla,tieelglicogeno,esalgoparecidoalPAS(enunatecnicaqsellamacarmindebest)
Origenvegetal:Hematoxilina (eselcoloranteuniversaldelosncleosyeselmasutilizadoenlahistologiaactual,seextraedeunarbolelcampeche.
Orcena (utilizadoparafibraselasticasytambienseextraedeunarbol)Orceinaunatancer
Azafrn:esuncolorantequenotieneutilidadenlatecnicahistologica
ARTIFICILES:Colorantesseobtienenapartirdeanilina.Sonsalesproducidasdelaunindeunabaseyuncido.Genricamenteselesconocecomocolorantesderivadosdelaanilina.Laanilinaesuncompuestoincolorocuyasmodificacionesqumicasproducidasenelanillobencnico leconfierenaloscompuestosnuevosuncolordeterminado.(bencenouncompuestoincoloroqtieneunalongituddeondade200nm).
sontodossales(derivadosdelaanilina)
DEACUERDOAPROPIEDADESQUIMICASAcidos-Bsicos-Neutros-Indiferentes-Metacromatico-
*Colorantescidos,Bsicosyneutrosposeenuncomponentecidoyunobsico. perosolounodeellosseencuentraactivado(paracidoybsico);enelcasodelneutro,ambosgruposseencuentranactivados.*Latincinconcolorantesindiferentesesunatincinfsica,utilizadaprincipalmenteenlaidentificacindelpidos.
cidos:Producto de la unin de un cromgeno de baja intensidad dbilmente bsico al que se le aaden grupos auxocromos fuertemente acido lo que le dan dicho carcter al colorante tie estructuras bsicas celulares en el citoplasma celula.
sal:bseincolorayelcomponentecidotienecolor(esactivo)-colorantecitoplasmtico-carganegativa(),-coloranteaninico.-
Lassustanciasqueatraenelctricamentealoscolorantescidossedenominanacidfilos.-*Ej:Eosina,Fucsinacida,Ac.Pcrico,OrangeG,safradina,cristalvioleta.
Bsicos: Asociacin de un cromgeno de baja intensidad y de carcter dbilmente cido al que se le aade grupos auxocromos catinicos fuertemente bsicos que son los responsables de la carga global del colorante por eso se utilizan para teir estructuras cidas.
Sal:baseescoloreadaysuporcincidaesincolora.-Colorantenuclear ,afinidadporcidosnucleicos(DNA,RNA)-Reaccionanconlosgruposfosfatodeloscidosnucleicos.-cargapositiva(+)-colorantecatinico.-
*Ej:Azuldemetileno oclorhidratodeazuldemetileno,quedebesupropiedadcolorantealabaseazuldemetilenoynoalHQ,queesincoloro.*Otrosej.esla lacadeHematoxilina(queeslevementeacidoperoelmordienteledalacaracteristicabsica),Tionina,AzuldeToluidina,Fucsinabsica.
Colorantes Neutros: unin colorante cido y bsico para formar un precipitado comnmente insoluble en agua y muy estable en disolucin alcohlica de esta forma siendo su carga floral neutra conservan en parte la propiedad de colorear conjunta o separadamente diferentes estructuras dependiendo de que sean o no capaces de atrapar algunos iones generando cuando la sal se disocia tras ser inestabilizada al colocarla en disolucin acuosa. Ejemplo Giemsa.
Salpartebsicacomolacidaproporcionancolor.-Tiesimultneamenteloscomponentesnuclearesyaloscitoplasmticos.-Soncolorantesexclusivamenteutilizadosparahematalogia-Elcoloranteneutrotieneunaparticularidadyesquesonmezclasdecolorantes.-prepararenetanol.-
*Ej:Eosinatodeazuldemetileno(Wright,MayGrunwaldgiemsa,giemsa,papenhem)-giemsa=azulA+azulB+eosinatodesodioentonceslospatologoslovencomosolouncolorantequetiededistintoscolores.
-
Colorantes Indiferentes: En condiciones normales colorean los tejidos por un mecanismo de impregnacin fsica no poseen carcter cido, bsico o salino definido por ejemplo la tincin argntica.
