RESUMO

Uso de método do palito para inoculação de Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis, em soja

Amauri Sivierol & José O. M. Menterr'

EMBRAPAlCPAF-ACRE, Caixa Postal 392, Rio Branco - AC, CEP: 69.908-180.ESALQ/USP Dept. de Fitopatologia, Caixa Postal 09, Piracicaba, SP, CEP: 13.418-970.Aceito para publicação em: 23/06/95.

Siviero, A. & Menten, 1.0.M. Uso de método do palito para inoculação de Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis, em soja. Summa Phytopathologica,v.21, p.259-260, 1995.

o cancro da haste da soja, causado por Diaporthe phaseolorum f. sp. meri-dionalis Morgan-Jones (D.p.m.), é um sério problema no Brasil desde o seuaparecimento em 1989. A avaliação da resistência de cultivares ao patógenoexige metodologia apropriada, segura e objetiva. Quatro cultivares de soja fo-ram testados para resistência a D.p.m. Plantas no estádio V I foram inoculadasatravés do método do palito e a avaliação da incidência da doença foi feitapela contagem do número de plantas mortas/murchas que se deu entre 15 a 20

dias após a inoculação. Os cultivares IAC-Foscarin 31 e Primavera são resis-tentes a Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis e podem ser utilizadoscomo fontes de resistência ao patógeno em programas de melhoramento, en-quanto, os cultivares Paraná e Forrest são suscetíveis a D.p.m. O método deinoculação usando o palito colonizado com o patógeno foi eficiente e segurona discriminação da resistência dos genótipos de soja a Diaporthe phaseolo-rum f. sp. meridionalis.

Palavras-chave: Metodologia, avaliação resistência, Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis, soja.

ABSTRACT

Siviero, A. & Menten, 1.0.M. The toothpick as a method for inoculation of soybean plantlets with the Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis. SummaPhytopathologica, v.21, p.259-260, 1995.

Soybean stem canker, caused by Diaporthe phaseolorumf sp. rneridionalisMorgan-Jones (D.p.m.), was been a serious problem of soybean crops in Bra-zil since their first report in 1989. More accurated and precise methodologicaltechnics are needed to evalue pathogen resistant cultivars. This work was car-ried out under greenhouse conditions using toothpick method. Four genotypesresistant (/AC-Foscarin 31 and Primavera) and susceptible (Paraná and For-

Key words: Metodology, resistance, Diaporthe phaseolorumf sp. meridionalis, Soybean.

rest) to D.p.m. were tested. The toothpick method was used to inoculate see-dlings at VI stage. The disease was evaluatedfifteen to twenty days after ino-culation by counting the number of dead or wilt plants. The toothpick methodwas eficient and accurate in detection of the soybean genotypes for resistanceto D.p.m.

o cancro da haste da soja foi constatado, pela primeiravez no Brasil, no município de Ponta Grossa -PR, em feve-reiro de 1989 e encontrado na safra 1989/90 em todas asáreas produtoras de soja do país (9). O fungo que causa adoença no Brasil é o mesmo que ocorre no sul do EUA,identificado como Diaporthe phaseolorum f. sp. meridiona-lis Morgan-Jones [forma anamórfica: Phomopsis phaseoli f.sp. meridionalis Morgan-Jones] (6, 9).

Os sintomas da doença no campo se caracterizam porapresentar estrias castanho claras que progridem para man-chas elípticas escuras ocorrendo nos entre-nós, nós, caule,pecíolos e medula das plantas. O ataque do patógeno podeprovocar a morte parcial ou total das plantas afetadas (9).

A avaliação da resistência em genótipos de soja ao cancroda haste em programas de melhoramento, exige a adoção demétodos de inoculação e avaliação rápidos e eficientes (I). Aprincipal desvantagem da avaliação em campo é a não ocor-rência da doença em determinados anos devido a condiçõesclimáticas desfavoráveis. Uma alternativa seria a inoculaçãodo patógeno em campo, porém, seria pouco prático e traba-lhosa.

O método de inoculação com palito foi usado no sistemasoja versus cancro da haste, pela primeira vez, por CRALL

1995 Grupo Paulista de Fitopatologia

(2) e sua eficiência foi comprovada posteriormente por di-versos autores (1,4,5, 8,9). O método do palito de dente co-lonizado com micélio do patógeno reduziu o tempo de ava-liação de plantas de soja ao cancro da haste, economizou tra-balho e espaço no campo, demonstrou também haver correla-ção entre os resultados obtidos no campo e em casa-de-vege-tação (5).

Este trabalho teve como objetivo testar o método do pali-to de dente colonizado com micélio do fungo com isolado doBrasil, para avaliação da resistência de genótipos de soja aD.p.m.

MA TERIA L E MÉTODOS

Foram utilizados os cultivares de soja IAC-Foscarin-31,Primavera, Paraná e Forrest pertencentes à Coleção de Ger-moplasma da Escola Superior de Agricultura "Luiz de Quei-róz' da Universidade de São Paulo.

