universidad regional autÓnoma de los andes...
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UNIVERSIDAD REGIONAL AUTÓNOMA DE LOS ANDES
UNIANDES
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
PROGRAMA DE MAESTRÍA EN FARMACIA CLÍNICA Y HOSPITALARIA
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL GRADO
ACADÉMICO DE MAGISTER EN FARMACIA CLÍNICA Y HOSPITALARIA
TEMA:
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA “IN VITRO” DEL
EXTRACTO HIDROETANÓLICO DE HOJAS DE Vernonanthura patens
(Laritaco) SOBRE Escherichia coli.
AUTORA: BQF. RIVERA BARRERA FLOR MARÍA
ASESORES: Dr. CARRANZA QUISPE LUIS EMILIO MsC.
Dr. BERMÚDEZ DEL SOL ABDEL Ph.D.
AMBATO – ECUADOR
2018
APROBACIÓN DE LOS ASESORES DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
CERTIFICACIÓN:
Quienes suscribimos, legalmente CERTIFICAMOS QUE: El presente trabajo de
titulación realizado por el señorita Flor María Rivera Barrera, maestrante del
programa de la Maestría en Farmacia Clínica y Hospitalaria, Facultad de Ciencias
Médicas, con el tema “EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
“IN VITRO” DEL EXTRACTO HIDROETANÓLICO DE HOJAS DE
Vernonanthura patens (Laritaco) SOBRE Escherichia coli” ha sido
prolijamente revisado, y cumple con todos los requisitos establecidos en la
normativa pertinente de la Universidad Regional Autónoma de los Andes
UNIANDES, por lo que se aprueba su presentación.
Ambato, junio del 2018
____________________________ ______________________________
Dr. Carranza Quispe Emilio, Ms. C. Dr. Bermúdez Del Sol Abdel, Ph.D.
ASESOR ASESOR
DECLARACIÓN DE AUTENTICIDAD
Yo, Flor María Rivera Barrera, maestrante del programa de la maestría en
Farmacia Clínica y Hospitalaria, Facultad de Ciencias Médicas, declaro que todos
los resultados obtenidos en el presente trabajo de investigación, previo a la
obtención del grado académico de MAGÍSTER EN FARMACIA CLÍNICA Y
HOSPITALARIA, son absolutamente originales, auténticos y personales; a
excepción de las citas, por lo que son de mi exclusiva responsabilidad.
Ambato, junio del 2018
______________________________
Bqf. Flor María Rivera Barrera
CI. 1400779417
AUTORA
DERECHOS DE AUTORA
Yo, Flor María Rivera Barrera, declaro que conozco y acepto la disposición
constante en el literal d) del Art. 85 del Estatuto de la Universidad Regional
Autónoma de los Andes UNIANDES, está constituido por: La propiedad intelectual
sobre las Investigaciones, trabajos científicos o teóricos, proyectos profesionales y
consultoría que se realicen en la Universidad o por cuenta de ella...”
Ambato, junio del 2018
______________________________
Bqf. Flor María Rivera
CI. 1400779417
AUTORA
DEDICATORIA
A mis amados padres y hermanos, quienes con
sus palabras de aliento no me dejaban decaer
para que siguiera adelante y siempre sea
perseverante y cumpla con mis ideales.
A mis compañeros y amigos, por brindarme su
apoyo y por permitirme aprender más de la vida
a su lado.
Flor Rivera
AGRADECIMIENTO
Dios, tu amor y tu bondad no tiene fin, me
permites sonreír ante todos mis logros que son
el resultado de tu ayuda, y cuando caigo y me
pones a prueba, aprendo de mis errores y me
doy cuenta que pones al frente mío para que
mejore como ser humano, y crezca de diversas
maneras.
Este trabajo de tesis ha sido de gran bendición
en todo sentido y te lo agradezco padre, y no
cesan mis ganas de decir que es gracias a ti
que esta meta está cumplida.
Gracias por estar presente no solo en esta
etapa tan importante de mi vida, sino en todo
momento ofreciéndome lo mejor y buscando lo
mejor de mi persona.