Compuestosnoinicosincapacesdeladisociacinelectroltica,noformansales-Notieneafinidadporningunaestructuradeltejido.(noesionico)-Mecanismotincinmsbienfsico,noqumico.-preparaenalcoholde70(solvente),soninsolublesenagua.-Sedisuelvenmejorenlpidosqueenelsolvente Lipofilico(coloranteporsolubilidaddiferencialmecanismofisicodetincion).
-
tieneafinidadporellipido(lipofilicos),hidrfobosynotieneningunaposibilidaddedisolverseenelagua.Entonceshayqueprobarcondistintasgraduacionesdealcoholesej,elOHde95sedisuelvenloscolorantesperodisuelveellipido,encambioelOHde70esunbuensolventedeloscolorantes,ycuandosehandisueltoyestanencontactoconuntejidograso,vahaberunacompetenciaentreelOHde70ylagrasayelcolorantesedepositaconmayorfacilidadenlagrasa. Esunatincionfeaperobastanteeficiente,porquedondeunoquieraencontrargrasasevateirnegro.
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*Tiensustanciasquetienenunpoderdisolventesuperioraldellquidoquehaservidoparaprepararlasolucincolorante.Tienporsolubilidaddiferencial(massolubleenelsolutoqenelsolvente).*Ej:Sudannegro,SudanIIIyIV
Laimportanciadeidentificarlpidoseneltejidosedaenlabiopsiamuscular(msculonosecontraeenpresenciadelpidos.Seanalizasisteconservaglicgeno)yenlabiopsiacerebral(stasedaencasosdeautopsia)Biopsiasencortescongeladosexclusivamente.
-
Seusanencortescongelados.
Colorantes Metacromticos: en condiciones normales la mayor parte de los colorantes tien los tejidos con un color parecido a l, esta propiedad es la ORTOCROMASIA, sin embargo cuando se utilizan ciertos colorantes bsicos derivado de la anilina algunas estructuras titulares se tien con tonos diferentes al que cabria esperar por el colorante usado. Por ejemplo los grnulos de los mastocitos presentan color rojo con el azul de metileno o el azul de toluidina, este efecto es la METACROMASIA y estructuras teidas LA CROMOTROPAS, los colorantes metacromticosson sustancias qumicamente puras y no de carcter salino. La explicacin se cree que se debe a que se produce una polimerizacin entre las molculas de colorante adyacente a las estructuras a teir. Existen estructuras como son por ejemplo glcidos complejos o cartlago que se observan mejor con estos colorantes metacromticos.
CLASIFICACION
Ortocromacia:tejidoadquiereunacoloracinigualaladelasolucinempleada.
Metacromacia:SoncolorantesBASICOS(qumicamentesustanciaspuras)Uncomponentedeltejidosetieconuncolordiferentealcolorempleado.
todossonbasicos-Polimerizaydependendeltejidoyaqestetieneqtenermolculasanionicas.-Notodosloscolorantesbasicossonmetacromaticos-Sontionina,azuldetoluidina,azuldemetileno-
Existemetacromaciadedistintostiposson3(dependedelpolianinqesteeneltejido)1)Alfa>PO4(fosfato)>azul.A)Beta>COOH(carboxilo)>violetaB)Gama>SO2,SO3(sulfato)>rojoC)
son6lospolianiones'?
ANFOTEROS:nosoncolorantesNeutrossoncolorantesmetacromaticoscomoelazuldemetileno.(basicos).
METODOSDECOLORACIONQUIMICOS
Directos:afinidaddirectaxeltejido(eosina)xelcitoplasmadeltejido(electroestatica)Indirectos:Requieredeintermediarios(mordiente)paraquelacoloracintengalugar(elmascomunlahematoxilina)C.I75290
Ej:Hematoxilina.porsisolanotie,esuncoloranteinactivo,hayqueoxidarloparaquetiayunmordienteparaqueseunaaltejido.(cadavesquesequieramejorarlatincinyelbrilloseaplicaunmordiente).
