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PLAN NACIONAL PARA EL CULTIVO DEL LENGUADO
Bases para el control de la reproducción y conocimiento del sistema de defensas naturales en
el lenguado senegalés (Solea senegalensis)
2009-2011
Objetivos Generales
Conseguir reproducción controlada en cautividad
con ejemplares de lenguado procedentes de cultivo
Determinar condiciones de cultivo para una óptima
respuesta inmune y resistencia a patógenos en juveniles
A.1. Búsqueda de terapias hormonales para facilitar ovulación, espermiación y desove natural
A.2. Desarrollar técnicas para conseguir la reproducción artificial
B.1. Determinar niveles óptimos de respuesta inmune
B.3. Conseguir protocolos eficaces de prevención de enfermedades
B.2. Conocer como se modifica la respuesta inmune por las condiciones de manejo en cultivo
A.3. Establecer fuentes de variabilidad que afectan a la reproducción de ejemplares de cultivo
Objetivos Específicos
Proyecto coordinado entre las CC AA de: Andalucía, Canarias, Cantabria, Cataluña, Galicia y Valencia.
Coordinador: José Pedro Cañavate Hors
Aplicación de hCG en machos estimula la puesta de huevos en hembras de la población. Recomendación dosis hCG de 500 IU/kg para estimular parámetros reproductivos en machos F1.
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.1. Terapias hormonales para facilitar desove natural
Aplicación de GnRHa induce secreción de esteroides sexuales y la ovulación en hembras F1. Dosis mínima de 5 ug/kg s u f i c i e n t e p a r a i n d u c i r esteroidogénesis y ovulación.
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.1. Terapias hormonales para facilitar desove natural
Tratamiento de reproductores F1 con implantes GnRHa no afecta significativamente los niveles de hormonas sexuales.
Hembras Machos
Aunque sí estimula maduración oocitaria y ovulación de hembras, pero no la producción de esperma en machos ni la fecundación de huevos.
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.1. Terapias hormonales para facilitar desove natural
Disfunción reproductora del lenguado F1 centrada en fallo de cortejo de los machos, ya sea con hembras F1 también o salvajes. Las hembras F1 o F2 sí son capaces de completar el cortejo con machos salvajes.
La aplicación de GnRHa, hCG y el PGF2a aumenta la frecuencia de liberación de huevos, pero no estimula el comportamiento reproductor.
Hembras F1 Hembras salvajes
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.2. Técnicas para conseguir la reproducción artificial
Protocolo de inducción hormonal mediante inyección, para hembras F1 en estado de madurez gonadal avanzado (E3), que permite obtener huevos para realizar fecundación artificial.
Tiempo de respuesta a la inducción hormonal
Evolución de fecundación y eclosión según el tiempo post-ovulación
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.2. Técnicas para conseguir la reproducción artificial
Importancia de la hora del día
para la estimulación
hormonal
Huevos obtenidos artificialmente pueden ser fecundados y dan lugar a larvas usando esperma
crioconservado, tanto de machos salvajes como F1.
06:00 12:00 19:00
El alimento fresco n a t u r a l e n reproductores F1 a u m e n t a l a s e c r e c i ó n d e esteroides sexuales durante el desarrollo g o n a d a l , e n c o m p a r a c i ó n a r e p r o d u c t o r e s a l imentados con pienso compuesto comercial.
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.3. Fuentes de variabilidad para la reproducción en cultivo
M a y o r secreción de E2 en hembras y de 11KT en m a c h o s d u r a n t e l a gametogénesis
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.3. Fuentes de variabilidad para la reproducción en cultivo
Alimentación con pienso comercial reduce calidad de esperma
Y calidad de huevos
Importancia de ácido araquidónico (ARA) en la dieta de reproductores. 2.3-3.2% ARA resulta en composición nutricional y fisiología reproductora similares a la de lenguados salvajes.
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.3. Fuentes de variabilidad para la reproducción en cultivo
Los reproductores de lenguado son capaces de seleccionar dietas con 3% de contenido en ARA.
El nivel de ARA se refleja en variaciones de esteroides sexuales en machos, pero no en hembras.
Y en la expresión de COX2
Existencia de ritmo endógeno de reproducción en el lenguado, que persiste en ausencia de señal de fotoperiodo. Ausencia de efecto de este factor externo muy clara para Esteroide Inductor de Maduración (MIS).
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.3. Fuentes de variabilidad para la reproducción en cultivo
Refuerzo evidencias sobre papel predominante de la temperatura en la regulación de la puesta de huevos en cautividad del lenguado.
Modificación de la temperatura durante la metamorfosis altera la proporción de sexos en poblaciones de lenguados cultivados.