As plantas de soja a serem inoculadas foram cultivadasem vasos de alumínio com capacidade de 2,0 litros. O subs-trato usado foi constituído de solo-arei a-esterco na proporçãode (3: I: I). Em cada vaso foram distribuídas aproximadamen-te 12 sementes e, antes da inoculação, foi feito um desbastedeixando-se cinco plantas por vaso.

Vol. 21, Nº 3-4, 1995 259

o inóculo foi produzido em palitos de dente colonizadoscom micélio do fungo. Os palitos foram cortados em dois pe-daços e suas extremidades afinadas, visando diminuir o danomecânico às plantas no momento da inoculação. Em seguidaforam fervidos em água destilada por 30 minutos, com trêstrocas sucessivas de água, para a eliminação de possíveisagentes tóxicos às plantas ou algum inibidor fúngico. Antesde serem colocados em contato com o micélio do fungo, ospalitos foram autoclavados à 120°C por 20 minutos.

O fungo foi repicado da cultura matriz em tubo, para pla-cas de Petri contendo BDA; após quatro dias de incubação a24 -26°C no escuro, transferiu-se cinco a seis discos de micé-lio medindo 5 mm de diâmetro para outra placa de petri comBDA. Os palitos a serem colonizados pelo fungo foram colo-cados nestas culturas (50 a 60 pedaços por placa) na posiçãovertical com a ponta afinada externa ao meio de cultura e in-cubados por quatro dias.

As plantas foram inoculadas no estádio VI (3), cerca de10 dias após a semeadura, através da inserção direta do pali-to colonizado com o fungo a I em abaixo do cotilédone daplanta. As plantas, após a inoculação, foram mantidas em câ-mara úmida por 72 horas, sendo transferidas para bancadasna casa de vegetação até a avaliação. Cada inoculação foirealizada em intervalo de sete dias repetindo-se o mesmoprocedimento acima descrito. Ao todo foram constituídosquatro lotes distintos de plantas submetidas a inoculação.

O delineamento experimental foi blocos ao acaso, comquatro tratamentos (genótipos) e quatro repetições. Em cadatratamento foram inoculadas 100 plantas, divididas em qua-tro repetições de 25 plantas. O preparo do inóculo foi inicia-do oito dias antes da data de cada inoculação, fazendo-secoincidir o desenvolvimento da planta com a disponibilidadede inóculo.

A avaliação da doença foi feita através da contagem donúmero de plantas mortas ou murchas e posterior transfor-mação em percentagem, entre 15 a 20 dias após a inocula-ção. Os dados originais de incidência (porcentagem de plan-tas mortas/murchas) foram transformados segundo a fórmularx+T e submetido a análise de variância. As médias foramcomparadas pelo teste de Tukey, ao nível de significância de5 e 1%.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

No Quadro 1, são apresentados os dados originais da inci-dência do cancro da haste da soja dos genótipos testados parareação de resistência a Diaporthe phaseolorum f. sp. meri-dionalis.

Os resultados apresentados no Quadro I confirmaram areação de resistência a Diaporthe phaseolorum f. sp. meri-dionalis dos cultivares "IAC-Foscarin-31" e "Primavera",bem como a reação de suscetibilidade dos cultivares "Para-ná" e "Forrest", conforme relatado por (9).

A avaliação da quantidade de doença segundo o critérioda incidência do cancro da haste em soja se mostrou eficien-te, simples e objetiva para detectar a resistência dos genóti-pos testados, uma vez que identificou-se diferença significa-tiva entre os genótipos.

260 Summa Phytopathologica

Quadro I. Reação de quatro genótipos de soja a Diaporthe phaseolorumf. sp. meridionalis. Piracicaba - SP, 1992.

IncidênciiGenõtípos' Média3

2 3 4

IAC-Foscarin-31 (R) 00 12 00 08 05 a

Primavera (R) 08 12 00 04 O6a

Paraná (S) 92 80 56 44 68 b

Forrest (S) 100 100 88 80 92b

, R = Resistente; S = Suscetível.2 % de plantas mortas/murchas.3 Médias seguidas da mesma letra não diferem entre si pelo teste de Tukey a

5% de probabilidade (cv = 12,74%).

O curto espaço de tempo (15 a 20 dias) para avaliação daresistência de genótipos é desejável, principalmente em pro-gramas de melhoramento onde um grande número de linha-gens são testadas. O tempo para avaliação da reação de resis-tência foi consideravelmente reduzido. Outros autores cita-ram a necessidade de 30 a 40 dias para a avaliação de resis-tência de genótipos de soja ao cancro da haste (5, 7).

O método de inoculação, usando o palito de dente coloni-zado com micélio do patógeno, foi eficiente na discrimina-ção dos materiais com relação a reação a D.p.m. Tal fato éimportante, considerando-se a boa correlação entre o métododo palito e a resposta dos cultivares ao nível de campo, comorelataram (5, 7).

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