Coloracin5
HematoxilinaCI:75290
Seprocedeateirconhematoxilinadurante7min(estetiempoesrelativoyaquedependedelestadodelahematoxilina)porsisolalahematoxilinanotie,siendolahemateinaunahematoxilinamaduradaporoxidacinconoxidorojodemercurio,yodatodesodiouotromtododeoxidacin,naturaloqumico.Estahemateinatienequeseracompaadadeunmordiente,elmordienteeselqueseunealtejidocorrespondeaunasalmetlicabiotribalentequelepermitealcoloranteunirsealtejidoconmsdeunenlace.EsteessulfatodeKyAl(enHxdeHarris),formandoasunalaca.
Hematoxilinaoxidada(Hemateina+mordentada(Alocation))(quelato+tejido)=laca
mordiente:Uninmetlicopolivalentequeformacomplejosdecoordinacinconciertostintes.
Quelato:Un complejo de coordinacin formado entre un in (cation) de metal polivalente y ciertos tintes. este es soluble en agua si tiene una valencia de 3 (unido a 3 hemateinas y esta estabilizado)
HM+ cation + tejido = laca
Diferenciacin
SerealizaconAlcoholcidoOHCl2soloundippingyaqueestetiendeasacarmuchoelcolorante,estoesunaextraccinselectivadeelexcesodecolorante,porlogeneral0,5% cidoclorhdrico1%enetanolal70%(alcoholdecidoestndar).
Siessuficienteobservaremosel(ncleocelular)yaqesesteelobjetivo,ynoteirtodalamuestradehematoxilina,sinosexcedemoslavamosconaguacorriente,luegodestiladaytrataremosdereteir.Ycontinuamosconlatcnica.
Azulamiento
Cuandoseaplicaapartirdeunmediocido,comolamayoradehematoxilinasestasson,elcolorinicialrojoladrillo.Estecolornoespermanenteysedebecambiaraazul.Lafaserojadealumbrehematenaessoluble,ysefiltrarlentamentedelasestructurasencualquiermedio,inclusobajoelcubreobjetos.Lafaseazulesinsolubleygeneralmenteseconsideraqueespermanente
ElcambioserealizaalterandoelpH.Eshabitualcolocarlasseccionesteidasydiferenciadosenunmedioalcalinoporunpardeminutosparaconvertirlamancha,acontinuacin,alavarconaguaparaeliminartodoloqueseutilizaparamodificarelpH.
ElmediomssimpleesagregarunasgotasdeamoniacoslidoconunpocodeaguahastaquetengaunpHdeaproximadamente9a10,acontinuacin,colocarlasseccionesenellahastaqueestnuniformementeazul.Otrosagentesazuladosonadecuadossonlasolucin0,11%decarbonatodelitio,acetatodesodioal0,5%,2%debicarbonatodesodioounasolucinmscompleja,comosustitutodelaguadelgrifo.
Enelcasodellaboratoriousaremosboraxotambinllamadoboratodesodiodurante(30segundos).
Despusdeazularpasamosporaguadestiladacontinuandoconlaeosina.
Progresivos:cuandolasolucindetincinseledejaactuarlentamentehastaalcanzarelefectodeseado.Sehaceactuaralcolorantehastaquellegueasupuntooptimo, estelodeterminaelusuario.-Serecomiendaparatejidosmuycelulares,amgdalas,ganglios(sedebeconocereltiempooptimodelcolorante).
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elproblemaesqesunatinciondemaciadovariable-caractercorto1min-
Regresivo:Serealizaunasobrecoloracinyluegoseeliminaelrestodelcolorantepormediodediferenciadores (eliminacoloracinespecficamente).seocupamasenellaboratorio-Aqusesobretieeltejidoydespussediferencia,aquseextraeselectivamenteelexceso,ejemplositeimospor10minutosenhematoxilina,sacamosylavamosenaguadestilada,veremosteidoslosncleoslasfibraselsticas,algunasmembranasbasalesdbil,tincincitoplasmticatambindbil,fibrasmuscularesycolgenosmuydbilescomoceleste,loquesehacecomovamosaaplicarunsegundocolorante,necesitamossacarelexcesodecoloranteselectivamente sinquitarlatincindelnucleo,porloqueseusaunreactivo,queeslacombinacindeacidoclorhdrico1%conalcoholde70,quenospermitemedianteunsolopasosacarelexcesoyluegoallavarenaguavaaquedarblancotodoloquenoseanucleo=tincinregresivaconceptomuyimportante,esteprocesonospermitevolveratrsyrecuperarlatincinencasodequesemehayaolvidadosacarlasplacasenhematoxilina.Tambinestilcuandonohaymastejidoynecesitohacerunatincinespecial,entoncestomounaplacaqueestateidaconH/Eylablanqueoparahacerlanuevatincin.
