automatizacion en microbiologia
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AUTOMATIZACION EN MICROBIOLOGIA
AUTOMATIZACION EN MICROBIOLOGIA
Marco Terencio V116-27 a.C.Insectos
Vectores deenfermedades
Avicena981-1037Describe
síntomas y tratamiento de gusanos
Hipócrates 460 -377 a.C.Enfermedad no es mágicaEnfermedadalt. Fluido
Vital y miasma
Girolano Fracastoro 1478-1553
Transmisibilidadde las enfermedadesPoema sobre la sífilis
HISTORIA : MICROBIOLOGIA
ZACARIAS JANSSEN1590-1608
Construyo Sistema de Lentes compuestos
GALILEO GALILEI1564-1609
Construyo primerMicroscopio simple
ANTONY VAN LEEUWENHOEK
1632 – 1723 1676,observa yDibuja bacterias
de la saliva
Carta 39, 17 Sept. 1683
EDWARD JENNER 1749 – 1823
Padre de la Imunología
1798: Preparó la vacuna contra la viruela humana.Realizó inoculaciones a humanos utilizando pústulas de viruela vacuna y comprobó que esta práctica protegía frente a la viruela humana.26 de Octubre 1979 la O.M.S. da por erradicada esta enfermedad del mundo
LOUIS PASTEUR 1822 – 1895 Padre de la
Bacteriología
1856: Fermentación por levaduras1857: Fermentación láctica1861: Culmino con la teoría de Generación espontánea 1866: Pasteurización1880: Identificó agente del Cólera en la gallina. 1881: Inmuniza ovejas contra el Carbunco1885: Vacuna contra la Rabia
ROBERTO KOCH 1843 – 1910 Nóbel Fis. y Med. (1905)
Las enf. infecciosas son provocadas por microorganismos y elaboro técnicas para identificar y aislar bacterias 1876: Demuestra la etiología del Carbunco o Ántrax, Bacillus anthracis1882: “Myco. Tuberculosis”1881: Estudio esporas y diferencias de los bacilos 1881: técnicas de laboratorio: medios de cultivo sólidos 1883: descubre el Vibrión colérico en Egipto
JOSEPH LISTER (1827 – 1912)
1867: Las bases de la desinfección y antisepsia en cirugía, utilizando fenol y bicloruro de mercurio en en el lavado del instrumental quirúrgico, manos y heridas de pacientes
Frederich Loeffler (1852-1915)-Klebs:descubre bacilo diftéricoKarl Joseph Ebert (1835-1926): el agente causal de la fiebre tifoideaArmauer Hansen (1841-1912), LepraAlbert Neisser (1855-1916), aísla el GonococoArthur Nicolaier ,descubre el bacilo tetanicoKitasato y Yersin ,descubren el bacilo de la peste
Descubrimiento de la Penicilina (1929)Descubrimiento de la Penicilina (1929)
Fleming, Sir Alexander.Fleming, Sir Alexander. Observó que un moho que contaminaba una de sus placas de cultivo, había destruido la bacteria cultivada en ella,
llamado Penicillium notatun.
Descubrimiento de la Estreptomicina (1944)Schatz y Waksman: Descubren la estreptomicina. Producida por hongo Streptomyces griseus
HANS C. J. GRAM (1853 – 1938)
1884, Coloración GRAM
HANS C. J. GRAM (1853 – 1938)
1884, Coloración GRAM
Tyndall Tyndall (1820-1893) ,1877 Evidencia la presencia de (1820-1893) ,1877 Evidencia la presencia de formas microbianas resistentes al calor (esporas formas microbianas resistentes al calor (esporas bacterianas).bacterianas).
Schaudinn y Hoffmann 1906 ; Descubren que Treponema pallidum , causa la Sífilis
Paul Ehrlich ( 1854-1919 ) ,1910 desarrolla quimioterapéutico (Salvarsán) frente a la Sífilis
ROBERTO GALLO ( U.S.A. )JEAN LUC MONTANIER ( FRANCIA )
1984: Descubren el VIH
1915-1917 , Descubren los virus bacterianos “Bacteriófagos”
D’Herrelle y Twort
Schönlein (1839) : Schönlein (1839) : Describe asociación de HONGOS Describe asociación de HONGOS con con
la Tiña (infección en piel)la Tiña (infección en piel)
1910: Comienza la era de la Biología Molecular1979: Se sintetiza la insulina por técnicas de ADN.1982: Se desarrolla la vacuna contra la Hepatitis B.
Watson y Crick :1953 , Proponen la estructura de la doble hélice para el ADN.
1933 el primer Microscopio Electrónico de Transmisión.1980 el primer Microscopio Electrónico de Barrido
El dinámico desarrollo de la microbiología en el siglo XX-XXI
Descubrim
iento de A
gentes infecciosos
Era de la
Antibioticoterapia
Prevenciónvacunas
Epidem
ias
B- lactam
icos
Am
ino
glu
cosid
os
Macro
lido
sQ
uin
olo
nas
Genética
Microbiología
Bioquím
ica
Revolución del Laboratorio
Biología BásicaAc. nucleicosCódigo genéticoMecanismo de síntesis proteica
Automatización Microbiología
En ProcedimientosUso ordenadores de
gestión MicrobiologíaEn diagnostico
HibridomasAc. monoclonales
específicos
PCR
¿PORQUE LLEGAR A LA AUTOMATIZACION?
