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PRÁCTICAS DE LABORATORIOBIOQUÍMICA GENERAL-BIOLOGÍA

IV SEMESTRE

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEINAS

Lasso Camilo Andrés, Quiñones Yerly, Palacios Christian Biología, Facultad de ciencias naturales exactas y de la educación, Universidad del Cauca

1. Introducción

Contextualizar el tema tratado en la práctica, por ej: ley de la conservación de la masa; Cual es su importancia; antecedentes más significativos.

En el último párrafo se deben describir los objetivos de la práctica.

2. Sección Experimental

2.1. ReactivosReactivo (Lowry): Carbonato de sodio Na2CO3 al 2% en NaOH 0.1NNa2 CO3NaOHSulfato de cobre (pentahidratado):CuSO4.5H2Oal 0.5% en tartrato de sodioC4H4O6Na2 al 1%CuSO4.5H2OC4H4O6Na2

Reactivo Folin:Solucion Comercial; diluir al 1N

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INFORMACIÓN DE LA PRÁCTICA

Realizada: 04/04/2014Entregada: 07/04/2014A: PhD. Diana Ma. Chito Trujillo

Palabras claves: ProteínasAminoácidos EspectrofotómetroReactivo de lowryKey words: ProteinsAmino acids Spectrophotometer Lowry reagent

Key words: máximo 4

Resumen

Párrafo entre 100-150 palabras. Se debe especificar concretamente que se hizo y que resultados se obtuvieron (cualitativos y/o cuantitativos).

Abstract

Resumen en inglés.

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Na2WO4.2H2ONa2MoO4

H3PO4

HCL

Grado de pureza, como fueron preparados y utilizados (puros, sólidos, por dilución y a que concentración)

2.2. Equipos

Celdas para el espectrofotómetro Espectrofotómetro

2.3. Procedimiento

Describir los procedimientos desarrollados (con las respectivas modificaciones hechas en el lab).

3. Datos y resultados

Registrar las mediciones tomadas en la experimentación y los resultados calculados en tablas.

4. Discusión de resultados

Realice una interpretación de los resultados obtenidos: su reproducibilidad, confiabilidad, precisión, exactitud, porcentajes de rendimiento, como se podrían mejorar, que variables o parámetros afectaron las medidas, efectos de matriz, selección de la técnica utilizada, etc. No caiga en el error de repetir el protocolo del procedimiento experimental.

En los casos que proceda, mencionar las ecuaciones utilizadas para los cálculos de los resultados. Para ello registre las ecuaciones utilizadas y enumerarlas entre paréntesis. Ejemplo:

ρ=mV

(1)

Si necesita insertar figuras o tablas, utilice el modelo de los siguientes marcadores. Recuerde el título de la figura debe ir en la parte inferior de la figura y el título de la tabla en la parte superior de la tabla.

Consejo: utilice los marcadores y referencias cruzadas para facilitar la numeración de tablas y figuras y evitar errores. Recuerde campos de secuencia de figuras o tablas con la combinación de teclas ctrl+F9 .

Ejemplo:

Figura 1. Esquema del proceso de destilación.

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Tabla 1. pH medidos en campo y en el laboratorio.

5. Conclusiones

El método de curva de calibración es adecuado para la cuantificación de Seroalbumina El reactivo de Lowry es necesario para provocar una reacción entre los aminoácidos de

la proteína y los compuestos de este reactivo, garantizando un complejo de color azul-morado, permitiendo la cuantificación de proteína.

Según el desarrollo de la práctica del laboratorio podemos concluir que a mayor cantidad de enlaces peptídicos mayor intensidad de color observado en la muestra

Para determinar la absorbancia es necesario la utilización del espectrofotómetro, instrumento que utiliza cálculos físicos para deducir la longitud de onda generada.

6. Preguntas Complementarias

1¿Qué es la curva de calibración y como se grafica?Rta/: Es un método de química analítica empleado para medir la concentración de una sustancia en una muestra por comparación con una serie de elementos de concentración conocida. Se basa en la existencia de una relación en principio lineal entre un carácter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometría) y la variable a determinar (concentración). Para ello, se efectúan diluciones de unas muestras de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una función matemática que relacione ambas; después, se lee el mismo carácter en la muestra problema y, mediante la sustitución de la variable independiente de esa función, se obtiene la concentración de esta. Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y, empleando la curva de calibración, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta encontrar la concentración del analito. Las curvas de calibración suelen poseer al menos una fase de respuesta lineal sobre la que se realiza un test estadístico de regresión para evaluar su fiabilidad.

La etapa de calibración analítica se realiza mediante un modelo de línea recta que consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de “n” puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido por una variable “x” (variable independiente, generalmente concentración del analito de interés) y una variable “y” (variable dependiente, generalmente respuesta instrumental). La recta de calibrado se encuentra definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente (m), mediante la ecuación y = mx + b . A partir de la curva de calibración (conjunto de concentraciones que describen el intervalo en el cual se deberá cuantificar el compuesto por analizar) y a fin de asegurar que la recta

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encontrada con los puntos experimentales se ajuste correctamente al modelo matemático de la ecuación se calculan los valores de la ordenada al origen, la pendiente y el coeficiente de determinación (r2). Por tener una buena exactitud y confiabilidad estadística, el método más empleado para encontrar los parámetros de la curva de calibrado es el método de los mínimos cuadrados Este método busca la recta del calibrado que haga que la suma de los cuadrados de las distancias verticales entre cada punto experimental y la recta de calibrado sea mínima o tienda a cero. A la distancia vertical entre cada punto experimental y la recta de calibrado se le conoce como residual. En forma gráfica se representa como:

Fig. 1 Curva de calibración

2 ¿determine la concentración de las muestras problema en función de la curva de calibración?

7. Referencias bibliográficas

file:///C:/Documents%20and%20Settings/WINDOWS%20XP%20SP3/Mis%20documentos/fernanda/informes%20bioquimica/CURVASDECALIBRACION_23498.pdf

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