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Laeosina sevaconelalcoholde95entre10a15minutos.ParadesteirunaplacaconH/Ehagotodoelprocesoinverso,ejparadesmontardejolaplacaenxilol,luegohidratarempezandoconalcoholde100.Esestemtodoqueseusatambinparateirunamuestraendoscpicaantesdelainclusin,conelobjetivodediferenciarla,sequitaluegoconalcoholynointerfiereconlaposteriortincinsoloquesedejapormenostiempoenlaeosina
Simple:Seutilizasolouncoloranteparateiralgncomponentecelularotisular.Combinado: compuestaocombinada:Aplicacindevarioscolorantesconlafinalidaddedestacar,mediantediferentescolores,estructurasespecficas.LacoloracincompuestapuedeserSimultneaoSucesiva.PorejemplolaHE
Simultnea:Seproducecuandoenunamismasolucindecoloracinsemezclanvarioscolorantes(todosloscidosfuncionandeestamanera).NOSONNEUTROS(unsolobaovarioscolrantes)
Sondistintoscolorantesenunsolobao, generandounatincinvariada.Entricromicos podemosusargiemsascarlettconfucsinaacida=2clorantesacidosdistintos.OJOentricromicoscomoveremosmasadelantesihaymezclasperosonneutras.(ejemplodesimultaneaponceau)(lasclulassuperficialesintermediasdecuellouterinosonorageofilicas),tiendedistintoscoloresdistintosetstratosdelepitelio.
Sucesiva:Consisteenaplicaralostejidossolucionessucesivasdevarioscolorantes,conlafinalidadqueciertoscomponentessetianconalgunosdeellos.
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Panoptico: Coloracincombinadaconcolorantesneutros actuandosucesivamente,sonvariosbaossucesivos.(colorantesneutros)Pancromica:Utilizasolocolorantesneutros enunsolobao, ejemploelGiemsa,seusaparatejidohematopoytico,parasitosymicroorganismosengeneral,sepone30minutosenelbao,selava,sepasaporalcoholes,semontaylisto.
GIEMSAOrtocromatico:nucleoAzulMetacromatico:prolongaciondelasestructurashematologicas.Silamezclanotieneeosinatoymetanol,lamezclanosaldracomoloesperamos-
Sonestos2requisitosEosinatodesodio-Metanol-
APRENDERSE:progresiva,regresiva,pancromicaypanptica.
Teorasdelacoloracin.
A los radicales qumicos responsables de la modificacin molecular a la que se debe la aparicin del color se le llama grupo cromforo y se denomina cromgeno al conjunto formado por el grupo cromforo y el anillo bencnico. Cromgeno no es sinnimo de colorante ya que el cromgeno no siempre tiene apetencia por el tejido o no se une fuertemente al tejido.
Etileno --------------------------------------- (>C=CC=O)Tiazlico --------------------------------------- (>C=S)
Imino --------------------------------------- (>C=N)Azoico --------------------------------------- (-N=N-) Orange G; rojo congo; sudanes; ponceau S Nitroso --------------------------------------- (-N=O)
Nitro --------------------------------------- (-NO)
La conversin del cromgeno en colorante est vinculada a la adiccin sobre la molcula cromtica de otros grupos atmicos que la confieren o le dan la oportunidad de disociarse electrolticamente o de formar sales con los diferentes tejidos. Estos radicales se los denomina grupos auxocrmos o potenciadotes del color. Generalmente tienen carga elctrica es decir posee carcter cido o bsico y son los responsables de que el colorante tenga mayor o menor afinidad por la estructura que va a teir.
Clasificacin de los colorantes segn los Grupos Cromforos.
