Revista Peruana de Epidemiología

E-ISSN: 1609-7211

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Sociedad Peruana de Epidemiología

Perú

Villegas-Blanco, Maikel; Prado-López, Irina; Ortega-Gónzalez, Meylin; Zhurbenko, Raiza

Identificación de Pseudomonas aeruginosa empleando el metoda del Numero Mas Probable.

Revista Peruana de Epidemiología, vol. 16, núm. 2, agosto, 2012, pp. 131-133

Sociedad Peruana de Epidemiología

Lima, Perú

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=203124632011

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Maikel Villegas-Blanco", Irina Prado-LopezB, Meylin Ortega-Gonzalez", Raiza Zhurbenko'"

Identification ofPseudomonas aeruginosa usingthe Most Probable Number method.

Identificaci6n de Pseudomonas aeruginosa empleandoel metoda del Numero Mas Probable.

® RPEonline

COMUNICACION CORTABRIEF COMMUNICATION

REVISTA PERUANA DE EPIDEMIOLOGiAISSN 1609-7211

RESUMENLadetecci6n de Pseudomonas aernginosa esticobrando illlaimportancia cadavez mayor, debido aque su presencia en elagua, tanto deuso industrial, hospitalario, pliblicoy domestico,puede ocasionar brotes de importantes enfermedades parael hombre. Objetivo: Identificar P aernginosa en muestras de aguas tratadas y no tratadas, en fo=a simultanea con laidentificaci6n de colifo=es totales y fecales. Metodos: Utilizando el caldo asparagina para la identificaci6n presillltivade P aernginosa y agar cetrimida, comopruebaconfi=ativa, ademis de las pruebas de oxidasay catalasa, en estetrabajose muestran resultados obtenidos en la identificaci6n de P aeruginosa en 69 muestras de agua de cisterna, pozo, presa yresidual domestico. Resultados: Del total de muestras analizadas, resultaron positivas aP aeruginosa eI59A2%. Hubopresenciacompartida de P aernginosa y colifo=es totales y fecales en illl 33.3%. Conclusiones: El erupleo de latecnicadel NUmero Mas Probable para la identificaci6n de Pseudomonas aeruginosa utilizando los medios de cultivo caldoasparagina y agar cetrimida, constituye illl metoda eficaz para la detecci6n de este microorganismo en muestras de aguasde diferentes fuentes.

PALABRAS CLAVE: Pseudomonas aernginosa,Aguas, Caldo asparagina,Agar cetrimida.

IN"1RODUCaON

Un gran ninnero y variedad de microorganismos pmdenpropagarse a trav6s del agua y ClIllSlIr enfennedades alhombre Y a los anjma1es. Entre las enfermedades mas

comunes de cstc tipo Be cncuentran infecciones diarrcicas agudas.fiebrc tifoidea, c61era... paratifoidea, salmonclosis, giardiasis,coccidiosis, en1rc otIas. Elrtupueden afecrtar individualmente 0 Ii Be

diseminan par el agua, constituyen brotes c.pldtmicos de arigenbidrico afectando grandee COlectiVOllhumanos...

Pseudomonas aeruginosa es uno de los contamjDantes mas comunelI

en las fueutes de suministro de agua. Es capaz de mul.tiplicarse enunrango de substratos muy amplio ya que puede proliferargracilis a lagranveriedadde compuestos orgAnicos que utiliuncomo fueutes decarbono y energ(a.'~

En Cuba, como en otros paIses, existen normativas y regulacionessabre la calidad microbiol6gica de las aguas potable, :fuentes deabesto, de piscina, de uso recreacional y medicinal.HI Las normas depiscina, de uso recreaci.onaly medicinal incluyenaP. aeruginosaporcl riesgo para la salud colectiva que implica el contacto directo concstas aguas,

El objetivo principal de cstc trabajo consisti6 en ideut:i:ficar P.aeruginosa en muestras de aguas tratadu Yno tratadas procedentcsde cisterna, pozo, press. y residual dom6stico empleando la t6cnicadelN6meroMasProbable,enformasimultaneaconlaidentificaci6nde coliformcstotalCI y fccalci.