Flor Rivera
ÍNDICE GENERAL
APROBACIÓN DE LOS ASESORES DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
DECLARACIÓN DE AUTENTICIDAD
DERECHOS DE AUTORA
DEDICATORIA
AGRADECIMIENTO
ÍNDICES
RESUMEN
ABSTRACT
INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 1
Antecedentes de la investigación ....................................................................... 2
Planteamiento del Problema .............................................................................. 5
Formulación del problema .................................................................................. 7
Identificación de la línea de investigación .......................................................... 8
Objetivos ............................................................................................................ 8
Objetivo general ................................................................................................. 8
Objetivos específicos ......................................................................................... 8
Hipótesis ............................................................................................................ 8
Aporte teórico, significación práctica y novedad científica. ................................ 8
CAPÍTULO I ..................................................................................................... 10
MARCO TEÓRICO .......................................................................................... 10
1. Uso de las plantas medicinales .................................................................... 10
1.1 Estudios etnobotánicos y etnofarmacológicos ........................................... 11
1.2 Valor de uso de las plantas medicinales .................................................... 13
1.3 Vernonanthura patens ............................................................................... 15
1.3.1 Hábitat y ecología ................................................................................... 16
Características botánicas ................................................................................. 16
1.3.2 Principios activos .................................................................................... 17
1.3.3 Actividad biológica de Vernonanthura patens ........................................ 17
1.4 Caracterización fitoquímica de extractos de plantas .................................. 19
1.4.1 Extracción de extractos vegetales ........................................................... 19
1.4 .2 Recolección y tratamiento del vegetal .................................................... 19
1.4.3 Métodos de Extracción ............................................................................ 22
1.4.4 Extractos ................................................................................................. 23
1.5 Tamizaje Fitoquímico de extractos vegetales ............................................ 23
1.5.1 Técnicas para el tamizaje fotoquímica .................................................... 23
1.6 Actividad antimicrobiana ........................................................................... 25
1.6.1 Resistencia antimicrobiana ..................................................................... 26
1.6.2 Tipos de resistencia ................................................................................ 27
1.6.3 Métodos para evaluar la actividad antimicrobiana .................................. 28
Factores que influencian en la actividad antimicrobiana .................................. 28
1.6.3.1 Factores que influyen en las pruebas antimicrobianas......................... 28
1.6.3.2 Antibiograma ........................................................................................ 30
CAPITULO II .................................................................................................... 31
MARCO METODOLOGICO ............................................................................. 31
2.1 Estudio etnobotánica. ................................................................................. 31
2.1.1 Descripción del Área de Estudio ............................................................. 31
2.1.2 Aplicación de cuestionario etnofarmacológico ........................................ 32
2.1.3 Análisis de datos etnobotánicos .............................................................. 33
2.2 Obtención del extracto hidroetonólico de Vernonanthura patens. .............. 33
2.2.1 Lavado y Desinfección de la planta ......................................................... 33
2.2.2 Maceración de la muestra ....................................................................... 34
2.2.3 Filtración.................................................................................................. 34
2.3 Análisis de calidad del Extracto hidroetanólico de la planta. ...................... 34
2.3.1 Determinación de cenizas totales. .......................................................... 34
2.3.2 Determinación de cenizas solubles en agua. .......................................... 35
2.3.3 Cenizas insolubles en ácido clorhídrico al 10% ...................................... 35
2.3.4 Determinación de agua (humedad residual) ........................................... 36
2.4. Análisis fitoquímico ................................................................................... 36
24.1 Ensayo de Espuma (saponinas) .............................................................. 37
2.4.2 Ensayo de Benedic (Fenoles) ................................................................. 37
2.4.3 Ensayo de Shinoda (Flavonoides) .......................................................... 37
2.4.4 Ensayo de Borntrager (Quinonas) ........................................................... 37
2.4.5 Ensayo de Chalconas ............................................................................. 38
2.4.6 Ensayo de Rosentaler (Terpenos) .......................................................... 38
2.4.7 Ensayo de Dragendorff (Alcaloides) ........................................................ 38
2.5. Análisis microbiológico mediante método de difusión en disco (Kirby-Bauer)
......................................................................................................................... 38
CAPITULO III ................................................................................................... 40
RESULTADOS Y DISCUSIONES ................................................................... 40
3.1 Etapa I: Estudio etnobotánico .................................................................... 40
3.2 Etapa II: Comprobación taxonómica e identificación botánica .................. 47
Calidad de la muestra. ..................................................................................... 47
3.3 Etapa III: Caracterización fitoquímica del extracto de Vernonanthura patens.
......................................................................................................................... 49
3.4 Etapa IV: Evaluación de actividad antimicrobiana del extracto
Vernonanthura patens ...................................................................................... 50
BIBLIOGRAFÍA
ANEXOS
ÍNDICE DE GRÁFICOS
GRÁFICO No. 1.. .............................................................................................. 15