Primer Método utilizado (1966), Estandarizado 0.5 Escala Mc Farland (Turbidez-inoculo)
Criterios de Interpretación (R, I, y S)Los escatogramas o scatterplots
Para la interpretación de CIM y disco difusión . •Los aislamientos son analizados con los métodos estándar de difusión por disco y CIM del NCCLS. La CIM y su correspondiente diámetro de zona son delineados para cada aislamiento.
Panel de microdilucion en Caldo - CIM
La prueba de microdilucion en caldo - CIM se realiza en placas de poliestireno (0.1 ml) .
Una placa contiene de 7 a 8 diluciones de 12 diferentes antibióticosUna celdilla es control (+) (caldo+inoculo)Control (-) (solo caldo)
Placas para Gram negativos y Gram (+)Caldo Muller Hinton recomendableHay paneles específicos
Caldo contiene Cationes Ca ++ y Mg ++
Cada lote examinado PH después de preparado (7.2 a 7.4) y Tº 25ºc
Para neumococo suplementar 2-5% sangre caballo lisado
Colocar standares de control de calidad
Grupo N acilo
Anillo Tiazolidinico
Posición aminoacídica 39 42 104 164 237 238 240 265 TEM-1 Ala Glu Arg Ala Gly Glu Thr
TEM-2
TEM-3 Lys Ser
TEM-4 Lys Ser Met
TEM-5 Ser Thr Lys
TEM-6 Lys His
TEM-7 Lys Ser
TEM-8 Lys Lys Ser Ser
TEM-9 Lys Ser Met
TEM-10 Ser Lys
TEM-11 Lys His
TEM-12 Ser
TEM-13 Lys Met
TEM-14 Lys Lys Ser Met
TEM-15 Lys Ser
Posición aminoacídica69 165 244 275 276
TEM-1 Met Trp Arg Arg Asn
TEM-31 (IRT-1) Cys
TEM-30 (IRT-2) Ser
TEM-32 (IRT-3) Ile
TEM-35 (IRT-4) Leu Asp
TEM-33 (IRT-5) Leu
TEM-34 (IRT-6) Val
TEM-36 (IRT-7) Val Asp
TEM-37 (IRT-8) Ile Asp
TEM-38 (IRT-9) Val Leu
TEM-39 (IRT-10) Leu Arg Asp
TEM-40 (IRT-I67) Ile
TEM-41 Thr
TEM-45 (IRT-14) Leu Gln
Posición aminoacídica
35 179 205 238 240 SHV-1 Leu Asp Arg Gly Glu
SHV-2 Ser
SHV-2a Gly Ser
SHV-3 Leu Ser
SHV-4 Leu Ser Lys
SHV-5 Ser Lys
SHV-7 Ser Lys
SHV-8 Asn
SHV-11 Gln
SHV-12 Gln Ser
BLEE B- Lactamasa relacionada
País de origen En especies detectadas
TEM TEM1 Y TEM2 FRANCIA Enterobacterias
SHV SHV 1 / LEN ALEMANIA P. Aeruginosa / BGNNF
CTX-M cefotaxaminasas
KLUA Kluyvera Alemania/Argentin E. coli, Salmonella
OXA OXA 10 Turquía/Francia P- aeruginosa
PER FRANCIA P.- aeruginosa
VEB PER Vietnam/Tailandia E. Coli
TLA CME-1 MEXICO E. Coli
GES/IBC Guayana/ Sudafr. K. Pneumoniae y Pseudomona
BES Y. Enterocolitica Brasil S. marcescens
SFO AmpA S. fonticola Japon E. cloacae
1 Antibiótico en sangre2 Bacterias sensibles a los
antibióticos3 Bacteria no sensible a los
antibióticos4 Bacterias muertas por
antibióticos5 Bacteria sobreviviente
6 Bacteria con resistencia creciente a antibióticos
7 Bacterias muertas por antibióticos
8 Población bacteriana con resistencia creciente al antibiótico
GENES DE RESISTENCIA BACTERIANA:GENES DE RESISTENCIA BACTERIANA:
1 Plásmido2 Antibiótico expulsado3 Genes de resistencia antibiótica4 Enzima que degrada al antibiotico5 Antibiótico que ingresa6 Antibiótico que ingresa7 Enzima que altera el antibiótico8 Antibiótico que ingresa9 Cromosoma
MRSA O SARM O SUPERBUGSTAFILOCOCO AUREUS RESISTENTE A LA METICILINA
MRSA O SARM O SUPERBUGSTAFILOCOCO AUREUS RESISTENTE A LA METICILINA
•E.U. 300,000 contraen infecciones en hospitalizacion /año •CDC ,número de muertes 12,000 por año•UCI ,aislamiento llega a 50% (R) a Meticilina, Penicilina, Tetraciclina y Eritromicina
•Factores de riesgo: prolongada hospitalización, uso múltiple de antibióticos previos,etc.•En la comunidad niños ,ancianos y portadores enf. crónicas•Endémico en Hospitales ,Neumonía ,Infecc. qx, bacteriemias.
En el Perú : UCI ,Unidad de Quemados, Oncologia y Cirugía, Resistencia del 58% (500 cepas aisladas-1995)En la actualidad brotes epidémico relacionado a la colonizaciónDel personal de salud (MINSA)
VISA – Resistencia Intermedia a la Vancomicina (GISA)VISA – Resistencia Intermedia a la Vancomicina (GISA)
Susceptibilidad intermedia a la Vancomicina, CIM 8-16 ug /ml y completamente Resistentes a CIM >= 32 ug /ml
VISA debido al engrosamiento de la pared celular que contiene precursores capaces de ligar Vancomicina extracelularmente.La mayoría contiene mecA ,las MIC de 4 ug /ml reportadas se consideraran VISA potenciales y se recomienda repetir pruebasDescrito 1996 en JapónEn EU. en pacientes con MRSA, que reciben Vancomicina por tiempo prolongado, en diálisis.
