7. INSTRUMENTACINEl Laboratorio Clnico es una herramienta primordial para el rea mdica, ya que por medio de este se diagnostican diferentes patologas y adems se realizan estudios para establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar al paciente, al igual que el seguimiento del mismo.A principios del siglo XX, el mdico recurra, en raras ocasiones, a los procedimientos del laboratorio para diagnosticar enfermedades; dos de las ms frecuentes eran la diabetes y la nefritis. Y, en algunas ocasiones, acuda al farmacutico para hacer las dosificaciones, por simples que stas fueran. Alrededor de mediados de siglo, fue cuando los mdicos ya tienen ms contacto con el laboratorio, al tener ms conocimientos tanto de las tcnicas antiguas como de las nuevas que empiezan a surgir. An, cuando el mdico sigue atendiendo a sus pacientes y al laboratorio, se ve desbordado por el surgir de nuevos avances en los procedimientos del laboratorio. Esto y el tener que atender a sus pacientes, prestndoles menos atencin, conlleva al mdico a aleccionar a personas de su confianza para encargarse del laboratorio.stas debern, aparte de encargarse del laboratorio, de renovar los conocimientos con las nuevas tcnicas que empiezan a surgir; as como, el funcionamiento y mantenimiento de los aparatos, que hacen que los procedimientos del laboratorio se hagan con mayor rapidez y precisin.De todos modos, el mdico sigue interpretando los resultados que les proporciona el laboratorio. Si el mdico puede precisar el significado de los anlisis con una mayor exactitud es posible gracias, en mayor o menor medida, a los datos tanto fisiolgicos como patolgicos ofrecidos por el tcnico del laboratorio y, estos resultados, conllevan al seguimiento de la enfermedad y de su posible tratamiento.Desde distintos puntos de vista, siempre, ha sido necesaria una seleccin. En lugar de hacer comentarios breves con relacin a todo lo que se dice o hace en un laboratorio, hemos credo ms importante elegir una serie de definiciones y estudiarlas ms a fondo.Finalmente, y para no alargar demasiado el asunto, cuando citamos uno o dos mtodos para una misma investigacin, no significar que el resto sea de menor importancia sino que son los que creemos que se dan con mayor frecuencia en dicha investigacin.Mobiliario, Materiales e Instrumentos del Laboratorio.Muebles de un Laboratorio BsicoMesa: Su parte superior debe ser fcil de lavar y limpiar por si fuera manchada o contaminada por productos sospechosos.Taburete o Silla Regulable: Adaptable a las circunstancias variables del trabajo. Vitrina: Con su llave, para conservar los productos.Armario: Conservar y clasificar las preparaciones, documentos, objetos frgiles, etc.Divn o Mesa de Reconocimiento: Necesaria para practicar, en buenas condiciones, extracciones y punciones. De forma general, tanto para muebles como el suelo o las paredes, suprimiremos todo adorno y objeto intil.Material de Uso en el LaboratorioDentro del laboratorio, podemos encontrar distintos tipos de materiales:Material de Vidrio: ste se caracteriza por tener una resistencia qumica alta frente al agua, cidos y bases. Pero, todos los vidrios pueden utilizarse en el laboratorio? No, slo aquellos que estn caracterizados por su resistencia qumica, mecnica (se puede realizar fuerza sobre ellos) y trmica (aguantan cambios de temperatura). Dichos materiales no pueden someterse ni a cambios bruscos de temperaturas ni de presin.

Material de Plstico: Se caracteriza por ser resistente a la rotura pero, el inconveniente es que, pueden ser atacados por disolventes orgnicos, cidos y bases fuertes. Tenemos dos tipos: 1) Uso mltiple: Probetas, matraces, etc. 2) Mono uso: Pipetas Pasteur, placas de Petri, etc.

Material de Porcelana: Este tipo de material es poco usado en los laboratorios, a excepcin de cuando tengan que soportar altas temperaturas. El material de porcelana que se usa en el laboratorio es el que est vidriado en el centro, lo cual hace que las partculas no se adhieran a sus paredes. Adems, encontramos que el material puede ser fungible (se puede reponer fcilmente por tener un bajo coste: guantes, portaobjetos, pipetas, etc) e inventariable (no se repone fcilmente, al tener un elevado coste: centrfuga, estufa, etc).