Los grupos auxocrmos de importancia son: el grupo hidroxilo, carboxilo, amino, sulfidrilo y determinados iones derivados del Fe, Cr, Al y del Mb.
En funcin del grupo cromgeno que contienen. Existen 8 grupos de colorantes:
Nitrocolorante
Colorante azoico
Antraquinona
Acridina
Oxacina Azuldenilo Tiacina AzurA;azurB;Azuldemetileno;tionina;azuldetoluidina
Acina Difenilmetanos;rojoneutro;safranina
Trienal metano
Fucsinaacida;fucsinabasica(rosanilin);Cristalvioleta;
Xianteno Ftalocianina de Cobre
Clasificacin de los colorantes segn los Grupos Auxocrmos y Apetencia Tisular.
El cdigo -numrico nos remite a lo que se denomina C.I. que es el ndice Calorimtrico del colorante que nos sirve para identificarlo y lleva 5 dgitos.
Cinco grupos fundamentales:
1) Colorantes Bsicos: asociacin de un cromgeno de baja intensidad y de carcter dbilmente cido al que se le aade grupos auxocromos catinicos fuertemente bsicos que son los responsables de la carga global del colorante por eso se utilizan para teir estructuras cidas.
Ejemplo: laca de hematoxilina - colorante nuclear.
Fucsina bsica
Galocianina
2) Colorantes cidos: productos de la unin de un cromgeno de baja intensidad dbilmente bsico al que se le aaden grupos auxocromos fuertemente acido lo que le dan dicho carcter al colorante tie estructuras bsicas celulares en el citoplasma celular: Eosina-C. Citoplasmtica / Fucsina-cida.
3) Colorantes Neutros: unin colorante cido y bsico para formar un precipitado comnmente insoluble en agua y muy estable en disolucin alcohlica de esta forma siendo su carga floral neutra conservan en parte la propiedad de colorear conjunta o separadamente diferentes estructuras dependiendo de que sean o no capaces de atrapar algunos iones generando cuando la sal se disocia tras ser inestabilizada al colocarla en disolucin acuosa. Ejemplo Giemsa.
Las estructuras as coloreadas adquieren una tonalidad policroma = multicolor.
4) Colorantes Indiferentes: En condiciones normales colorean los tejidos por un mecanismo de impregnacin fsica no poseen carcter cido, bsico o salino definido por ejemplo la tincin argntica.
5) Colorantes Metacromticos: en condiciones normales la mayor parte de los colorantes tien los tejidos con un color parecido a l, esta propiedad es la ORTOCROMASIA, sin embargo cuando se utilizan ciertos colorantes bsicos derivado de la anilina algunas estructuras titulares se tien con tonos diferentes al que cabria esperar por el colorante usado. Por ejemplo los grnulos de los mastocitos presentan color rojo con el azul de metileno o el azul de toluidina, este efecto es la METACROMASIA y estructuras teidas LA CROMOTROPAS, los colorantes metacromticos son sustancias qumicamente puras y no de carcter salino. La explicacin se cree que se debe a que se produce una polimerizacin entre las molculas de colorante adyacente a las estructuras a teir. Existen estructuras como son por ejemplo glcidos complejos o cartlago que se observan mejor con estos colorantes metacromticos.
Teora del Proceso de Coloracin o Mecanismos de Coloracin
Los mtodos de tincin se fundamentan en una serie de procesos fisicoqumicos complicados que venan segn los colorantes algunos son todava desconocidos no se sabe si la coloracin se efecta por procesos fsicos o qumicos. Aunque ambas teoras intervienen y adems se produce una serie de procesos complicados que entran en el campo de la fsico-qumica (aunque el proceso de coloracin la
- M. Fsicos: ligados a las propiedades de disolucin e impregnacin del colorante sobre el tejido, el colorante es ms soluble en el tejido que en el disolvente que acta como medio de transporte, suele ser agua, un ejemplo: la tincin para grasas, en esta el colorante se disuelve mas fcil en los lpidos titulares que en la solucin alcohlica siguiendo reglas de la difusin para el colorante de la solucin colorante a las estructuras de su predileccin tambin el proceso de impregnacin se basa en m. Fsicos en este caso el colorante tiene un gran volumen molecular o bien se hace una precipitacin selectiva en forma de agregados insolubles de manera que el colorante queda atrapado entre la mellad e clulas y fibras que constituyen los tejidos.