MATERIALYMETODOS

Mediante cim6todo de Ninnero Mas Probable (NMP) sc analizMon69 muestras de aguas tratadas con cloro (cisterna) y no tratadas(POZO, press Yresidual dom!istico) durante el perlodo de noviembredel 2009 basta mayo 2010, correspondiendo 47 muestras de pozos(APO), 10 de press. (AP). 10 de cisterna (AC) Ydos de residualesdomesticos (AR). Las muestras fueron recepcionadas en clLaboratorio de Microbiologia de la Empresa Nacional de An8liais yScrvicios T6cnicos (ENAST) de Ciudad de la Habana, donde Be leasignaron nUmeros consecutivos de acuerdo a la fccha de entrada dedichas muestras.

El volumen de cada muestra fuc de 100mL. Pen. la identiticaci6n deP. aerugirwsa 8C utilizaron en la etapa presuntiva caldo asparagina yenla. ctapa confumativa agar cctrimida, ambos fucron producidospar Centro Nacional de Bioprcparados (BioCcn, Cuba). Paracoliformcs fecalcs y Iotales 8C cmplcaron los medios de cultivo caldolactoaado, caldo billsverdebrillante y caldo EC (BioCcn, Cuba).

(A) Laooratorio de Investi*,ciones de Medios de Cultivo, Centro Nacional deBiof'l""parados (BioCen), Habana, Cuba, (B)La.ooratorio de Mi<TObiologra, Emf>"'"saNadonal de Anili';s r ServiciosTecnicos (ENAS"T), Habana, Cuba,CorTesf>Ond encia. a Maikel Ville*,s-Blanco: villega.>@biocen,OJRed bi do el 28 de junio de 2012 Yaf>l"bad 0 el 21 de agosto de 2012,Ciu su&erida: Villegas-Blanco M, Prado-L0P'"z ~ Ortega-Gonzalez M,Zhuroonko R,Id ..,tificadon de Pseudomonas "erugjn"," emplean do el metod 0 del Nu mirO MisProbable, Rev peru epiiemjol2012; 16 (2) [5 pp.]

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COMUNICACION CORTABRIEF COMMUNICATION

Para el ensayo de detecci6n deP. aeruginosa se inocu1aron 10mL decarla muestra en una serle de cinco tubos con 10 mL de caldoasparagina de doble concentraci6n. Los tubos se incubaron durante48 horas a 35°C± O.5°C y fueron examinadosbajo luzultravioleta delongitud de onda de 365nm (Black Ray Lamp, modelo UVL-21). Laproducci6n de pigmentos flucrescentes verdes constituy6 la prucbapresuntivapositiva.

Para la etapa confinnativa desde las muestras positivas se tomaronuna a dos asadas y se semhraron en agar cetrintida par agotarnientodel in6cu10." Las placas fueroo incubadas a 35°C± O.5°C durante 24homs. La producci6n de pigmentos fluorescentes verdes en lascolonias constituy61aprueba confirmativapositivapara 1apresenciade P. aeruginosa, apartir de las cua1es se les realiz61a identificaci6nbioquimica atraves de las prucbas de laoxidasay la catalasa. 11

EI c81culo de la densidad de P. aeruginosa se realiz6 a partir lacombinaci6n de tubos positivos y negativos obtenidos en la etapapresuntiva y los resultados se expresan como el nfunero rruisprobable de P. aeruginosa en 100 mL de agua (NMP P. aeruginosa/lOOmL)."

