02 pseudomonas 2011

Pseudomonas sp.Moraxella spp.

CÁTEDRA DE MICROBIOLOGÍA FACULTAD CIENCIAS VETERINARIAS

Falleció: 25/01/2009

•Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Orden Pseudomonadales

Familia Pseudomonadaceae

numerosas especies

ampliamente distribuidas en la naturaleza, suelo, agua y en todo lugar donde exista materia orgánica en descomposición

De las más de 100 especies que integran este género

Pseudomonas aeruginosa

es la única que en el hombre y los animales reviste una enorme importancia clínica, aunque raramente constituye el agente primario de la enfermedad.

Palleroni (1984) por estudios de hibridación del RNAr/DNA, clasifica al género en cinco grupos ej.

Grupo I (Pseudomonas fluorescentes) está P. aeruginosa.

Grupo II, integrado por P. mallei, P. speudomallei y P. cepacia, hoy constituyen el género Burkholderia.

P. aeruginosaP. aeruginosa

bacilo gramnegativo 0,5 a 1 m por 3 a 4 mmóvil por uno a tres flagelos polares. Posee pili y fimbrias. No forma esporas. Algunas cepas están rodeadas de una capa de mucus o polisacárido extracelular

denominado slime, con capacidad de formar biofilm.

BiofilmBiofilm

aerobio estrictoutiliza el oxígeno como aceptor final de electrones

puede crecer en un ambiente anaeróbico utilizando nitratos como aceptor terminal de electrones.

No tiene exigencias nutritivas

Crece en medios comunes

medios sólidos dos tipos de coloniasgrande, de 3 a 5 mm de diámetro, lisa con centro elevado y bordes ondulados (se parece a un huevo frito) y

pequeña (alrededor de 2 mm), rugosa y convexa.

A veces mucoso productoras de slime

No desarrolla a 4 ºC

Desarrolla de 10 y 42 ºC óptima 35 ºC 24-48 horas .

Crecimiento a 42 ºC ayuda para diferenciarla de otras especies que integran el género.

Los cultivos desprenden un aroma dulzón muy característico “como de uvas”, que ayuda a la identificación.

PigmentosPigmentos1) piocianina, 2) fluoresceína o pioverdina, 3) piorrubina 4) piomelanina,

siendo la única especie que produce piocianina pigmento azul-verdoso.

Este pigmento, no colorea las colonias, sino que se difunde en el medio, favoreciendo la detección y facilitando el diagnóstico de laboratorio.

La piocianina (del griego: pus azulado) casi el 90% de las cepas

responsable del característico pus azul de las heridas.

este pigmento posee actividad antibacteriana e inclusive fungicida.

La pioverdina o fluoresceína, emite fluorescencia a la luz ultravioleta.

Algunas cepas producen piorrubina, de color rojo y

piomelanina de color marrón-negro.

La producción de pigmentos depende de la presencia de hierro en el medio de cultivo.

P. aeruginosa elabora bacteriocinas o piocinas

sustancias de acción bacteriostática sobre otras cepas del mismo género.

En agar sangre produce beta-hemólisis.

No fermenta los carbohidratos.

Citrato de sodio +

Factores de agresión de Pseudomonas aeruginosa

Virulencia multifactorial.

componentes propios de la célula LPSpili,alginatos y productos extracelulares como enzimas y toxinas.

P. aeruginosa plásmidos R por conjugación resistencia a la mayoría de los antibióticos unida a la resistencia a metales pesados.

Factores de adherencia:Los pili facilitan la adhesión a las

células epiteliales, permitiendo la colonización. También coloniza tejidos profundos y expuestos, como ocurre en las quemaduras y heridas.

Las cepas productoras de slime, forman como una biopelícula, que impide la acción de los anticuerpos.

Endotoxina:

lípido A (componente de la endotoxina de la pared celular)

Exotoxina:

Exotoxina A responsable de la dermatonecrosis

en quemadurases inmunodepresora y tóxica para los

monocitos y médula ósea de los animales y humanos.

Exoenzimas S y T:

daño en las células epitelialesFacilita diseminación, invasión tisular y necrosis.

Enzimas proteolíticas: La mayoría de las cepas producen enzimas proteolíticas Degradan

elastinacaseínacolágenogelatinafibrina.