- M. Qumicos: La reaccin entre colorante y tejido ocurre por procesos qumicos bien definidos de manera que al interaccionar se produce un nuevo cromgeno responsable del color obtenido, los procedimientos que se fundamentan en este mecanismo. Se agrupan en el campo de la histotecnologa que estudia la estructura qumica y la composicin de los tejidos mediante reacciones qumicas especificas para la localizacin microscpica de determinadas sustancias.
- M. Fsico-Qumicos: Se basa en la formacin de uniones intermoleculares por atraccin electrosttica (cargas diferentes) de manera que el colorante cido tiene estructuras bsicas y viceversa.
VOCABULARIO EN LAS TENICAS DE COLORACIN:
Coloracin progresiva: en ella se deja actuar el colorante hasta que la coloracin alcanza la intensidad deseada, se lleva el control exacto de los tiempos y el punto exacto se controla con el microscopio.
Coloracin regresiva: en ella una se sobrecolorea y luego se elimina el exceso de colorante, a ste ltimo proceso se le llama diferenciacin que se puede hacer con agua, con cidos, alcohol, bases o con soluciones metlicas.
Coloracin Terminal: Colorea estructuras cuya intensidad es independiente del tiempo que acta el colorante.
Impregnacin: en ella se utilizan sales metlicas como cloruro de oro, nitrato de plata y se origina precipitados metlicos en las estructuras.
Coloracin en Bloque: en ella las piezas se tien, se incluyen, se cortan tal cual.
Coloracin directa: el colorante tie por el mismo, necesita mordiente.
Coloracin indirecta: el colorante no tie por si mismo sino que hay que tratar con un mordiente
Coloracin Topogrfica: es aquella que proporciona una visin de conjunto, de manera que se pueden separar todos los componentes arquitecturales.
Coloracin estructural: nos sirve para resaltar ciertas estructuras titulares. Ejemplo: ncleos, fibras elsticas
Quimicamenteloscolorantessecomponendedoselementos,unoeselcromoforoyotroeselanillobencenico,sinosotroencontamosunaestructuraqtengaundobleenlaceentrelosbencenos,N=NEstamosenpresenciadeuncoloranteazoico.Ej:EnestecasoesDi azoicoN=N
Perodeacuerdoalauxocromo
Cromoforo:
Dadoque,pordefinicin,colorantessoncompuestosaromticossuestructuraincluyeanillosdeariloquehandeslocalizadosistemasdeelectrones.Estossonresponsablesdelaabsorcinderadiacinelectromagnticadelongitudesdeondavariables,dependiendodelaenergadelasnubesdeelectrones.Porestarazn,loscromforosnohacentintesdecolorenelsentidodequelesconfierenlacapacidaddeabsorberlaradiacin.Msbien,cromforosfuncinmediantelaalteracindelaenergaenlanubedeelectronesdeslocalizadadelcolorante,yestaalteracinresultaenqueelcompuestoabsorbalaradiacindentrodelagamavisibleenlugardefueradeella.Nuestrosojosdetectanquelaabsorcin,yrespondenalafaltadeunacompletagamadelongitudesdeondaporverelcolor.
Auxocromo:Eselcomponenteqhaceqelanillobencenicoreccioneconeltejido.Correspondenalosauxiliaresdelcolor,qestanencondicionesdereaccionar.Reaccionanconlasfuerzaselectroestticasqsonlasqmasactuan.
NH3(+)COOH() HSO3 ()OH()ElSHValencia+1o1AminoCarboxiloSulfonicoHidroxiloEnalgunoscasos
Cl2 Br
Estaestructuracuandonohaymordienteosi(quelato)esqhaycumplelafunciondeunirsealtejido.