Para la detecci6n de coliformes totales y fecales, cada muestra seinocul6 en series de 15 tubos; 5 tubos cada uno con 10 mL de caldolactosado doblemente concentrado y 10 tubos cada uno con 10 mLde caldo lactosado simple concentrado. En los 5 tubos dobleconcentrados se inocu16 10 mL de muestra, en los 5 tubos simpleconcentrados, 1mL de muestra y en los Ultimos 5 tubes, 0.1 mL demuestra, los tubos fueron incubados a 35°C ± O.SoC durante 48 ± 3horas. La producci6n de gas foe tornada como etapa presuntivapositiva. En 1a etapa confirmativa de las muestras positivas setomaronuna 0 dos asadas y fueron sembradas en tubos con 10 mL decaldo bilis verde brillante para la detecci6n de colifonnes totales y

TABLA 1. Resultados de la identificaci6n preslUltiva y cuantificaci6n dePseudomonas aeruginosa, jlUlto a colifonnes fatales y fecales

en muestras de aguas procedentes de pozo.

N°Pllleba presuntiva

oxidasalColiformes Coliformes

muestraP aeruginosa

catalasa totales fecales(NMP/100mL) (NMP/100mL) (NMP/100mL)

1 <2.2 +/+ <2 <2

5 <2.2 +/+ <2 <2

8 <2.2 +/+ <2 <2

13 <2.2 +/+ <2 <2

14 <2.2 +/+ 4 <2

17 <2.2 +/+ <2 <2

18 <2.2 +/+ <2 <2

37 <2.2 9 <2

38 <2.2 43 <2

39 <2.2 <2 <2

46 <2.2 -/- 240 23

50 <2.2 -/- <2 <2

51 <2.2 43 4

52 <2.2 -/- 4 <2

53 <2.2 +/+ <2 <2

55 <2.2 +/+ <2 <2

56 <2.2 <2 <2

57 <2.2 +/+ <2 <2

(+/+) oxidasa y catalasa positivas(-1-) oxidasa y catalasa negativas(-) no se realizaron las pruebas oxidasa y catalasa

REV. PERU. EPIDEMIOL. VOL 16 No2 AGOSTO 2012 -132-

REVISTA PERUANA DE EPIDEMIOLOGfA

Villegas-Blanco M, et al. Identificaci6n de Pseudomonas aeruginosaempleando el metoda del NLimero Mas Probable

una ados asadas que fueroo sembradas en tubos con 10 mL de caldoEepara ladetecci6nde colifonnes fecales. lO

Los tuhos con ealdo bills verde brillante, se incubaron a 35DC ±O.5°C durante 48 ± 3 horas. La producci6n de gas foe tomada comoetapa confinnativa positiva para coliform.es totales. Los tubos concaldo EC se incubaron a 44.4°C ± 0.2°C durante 24 ± 2 horas. Laproducci6n de gas fue tomada como prucba confinnativa positivaparacolifonnes fecales.

RESULTADOS

La tabla I presenta los resultados de la identificaci6n presuntiva dep. ae11lginosa en 18 muestras de aguas procedentes de pozouti1izando s610 el caldo asparagina con un NMP/100 mL de <2.2 entodas las muestras, mientras que este indicador vari6 entre <2.2 y240 entre los colifonnes totales y <2.2 Y 23 entre los colifonnesfecales.

En la tabla 2 se muestran los resultados de la identificacionpresuntiva y cuantificaci6n de P. aeu11lginosa en caldo asparagina yla confirmaci6n en agar cetrintida de 29 muestras de agua de pozo,observandose que el NMPII00 mL para P. aeuruginosa en caldoasparagina vari6 entre <2.2 y >16.0 Y en 0610 dos aislades queresultaron positivos a la prueba presuntiva no se desarro1l6fluorescencia en agar cetrimida.

TABLA2. Resultados de la identificaci6n preslUltiva, confmnativay cuantificaci6n de Pseudomonas aeruginosa, jlUlto a colifonnes

totales y fecales en muestras de aguas procedentes de pozo.