GRÁFICO No 2. ............................................................................................... 32
GRÁFICO No. 3. .............................................................................................. 42
GRÁFICO No. 4.. ............................................................................................. 42
GRÁFICO No. 5.. ............................................................................................. 43
GRÁFICO No. 6.. ............................................................................................. 44
GRÁFICO No. 7.. .............................................................................................. 51
ÍNDICE DE CUADROS
CUADRO No.1. ................................................................................................ 40
CUADRO No. 2.. .............................................................................................. 44
CUADRO No. 3.. .............................................................................................. 45
CUADRO No. 4.. .............................................................................................. 48
CUADRO No. 5.. .............................................................................................. 49
ÍNDICE DE ABREVIATURAS
CMI Concentración mínima inhibitoria
DMSO Dimetilsulfóxido
h Horas
IVU Índice de valor de uso
g Gramo
mL Mililitros
mm Milímetro
cm Centímetro
m Metro
msnm metros sobre el nivel del mar
OMS Organización mundial de la salud
DAP Diámetro a la altura del pecho
ug Microgramo
uL Microlitro
UST Nivel de uso significativo Tramil
Vuis Valor de uso de la especie
ADN Ácido desoxirribonucleico
ARNr Ácido ribonucleico ribosómico
INEN Instituto Ecuatoriano de Normalización
RESUMEN
El uso de plantas medicinales con fines curativos es una práctica utilizada
desde la antigüedad. Estas han sido por mucho tiempo el principal e incluso el
único recurso al alcance de la población, por lo que existe un gran interés en la
búsqueda de nuevas especies vegetales con propiedades medicinales. El
objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antimicrobiana “in vitro”del
extracto hidroetanólico de las hojas de Vernonanthura patens sobre
Escherichia coli, para lo cual se realizó un estudio etnobotánica con el método
de la encuesta a 107 informadores clave en la parroquia Pacuyacu del cantón
Lago Agrio de la provincia de Sucumbíos, Ecuador. Para la caracterización
fotoquímica de la especie vegetal seleccionada se recolectó, identifico,
acondicionó, extrajo con solvente hidroalcohólico, concentró y se llevó a cabo
el tamizaje fotoquímico, se realizó la evaluación de la actividad antimicrobiana
a dicho extracto usando el método de difusión de discos frente a Escherichia
coli. Como resultado de las encuestas se seleccionó a la planta Vernonanthura
patens por tener un nivel de uso significativo de 67.2%. El tamizaje fotoquímico
mostró la presencia en esta planta de Fenoles, Flavonoides, Terpenos y
Auronas que son metabólicos con actividad antimicrobiana. El extracto mostró
actividad antimicrobiana frente a Escherichia coli siendo los extractos al 25%,
50%, 75% y 100% los que presentaron mayor halo de inhibición. Se concluye
que Vernonanthura patens es una de las plantas más usadas para tratar
afecciones infecciosas en la parroquia Pacuyacu del cantón Lago Agrio y el
extracto hidroetanólico de las hojas presenta acción antimicrobiana in vitro
sobre Escherichia coli.
Palabras clave: Vernonanthura patens, Escherichia coli, Estudio etnobótanico,
actividad antimicrobiana, plantas medicinales.
ABSTRACT
The proper use of the medicinal plants for curative purposes has been practiced
since ancient times. It is essential to mention that the mentioned practice has
been the unique form to treat medical problems since hundreds of years ago.
Therefore, even today, many people are looking for new natural species whose
property has medicinal treats. The main objective of this research was to
evaluate the antimicrobial activity “in vitro” on hydro-ethanoic extracts of leaves
mainly known as “Vernonanthura patens on Escherichia coli”. It is essential to
mention that ethnobotanical analysis was made; in addition, a survey to 107
people was made. This study took part in Pacuyacu – Lago Agrion, in
Sucumbios province.
To do phytochemical processes on vegetal species, it was relevant to identify,
collect, and extract the species by the using hydro-alcoholic substances. It was
also essential to carry on a phytochemical screening as well as the assessment
of antimicrobial activities by applying diffusion Methods on “Escherichia coli”.
After doing he surveys, it was found out that the plant “Verbonaninthura” had a
high level of medical treats (67.2%). In addition, the phytochemical screening
showed that the pant had Phenols and flavonoids characteristics. It was seen a
microbial activity in relation with Escherichia coli (25%, 50%, 75% and 100%). It
was concluded that, “Verbonaninthura patens” is one of the pants who have
high levels of inhibition as they can cure infectious diseases. In addition, hydro-
ethanoic substances also present medicinal patterns.
Key Words: Verbonaninthura patens, Escherichia - coli, ethno-botany study,
antimicrobial activity, medicinal plants.
1
INTRODUCCIÓN
Las plantas medicinales han formado parte importante de la historia y cultura
de los pueblos indígenas. El uso de plantas medicinales es el resultado de la
experiencia e íntimo contacto con la naturaleza que el hombre ha acumulado
por generaciones, así como de la convivencia entre las culturas de diferentes
pueblos. Este saber ha permitido que sobrevivan comunidades que habitan en
lugares apartados, donde hay carencias de servicios médicos y donde las
parteras, "yerberos" y curanderos son los principales responsables de la salud
de los habitantes (1).
Por lo tanto, las plantas medicinales cumplen una función importante como
fuente de salud y revisten un interés incuestionable, por ello la Organización
Mundial de la Salud (OMS) en su programa "Salud para Todos en el año 2000"
recomendó la promoción de la medicina tradicional y las plantas medicinales,
por su bajo costo y aplicación popular en la atención primaria de la salud (2).
En Asia, millones de personas mantienen su salud mediante el uso de hojas,
raíces y cortezas de árboles. Según investigadores todas estas plantas han
sido reveladas para su utilización en la medicina tradicional. De acuerdo a la
capacidad científico-técnica predominante en la región latinoamericana, las
nuevas tecnologías de la información, las comunicaciones, la abundante
diversidad biológica y los pasos para el desarrollo de la salud de la sociedad se
verán altamente favorecidos (3).
La gran diversidad vegetal y la amplia riqueza cultural de México han
favorecido el aprovechamiento de las plantas con fines medicinales desde
épocas prehispánicas. Este patrimonio cultural se ha transmitido de generación
en generación, de manera que algunas costumbres subsisten y son ejercidas
de manera cotidiana, tanto en áreas rurales como urbanas (4). En México
alrededor de 4 000 especies de plantas con flores (aproximadamente 15% de
la flora total) tienen atributos medicinales, es decir que más o menos una de
cada siete especies posee alguna propiedad curativa. Sin embargo, se estima
que la validación química, farmacológica y biomédica de los principios activos
que contienen se ha llevado a cabo sólo en 5% de estas especies (5).
