JUAN CARLOS RODRIGUEZ DIAZ

S. MICROBIOLOGIA

HOSPITAL GENERAL UNIVERSITARIO DE ELCHE

CASOS PRACTICOS EN MICROBIOLOGIA CLINICA

CASO CLINICO 1: Paciente joven con sospecha de tuberculosis

Datos clínicos• Hombre• 27 años• Fumador• Tos de 20 días de evolución• Febrícula vespertina• Pérdida de peso de 8 kg• Lesión radiológica en pulmón

CASO CLINICO 1: Paciente joven con sospecha de tuberculosis

Muestras a procesar• Tres muestras de esputo de días diferentes• Aspirado bronquial• Lavado bronquial • Cepillado bronquial• Biopsia pulmonar

Patogenia de la tuberculosis

Respuesta del sistema inmuneDiseminación hematógena

Infección tuberculosa o Tuberculosis latente

Enfermedad tuberculosa

Entrada del microorganismo

Métodos clásicos de diagnóstico de la infección tuberculosa

Prueba del Mantoux o de la tuberculina

� Basada en:� Inoculación de una mezcla de antígenos obtenidos de un cultivo inactivado

� Lectura de la induración a las 48-72hPRINCIPALES VENTAJAS� Existen consensos internacionales para su interpretación

� Amplia experiencia clínicaINCONVENIENTES� Reacción cruzada con:

� BCG�Micobacterias no tuberculosas� Falta de sensibilidad (anergia)

Nuevos métodos de diagnóstico de la infección tuberculosa

IGRAs (interferon gamma release assay)

� Basada en:� Detección de la producción de interferon en

leucocitos estimulados in vitro con antígenos específicos de M. tuberculosis (ES AT-6 y CFP-10)

� PRINCIPALES VENTAJAS� Evita las reacciones cruzadas con la vacuna y

con muchas de las micobacterias no tuberculosas

� Útil en vacunados e inmunodeprimidosINCONVENIENTES� Coste� No está evaluado en profundidad su

verdadero significado en algunos casos

Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa

Tinciones• Ziehl Neelsen• Auramina

PRINCIPALES VENTAJAS� Rapidez� Bajo costeINCONVENIENTES� Falta de sensibilidad� No diferencia entre M. tuberculosis y micobacterias no tuberculosas

Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa

Cultivos• Sólidos: Lowenstein, Coletsos• Líquidos automatizados: MGIT

PRINCIPALES VENTAJAS� Sensibilidad� Aislamiento de la cepa para estudios posteriores: sensibilidad, etc� Permite diferenciar entre M. tuberculosis y micobacterias no

tuberculosasINCONVENIENTES� Lentitud: 2-4 semanas

Métodos de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa

Sistemas de biología molecular

• PCR a tiempo real

• Amplificación e hibridación con sondas específicas

PRINCIPALES VENTAJAS� Sensibilidad, aunque menor que el cultivo� Permite diferenciar entre M. tuberculosis y micobacterias no

tuberculosas� Rapidez� Permite conocer la resistencia antibióticaINCONVENIENTES� Coste� No permite obtener la cepa� No sustituye a los métodos clásicos sino que los complementa

Métodos moleculares de diagnóstico de la enfermedad tuberculosa

Métodos moleculares de detección de resistencias en Mycobacterium tuberculosis

Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria

Cistitis (infección de vías bajas)• Micción dolorosa: Disuria• Micción frecuente: Polaquiuria• Sensación continua de necesidad de orinar: Tenesmo• Escasa sintomatología

Pielonefritis

(infección de uréteres y riñones)• Fiebre• Dolor lumbar• Afectación general• Síntomas de cistitis

Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria

Muestras a tomar

Cistitis�Muestra de orina para cultivo cuantitativo

� Pielonefritis�Muestra de orina para cultivo cuantitativo�Hemocultivos para bacterias aerobias y anaerobias

Caso clínico 2: Mujer joven con infección urinaria

Cultivo cuantitativo

� Para diferenciar infección y colonización uretral: 100.000 colonias/ml de orina

� Principales patógenos:�Escherichia coli�Proteus mirabilis�Enterococcus faecalis

� Se realiza en varios medios: �CLED�Agar sangre�Agar mac Conkey

Caso clínico 3: Viajero que regresa de Méjico con diarrea

Causas

� Bacterianas�Salmonella�Campylobacter�Shigella�Vibrio

� Virus�Rotavirus�Adenovirus�Norovirus

Parásitos: clasificación

• Protozoos:– Amebas

– Ciliados

– Flagelados

– Apicomplexa

– Microspora

• Helmintos– Platelmintos

• P. cestodos

• P. trematodos

– Nemátodos

Protozoos: Amebas

Protozoos ciliados

Protozoos: flagelados

Trichomona vaginalis

Protozoos: flagelados II

Leishmania spp Tripanosoma spp

Protozoos: Apicomplexa

Pasmodium Toxoplasma gondii

Protozoos: Apicomplexa II

Cryptosporidium spp

Isospora belli

Cyclospora cayetanenesis

Protozoos: Microspora

Enterocytozoon spp

Platelmintos: cestodos

Tenia spp. Ecchinococcus ssp.

Platelmintos: tremátodos

Fasciola hepatica Schistosoma mansoni

Nemátodos I

Trichuris trichiura Trichinella spiralis

Nemátodos II

Enterobius vermicularis Ascaris lumbricoides

Nematodos III

Toxocara canis Strongyloides stercoralis

Nemátodos III

Necator americanus Anylostoma duodenale

Nemátodos IV

Filarias sp

Identificación de los microorganismos

Se utilizan pruebas bioquímicas, sensibilidad a algunos compuestos, secuenciación y espectrometría de masas

� Pruebas bioquímicas:�Fermentación de azúcares: glucosa, lactosa, etc�Hidrólisis de la urea

� Sensibilidad a:�Optoquina�Bacitracina

Identificación de los microorganismos

Secuenciación de algunos genes

� Bacterias: Gen 16S rRNA� Hongos: Genes ITS 1 y ITS4

Espectrometría de masas (Malditof)

Estudio de la sensibilidad antibiótica

Concentración mínima inhibitoria (CMI): Mínima concentración del antibiótico que inhibe el crecimiento bacteriano in vitro

Métodos

� Sistema disco placa: Utiliza discos impregnados que se ponen en un medio sólido

� Sistema microdilución: Utiliza concentraciones seriadas de antibióticos en cultivos líquidos

� E-test: Tiras con un gradiente de antibióticos que se ponen sobre un cultivo sólido

� Detección molecular de genes de resistencia

Estudio de la sensibilidad antibiótica

Caso clínico 4: Paciente con sospecha clínica de HIV

Datos clínicos

• Varón• 25 años• Antecedentes de uso de drogas por vía

parenteral hace 5 años• Asintomático

Caso clínico 4: Paciente con sospecha clínica de HIV

Detección de anticuerpos

• Cribado mediante enzimoinmunoensayo (ELISA)

• Su negatividad descarta la infección salvo en primoinfección (infección muy reciente)

• Si es positivo siempre hay que confirmar por western Blot y PCR

Interpretación de resultados serológicos

Exposición al microorganismo

• Presencia de anticuerpos en el suero del paciente

Diagnóstico de infección aguda:

• Detección de IgM

• Seroconversión

• Al cuantificar dos sueros del paciente separados 3-4 semanas se observa un incremento importante de la cantidad total de anticuerpos

• El suero en fase aguda puede ser negativo

Interpretación resultados serológicos