Utensilios Bsicos de Laboratorio

Dentro de esta clasificacin, podemos encontrar los siguientes utensilios bsicos:Vaso de Precipitado: Un vaso de precipitados o vaso de precipitado es un recipiente cilndrico de vidrio fino que se utiliza muy comnmente en el laboratorio, sobre todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar lquidos. Son cilndricos con un fondo plano; se les encuentra de varias capacidades, desde 1 ml hasta de varios litros. Normalmente son de vidrio o de goma aqullos cuyo objetivo es contener gases o lquidos. Tienen componentes de tefln u otros materiales resistentes a la corrosin. Suelen estar graduados, pero esta graduacin es inexacta por la misma naturaleza del artefacto; su forma regular facilita que pequeas variaciones en la temperatura o incluso en el vertido pasen desapercibidas en la graduacin. Es recomendable no utilizarlo para medir volmenes de sustancias, ya que es un material que se somete a cambios bruscos de temperatura, lo que lo descalibra y en consecuencia nos entrega una medida errnea de la sustancia. Matraz Erlenmeyer: Consiste en un frasco de vidrio transparente de forma cnica, de base ancha y alargada, cuello muy estrecho, con una abertura en el extremo estrecho, generalmente prolongado con un cuello cilndrico. Se los encuentra de diversas capacidades, colores y con algunas variaciones. Suelen incluir unas pocas marcas para saber aproximadamente el volumen contenido. Fue creado en el ao 1861 por el qumico Richard August Carl Emil Erlenmeyer (1825-1909)Embudos: Los embudos de laboratorio son embudos que forman parte del equipamiento de laboratorio qumico. Su diseo ha sido modificado para adaptarse a la funcionalidad concreta que desempean.Hay muchos tipos diferentes de embudos que han sido adaptados para estas aplicaciones especializadas: Embudos planos, de diseo normal para operaciones bsicas.Existen en varias dimensiones, con el cuello ms largo o ms corto. Embudo de filtracin, de forma cnica y generalmente fabricados en vidrio. Los modelos para filtrado en fro poseen un tubo de salida, pero los modelos para filtracin en caliente estn hechos de vidrio pyrex y no poseen tubo de salida. Embudo Bchner, est fabricado en porcelana e incluyen una placa de vidrio sinterizado o una base de porcelana perforada.Estos se utilizan en la filtracin a baja presin con un matraz de Bchner o kitasato, conectados a una bomba de vaco. Tubo de seguridad (en forma de flor de cardo), usado habitualmente para aadir lquidos a un aparato o montaje de laboratorio. Embudo de adicin o de goteo, que tiene una llave que permiten que el lquido sea aadido a un frasco lentamente. Son cilndricos, frecuentemente estn graduados y poseen en su base una junta de vidrio esmerilado estndar. A menudo se suministra con un tubo paralelo estrecho que conecta las partes superior e inferior, para igualar la presin. Embudo de polvo, con un cuello ancho y corto, es ms apropiado para las materias slidas, ya que no se obstruyen fcilmente. Embudo de decantacin, en forma de pera, tienen un tapn en la boca superior y un cuello corto, con una llave de paso para el vertido controlado de lquidos. Estos se utilizan para decantar dos fluidos inmiscibles. Pueden estar graduados, aunque esto no es muy comn. Se utilizan en la extraccin lquido-lquido. Embudo Hirsch, su forma es similar a la de los embudos normales, pero contienen agujeros de vidrio sinterizado en la base para que las filtraciones sean ms rpidas. Embudo de filtracin en caliente, es un embudo menos frecuente, posee una camisa exterior, y est rodeado de un fluido que se calienta.Tubos de Ensayo: es el principal material que conlleva la preparacin de soluciones o la toma de muestras que luego seran depositadas en este.

Frascos Lavadores: o tambin llamados picetas, Son recipientes de plstico que se llenan generalmente con agua destilada. Se les emplea fcilmente para enjuagar materiales previamente lavados, completar volmenes de lquidos y lavar precipitados., para pasar estos del papel de filtro a un vaso de precipitado o para efectuar lavados que precisen hacerse con agua destilada.

Gradillas: Una gradilla es una herramienta que forma parte del material de laboratorio (qumica) y es utilizada para sostener y almacenar gran cantidad de tubos de ensayo, de todos los dimetros y formas.La gradilla es utilizada ms comnmente en laboratorios clnicos.Su principal funcin es facilitar el manejo de los tubos de ensayo.Normalmente es utilizado para sostener y almacenar este material. Este se encuentra hecho de madera, plstico o metal; pero las ms comunes son las de madera.Tipos de Gradillas: Gradillas rectangulares Gradillas redondas Gradillas varias Gradillas en forma de "Z".