2
En Ecuador, el uso de las plantas en las diversas poblaciones humanas está
intrínsecamente ligado a las tradiciones culturales, es así que la etnobotánica
ha sido clave para investigar cómo cada población aprovecha la flora de su
entorno por ser parte sustancial de su identidad. Este nexo socioambiental
demuestra por qué los procesos de aculturación acelerados y la desaparición
de los bosques tendrían como consecuencia no solo la pérdida de las especies
de plantas útiles, sino también del saber milenario de los pueblos indígenas
asociado con su aprovechamiento (6).
Actualmente, en el Ecuador la etnobotánica ha despertado una conciencia de
cambio en las nuevas generaciones científicas y académicas. El reto para los
etnobotánicos ecuatorianos en el siglo XXI es demostrar que sí es posible un
aprovechamiento sostenible de la diversidad vegetal, el cual es factible a través
de prácticas tradicionales que implican la participación de los actores locales,
quienes tienen un profundo respeto por la naturaleza al concebirla de manera
holística (6). Sin embargo, en el Ecuador, los estudios de plantas medicinales y
etnobotánica han sido desarrollados principalmente en la región central andina
y en la Amazonía y consisten mayormente en la enumeración de las plantas
que conoce y usa la gente local y/o la descripción de los sistemas de salud
tradicional en comunidades indígenas (7).
Por lo cual las plantas medicinales tienen importantes aplicaciones en la
medicina moderna; entre estos, son fuente directa de agentes terapéuticos, se
emplean como materia prima para la fabricación de medicamentos
semisintéticos más complejos, la estructura química de sus principios activos
puede servir de modelo para la elaboración de drogas sintéticas y tales
principios se pueden utilizar como marcadores taxonómicos en la búsqueda de
nuevos medicamentos (8).
Antecedentes de la investigación
Las plantas, desde la antigüedad, han sido un recurso natural al alcance del
ser humano para su propio beneficio. Desde los inicios de la historia, el
hombre ha utilizado las plantas para diversos usos, principalmente para su
alimentación y la curación de enfermedades. Las llamadas plantas medicinales
3
eran veneradas por las virtudes que poseían al ver los resultados tras su
aplicación, trasmitiéndose el conocimiento de sus propiedades de generación
en generación (9). El uso de hierbas medicinales ha aumentado en todo el
mundo debido a su presunta eficacia, disponibilidad y aceptación general (10).
La práctica de la medicina herbaria se basa en el uso terapéutico de las
plantas medicinales como sustitutas de las formas farmacéuticas o en
combinación. De las plantas se usan sus extractos en diversas formas de
preparación, para mejorar el estado de salud. (10) Por lo cual la (OMS) define
a la medicina tradicional como todo conjunto de conocimientos, aptitudes y
prácticas basados en teorías, creencias y experiencias indígenas de las
diferentes culturas, sean o no explicables, usados para el mantenimiento de la
salud, así como para la prevención, el diagnóstico, la mejora o el tratamiento
de enfermedades físicas o mentales (11).
Los sistemas tradicionales de medicina se han convertido en un tema de
importancia mundial y ha renacido el interés por el estudio y uso de las plantas
como recurso terapéutico (11) (12). Las estimaciones actuales sugieren que,
en muchos países en desarrollo una gran proporción de la población depende
en gran medida de los médicos tradicionales (yerberos, curanderos, naturistas,
etc.) y las pantas medicinales para satisfacer las necesidades de atención
primaria de salud (11) (13).
Por lo que cada día se presta más atención al estudio de las plantas
medicinales de forma que la etnobotánica, la etnofarmacología, la fitoterapia y
la fitoquímica están tomando un auge insospechado, tanto en la práctica de la
medicina complementaria como en el ámbito académico (14). El 80% de la
población mundial, más de cuatro mil millones de personas, utiliza las plantas
como principal remedio medicinal, según nos señala la OMS (11).
La especie Vernonanthura patens (laritaco) es originaria de México y
Suramérica, encontrándose distribuida en México, Belice, Costa Rica, El
Salvador, Guatemala, Honduras, Nicaragua, Panamá, Venezuela, Bolivia,
Colombia, Perú y Ecuador (15).
4
De acuerdo a estudios realizados del genero Vernonanthura de otras especies,
ha demostrado actividad diurética, hipotérmica, respiratoria, cardiovascular,
antioxidante, antidiabética, antimalárica, antibacteriana, antifúngicas,
antimolusquicida y efecto inhibidor de cepas de: Staphylococcus aureus y
Pseudomonas aeruginosa; como inhibidor en la producción de células HeLa.
En su composición química se ha encontrado la presencia de sequisterpenos
lactónicos, diterpenos, flavonoides, triterpenos y saponinas que podrían ser los
posibles responsables de las actividades terapéuticas atribuidas a estas
especies (15) (16).