VRSA : STAPHYLOCOCCUS AUREUS RESISTENTE A VANCOMICINA , 2002 EN EE.UU.
HOSPITAL BASE VALDIVIA 2007
RESISTENCIA DEL ESTAFILOCOCO AUREUS
RESISTENCIA INDUCIBLE A CLINDAMICINARESISTENCIA INDUCIBLE A CLINDAMICINA
bacterias poseen gen de B- Lactamasa y se exponen un agente B-Lactàmico.Esta acción antimicrobiana en la pared celular activa mecanismo genético en cascada que inicia la producción deB-Lactamasa.
la producción cesa en ausencia de antimicrobianos en la pared
B-Lactamasa AmpCB-Lactamasa AmpC
Panorama actual Panorama actual La aparición cada vez más frecuente y diversa de los
mecanismos de resistencia microbiana, sobre todo en bacterias patógenas facultativas y oportunistas, ha traído consecuencias importantes en términos de morbilidad y mortalidad y millonarias pérdidas humanas y económicas
Resistencia incrementada en caso de staphilococcus, streptococcus y enterococcus y bacilos Gram negativos (enterobacterias y no fermentadores)
Dificultad para predecir los patrones de resistencia en pacientes críticos
El uso de la Terapia de amplio espectro de alto costo y numerosos efectos secundarios o adversos que se presentan
Panorama actual Panorama actual La necesidad de
entrega de resultados oportunos ,evita que la terapia inicial se prolonga innecesariamente
Mortalidad : Resultado > 72 hrs. da
como consecuencia el aumento de mortalidad
en pacientes críticos y sobrevida disminuye 30% por cada día de retardo a entrega de resultados
VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS Perú 2007 -INS
VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS Perú 2007 -INS
HOSPITAL Aislados E. Pediátricas ( R )
Aislados H. Unanue
(R)
ANTIBIOT.
Cefazolina
Clindamicina 28 53.6 % 46 87
Eritromicina 29 69 46 91.3
Gentamicina 27 59.3 38 81.6
Oxacilina 29 58.6 43 90.7
Vancomicina 29 0 36 0
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS Perú 2007 -INS
VIGILANCIA DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS Perú 2007 -INS
Escherichia coli-Resistencia
Hospital aislado H. Unanue aislado I.M.P aislado E. Pediátricas
AntibiotAmicacina 84 2.4 % 106 8.5 % 82 4.9 %Amox.Cl 227 63.9 83 18.1 79 55.7Cefotaxima 69 31.9 66 27.3 78 32.1Ceftriaxona 180 30.5 115 34.8 82 32.9Cefuroxima 71 23.9Ciprofloxac 74 65.4 116 30.4 45 33.3ESBL 53 98.1 31 71 82 32.9Nitrofurant 190 7.9 102 8.4 69 1.4Trimet- Sulf 220 65.9 95 80 80
TEM-1 de E. coli 1.8 A de resolución
ANTIMICROBIANOS Perú 2007 – INS
Pseudomonas aeruginosa
ANTIMICROBIANOS Perú 2007 – INS
Pseudomonas aeruginosa
Hospital aislado 2 de Mayo aislado H. Unanue
Antibiótico
Amicacina 72 37.5% 73 47.9%
Aztreonam 75 33.3 71 80.3%
Ciprofloxacina 73 46.6% 80 65
Gentamicina 76 46.1 72 65.3%
Imipenem 64 43.8
Meropenem 52 50%
ANTIMICROBIANOS Perú 2007 – INS Klebsiella pneumoniae
ANTIMICROBIANOS Perú 2007 – INS Klebsiella pneumoniae
Hospital aislado IMP aislado H. Unanue aislado S. Bernales
AntibióticoAmicacina 56 60.7% 42 11.9 31 19.4
Amp. Clav 48 22.9 75 77.3 31(A-S) 41.9 (A-S)
Aztreonam 36 80.6
B-lactamasa 42 95.2
Cefalotina 75 76
Cefazolina 31 93.5 31 58.1
Cefotaxima 36 77.8 31 45.2
Ceftriaxona 63 81.1 31 45.2
Cefuroxima 31 51.6
Ciprofloxacin 52 21.2 66 45.5 31 25.8
Factores de riesgo de adquirir infecciones por cepas productoras de BLEE
DesnutriciónBajo peso al nacer
Gravedad de la infección Duración de la estadía en el hospital y en UCIProcedimientos invasivos
Receptores oncológicos
Reservorios y vectores
Termómetros Cánulas de oxígenoMascaras y tubos de ventiladores mecánicosJabón líquidoInsectosGel para ecografíasTrabajadores de la salud
Papel de la AutomatizaciónPapel de la Automatización Los sistemas automatizados acortan los
tiempos porque mejoran la sensibilidad analítica de los métodos
Capaces de detectar el desarrollo bacteriano en una suspensión con y sin antimicrobianos antes que el laboratorista detecte turbidez (fundamento de los sistemas automatizados)
Metodología: colorimetría – turbidimetria -fluorometria etc.
ventajas EspecificaciónImpacto clínico Rapidez en el resultado
de 3 a 10 horas.