Varillas de Vidrio o Agitadores: Estn hechos de vidrio y se utilizan para agitar o mover sustancias, es decir, facilitan la homogenizacin.

Material Especfico de Laboratorio:Dentro del material especfico de laboratorio podemos encontrar los siguientes:Porta Objetos: es una fina placa de cristal sobre el cual se disponen objetos para su examen microscpico. Sus dimensiones tpicas son de 75 mm x 25 mm. El objeto a observar suele disponerse sobre este artefacto para despus situarse en el microscopio y ser observado. En ocasiones puede cubrirse la muestra con un cubreobjetos, una hoja de cristal ms fina y pequea.

Cubre Objetos: Un cubreobjetos es una fina hoja de material transparente de planta cuadrada (normalmente 20mm x 20mm) o rectangular (de 20 mm x 40 mm habitualmente). Se coloca sobre un objeto que va a ser observado bajo microscopio, el cual se suele encontrar sobre un portaobjetos. Sirve para: cubrir los objetos que estn en el portaobjetos que a su vez est en un objeto llamado microscopio o 'microscopius' en latn.

Placa de Petri: La placa de Petri, o cpsula de Petri, es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el recipiente, aunque no de forma hermtica. Es parte de la coleccin conocida como material de vidrio. Tiene uso de microbiologa.Fue construida en el ao de1877 por el bacterilogo alemn Julius Richard Petri cuando trabajaba como ayudante de Robert Koch, el premio Nobel descubridor del bacilo de la tuberculosis. Se utiliza en los laboratorios principalmente para el cultivo de bacterias, mohos y otros microorganismos, solindose cubrir el fondo con distintos medios de cultivo (por ejemplo agar) segn el microorganismo que se quiera cultivar. Si se quieren observar colonias, durante el tiempo de incubacin del microorganismo sembrado en la placa esta se mantiene boca abajo, es decir, apoyada sobre la tapa. De este modo, el agar queda en la parte superior y al condensarse el vapor de agua que generan los microorganismos por su metabolismo, cae sobre la tapa, evitando que los microorganismos se diluyan, mantenindose fijo al sustrato.

Pipetas de VSG: Pipetas fabricadas en poliestireno con un comportamiento equivalente al vidrio. El sistema de CIERRE-CERO permite el llenado de la pipeta impidiendo que la sangre supere el punto cero y evitando el vaciado total o parcial. Al quedar automticamente sellado se convierte en un artculo de un solo uso. Son pipetas para la determinacin de la velocidad de sedimentacin globular (V.S.G) Mtodo de Westergreen.

Capilares: Sirven para tomar pequeas muestras de fluidos en el laboratorio. Los capilares con heparina u otro anticoagulante, su aplicacin es tomar sangre y una vez sellados, introducirlos a la centrfuga para microhematocrito para determinar la cantidad de eritrocitos en sangre total. Los que no tienen anticoagulante, sirven para medir el tiempo de coagulacin.

Cristalizador: consiste en un recipiente de vidrio de base ancha y poca estatura. Su objetivo principal es cristalizar el soluto de una solucin, por evaporacin del solvente. Tambin tiene otros usos, como tapa, como contenedor, etc. El objetivo de la forma es que tenga una base ancha para permitir una mayor evaporacin de sustancias. Tambin puede ser utilizado para conservar, guardar insectos, hojas de rboles, etc. que tiene el volumen de un 3.85 cm cbicos nada se puede ver en un microscopio al ver estos podrs ver por medio de un cristal lo que t necesitas.

Asa de Siembra: es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o platino que termina o en aro o en punta. Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo volumen que contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin de trabajo tambin llamada solucin madre al medio de cultivo (slido o lquido) o de un medio a otro (resiembra). Tambin sirve para la realizacin de frotis. La cantidad de inculo que se trasvasa viene determinado por el dimetro del aro final del filamento, que se encuentra calibrado y normalmente oscila entre 0,1 y 0,01 ml.

Hilo de Platino: se utiliza para transferir colonias de una placa a otra, sobre todo, para inoculacin de medios slidos y semislidos en tubo (picadura). Hoy da en la mayora de los laboratorios han sido reemplazados por matelial de usar y tirar.