Prueba PruebaColiformes Coliformes

N" presuntiva confirmativa oxidasal totales fecalesmuestra P aeruginosa P aeruginosa catalasa (NMP/100mL) (NMP/100mL)(NMP/100mL) (NMP/100mL)

6 2.2 FllJorescencia +1+ 2 27 2.2 FllJorescencia +1+ 7 7

10 16 FllJorescencia +1+ 110 8011 16 FllJorescencia +1+ 80 2212 > 16.0 Sin FllJorescencia -1-

15 > 16.0 FllJorescencia +1+ 500 3024 > 16.0 FllJorescencia +1+ <2 <225 > 16.0 FllJorescencia +1+ 4 <226 > 16.0 FllJorescencia +1+ 39 <227 > 16.0 FllJorescencia +1+ 9 <232 2.2 Sin FllJorescencia +1+ <2 <233 <2.2 Sin FllJorescencia +1+ <2 <234 > 16.0 FllJorescencia +1+ <2 <235 > 16.0 FllJorescencia +1+ <2 <236 > 16.0 FllJorescencia +1+ <2 <240 > 16.0 FllJorescencia +1+ 1100 <241 5.1 FllJorescencia +1+ <2 <242 2.2 FllJorescencia +1+ 9 <243 > 16.0 FllJorescencia +1+ 24 <244 2.2 FllJorescencia +1+ 43 <245 > 16.0 FllJorescencia +1+ 93 <248 2.2 FllJorescencia +1+ 93 2349 > 16.0 FllJorescencia +1+ 93 754 > 16 FllJorescencia +1+ 4 464 5.1 FllJorescencia +1+ 110 11065 > 16.0 FllJorescencia +1+ 1100 28066 2.2 FllJorescencia +1+ 110 5067 > 16.0 FllJorescencia +1+ 900 2668 > 16.0 FllJCfeScencia +1+ 500 34

(+1+) oxidasa y catalasa positivas(-1-) oxidasa y catalasa negativas

REVISTA PERUANA DE EPIDEMIOLOGiA

V1llegas-Blanoo M, et al.ldentificaci6n de Psoodomonas aeruginosaempleando el metodo del Numero Mas Probable

ABSTRACT

(OMUNICACl6N (ORTABRIEF COMWJNICATION

lDENriFICATION OFPSEUDOMON.:fSAERUGINO&t USING TIlEMOSTPRoBABLENUMBERMElHOD.The detection ofPseudomontu aeruginosa inwater samples is crucial because the contamiDltion ofwater sources such asindustrial. hospital. public anddomestic is :frequently the cause ofimportanthumanoutbreaks. In thisworkwc evaluatedtheused ofthe asparagine broth and cctrimidc agar produced inBioCcn, HaVllllB, Cuba, for the presumptive and confumativeidentification ofP. aerugin03a, respectively. Objective: To identify P. aerugin03a in samples oftreated and nat 1rcatcdwaters, in simultaneouswith the identificationoftotal and fecal coliforms. Methods: Sixtynincsamples from. cisternwater,well, prey and domestic waste were taken. The presmnptivc identi:fi.cation was performed by Most Probable NumberTechnique using asparagine broth, confirmative test was carried outusing cetrimide agar followed by oxidase and catalasatests.Relu1tl: ThepresenceofP. amIgtnosawasidenti:fi.edinthe 59.42%ofthesamplesanalyzed.Itwasalsodemoustratedthe commonprcsence ofPsew:Jomonas aerugino8a and total and fecal colifonns in 33.33% ofthe samples. CODdudoDI:The cmploynwntthe Most probable Numbertecbnique forthe i.deutificationofPseudomomu aeruginosa using the culturemedia asperagine broth and cetrimide agar, it constitures an effective method for the detection ofthil microorganism insamplesofwateniofdifferent IOUI'CClI

KEYWORDS: Pseudomo1la'l aerugino8a, Asparagine broth, Cctrimidc agar, Water, Cuba

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