Inicio o cambio precoz del antimicrobiano
costos hospitalización y análisis de laboratorio ,de usos de antibióticos
Estandarización y control de calidad
de la reproductibilidad intra e ínter laboratorio
Disminución de la carga de trabajo
Requieren manos personal en métodos del MIC
CONDICIONES SOBRE SU UTILIZACION
ventajas Especificación
Disminución de errores post analíticos
Evita la transcripción errónea de resultados por el uso de programas
Utilización de sistemas de expertos
Permite actualizar anualmente las guias de NCCLS que permite el informe selectivo de los antimicrobianos. Monitorizar resultados inconsistentes
ventajas Especificación
Patrones fenotipitos de resistencia
Permite sospechar la presencia de B lactamasas de espectro extendido y cefalosporinas
Facilita las estadísticas Almacenar y procesar información para una análisis de tendencias anuales de susceptibilidad
Facilita el control en el uso de antimicrobianos
Informe de resultados en línea con el comité farmacológico
desventajas EspecificacionesAlto costo (3 veces mayor
Que los manuales)
El equipamiento y los insumos (paneles o tarjetas) - “tarifas diferenciadas o “uso para hospitalización y críticos”
Requieren método de respaldo
Frente a cualquier falla se necesita un back up o metodología manual de respaldo
No existen normas NCCLS para sistemas automatizados, no aplicables a todas las bacterias
Sin embargo se deben considerar los métodos empleados (puntos de corte o MIC)
desventajas Especificaciones
Poca flexibilidad en los antimicrobianos ensayados
Paneles o tarjetas están determinadas por el fabricante.
Existen tarjetas especiales pero requiere consumo mínimo
desventajas Especificaciones
Discrepancia con métodos convencionales de referencia
Problemas:
Haemophilus Influenza Neumococos, Gram (-) no fermentadores, y Anaerobios .
Cefepime y Pseudomonas
Vancomicina (I) en el caso de Enterococcus
Imipenem ,falsa (R) o (S) con Pseudomona y Acinetobacter baumanii .
desventajas Especificaciones
Discrepancia con métodos convencionales de referencia
Problemas:
B lactamasa en algunos Gram negativos requieren prolongada incubación para expresar ( R )
FDA recomienda para errores mayores (sistema informe R siendo (S) ,la tasa no > 1.5% ,la concordancia sea 90% , fallas de crecimiento =< 10%
SISTEMAS AUTOMATIZADOSSISTEMAS AUTOMATIZADOS
Diferentes grados de automatización Métodos Calorimétricos,
Turbidimetricos , Fluorescencia Lectura a tiempos determinados Lectores muy sensibles al crecimiento
aumentan la velocidad de entrega de los resultados
Componentes TecnológicosComponentes Tecnológicos
Panel o tarjeta de Trabajo Software
MicrobiológicoControl de Calidad Cepas ATCCMotor de Base de DatosEstadístico y EpidemiológicoNormas de la CLSI (antes NCCLS)Comunicación (Interfaz)
BiomeriuxVitek
SiemensMicroScan
Becton DickinsonBD Phoenix
Panel o Tarjeta de Trabajo
Biomeriux
Vitek SiemensMicroScan
Becton DickinsonBD Phoenix
Caracteristicas de PanelesMICRO Scan
Caracteristicas de PanelesMICRO Scan
Identificación solamente
Sensibilidad solamente
(BP o MIC)
Combo (ID+ATB)
Tecnología del PanelTecnología del Panel Paneles Convencionales – Colorimetrica y Turbidez
– Gram Negativo / Gram Positivo Paneles Cromogénicos – Colorimetrica Enzimatica Identificación en 4 hrs
– ID de Levaduras– HNID (Haemophilus, Neisseria, Moraxella y Gardnerella)– ID de Anaerobios
Paneles Rápidos Fluorescentes - Fluorescencia– Gram Negativo– Gram Positivo
Synergies Plus Panels – Fluorescencia y Turbidez– Gram Negativo– Gram Positivo
Paneles Especializados – Turbidez– MicroStrep Plus– ESBL confirmatorio
Colorimetrica y Turbidez
Colorimetrica y Turbidez
Colorimetrica Enzimatica
Fluorescente Fluorescente y Turbidez
MIC (Concentración Mínima Inhibitoria)
Concentración del antibiótico in vitro por método cuantitativo.
4 – 5 diluciones por antibiótico
17 – 27 ATB /panel
BP (Breakpoint) Susceptibilidad in
vitro cualitativa (S, I, ó R)
Concentración de antibiótico equivalente a las reglas CLSI - breakpoints
1-2 diluciones por droga - 29-33 ATB por panel
ANTIBIOGRAMA
PANEL ESβL plusPANEL ESβL plus Confirmar la producción de Beta Lactamasas de Espectro
Extendido en E. coli, Klebsiella oxytoca y Klebsiella pneumoniae.
La inoculación con la técnica de turbidimetría o de prompt. Incubar 20-24 hrs. A 35 ± 1°C sin CO2 en incubadora externa.
Determinación cualitativa con lectura manual de crecimiento en pocillos como turbidez o nebulosidad en todo el pocillo.
Interpretación del resultado (disminución 3 diluciones en Caz y Caz/CA ó Cft y Cft/CA):
ESBL positivo ESBL negativo
Se ingresa al software manualmente el resultado en el apartado de ESBL para confirmar el resultado si es positivo o negativo.
ESBL panel (B1027-101)
PANEL MICro STREP plusPANEL MICro STREP plus Determinar la sensibilidad de antimicrobianos para estreptococos aerobios no enterococos (incluidos St.
pneumoniae). Inoculación del panel (turbidimetría con tubo 0.5 de Mc Farland).