Proteasas extracelulares: elastasas, proteasa alcalina.

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIOMuestras:

orina, pus, exudados, raspados de la superficie de los tejidos infectados.

Siembra en medios simples 24-48 horas a 35 ºC, en aerobiosis.

Medio sólidocolonias translúcidas, extendidas, con

bordes ondulados semejante a un huevo frito.

Producción de piocianina medio de cultivo azul verdoso que facilita la identificación.

Agar sangre b-hemólisis.

Los cultivos tienen un olor a uvas característico.

medio selectivo de elección:

agar cetrimida

resistencia a los compuestos de amonio cuaternario.

La identificación de otras especies del género requiere una amplia batería de pruebas fisiológicas.

En general, las cepas de Pseudomonas se pueden tipificar por:

serología, sensibilidad a bacteriófagos (fagotipificación), patrones de sensibilidad a antibióticos, producción de

piocinas. Las técnicas de epidemiología molecular (DNA o RNA

ribosómico) permiten clasificar las cepas con mayor sensibilidad y especificidad.

TRATAMIENTO Y CONTROLP. aeruginosa presenta una característica inherente a su fisiología, es la resistencia a varios antibióticos.

Durante el tratamiento, muchas cepas sensibles se vuelven resistentes, al adquirir enzimas inactivantes por medio de plásmidos de resistencia o al mutar las proteínas de los canales porínicos o, inducir alteraciones en el sitio diana

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Coloración de Gram

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

MEB

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Colonias en Agar

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Agar sangre

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Müeller Hinton

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Agar nutritivo

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Agar cetrimide

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Producción de piocianina

Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa

Reacción en Agar doble azúcar-hierro o

KliglerNO MODIFICA

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

Producción de oxidasa +

+ -

•Moraxella spp.Moraxella spp.

Género propuesto por Lwoff en 1939

Ubicado en familia Neisseriaceae en 1968

En 1991 se propuso la creación de una nueva

Familia: Moraxellaceaegéneros

MoraxellaAcinetobacterPsychrobacter

Los bacilos son muy cortos y gruesos, “regordetes”

en pares o cadenas cortas

en los cultivos variaciones de tamaño celular, de la forma y aún producción de elementos filamentosos o de cadenas.

Son gramnegativos

No poseen flagelos

En general son aerobios

Poseen oxidasa, generalmente también catalasa y son muy sensibles a penicilina.

Moraxella bovis

queratoconjuntivitis de bovinos.

bacterias aerobias

inactivas frente a hidratos de carbono

con exigencias nutritivas

medios enriquecidos para su desarrollo (sangre, suero).

QueratoconjuntivitisQueratoconjuntivitis

Moraxella bovis produce toxinas:HemolisinasCitolisinas.

Estas toxinas tienen la propiedad de degradarse muy fácilmente, es decir, no duran mucho tiempo fuera de la Moraxella, pero sí lo suficiente como para producir daño corneal.

PILIPILI

Hay distintos tipos de pili, de muy variada composición proteicacada tipo piliar produce anticuerpos que protegen exclusivamente contra ese tipo piliar

DIAGNÓSTICO

queratoconjuntivitis infecciosa cuadro clínico

aislamiento del microorganismo

Opacidad de la córneaOpacidad de la córnea

Toma de la muestra con hisopo estérilfase inicial de la enfermedad

Siembra debe hacerse en medios enriquecidos (agar sangre, agar chocolate)

incubación a 36-37 ºC durante 24‑48 horas.

Desarrollo de colonias pequeñasredondeadasgrisáceas

hemolíticas (halo de hemólisis muy reducido)

Por microscopía se ven cocoides o bacilos cortos gramnegativos.

En cultivos viejos muestra marcado pleomorfismo.

Identificación oxidasa positiva

hidrólisis de gelatina

licuación de medios con sueroNO reducen nitratos a nitritosinactivo frente a hidratos de carbono.

Completar con inmunodiagnóstico

TRATAMIENTOprofiláctico, por vacunas específicas

M. bovis es muy sensible a la mayoría de los antibióticos (penicilina).

La tetraciclina de acción retardada suele ser la droga de elección, tópica o sistémica.