Cmara de Neubauer: es un instrumento utilizado en medicina y biologa para realizar el recuento de clulas en un medio lquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, lquido sinovial, etc.

Esta cmara de contaje est adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrcula de dimensiones conocidas. Se cubre la cmara con un cubrecmaras que se adhiere por simple tensin superficial. Luego se introduce el lquido a contar, al que generalmente se ha sometido a una dilucin previa con un diluyente, por capilaridad entre la cmara y el cubrecmara; puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultaneamente. Para contar las clulas se observa el retculo al microscopio con el aumento adecuado y se cuentan las celulas. Con base en la cantidad de clulas contadas, conociendo el volumen de lquido que admite el campo del retculo, se calcula la concentracin de clulas por unidad de volumen de la muestra lquida inicial. La frmula de valoracin del nmero de clulas (vlida universalmente) es la siguiente: Partculas por l=(partculas contadas)/(superficie contada (mm)profundidad de la cmara(mm) dilucin)

En el retculo central, la cmara de Neubauer posee un cuadrado primario que contiene nueve cuadrados secundarios cada uno de ellos divididos a su vez en 16 cuadrados terciarios, el cuadrado central contiene 25 cuadrados, cada uno de ellos dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los bordes de este cuadrado central se cuentan los hemates, utilizando slo los cuadrados de los bordes del terciario central y uno de los centrales. En los secundarios de los bordes superiores e inferiores de la cmara se hace el recuento leucocitario. Trpode: se utiliza cuando no se tiene el soporte universal para sostener objetos con firmeza. Es ampliamente utilizado en varios experimentos. La finalidad que cumple en el laboratorio es solo una, ya que su principal uso es como herramienta de sostn a fin de evitar el movimiento. Sobre la plataforma del trpode se coloca una malla metlica para que la llama no d directamente sobre el vidrio y se difunda mejor el calor. El mechero se coloca debajo.

Esptula: Se utiliza para tomar pequeas cantidades de compuestos reactivos que son bsicamente polvo. Se suele clasificar dentro del material de metal y es comn encontrar en recetas tcnicas el trmino punta de esptula para referirse a esa cantidad aproximadamente.

Lanceta: es un instrumento compuesto de una lmina aplanada, puntiaguda, cortante en los dos bordes, de 3 cm de longitud y de dos plaquitas mviles, la caja, que, replegadas, protegen la lmina. La lanceta sirve para la sangra, la vacunacin, las escarificaciones, etc.

Pinzas: Las pinzas de laboratorio son un tipo de sujecin ajustable, generalmente de metal, que forma parte del equipamiento de laboratorio, mediante la cual se pueden sustentar diferentes objetos de vidrio (embudos de laboratorio, buretas...) o realizar montajes ms elaborados (aparato de destilacin). Se sujetan mediante una doble nuez a un pie o soporte de laboratorio o, en caso de montajes ms complejos (lnea de Schlenk), a una armadura o rejilla fija.Las pinzas de laboratorio tienen dos partes: Un vstago o varilla cilndrica, que se conecta a un soporte o rejilla mediante una doble nuez. Este acoplamiento proporciona la posibilidad de ajuste en el soporte, tanto vertical como horizontalmente. Tambin puede hacerse girar un cierto ngulo para facilitar el montaje del aparato. Una pinza metlica con una estructura parecida a unas tenazas. Se compone de dos brazos, que aprietan el cuello de los frascos u otros elementos de vidrio con un tornillo especial que puede ajustarse manualmente. Cada brazo posee en su cara interna un recubrimiento de PVC, corcho, fieltro o de plstico, con el fin de evitar el contacto directo del vidrio con el metal, lo que podra provocar la rotura del cristal. Tipos de pinzas de laboratorio: pinza de tres dedos pinzas de madera o pinzas para tubos de ensayo Pinzas de plstico Pinzas Fischer Pinzas para crisoles Pinzas de diseccin

Hemograma: El hemograma es una prueba que sirve para orientarnos hacia el diagnstico de enfermedades sospechadas por la exploracin fsica o por la historia clnica.Permite detectar: Anlisis cuantitativos de los hemates (anemias, policitemias). Anlisis cualitativos de los hemates (hemates fragmentados por comprometimiento de la micro circulacin, depranocitosis falciforme). Anlisis morfolgicos de leucocitos que detectan diferentes patologas, dependiendo de su variacin (virosis simple o maligna, leucemias). Anlisis cualitativos y cuantitativos de plaquetas (identificacin de patologas hemorrgicas: prpuras).