TSA con 5% de sangre de carnero
25 ml de LHB (B1015-25)
0.5 McFarland =
0.08 ± 0.02 turbidímetro
Incubar 20-24 hrs. a 35 ± 1 °C
en una incubadora
externa.
Se ingresa al software manualmente el resultado donde el crecimiento se presenta como turbidez. Cualquier cambio de color en el medio no se considera crecimiento.
Salina (B1015-12)
4-5 colonias
100 mcl
Inoculador
2 veces
MICro STREP panel (B1027-201)
PANELES Synergies PlusPANELES Synergies Plus
Organismos Gram NegativosGram Positivos
Tipos de Panel Combo, MIC sólamente, ID Medio de cultivo Agar Sangre para Gram Negativos Identificación 138 Gram negativos Antibióticos 31 para Gram negativos
Tiempo de Lectura 2.5 hrs ID con base en la fluorescencia
MIC 4.5-16 hrs, Read-When-Ready 80% MIC en 6.5 hrs Método de Lectura Sistema WalkAway®
Almacenamiento Temperatura Ambiente Vida de Anaquel Un año Reactivos Ninguno
ANTIBIÓTICOS EN PANELES SYNERGIES PLUS
ANTIBIÓTICOS EN PANELES SYNERGIES PLUS
Antibióticos que se liberarán en cuanto estén listos
Amikacina Ampicillina Ampicillina/Sulbactam* Ceftazidima Ceftriaxona Cefuroxima Ciprofloxacina Gatifloxacina Gentamicina Imipenem Levofloxacina Meropenem Moxifloxacina Nitrofurantoina* Norfloxacina Piperacillina/Tazobactam* Piperacillina* Tobramicina Trimetoprim/Sulfametoxazol
Antibióticos de incubación convencional
Amoxicillina/Clavulanato
Aztreonam
Cefazolina
Cefepime
Cefotaxime
Cefotetan
Cefoxitin
Cefalotina
Cloramfenicol
Tetraciclina
Ticarcillina
Ticarcillina/Clavulanato
* Antibióticos de incubación convencional en algunos paneles.
INOCULACIÓN DE PANELESINOCULACIÓN DE PANELES
1-Desembolsar el Panel
2- Imprimir y pegar el código de barras al panel
3- Tomar la colonia 4- Un prompt para ID y sensibilidad.
5- Vaciar suspensión bacteriana al inoculador
6- Preparar una placa de pureza
7- Usar el Renok para inocular panel
8- Cargar el panel en el WA
Colorimetría, mide color de soluciones.Fluorometría, mide fluorescencia y luz dispersa y reemitida en varias direcciones.
Turbidimetría, mide luz no dispersa a través de una solución turbia.
Dual combinacion de dos tecnologias a la vez
Lectura
Visual sin equipo
Equipo AS-4
Equipo WA 40/96 SI
SiemensMicroScan
Centro de Comando LabPro
Muestra lista de códigos de barra de
nuevas ordenes del LIS
Paneles completados
Paneles recién cargados
Cargar Paneles
Probabilidad del organismo
Interpretaciones CLSIResultados suprimidos
del reporte
Texto de Alerta
ordenado por prioridadInformaciones necesárias para tomar decisiones
aparecen en la misma pantalla
Click + para exibir texto de instrucciones
de alertas
Código de colores para resultados “Fuera de Control”
Sumário y Edición de Resultados QCSumário y Edición de Resultados QC
Entrada & información acción correctiva & manutención de archivos w/QC; apoya guias del CAP
LabPro: EpidemiologiaLabPro: Epidemiologia
Excluir drogas no-formulário
Reporte ordenado
por organismo
Critério de aislados duplicados definidos por el usuário
Reportes de
Incidencia Bacteriana
Sistema – Elaborado por el usuario– Automatizado programado día y hora
Interfaz– Unidireccional y/o bidireccional– Labpro – Labpro– Labpro – Sistema del Hospital– Labpro - Whonet
Control de Calidad MicroScan Nacional : MINSA – INS
Internacional m: NCCLS - USA
Streptococcus pneumoniae Resistente a Penicilina: Evaluación CuantitativoStreptococcus pneumoniae Resistente a Penicilina: Evaluación Cuantitativo
2,0 g/ml
RR
<0,12 g/ml
SS II
0,12 - 1,0 g/ml
Hansman & Bullen, 1967, en Australia.
Appelbaum et al., 1977; Jacobs et al., 1978; Koornhof et al., 1978, en África del Sur. CIM2,0 mg/ml de penicilina
Resistencia se incrementa a nivel mundial, España, Africa del Sur, Sudeste Asiático y Estados Unidos
VRE – Enterococo Resistente a VancomicinaVRE – Enterococo Resistente a Vancomicina
Resistencia intrínsecaResistencia a las Cefalosporinas
“National Nosocomial Infections Surveillance System” (1999)– 2º en bactiremias– 2º en infecciones urinarias
EQUIPOS DE APOYOEQUIPOS DE APOYO
El Eddy Jet para realizar las siembras en espiral.El uso de una micro-jeringa desechable de gran precisión, evita la contaminación cruzada.
Instrumento óptico que utilizado con un ordenador WXp o Vista se convierte en un potente contador de colonias.Con un software opcional se puede utilizar para un número ilimitado de nuevas aplicaciones.
EQUIPOS DE APOYOEQUIPOS DE APOYO
El Spin Air es el instrumento para el muestreo microbiológico del aire.El diseño especial de los orificios combinado con la lenta rotación de la cápsula permite el uso del 100% de la superficie comparado con el 5% de la misma que emplean los aparatos fijos.