El Ecuador está dentro del grupo de países considerados mega diversos, se
encuentra a nivel mundial entre los 17 países, que en conjunto representan
más del 70% de la biodiversidad del planeta (17).
De la planta Vernonanthura patens, se utiliza sus hojas en forma de
cataplasma para combatir el pie de atleta, mientras la decocciones de sus
hojas son empleadas en la medicina folclórica para combatir el paludismo, los
dolores estomacales y de parto; las erupciones en la piel, las diarreas,
antihelmíntico, lavar heridas, aliviar el dolor de cabeza, antiinflamatorio,
antitusivo, para tratar ciertos tipos de cáncer y se emplea en la preparación de
suero antiofídico (15) (16).
Según Manzano P, Tulio O, et al en el año 2013 estudiaron algunos
parámetros farmacognósticos de la especie Vernonanthura patens, que crece
en el Cantón de Marcabelí, provincia del Oro y propusieron los parámetros de
calidad de las hojas, tallos y flores de la especie, además se identificó algunos
metabolitos secundarios del tallo (compuestos reductores y saponinas) y las
flores (saponinas, catequinas, lactonas, aminoácidos, compuestos reductores)
(15).
Mediante las investigaciones realizadas a los diferentes extractos de las hojas
de la planta Vernonanthura patens se identificó lo siguiente: extracto
metanólico, su composición química presenta sesquiterpenos bicíclico y
triterpenoides pentacíclicos (lupeol, epilupeol y acetato de lupeol) y presenta
actividad antifúngica frente a cepas de Penicillium notatum y Fusaryum
5
oxysporum (16), extracto acuoso presenta actividad antimalárica
contra Plasmodium falciparum (15) (16) y el extracto etanólico tiene actividad
antileishmanial.(18) (19)
De acuerdo con los antecedentes antes mencionados no se ha reportado
investigaciones de manera nacional e internacional acerca de la actividad
antimicrobiana “in vitro” del extracto hidroetanólico de las hojas de
Vernonanthura patens sobre Escherichia coli, con la finalidad de ser un punto
de partida en el descubrimiento de nuevos fármacos y aumentar el mayor
interés de la población ecuatoriana al uso y consumo de la medicina herbaria.
Planteamiento del Problema
La OMS emitió un informe “Antimicrobial resistance: global report on
surveillance “sobre la resistencia a antimicrobianos, el primero de carácter
mundial que reconoce la realidad de este problema, que puede afectar a
cualquier ciudadano de cualquier país y que supone una gran amenaza para la
salud pública (20).
En la Asamblea de la OMS llevada a cabo en 2015, se consensa la necesidad
de un plan de acción global para combatir la resistencia a los antimicrobianos,
que involucre a países en todas las regiones y que apunte a concientizar y
educar sobre la resistencia antimicrobiana, optimizar el uso de los
antimicrobianos, reducir la incidencia de la infección hospitalaria y la
diseminación de los microorganismos resistentes y asegurar una sostenible
inversión para la lucha contra la resistencia antimicrobiana (21).
La resistencia a los antimicrobianos pone en peligro la eficacia de la
prevención y el tratamiento de una serie cada vez mayor de infecciones por
virus, bacterias, hongos y parásitos, debido a que estos sufren cambios al
verse expuestos a los antimicrobianos (antibióticos, antifúngicos, antivíricos,
antipalúdicos o antihelmínticos, etc.) (22). Los mecanismos que utilizan las
bacterias para defenderse de los antinfecciosos están en constante evolución
por lo tanto existe multirresistencia que deja pocas posibilidades para el
tratamiento de las infecciones (21).
6
El incremento de la resistencia microbiana por la presión selectiva que
representa la utilización de antibióticos a gran escala, sobre todo en los
hospitales, ha permitido cepas con mecanismos de resistencia que, en
muchas ocasiones, nos dejan prácticamente sin alternativas para el
tratamiento de las infecciones. La resistencia a los antimicrobianos reduce
las posibilidades de tratamiento eficaz de enfermedades, prolonga el tiempo
de agonía de los enfermos y los obliga a utilizar medicamentos costosos,
además de alargar el tiempo de hospitalización y aumentar el riesgo de
mortalidad (23).
Desde 1976 la (OMS), ha estado promoviendo el uso de los sistemas
tradicionales de la medicina como parte de los programas de Atención
Primaria de Salud. Entre las tendencias de la medicina contemporánea se
destaca la incorporación de la medicina natural y tradicional a la práctica
profesional, como método alternativo y en particular el uso de las plantas
medicinales (24).
La Escherichia coli en los últimos años ha presentado un incremento en la
resistencia a los tratamientos con antibióticos como la penicilina, situación
que ha provocado una gran preocupación a nivel sanitario y terapéutico (25).
La resistencia bacteriana de Escherichia coli a antibióticos como ampicilina
está entre 28-39%, a trimetoprim-sulfametoxazol 31%, a cefalosporinas entre 9
al 19% y a cefuroxime en 1% (26). Las fluoroquinolonas prescritas a menudo
de forma masiva e indiscriminada desde su introducción comercial para el
tratamiento de infecciones ambulatorias desencadenaron en un aumento de
las infecciones causadas por E. coli resistente a estas (27). Por lo cual el
aumento de la resistencia bacteriana a los antimicrobianos limita la
administración de antibióticos baratos y de espectro limitado, lo que afecta el
costo y el acceso a la atención de salud (28).