Centrfuga: es una mquina que pone en rotacin una muestra para acelerar por fuerza centrfuga la decantacin o sedimentacin de sus componentes o fases (generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad. Existen diversos tipos de estos, comnmente para objetivos especficos.Una aplicacin tpica consiste en acelerar el proceso de sedimentacin, dividiendo el plasma sanguneo y el suero sanguneo en un proceso de anlisis de sangre. Tambin se utiliza para determinar el hematocrito mediante una toma de muestra capilar. En este caso la mquina utilizada se denomina microcentrfuga.Es muy usada en laboratorios de control de calidad, de fbricas que elaboran zumos a base de ctricos, para controlar el nivel de pulpa fina de estos, separando la pulpa fina del zumo exprimido. Otra aplicacin de las centrfugas es la elaboracin de aceite de oliva. En ella las aceitunas una vez molidas y batidas se introducen en una centrfuga horizontal en la que se separa el aceite que es la fraccin menos pesada del resto de componentes de la aceituna; agua, hueso, pulpa etc.

Agitador de tubos: Un agitador, a veces llamado mezclador, es un dispositivo que se utiliza en los laboratorios de qumica y biologa para mezclar lquidos o preparar disoluciones y suspensiones. Un agitador tpico tiene una placa o superficie que oscila horizontalmente, propulsado por un motor elctrico. Los lquidos que van a ser agitados estn contenidos en vasos, tubos o matraces Erlenmeyer que se colocan sobre la superficie vibrante o, a veces, en tubos de ensayo o viales que se insertan en los agujeros de la placa.

Agitador vrtex: o mezclador de vrtice de la marca Whirlimixer, empleado para mezcla de lquidos. Los agitadores magnticos y los agitadores estticos son productos relacionados. Un agitador tipo vrtex o mezclador de vrtice es un dispositivo simple que se usa comnmente en los laboratorios para agitar pequeos tubos o frascos de lquido. Se compone de un motor elctrico con el eje de transmisin orientado verticalmente y unido a un trozo de goma o caucho montado en forma de copa, ligeramente excntrico. A medida que el motor gira la pieza de caucho oscila rpidamente en un movimiento circular. Cuando un tubo de ensayo o recipiente adecuado se coloca en el soporte de goma (o toca su borde) el movimiento se transmite al lquido en su interior y se crea un vrtice. La mayora de los mezcladores de vrtice tienen una configuracin de velocidad variable y pueden ser configurados para ejecutarse de forma continua, o para que funcione slo cuando una dbil presin se aplica a la goma. Poseen unos pies de ventosa en la base para evitar desplazamientos.

Bao Mara: son equipos de uso frecuente en el Laboratorio Clnico, ya que en las reacciones qumicas la temperatura es un factor importante. Por regla general se utilizarn 37C para reacciones enzimticas. Estas tienen la funcin de llevar y mantener una muestra a una temperatura especfica. En el laboratorio mdico tienen muchas aplicaciones tales como activar procesos enzimticos o proporcionar condiciones ptimas para cultivos (a 56C en serologa y en algunas pruebas a 100C para acelerar las reacciones), se pueden clasificar por tamao en grande, medianos y pequeos. Los baos de Mara, incluyen termostatos desde 25C hasta 100C, los ms recientes traen incorporados, bombas de circulacin de agua que permiten mantener la temperatura uniforme. Los baos de mara secos, son bloques de calentamiento a temperaturas prefijadas incluidos dentro de equipos.

Nevera: las neveras sirven para preservar las muestras cuando no se procesan inmediatamente al llegar al Laboratorio (2-8C). Los congeladores sirven para conservar las cepas que luego nos servirn para compararlas con otras muestras nuevas.

Microscopio ptico: Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticos. Tambin se le conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una nica lente pequea y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o espcimen). Este uso de una nica lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos pticos.