Para realizar diluciones volumétricas 1 a 10ml para muestras microbiológicas.También pueden realizar diluciones gravimétricas utilizando una balanza externa. reducen la mano de obra, ahorran tiempo y aseguran esterilidad y precisión.
Coloración GRAMColoración GRAM
Poly Stainer : automático para la tinción de Gram.totalmente programableAlmacena diez programas diferentes, para definir el baño, el tiempo de inmersión y la agitación.
PhoenixPhoenix Sistema automatizado de identificación y sensibilidad Comunicación con el equipo por iconos. Capacidad de incubación de 100 paneles Sistema de fácil inoculación Control y calibración interna, no requiere mantenimiento. Lectura : convencional, fluoro génico y cromogénico. Medidas cinéticas de las reacciones: cada 20 min. Funcionamiento autónomo, incluyendo el sistema experto
BDXper. Conexión al sistema Epicenter Conexión al Sistema de Gestión de Laboratorio
Phoenix: PantallaPhoenix: Pantalla
Phoenix: InsumosPhoenix: Insumos
Panel y sellador: bandeja de poliestireno, moldeada sellada y autoinoculante. 136 pozos: 51 ID y 85 en AST.
Caldo Phoenix ID y AST Indicador Azul de Alamar Estación de Inoculación Recipiente para paneles Nefelómetro Crystal Spec o BD
Phoenix Spec. Pipeta 25 ul con micropuntas.
Phoenix: InsumosPhoenix: Insumos Identificación: 45 substratos:
convencionales, fluorogénicos y cromogénicos, Carbohidratos, fuentes de carbón o Esculina.
Sin adición de reactivos 5 bases de datos Resultados a 2,3,4, 6 y 12 hrs. Información de valores de
confianza y reacciones de los substratos.
B-Lact en la parte ID para los paneles G+
Phoenix: InsumosPhoenix: Insumos Paneles para ID/AST Combo
o solo AST para 1x25:• Gram negativos: NMIC/ID• Gram positivos PMIC/ID• Streptococcus SMIC/ID• Panel de formato único:
NID,PID,PMIC,NMIC,SMIC. Temp. almacenamiento de
reactivos: ambiente. Bioseguridad: Cierre hermético Resultados rápidos: 80% de
los resultados de AST completo en < de 10h.
Phoenix: InsumosPhoenix: Insumos
Sensibilidad: Caldo AST/AST-S 8 ml, Azul de
Alamar. 20 a 22 antibióticos por panel. > de 3 diluciones por Antibiótico Doble diluciones ESBL incluido en cada panel G-
con 2 métodos de detección NMIC/ID, NMIC, PMIC/ID,
PMIC, SMIC/ID, SMIC.
Phoenix: Medios de Obtención de InoculoPhoenix: Medios de Obtención de Inoculo
Phoenix: InoculaciónPhoenix: Inoculación
Colonias puras, 18-24 hr de incubación.
Hacer escala de McFarland 0.5 o 0.25.
Añadir una gota del indicador azul de Alamar.
Phoenix: InoculaciónPhoenix: Inoculación
Transferir 25 ul o 50 ul de inoculo ID al caldo AST.
Servir ambas soluciones en el panel según corresponde ID o AST.
Cierre el panel: hermético.
Phoenix: IncubaciónPhoenix: Incubación1. Escanear el
código de barras.
2. Teclear o escanear el
numero de muestra.
3. Introducir el panel en el Phoenix.
Phoenix: Control de CalidadPhoenix: Control de Calidad
Lectura de lotes automática
Cepas ATCC variadas
Phoenix: Método de IdentificaciónPhoenix: Método de Identificación
Substratos: convencionales. Cromogenicos, fluoro génicos, Esculina H.C.
Base de datos después de 2,3,4,6, y 12 hrs. de incubación.
Phoenix: Método de análisisPhoenix: Método de análisis Sensibilidad: Diluciones seriadas con MIC real
doble dilución: mínimo 3 dil por antibiótico. Lectura basada en:
– Indicador de actividad metabólica: redox– Cambios de turbidez
Medición cinética cada 20 min. 6 – 16 hr. .
Phoenix: Marcador de ResistenciaPhoenix: Marcador de Resistencia
Marcadores de Resistencia: tests específicos (ESBL) o Características fenotípicas
No se requiere de Test de confirmación adicional BDXpert utiliza estos marcadores para tomar acción apropiada
o hacer recomendaciones. Los marcadores son:
– ß-Lactamasa de Staphylococcus (Nitrocefinasa)– MRSA (basado en Interpretacion de Oxacilina y Cefoxitin.)– VRE (basado en MIC Vancomicina).– Sinergia con aminoglicosidos en Enterococcus
(Gentamicin500mcg/ml y Streptomycin1000mcg/ml)– ESBL
Epi CenterEpi Center
Inter-conexión de Microbiología
EpiCenter: Informe ClínicoEpiCenter: Informe Clínico
EpiCenter: Estadística y EpidemiologíaEpiCenter: Estadística y Epidemiología
EpiCenter: GraficosEpiCenter: Graficos
EpiCenter: Cubo Dinamico.EpiCenter: Cubo Dinamico.
