southern blot

Southern blot

RODRIGO CHIRIBOGA6° BIOTECNOLOGIA

UNIVERSIDAD TÉCNICA DEL NORTE

¿QUÉ ES? Es un método de biología molecular que

permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja de este ácido nucleico.

PROCEDIMIENTO 1. Extracción del ADN Se puede extraer ADN de casi cualquier tejido 

2. Digestión del ADN con una enzima de restricción

3. Electroforesis en gel de agarosa(-+)

4. Preparación de un ensayo de Southern ("Southern blot")

1. El ADN resultante de la electroforesis se lo trata con una solución alcalina.

2. El ADN desnaturalizado se lo transfiere a la superficie de una membrana de nailon.

3. Este proceso de desnaturalización y transferencia se conoce como método de Southern 

5. Hibridación con sonda radioactiva  El ensayo de Southern resultante de la etapa 4

se incuba en una disolución que contiene una sonda radiactiva de locus único, bajo condiciones de temperatura y concentración desales que favorezcan la hibridación. Tras producirse ésta, se lava el exceso de sonda no unido, de modo que la única radiactividad que quede en la membrana de nailon sea la asociada al ADN del locus

6. Revelación de la hibridación por una reacción de color.

Mediante la exposición de la membrana a una placa autorradiográfica (como la de los rayos X). En la placa se observan específicamente él o los fragmentos donde hibridó la sonda ya que la radiación emitida en ese sitio vela la placa autorradiográfica.

Aplicaciones Es empleada para el estudio de

reordenamiento, amplificación, deleciones y mutaciones puntuales de genes

Diagnóstico de enfermedades Casos forenses

Ventajas  sus altas especificidad y reproducibilidad permitir la valoración del estado físico del

ADN poder valorar si el ADN viral está integrado

en el genoma del huésped o permanece como episoma en el huésped

Es un método excelente para detectar pérdidas homocigóticas. 

Desventajas Es una técnica de larga duración Que requiere un personal entrenado, Además, precisa de una cantidad

relativamente alta de ADN, sólo permite estudiar una pequeña región del

genoma con cada sonda la mayoría de las sondas son poco

informativas