A. Reproducción controlada con lenguados procedentes de cultivo
A.3. Fuentes de variabilidad para la reproducción en cultivo
A.1. Niveles de referencia de la respuesta inmune
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
El desarrollo del sistema inmune innato del lenguado se inicia durante su metamorfosis, periodo en el que genes básicos como la lisozima g y la fracción C3 del complemento experimentan una evolución muy notable.
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.1. Niveles de referencia de la respuesta inmune
Generación base de datos sistema inmune lenguado
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.1. Niveles de referencia de la respuesta inmune
Generación base de datos sistema inmune lenguado
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.1. Niveles de referencia de la respuesta inmune
Generación base de datos sistema inmune lenguado
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
Algunas secuencias de genes de inmunidad: Ruta del complemento: factores c1qlike, C1q 23Kd-like, c1r, c1s, C2, C3, C4-1, C4-2, C5, C6, C7-1, C7-2, C8 gamma, C8 alfa, C9, Properdin, factor D/, Factor H. Interleucinas: 1B, 1B-like, 2, 6, 8 type I, 8 type II, 8 type III, 8 type IV, 10, 11a, 11b, 12, 15, 15-like, 16, 17C, 17N, 18, 22. Citoquinas y quimiocinas: Second macrophage colony-stimulating factor, Macrophage migration inhibitory factor, Macrophage migration inhibitory factor-like, monocyte-to-macrophage differentiation factor 2, LPS-binding protein/bactericidal permeability-increasing protein, C-C motif chemokine 19, C-C motif chemokine 25, chemokine CXC10-like, C-X-C motif chemokine 14, C-X-C motif chemokine 13, C-C motif chemokine 20. Factores antivirales: Proteína Mx, Interferon C, factores reguladores de interferón (IRF) IRF1, IRF2, IRF3, IRF4a, IRF5, IRF7, IRF8, IRF9, IRF10. Varios: lisozimas (g-type lysozyme 1, g-type lysozyme 2, g-type lysozyme 3, c-type lysozyme 1, c-type lysozyme2) y antígenos de diferenciación (CD9 antigen, CD48, CD40).
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.2. Modificación respuesta inmune por condiciones de cultivo
Menor actividad para genes básicos del sistema inmune innato (lisozima, hepcidina, complemento) en lenguados cultivados en régimen intensivo frente a los cultivados en régimen extensivo. Importancia de mantener niveles adecuados de respuesta en la primera barrera frente al ataque de patógenos.
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.2. Modificación respuesta inmune por condiciones de cultivo
Puesta a punto de nuevos marcadores de estrés en el lenguado como herramienta válida para conocer procesos de aclimatación en diferentes condiciones.
Receptores para Glucocorticoides (GR1 y GR2). Fosfolipasa A2 (PLA2) Ciclooxigenasa (COX2) Lipooxigenasa (LOX) Genes de receptores de prostaglandina (EP2, EP3 y EP4). Delta 6 desaturasa
Expresión génica de:
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.2. Modificación respuesta inmune por condiciones de cultivo
Uso de aceite de pescado como fuente básica de lípidos en dietas con bajo contenido graso para el lenguado es fundamental de cara a obtener ejemplares cultivados en óptimas condiciones fisiológicas, capaces de responder en mejores condiciones a las situaciones de estrés.
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.2. Modificación respuesta inmune por condiciones de cultivo
Mayor acumulo de grasa en enterocitos con el uso de aceites vegetales
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.2. Modificación respuesta inmune por condiciones de cultivo
GR1 Intestino GR2 Intestino
Aumento de temperatura produce efecto diferente en GR según tejido:
GR1 Hígado GR2 Hígado Descenso en hígado
Aumento de la expresión relativa en intestino
Sin efecto en músculo
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.2. Modificación respuesta inmune por condiciones de cultivo
Se recomienda el uso de sistemas de recirculación de agua para el engorde del lenguado. La estabilidad en la calidad del agua y constancia en la temperatura son dos factores muy importantes para opt imizar e l rendimiento de las instalaciones de engorde de lenguado.
B. Condiciones para óptima inmunidad y resistencia a patógenos.
A.3. Procedimientos eficaces para prevención de enfermedades
La aplicación de pulsos de 15 días del probiótico Pdp11 fresco en el preengorde y engorde de lenguado senegalés es aconsejable.
Infección natural Infección inducida Alta densidad Baja densidad
Mayor nivel de triglicéridos y ácidos grasos en lenguados alimentados con probióticos.
Posible relación con mejor absorción y transporte lipídico
Baja densidad + Pdp11. Mayor activación metabólica frente a estrés agudo.
HASTA AQUÍ HEMOS LLEGADO!!!!
GRACIAS A JACUMAR Y AL TRABAJO DE UN EXCELENTE EQUIPO DE PROFESIONALES