8. PROCESAMIENTOS DE DATOS

En todo laboratorio cuya lnea de trabajo est encaminada a la utilizacin de tcnicas de diagnstico, es inevitable realizar un complejo proceso de manipulacin y anlisis de datos en el cual se involucra gran cantidad de informacin que debe ser procesada para obtener el resultado final en cada uno de los mltiples ensayos a los cuales se enfrenta el analista diariamente. El proceso de operaciones de clculo, toma de decisiones, anlisis de datos e interpretacin de resultados puede hacerse engorroso, si no se dispone de una herramienta que facilite estas operaciones y ms si se trata de laboratorios vinculados a pesquisajes masivos y vigilancia epidemiolgica, en los cuales se manipulan diariamente una cantidad considerable de muestras. En estos casos la presencia de un sistema de procesamiento que permita enfrentar el excesivo volumen de trabajo en que se incurre por concepto de documentacin de un gran nmero de pacientes y pruebas as como el clculo e interpretacin de un volumen igual o mayor de muestras, permite una disminucin considerable de la cantidad de errores operativos por estas causas. La importancia de realizar un procesamiento de datos adecuados es descrita por Dudley y Edwards esbozando adems los principios que deben seguirse para los inmunoensayos. Con el desarrollo de las ciencias mdicas y biolgicas, juegua un papel cada da ms importante el desarrollo y aplicacin de estos procedimientos estadsticos y matemticos ofrecidos mediante un sistema que ofrezcan la posibilidad de una mejor interpretacin de resultados y faciliten enfrentar el volumen de trabajo en el laboratorio de diagnstico. El desarrollo y aplicacin de los algoritmos de clculos apropiados determinan hoy en da, en la mayora de los casos, la utilidad de una prueba diagnstica cualquiera y posibilita una interpretacin adecuada dentro de un nmero considerable de variables y posibilidades de error.

MATERIALES Y MTODOS

Tipos de ensayos de la Tecnologa SUMA. Los inmunoensayos pueden clasificarse segn la forma de ofrecer los resultados en cualitativos (cuando el resultado emitido se expresa en forma cualitativa por ejemplo positivo, negativo) y cuantitativos (cuando el resultado se expresa como un valor de una magnitud fsica, por ejemplo 50 mu/L). Caractersticas generales del sistema. Diseado para satisfacer las necesidades del laboratorio de diagnstico; incluido el control de la calidad del ensayo. Aporta la informacin necesaria para que se pueda realizar el control interno y externo tributando al sistema para el control de la calidad tambin de Tecnologa SUMA. Procesamiento de datos. Se analizan los valores de fluorescencia resultado de la lectura de los pozos de reaccin de una placa donde se depositan volmenes 10 microlitros. El rango de fluorescencia se encuentra entre 0 - 210 UF. Al trabajar con ultramicrovolmenes se necesita el desarrollo de algoritmos propios que incluyan diferentes validaciones antes de ofrecer el resultado final. Ensayos cuantitativos. Estos ensayos tienen como rasgo distintivo que el resultado se expresa como un valor de una magnitud fsica. Obtener el resultado final est marcado por la presencia de los siguientes elementos: Validacin de la curva estndar o curva de calibracin Seis calibradores de concentracin conocida que se sitan por duplicado ocupando las doce primeras posiciones en la placa de reaccin; se utilizan para construir una curva donde se interpolan los valores de fluorescencia de las muestras y se obtienen su correspondiente valor de concentracin, el cual se utiliza para interpretar el resultado. Estos doce calibradores son analizados. Si no resulta satisfactorio el anlisis, se considera que la curva no es vlida y se rechaza el ensayo. Generalidades del mtodo de validacin de la curva en los ensayos cuantitativos. 1. Obtener los mnimos y mximos para cada duplicado de fluorescencia de cada calibrador de la curva estndar. 2. Obtener la media de los duplicados de fluorescencia de cada calibrador de la curva estndar. 3. Calcular el coeficiente de variacin de los duplicados de fluorescencia de cada calibrador de la curva estndar. 4. Verificar que las medias de los puntos sean todas diferentes de cero. 5. Analizar comportamiento de los duplicados de fluorescencia del primer punto de la curva de calibracin con respecto a su sucesor. 6. Analizar el comportamiento de los valores mnimos y mximos de los cinco puntos restantes de la curva de calibracin, evaluando el comportamiento de los duplicados del punto con relacin a su antecesor y su sucesor. 7. Calcular la media para cada punto teniendo en cuenta los valores mnimos y mximos reasignados segn evaluacin anterior. 8. Analizar el comportamiento de los valores mximos de los duplicados de fluorescencia de los puntos de la curva de calibracin desde el punto 2 hasta el punto 6 con respecto al valor medio de su punto antecesor. 9. Determinar para la concentracin de cada estndar su correspondiente valor medio de fluorescencia y proceder con la construccin de la curva de calibracin utilizando el mtodo de ajuste apropiado. Mtodos de ajuste para obtener la curva para los ensayos cuantitativos. En los ensayos cuantitativos se ofrece mediante el software la posibilidad de realizar el ajuste de la curva por los mtodos que a continuacin se describen: 1. Interpolacin lineal. 2. Interpolacin semilogartmica. Interpolacin lineal: Ajuste de la curva de fluorescencia (Y) concentracin (X) mediante tramos de rectas. Considerando X[i] = Concentracin y Y[i] = Fluorescencia de los puntos donde i=1..6, para los puntos 1 y 2 de la curva la ecuacin se define como Y = MX + B donde M=(Y[2]-Y[1])/(X[2]-X[1]). Interpolacin semilogartmica: Ajuste de la curva de fluorescencia (Y) logaritmo de la concentracin (X). Clculo de la dispersin: Se calcula determinando primero el valor absoluto resultado de la diferencia de los dos valores de fluorescencia dividido entre la media. ED=F1-F2 / ((F1+F2)/2). Si ED>0.2 entonces la muestra debe ser repetida. ED>0.2: 20% de diferencia entre ambos duplicados. Determina la presencia de malos duplicados para los puntos de la curva estndar. Validacin del control del ensayo. Calibrador (SC) que se sita por duplicado, inmediatamente despus de la curva de calibracin. Su valor medio de concentracin debe encontrarse dentro de los lmites mnimos y mximos en valores de concentracin para el ensayo de lo contrario se considera fuera de rango y se rechaza el ensayo. Validacin de las muestras. Se sitan por duplicado posterior al control del ensayo. Son analizadas si resulta satisfactorio el anlisis de la curva estndar y el control del ensayo. Si resulta satisfactoria la validacin de la muestra se procede a interpretar el resultado de la misma; por lo que en una misma placa pueden existir muestras con un resultado asociado y muestras que deben repetirse pues no cumplieron con los requisitos necesarios para ser interpretadas. De esta manera el software tiene en cuenta: 1. ED > 0,2 Repetir la muestra. 2. Concentracin del punto mayor que el ltimo punto de la curva.

