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Ges$on  du  temps  !!!  

Western  Blot  !  ≠  coIP  !!!!!!!!!  

Ques$on  de  cours:    

Analyse  du  WB  :  SET2  est  une  histone  méthyle  transférase  

qui  triméthyle  la  lysine  36  de  l’histone  H3    

Test  d’interac$on  protéine-­‐protéine  in  vitro  u$lisé  afin  de  savoir  avec  quelle  forme  de  l’ARNPII  (Rbp1)  interagit  SET2.  

SET2  interagit  spécifiquement  avec  RNAPIIPSer2  (càd  lorsque  le  CTD  de  Rbp1  est  phosphorylé  sur  la  sérine  2)  

Donc  SET2  interagit  spécifiquement  avec  l’ARNPII  en  élonga$on  

Ques$on  de  cours:    

+  +  

=  12  points  faciles  /  20  !!!!  

Les  cellules  cul$vées  en  présence  de  glucose  :  pas  d’induc$on  du  gène  Gal1  =  PAS  DE  TRANSCRIPTION  de  GAL1  

RAPPEL  DE  LICENCE  :  induc$on  transcrip$onnelle  par  les  sucres  (maltose,  glucose,  galactose…)  

Les  cellules  cul$vées  en  présence  de  galactose:  induc$on  du  gène  Gal1  =  TRANSCRIPTION  de  GAL1  

SET2  est  localisée  plutôt  au  centre  du  transcrit  GAL1  (amorces  2  et  3  ≠  CDS  !!!).  La  marque  épigéné$que  (≠  protéine)  possède  le  même  profil  que  SET2.  

Corréla$on  avec  la  fonc$on  de  SET2  :  HMTase  H3K36me3  (ques$on  2)  

Conclusion:  SET  2  n’est  fixé  au  locus  GAL1  que  lorsque  ce  dernier  est  transcrit.  Il  se  fixe  au  centre  de  la  région  transcrite  (≠CDS).  

Or,  SET2  se  fixe  à  l’ARNPIIP  (Ques$on  2)  

Lors  de  la  transcrip$on  de  GAL1  SET2  se  fixe  à  l’ARNPII  et  triméthyle  H3K36    

Lors  de  la  transcrip$on,  SET2  «  accompagne  »  l’ARNPII  en  élonga$on  lorsque  le  CTD  celle-­‐ci  est  phosphorylée  sur  la  serine  2  de  Rpb1.  

 SET2  va  ensuite  triméthylée  la  lysine  36  de  l’histone  H3.  

Hypothèse:  cefe  marque  épigéné$que  ac$vatrice  permefrait  le  bon  déroulement  de  la  phase  de  l’élonga$on  de  la  transcrip$on  en  rendant  les  histones  plus  «  fluides  »  lors  du  passage  de  l’ARNPII.  

Cours  

Cours  

ATTENTION  

•  En  Master  ne  plus  confondre  transcrip7on  et  traduc7on  !!!  

•  Ne  pas  confondre  méthyla7on  des  histone  (MPT)  et  méthyla7on  de  l’ADN  !!!  

•  No7on  d’ORF/CDS/locus/gène/ARNm  …