En Ecuador como tantos otros países, la resistencia a fármacos ya se siente
en el sistema de salud, es así como en Instituto Nacional de Investigación en
Salud Pública (INSPI), ha realizado un estudio de resistencia bacteriana con
una muestra 76 pacientes respecto a la bacteria Escherichia coli, causante de
diarreas, donde indica que la bacteria es resistente en el 60% al antibiótico
7
(Ciprofloxacino). Este es tan solo un ejemplo de los tantos que se van
presentando en el país, así como a nivel mundial, en donde los antibióticos
van perdiendo su eficacia frente a este tipo de microorganismos (29).
La Red Nacional de Resistencia Bacteriana de Ecuador (REDNARBEC), es la
organización que ha presentado datos de resistencia bacteriana tanto a nivel
comunitario como hospitalario en el Ecuador. En los últimos datos disponibles
del año 2008, reportan que a nivel comunitario la resistencia de Shiguella spp
a tetraciclina fue del 96% y a ampicilina 93%, Salmonella spp fue resistente a
tetraciclina en un 30%. Escherichia coli era resistente a ampicilina y tetraciclina
en un 71%. A nivel hospitalario Escherichia coli presentó hasta un 77% de
resistencias a ampicilina, Klebsiella pneumoniae era resistente en un 65% a
cefotaxima, enterobacter presentó un 67% de resistencias a ampicilina
sulbactam (30)
Ante lo expuesto, La práctica de la medicina herbaria se basa en el uso
terapéutico de las plantas medicinales como sustitutas de las medicinas
farmacéuticas o en combinación. De las plantas se usa sus extractos en
diversas formas de preparación, para mejorar el estado de salud (10). Las
plantas medicinales son una ventaja y la mejor opción para encontrar
alternativas a la terapia medicamentosa que en muchos de los casos pueden
presentar efectos adversos para el individuo, son de elevado costo, difícil
administración y carecen de valor nutricional comparados con las plantas (22).
Con la investigación se pretende aportar a la exploración e investigación de la
actividad antimicrobiana presente en el extracto hidroetanólico de
Vernonanthura patens sobre Escherichia coli, mediante la experimentación en
cultivo in vitro con el propósito de establecer una alternativa terapéutica a la
patología causada por esta bacteria.
Formulación del problema
¿Presenta efecto antimicrobiano “in vitro” el extracto hidroetanólico de las hojas
de Vernonanthura patens sobre Escherichia coli?
8
Objeto de investigación y campo de acción
Actividad antimicrobiana de la planta.
Identificación de la línea de investigación
Estudios microbiológicos.
Objetivos
Objetivo general
Evaluar la actividad antimicrobiana in vitro del extracto hidroetanólico de las
hojas Vernonanthura patens sobre Escherichia coli.
Objetivos específicos
1. Determinar el nivel de uso significativo de Vernonanthura patens
2. Obtener el extracto hidroetanólico de las hojas de Vernonanthura patens.
3. Identificar la composición fotoquímica del extracto de las hojas hidroetanólico
de Vernonanthura patens.
4. Evaluar el efecto antimicrobiano del extracto de las hojas hidroetanólico de
Vernonanthura patens sobre Escherichia coli.
Hipótesis
El extracto hidroetanólico de las hojas de Vernonanthura patens tiene efecto
antimicrobiano sobre Escherichia coli
Aporte teórico, significación práctica y novedad científica.
El presente trabajo contribuyo como aporte a la ciencia, acerca de los
beneficios de la planta medicinal, debido a que se realizó la identificación de
metabolitos secundarios, obtención del extracto y comprobación de la
9
actividad microbiana con la finalidad de conocer sus propiedades y usos de la
Vernonanthura patens originaria de Ecuador.
Con la elaboración del proyecto de investigación, se benefició la población en
general debido a que las plantas medicinales se utilizan como principal
alternativa terapéutica para tratar enfermedades, y así incentivar a los futuros
investigadores a la elaboración de nuevos fitofármacos de bajo costo, índices
de toxicidad reducido en comparación con los medicamos sintéticos.
Con esta investigación científica por primera vez se determinó en el extracto
hidroetanólico de las hojas Vernonanthura patens la actividad antimicrobiana
con la finalidad de utilizar como alternativa de tratamiento de infecciones
causadas por bacterias farmacorresistentes como es la Escherichia coli y así
se evita el aumenta del costo de la atención sanitaria por la mayor duración de
la hospitalización y la necesidad de una atención más intensiva.
10
CAPÍTULO I
MARCO TEÓRICO
1. Uso de las plantas medicinales
El uso de prácticas de salud complementarias es tan antiguo como la aparición
de la especie humana, porque desde el principio de la civilización son parte de
las prácticas de atención familiar y comunitaria. Entre las distintas prácticas
complementarias utilizadas y difundidas a través de la cultura popular, las
plantas medicinales siempre ocupan lugar destacado y durante mucho tiempo
fue el principal recurso terapéutico utilizado para tratar la salud de las personas
y sus familias (31).
