hibridacion fluorescente in situ (fish)

HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SITU

(FISH)

INMUNODIAGNOSTICO I Y II

LINDSAY BORJAS

DEFINICIONLa técnica consiste en preparar cortas

secuencias de DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que son complementarias de las secuencias de DNA que se quieren marcar y examinar.

Es muy utilizada en la detección de anomalías cromosómicas.

alta sensibilidad y especificidad

SONDASSon secuencias cortas de ADN de una sola

hebra, que son complementarias de las secuencias de ADN que se quieren marcar y examinar.

Sondas especificas de

un locus

Hibridan a una región particular de un gen. Esta sonda es útil cuando se ha aislado una pequeña parte de un gen y se quiere averiguar en que cromosoma se encuentra.

Sondas centroméricas

contienen secuencias complementarias de las secuencias repetidas que se encuentran en los centrómeros de los cromosomas. Como pueden utilizarse sondas de diferentes colores, cada cromosoma puede ser marcado de manera distinta, con lo que se puede averiguar si un individuo tiene el número correcto

Sondas para cromosomas completos

Son colecciones de sondas de un tamaño reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas librerias de sondas, se puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo espectral.

PROCEDIMIENTO

A . Moter ,U . B . Gobel,2000

R. Amann, B. Fuchs, 2008

Bishop,2010

HISTORIALas primeras técnica de FISH fue

desarrollada, independientemente por Padue, Gall, John y sus colaboradores en 1969, pero fue propuesto por Olsen.

En 1989, DeLong y su equipo de trabajo emplearon oligonucleótidos marcados con fluorocromos para detectar células microbianas crecidas de manera individual.

APLICACIONESDetecta anomalías: Aneuploidía, la pérdida de

una región cromosómica, un cromosoma entero o para monitorizar la progresión de una aberración.

En el diagnóstico de una enfermedad genética.

FISH se puede aplicar a la investigación como: el mapeo de genes, identificación de nuevos oncogenes que contribuyen a diversos tipos de cáncer.

VENTAJAProporciona una resolución

considerablemente superior a la de las técnicas de bandas de alta resolución; ya que puede detectar deleciones de tamaño tan pequeño como 1 millón de pares de bases.

Pueden detectar aneuploidias empleando cromosomas en interfase, no es necesario estimular a las células para que se dividan con el fin de obtener cromosomas en metafase.

COMPARACIONConvencional: Técnicas de bandeo de

cromosomas (tinción Giemsa) revolucionó el análisis citogenético y han sido fundamentales en la comprensión de los cambios genéticos en ambas enfermedades constitucionales y adquiridos.

La resolución del análisis de bandas es de tal manera que sólo puede detectar reordenamientos que implican 0,3 Mb de ADN.

Técnicas de bandas se limitan a células mitóticas activas.

La tinción de cromosomas con Giemsa permite el análisis de los diferentes tipos como: cromosomas policéntricos, cromosomas en anillo, intercambios de cromátidas y fragmentos.

Otros tipos de aberraciones cromosómicas tales como translocaciones e inversiones recíprocas no son normalmente reconocible con la tinción de Giemsa, pero pueden ser visualizados por FISH.

Nueva: La tecnología de Microarreglos.Analizar diferentes tipos de muestras

biológicas (tejidos, proteínas y material genético) y otras moléculas de manera simultánea por ensayo.

La versatilidad de esta técnica permite utilizarla en estudios de dosis-respuesta, para establecer perfiles de expresión diferencial de genes en condiciones experimentales distintas (enfermedades y tratamientos) en el análisis de polimorfismos, presencia de metilaciones, mutaciones puntuales e identificación de blancos terapéuticos.

E. Medina, 2009

Bishop,2010

INTERPRETACION

Internacional System for Human Cytogenetics Nomenclature (ISCN), 2009.

IATREIA Vol 24(3) septiembre 2011

Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011

Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011

Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011

ESTUDIO DE MERCADO Y COSTOS

APLICACIONES A NIVEL NACIONAL

Lab. Citogenetica HNN, 2014

GRACIAS