DESARROLLADO PARA LA INVESTIGACIÓN ESPACIALTARJEDAS PEQUEÑAS-SE INCOCULA CON UN SISTEMA DE VACÍO- ENTRE 4 Y 10 HORAS (JORNADA LABORAL)LECTURA CADA 60 MINUTOS
DESARROLLADO PARA LA INVESTIGACIÓN ESPACIALTARJEDAS PEQUEÑAS-SE INCOCULA CON UN SISTEMA DE VACÍO- ENTRE 4 Y 10 HORAS (JORNADA LABORAL)LECTURA CADA 60 MINUTOS
Tecnología – Tarjeta
TrazabilidadUnión electrónica Por código de Barras
Seguridad Unidades Selladas
Rendimiento64 pocillos
SimplicidadInóculo único
1 Preparación de la Muestra
2 Entrada código barras
3 Carga del sistema
123 especies 159 especies 52 especies
Aumento de la productividad Completo menú ID
98% de la rutina ID realizable en una plataforma
Menú de antibióticos FLEXIBLE
~ 20 antibióticos por tarjeta +Rango MIC EXPANDIDO + Antibióticos deducidos
Manejo de ICONOS - Árbol de navegación
1 Entrada cassette
2 tarjetas 3 Muestra
Resultados para el médico
los resultados e Identificaciones precisas
API referenciaAPI referencia
Equipado Sistema de Expertos™ Reporte correcto de Interpretación
Alerta de mecanismos de resistencia
Tiempo respuesta - 80% aislamientos
95% de la rutina bacteriana en 6 horas Soporte a las decisiones terapéuticas
Resultados rápidos - ID
E. coli 5K. pneumoniae 5P. aeruginosa 6P. mirabilis 4
E. faecalis 4S. aureus 5S. pneumoniae 5S. epidermidis 6
Método tradicional
6 hrs Enterobacteriaceae
18-24hrs Todos los Microorganismos
9 hrs No-fermentadores
< 5 hrs Staph Oxa R
3 Resultados en el dia - Sensibilidad
Detección rápida de la resistencia Bacteriana Rápido ajuste y rotación del tratamiento Rápido aislamiento del paciente
La automatización en el aislamiento primario :Hemocultivos
Desinfección adecuada de la zona , tiempo de espera de acción desinfectante,punción tradicional desinfección final del septum de la botella.
Espera 2 min.
Desinfectar septum
BACTERIEMIA Y FUNGEMIABACTERIEMIA Y FUNGEMIA
“Presencia de Bacterias y/o levaduras y/o hongos en sangre indicando la falla del sistema inmune del huésped para localizar la infección en su foco primario o la falla del médico remover, drenar y/o esterilizar aquel foco.”
“... La tasa de mortalidad está entre 20% al 50% ”
HEMOCULTIVOSHEMOCULTIVOS
Síntomas de sospecha de bacteremia :
Fiebre de origen desconocido (> 38°C) o hipotermia (<36°C)
shock, escalofríos Infecciones severas (meningitis,
endocarditis, neumonia, pielonefritis, Absceso abdominal…).
Frecuencia cardíaca acelerada Alta o baja presión sanguínea Aumento de la frecuencia
respiratoria
Hemocultivos: importancia del volumenHemocultivos: importancia del volumen
WEINSTEIN,M.REV INF DIS,1983
Nº DE EPISODIOS= 282
3 MUESTRAS DE 15 ml CADA UNA
1º= 91% POSITIV 2º= >99% POSITIV
WASHINGTON, J.MAYO CLIN PROC. 1975
Nº DE EPISODIOS= 80
3 MUESTRAS DE 20 ml CADA UNA
1º= 80% POSITIV. 2º= 88% POSITIV 3º= 99% POSITIV
Criterios de interpretaciónCriterios de interpretación
MICROORGANISMOS QUE SIEMPRE REPRESENTAN BACTERIEMA
S.pneumoniae, H.influenzae, N.meningitidis, S.agalactiae, Brucella spp, M.tuberculosis, Bacteroides spp, Fusobacterium spp, H.capsulatum, C.neoformans, Leptospira.
MICROORGANISMOS QUE GENERALMENTE REPRESENTAN BACTERIEMIA
S.aureus, enterobacterias, P.aeruginosa, S.pyogenes, C.albicans
Criterios de interpretaciónCriterios de interpretación
MICROORGANISMOS QUE PUEDEN SER CONTAMINANTES O REPRESENTAR BACTERIEMIAS VERDADERAS:Estreptococos grupo viridans, Clostridium spp, C.tropicalis.
MICROORGANISMOS QUE GENERALMENTE REPRESENTAN CONTAMINACION:SCN, Bacillus spp, Corynebacterium spp, P.acnes, bacilos gram negativos no fermentadores (excluyendo a P.aeruginosa)
DDiaia 1 1 al 15 al 15Paso 2 Paso 2
24 – 48 hrs24 – 48 hrs
Paso 3 Paso 3
24 – 72 hrs24 – 72 hrs..
Método tradicional
Se requiere un máximo de 15 díaspara descartar un negativo
Subcultivo Identificación yantibiograma
Tecnología Colorimétrica
• Utilización de un sensor liquido tipo plasma.
• Membrana de silicona impregnada al plasma de sensibilidad
• Cambio sensitivo de CO2 diluido
• Generación de color permanente.
Unidades de reflectancia
2
Uso para hemocultivos, fluídos corporales y micobacterias.
La curva de crecimiento es automáticamente
GRABADA
ANALIZADA
GUARDADA
0 1 2 3 4 5 6 7
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
Days tested
Reflectance Units
1 Sustained acceleration2 Rate3 Initial threshold
1
3
2
• Algoritmos– Independientes al
tipo de medio monitoreado.
– Immediata notificación de positivos.