Se estima que el 80% de la población mundial depende de remedios
herbolarios tradicionales y que al menos 35 000 especies vegetales presentan
potencial para uso medicinal (32). La utilización de las plantas medicinales
como recurso terapéutico es bastante difundida en todo el mundo, y 67% de las
especies vegetales medicinales son provenientes de países en desarrollo. Son
consideradas como terapia complementaria o alternativa en salud y su uso ha
sido creciente. El empleo de las plantas generalmente está fundamentado en el
conocimiento popular, y muchas veces, los pacientes no relatan su utilización a
los profesionales de la salud (33).
Este patrimonio cultural se ha transmitido de generación en generación, de
manera que algunas costumbres subsisten y son ejercidas de manera
cotidiana, tanto en áreas rurales como urbanas. Estas prácticas médicas
permanecen vigentes debido a que, entre otras cosas, los tratamientos
tradicionales están basados en la enfermedad como es concebida dentro de su
cultura (34).
En el Ecuador muchas personas del campo, todavía dependen directa o
indirectamente de las plantas para cubrir sus necesidades de alimento,
medicina y vivienda. En las ciudades el uso directo de plantas medicinales es
11
menor y principalmente relegado a personas que viven en zonas urbanas
marginales y de condición socioeconómica baja. No obstante, el uso y
comercio de plantas medicinales se mantiene como una práctica activa en los
mercados de las ciudades ecuatorianas y particularmente en las urbes del
callejón interandino, en donde se expenden por lo menos 273 especies de
hierbas medicinales, mismas que se emplean para tratar más de 70 dolencias
(35).
1.1 Estudios etnobotánicos y etnofarmacológicos
La investigación sobre el uso de plantas medicinales forma parte de la
etnobotánica, que ha sido definida como el estudio de las interrelaciones entre
los grupos humanos y las plantas (36).
Según la OMS, en la actualidad, las dos terceras partes de la población de los
países con economías periféricas recurren a la medicina tradicional, siendo un
sistema complementario a la medicina alopática o científica. El amplio uso de la
medicina tradicional se atribuye a su accesibilidad y asequibilidad, siendo
muchas veces la única fuente para la atención sanitaria de los pacientes de
menores recursos (11).
Entre los principales objetivos de la etnobotánica esta: la recopilación y
conservación de los conocimientos ancestrales, la búsqueda y elaboración de
nuevos fármacos que contribuyan a elevar la calidad de vida de todos los seres
humanos. Además, es importante señalar su contribución en la elaboración de
un inventario del saber ancestral ya que en la actualidad hay una pérdida
progresiva debida principalmente a la aculturación que está sometido nuestros
pueblos. Por ello la recopilación de estos conocimientos permite fortalecer la
identidad de cada pueblo y es factor importante para la conservación integral
del patrimonio natural y cultura (37).
La etnofarmacología es un concepto reciente, surgido en la década de los 60’s
en el ámbito de los agentes psicoactivos. Es con el libro de Efron en 1967:
“Búsqueda etnofarmacológica de drogas psicoactivas” que el término adquiere
12
relevancia científica. La redefinición del campo de estudio de la
etnofarmacología y su método se vieron plasmados en la evolución del
concepto de la materia; en 1983 Holmstedt y Brunh definen a la
etnofarmacología como “La exploración interdisciplinaria de los agentes
biológicamente activos tradicionalmente empleados por el hombre”. Schultes
(1991) vierte una nueva definición como: “La observación, identificación,
descripción e investigación experimental de los efectos de las drogas utilizadas
en la medicina tradicional”. Con este enunciado se puntualizan los sujetos de
estudio de la etnofarmacología, así como cada uno de los aspectos que debe
comprender un estudio completo (38).
La Etnofarmacología es una ciencia interdisciplinaria, ya que abarca las
observaciones en campo, así como también la descripción del uso y
preparación de los remedios, la determinación botánica del material obtenido,
también engloba los estudios fitoquímicos que son muy importantes para aislar
los compuestos presentes en las plantas, así como los estudios farmacológicos
(38).
Esta ciencia ha tomado una gran relevancia en los últimos años, ya que varias
compañías farmacéuticas están interesadas en las plantas y su potencial para
obtener agentes terapéuticos que ayuden al tratamiento de algunas
enfermedades de gran prevalencia entre la población (38).
Uno de los retos actuales de la etnofarmacología es documentar y preservar la
riqueza biológica empleada en la medicina tradicional y desarrollar sistemas
sustentables de producción y uso de plantas con potencial farmacológico para
el tratamiento de diversas enfermedades (39).
Los estudios etnofarmacológicos son muy frecuentes en nuestro medio puesto
que hace referencia al uso empírico de plantas medicinales para el tratamiento
de diversas patologías; esta práctica es más evidente en las áreas rurales y en
los estratos económicos más bajos (7).
13
1.2 Valor de uso de las plantas medicinales
Las plantas medicinales tienen una contribución importante en el sistema de
salud de comunidades locales debido a que son usadas de manera frecuente
por la mayoría de las poblaciones rurales.