Interpretacin del resultado. Se interpreta el resultado de cada muestra si cumplieron con las condiciones de validacin. Segn el ensayo y los requisitos para la interpretacin del resultado se asigna el mismo, el cual est directamente relacionado con el diagnstico. Ensayos cualitativos. El resultado se expresa en forma cualitativa (positivo, negativo). Utilizan controles de tipo N (Negativo), P (Positivo) y B (Blanco). Se ubican dos blancos (B1,B2) seguidos de dos controles positivos(P1,P2) y de dos controles negativos(N1,N2). Se procede con la evaluacin de los controles y si es satisfactoria se analizan las muestras para ofrecer el resultado correspondiente a cada una de ellas. Evaluacin de los controles. El sistema lleva a cabo la eliminacin de los controles con valores aberrantes de fluorescencia. Los controles no vlidos son excluidos. Son vlidos los controles que cumplan que: a) Al menos uno de los blancos debe tener un valor de fluorescencia menor de 10 unidades. b) Al menos uno de los negativos debe tener un valor de fluorescencia que no supere en ms de 10 unidades a la media del blanco. c) Al menos un control positivo debe tener un valor de fluorescencia entre 60 y 180 unidades. d) Siendo P el suero control positivo vlido con menor fluorescencia, NN la media de los sueros negativos vlidos y BB la media de los blancos, debe cumplirse que: (NN-BB)/(P-BB) < 0,1 Si estas condiciones no se cumplen se rechaza el ensayo y no se ofrece resultado para las muestras. Procedimiento de clculo. Concluida satisfactoriamente la evaluacin de los controles del ensayo se procede al clculo del nivel de corte a partir del cual se determinar las positividad de las muestras. El nivel de corte en unidades de fluorescencia (NC) para las muestras de suero o sangre en papel de filtro se expresa como: NC = 0.300 x (P-BB) + BB BL = 0.255 x (P-BB) + BB Interpretacin de los resultados. a) Para las muestras analizadas de forma simple. Siendo F el valor de fluorescencia de una muestra y NC el nivel de corte calculado para el ensayo: Si F >= NC POSITIVASi BL