Hayaxocromosde2tiposAcidos-Basicos-
Siseuneaunaestructuraxmediodeunaxocromodiremosqes
AxocromobasicotipoazoN=NElcasode(rojocongo)hayqverlavalenciade8........2xcara
CromogenoEscuandonoexisteauxocromoenlaestructurabencenica(2muyimportantes)ADB(diaminobencidina)colorantetipocromogenoconanilloperosinauxocromo,nosepuedeunirsnada,launicamaneraesreduciendose,soloporredipuccioncambiadecolor,HIQDABsereduceytiedecafetodaslasestructuras.
-
CROMOTROPOEselsustratodeloscolorantesmetacromaticos,siviramosysetiesediceqeseessucromotropo.Giemsa-Azultoluidina-Metacromaticasbasicas-ShifCuandoactuasolosobrelosaldehidos(todosloshidroxilostenemosqpasarlosaaldehido)-Atpasa-Citocromooxidasa-Amilasasalibal-EZ-
Sustanciascromotropassonlasqsetienconmucosustancias.??!?.Dudapreguntaralprofe
42520;fucsinabasica(rosanilin)Fucsinabasicaesunamezla
Cadavesqunoveeltejidotieneqfijarseentrescosasimportantes.(consideracionesfisicasgenrales)leerymarcar
.
.
Enlacesconjugados
enlacesaislados,yexistenindependientementedeotrosdoblesenlacesenlamismamolcula.Silostomosadyacentestienendoblesenlacessedenominanenlacesdoblesconjugadosylosbonosinteractuarunosconotros.Configuracionescromforoexistenamenudocomovariasunidades,despusdehaberconjugadodoblesenlaces,ysonmseficacescuandolohacen.Estoesdebidoalainteraccinentrelosdoblesenlaces,loqueprovocaladeslocalizacinparcialdeloselectronesqueparticipanenlosenlaces.
Dependiendodeeltamaodelapartculaysupesomolecularqestamuyrelacionadoteiremosdiferencialmentedistintasestructurasdeltejido.
TinciondeVANGIESON(tricromico)enellabocupamosponseauSyseocupafucsinaacida.Tinciondelmusculo(bajopesomolecular)acidopicricoPM:229,1gr/molCI:10.305-PonseauS(altopesomolecular)tielacolagenaPM:760,6Gr/molCI:27.795-
Elsustratobebepermitirladifusinporalgnespaciosubmicroscopico..
Sehaceunefectobloqueoenlaentradaoelcuellodelaporosidad.Colorantetiendeacolocarseenlapartedeafura,elcoloranteestamasconcentradoafuera.(laexplicacindelatincionylasobretincion).Estoesloqeliminamosenladiferenciacin,poresoestanpeligrosa.
Pregunta
FuerzaelectroestticaA)PuenteshidrogenoB)EnlacecovalenteC)FuerzasvanderwallsD)
Mtodosqumicos?
Impregnacin(tincionesargenticas)A)Mtodofsico
PreguntaDiferenciaentrecoloranteytincion?
T:unionmol.C.act.a.Comp.tej.A)C:sust,quim,conf,col,a,otraestructuramod.Quim,estr,yresonancia.
B)
Pregunta
ColoranteA)Terminocromoforoseasociamasa?
AcidosA)MordientesB)OxidantesC)
ElcasodelaeosinanoesDiferenciacinyaqlosdiferenciadoressolopuedenser?
Combinada...simultaneaosucesiva.A)QUETIPODETINCIONESLAHE?
PreguntaCualesladiferenciaentresimultaneoypanoptico?
Simultaneo:acidosporlogeneraluotros,espartedeunacombinada.
A)
Pancromico:solocolorantesneutros
B)
Barioscolorantesenunmismobao
HEA)TricromicosB)VangiesonC)MassonD)
Sonsimultaneos?
Sonpancromicos?
Giemsa(colorantesneutros)A)
Pregunta
SeccionesgruesasA)Coresobreaguasucia(espaciosxarrastretejido)
B)
LineasnavajamelladaC)Disgregacin(aguamuycaliente)D)Cortecraquelado(bloquefrio)E)Rugosidad(navajanoapretada)F)Pliegues(cortemuycalienteej.Utero)
G)
ExcesivacompresinH)SobreexposicinenflotacinI)BurbujasbajolaseccinJ)PresenciadepolvoK)
Erroresmasapreciableseneltejido?