– Algoritmo de alto valor inicial. (ventaja en la entrada de botellas demoradas).
Tecnología Colorimétrica
Bourbeau PP et al. Routine incubation of BacT/ALERT FA and FN blood culture bottles for more than 3 days may not be necessary. J Clin Microbiol. 2005;43:2506-2509
Importancia de la automatizacionTiempo de recuperación
74% en Día 1 20% en Día 2 4% en Día 3 2% en Día 4 1% en Día 5
Estos resultados demuestran que el 98% de los aislamientos clínicamente significativos fueron recuperados en los 3 primeros días de incubación y el 94% dentro de los 2 días de incubación.
1.Cockerill FR III, Wilson J.W., Vetter E.A., et al. Optimal testing parameters for blood cultures. Clin Infect Dis. 2004 ;38 :1724-1730
Importancia de la automatizacionTiempo de recuperación
Estos datos sugieren que períodos de incubación extendidos previamente recomendados para la detección de microorganismos fastidiosos que a veces causan endocarditis, incluyendo Brucella, Capnocytophaga y Campylobacter spp., y el grupo HACEK (Haemophilus, Actinobacillus, Cardiobacterium, Eikenella y Kingella spp.) no son necesarios CUANDO SE UTILIZA SISTEMAS DE HEMOCULTIVOS AUTOMATIZADOS DE MONITORIZACIÓN CONTINUA
99.5% de la infecciones de sistema circulatorio (no endocarditis) y 100% de los episodios de endocarditis fueron detectados con 5 días de incubación.
Impacto de la contaminaciónImpacto de la contaminación
Un hemocultivos falso positivo puede conducir a un tratamiento antibiótico innecesario, mayor tiempo de hospitalización y mayores costos.
Se ha estimado que cada hemocultivo contaminado puede llevar a un aumento en:
estadía del paciente - en 6 días en promedio, el tiempo de terapia antibiótica – en 3 días, el costo de la administración de antibióticos puede ser
de hasta US$ 4400
Barenfanger et al. Clinical and Financial Benefits of Rapid Bacterial Identification and Antimicrobial Susceptibility Testing J. Clin. Micr, May 1999 p1415-1418
BACTEC 9050BACTEC 9050BACTEC 9050BACTEC 9050
Tecnología de monitoreo contínuo de la serie BACTEC ® 9000Sistema no invasivoCapacidad de 50 vialesInterfase gráfica de fácil uso:
Pantalla de cristal líquidoTeclado sencillo
Lector de código de barras fijoajuste de la intensidad de la alarmaformato de fecha/hora
El material del sensor es una sustancia sensible a la concentración de CO2
El sensor genera una señal fluorescente, la cual es detectada por el analizador.
La fluorescencia aumenta a medida que aumenta la concentración de CO2
El material del sensor es una sustancia sensible a la concentración de CO2
El sensor genera una señal fluorescente, la cual es detectada por el analizador.
La fluorescencia aumenta a medida que aumenta la concentración de CO2
Filtro de Detección
SENSOR
Filtro de Excitación
LEDPhotodiode
LED
CO2
Fotodiodo
FELIZ NAVIDAD Y PROSPEROAÑO NUEVO
COSTOS DE UCI-HSRCOSTOS DE UCI-HSR HOSPITALIZACION 106.00 / día OXIGENO 53.00 / día DESCARTABLE 20.00 (sondas , mascaras) MEDICAMENTOS 100.00 (Imipenem – asociados) Materiales de asepsia 40.00 total 319.00 gasto por día Promedio de estancia 5 días Total = 1595.00 Sin considerar análisis de control y Rx (15.00)si amerita Gases arteriales : 25.00 + hemograma 12.00 +
coagulación 25.00 + bioquímica 18.00 (glucosa,urea,creatinina) +hemocultivo 45.00 + otros 17 =142.00
Importancia de la automatización Conclusiones
Importancia de la automatización Conclusiones
Tratamiento inicial acertadoTratamiento inicial acertado– Beneficios clínicosBeneficios clínicos
– Menor morbi-mortalidadMenor morbi-mortalidad– Menor tiempo de internaciónMenor tiempo de internación– Menor toxicidadMenor toxicidad– Reducción de costosReducción de costos
– Beneficios epidemiológicosBeneficios epidemiológicos Disminuir presión de selección de cepas RDisminuir presión de selección de cepas R
Estudio de resistencia los antibacterianos en el Centro Medico Naval -2000Estudio de resistencia los antibacterianos en el Centro Medico Naval -2000
Escherichia coli ( R) 60% Penicilinas ,B lactamicos, , Cefalosporinas
Recomendamos estudiar con detalles la resistencia de Estafilococo aureus y tomar las medidas necesarias para evitar su desiminacion : (R) Penicilinas y Céfalosporinas: 70%
Necesario que el Dep. de Microbiologia realice una vigilancia permanente de la resistencia a los antimicrobianos y la aparición de cepas multiresistentes
Farmacia debe realizar estudios de utilización de antibióticos El personal de enfermería alerta ante el problema de
resistencia y establezca medidas para evitar la diseminación Comité de Infecciones y la vigilancia Epidemiológica Uso racional de antibióticos
Programa de Evaluación Externa del Desempeño (PEED)
Vigilancia de la Resistencia Antimicrobiana de bacterias patógenas asociadas a Enfermedades Diarreicas Agudas, Infecciones
Respiratorias Agudas e Infecciones Intrahospitalarias
INS - CNSP LRN Enteropatógenos LRN IRAs E IIH
GRACIAS
POR NO DORMIR