Pregunta
HematoxilinaA)OrceinaB)AzafranC)
Carmin(animal)D)
Soncolorantesnaturales?
Pregunta
EosinaA)FucsinaacidaB)Ac.PicricoC)OrangeGD)CristalvioletaE)SafraninaF)
Soncolorantesacidos?
FucsinabasicaA)Hematoxilina(mordentado)B)TioninaC)AzuldetoluidinaD)azuldemetilenoE)
Colorantesbasicos
Soncolorantesneutros(mezclas)
WrightA)GiemsaB)MaygrunwaldgiemsaC)PapenhemD)
Colorantesdehematologia
SudanNegroA)Sudan3B)Sudan4C)
Indiferentes (noionicos,noformansales,sindisociacinelectrolitica)SolublesoloenOH
Pregunta
Sudannegro,3y4A)
Unicocoloranteqnosepuedepasaralavarenagua?
Pregunta
SolopuedeserconcortecongeladoA)Nolavarenaguasinoqsoloalcoholes
B)
Tieporsolubilidaddiferencial.C)
Caractersticadelabiopsiaensudan?
Pregunta
EosinaA)
Sonejemplosdeortocromacia(noimportaelorigen)
esuncolorantePANCROMICO?A)giemsa
sonmetacromticos(basicos)?a)azultoluidinab)tioninac)azuldemetilenod)basicos
Esunacoloracionindiferente?a)argenticasb)sudannegroc)sudan3y4
escolorantedirecto?a)eosina
escoloranteindirecto(mordiente)?a)hematoxilinasb)harris,mayer,hill,carazzic)weigert,verhoff
colorindicedelahematoxilina?a)75290b)tiponatural(nohaycromoforos)
oxidantedelahematoxilinaA)ox.rojodemercuriob)NaIO3(yodatodesodio)
mordientedelahematoxilinaA)sulfatodealuminio(Al2(SO4)3)B)sulfatodeFe(FeSO4)
hematoxilinas aluminicasa) harrisb) mayerc) carazzid) Gill 1,2,3e)
hematoxilinas ferricas a) weigertb) verhoffc)d)
CIfucsinabasicaOROSANILIN?a)42510unicoparareactivoshiffparaPASTriarylmethane
CIac.picrico?a)10305(nitro
CIfucsinaacida42685 Triarylmethane
quesignificaunavalencia2?mordienteunidoa2moleculasdecolorante(quelato)val3lomismo
PREGUNTAPROFEdiferenciaentreenlacecovalenteyenlacecovalentecohordinado?a)
lacaA)Hm+cation+tejido
quelatoa)HM+cation
tincionregresivaa)seusamasb)usadiferenciador
hematoxilinaA)regresivab)basicac)
HEA)Sontecnicassucesivas?
TricromicasA)PonceausB)EA50C)
Sondecarctersimultneo?
panopticoypancromica(colorantesneutros)?
pancromica1baoa)giemsab)m.g.giemsac)panopticavariosbaos(susesivos)a)B)c)
PAPEA50a)verdeluzb)pardovismarkc)eosina
coloracionsimultanea (acidosmezclas)a)tricromicosb)EA50
Girmsa(mescladecolorantes)enneutro,espancromico
AzurA(metacromatico)A)AzurB(metacromatico)B)Eosinatodesodio(Acido)C)
Esunamezclaqsetransformoensal.
LagraciaesqazurAyazurBsonmetacromaticos
SucesivaA)HEESDECARACTER?
Unoneutro:giemsaA)Otroacido:masson,vangiesonB)
SIMULTANEOSECONFUNDECOMPANOPTICO
Pregunta
GiemsaA)
Quetincionocupariaparaunparacitoytambinparahematologicas?
EosinaestipofluoronaHematoxilinanatural
DABA)Untipicocromogeno
GiemsaA)Metacromaticos(basicos)B)
Tipicocromotropo
Hematoxilina?
TamaopartculacolorantePMA)PorosidaddelsustratoB)EfectointerfacialC)
Tresconsideracionesfsicasimportantes
ClaseP201Estructuraqumicayclasificacindeloscoloranteslunes,19demayode2014 5:57p.m.