De esta manera, la etnobotánica es una herramienta útil para el rescate del
conocimiento sobre el uso del recurso vegetal y es el campo científico que
estudia las interacciones que se establecen entre el hombre y las plantas a
través del tiempo y en diferentes ambientes y su estudio en bosques tropicales,
ha adquirido interés e importancia en las últimas décadas debido a la pérdida
acelerada del conocimiento tradicional y a la degradación de los bosques (40).
El uso de la medicina tradicional en el tratamiento de enfermedades, es una
práctica que se ha llevado a cabo desde tiempos ancestrales y ha demostrado
que es una de las mejores opciones beneficiando a las personas y
comunidades que mantienen y conservan el uso de plantas medicinales, caso
particular del área rural donde se utiliza este recurso, manteniendo su valor y
uso cultural.
Para el análisis etnobotánico es necesario el empleo de 3 índices para
determinar la importancia de las diferentes especies identificadas en una
determinada área de estudio, los cuales son: (41)
Índice de valor de uso de especies (IVU)
Conocimiento relativo de la especie por varios informantes (RVU)
Nivel de uso significativo (UST)
EL Índice de valor de uso de especies evalúa la importancia o valor cultural
del uso de los recursos (especias, familias) para diferentes grupos humanos
(7).
Para la estimación de índice de valor de uso general de cada especie se utiliza
la siguiente formula:
IVU
14
Dónde:
UVis: número de usos mencionados por cada informante (i), para cada especie
(s); ns: número de informantes entrevistados.
El conocimiento relativo de la especie por varios informantes (RVU). Se
utilizó la siguiente formula:
VUis= valor de uso de la especie por cada informante.
IVUs= es el índice de valor de uso de la especie.
Nsp= es el número de especies.
Nivel de uso significativo Tramil (UST). Según la metodología propuesta por
Germosén-Robineau expresa que los usos medicinales que son citados con
una frecuencia superior o igual al 20%, por las personas encuestadas que usan
plantas como primer recurso para un determinado problema de salud, pueden
considerarse significativos desde el punto de vista de su aceptación cultural y,
por lo tanto, merecen su evaluación y validación científica (7).
El UST se calcula mediante la siguiente ecuación:
Dónde:
Uso especie (s) = número de citaciones para cada especie
Nis = número de informantes encuestados.
15
1.3 Vernonanthura patens
GRÁFICO No. 1. Vernonanthura patens.
La Vernonanthura, es uno de los géneros de la subfamilia Cichorioideae, que
cuenta con 65 especies, distribuidas a través de México, las Antillas, América
Central y del Sur. (15).
La Vernonanthura patens (Kunth) H. Rob., es un arbusto originario de
Sudamérica, que crece de forma silvestre en el sur ecuatoriano; los pobladores
la conocen como laritaco y utilizan las cocciones acuosas de las hojas para
lavar y cicatrizar las heridas, calmar el dolor de cabeza, como antiinflamatorio,
calmar la tos y combatir ciertos tipos de cáncer (15).
La utilización de esta especie también se encuentra en la práctica veterinaria,
que consiste en curar heridas infectadas de animales a través del lavado con
mezclas de plantas en las que se incluyen a las hojas de Vernonanthura
patents.
En el Ecuador, los moradores de la zona sur-oeste de Loja la utilizan para lavar
heridas, por su poder cicatrizante, así como su acción analgésica, para el dolor
de cabeza en humanos; en el Cantón Marcabeli, provincia del Oro, es muy
utilizada como antiinflamatorio, para calmar la tos, y para combatir ciertos tipos
de cáncer. Se reporta su uso en el tratamiento de leishmaniasis; en la
preparación de suero antiofídico (15).
16
Clasificación taxonómica
Reino: Plantae
Phylum o división: Tracheophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Asterales
Familia: Compositae
Género: Vernonanthura
Especie: Vernonanthura patens
Nombre científico: Vernonanthura patens (Humb., Bonpl. & Kunth) H.Rob
(42).
1.3.1 Hábitat y ecología
La Vernonanthura patens (Kunth). H Rob. Es una especie que crece de 0 a
2000 msnm de forma silvestre en las diferentes zonas de Ecuador como son la
región Costa, Sierra y Oriente. Se encuentra en los bosques de tipo seco
pluviestacional y bosque seco andino (43) (44).
Características botánicas
Es un arbusto caducifolio de 6 m de altura y 10 cm de DAP (diámetro a la altura
de pecho). Fuerte muy ramificado. Ramitas terminales poligonales, pubérulas o
tomentulosas. Corteza externa gris oscuro, lenticelada, ligeramente estriada,
café claro, con manchas obscuras. Copa irregular, abierta. Hojas simples,
alternas, esparcidas, láminas de 3-15 cm de longitud y 1-2 cm de ancho,
lanceoladas o angostamente oblongas, con ápice agudo o acuminado;
venación reticulada, con 12-15 pares de nervios secundarios; haz áspero y en
envés densamente pubescente. Flores hermafroditas, blancas; corola tubular
de 5 mm de longitud, con 5 lóbulos, agrupadas en inflorescencias panículas o
cabezuelas con 20-30 flores por cabezuela; involucro campanulado. Fruto
aquenio, angostamente turbinado, de 1,3-1,8 mm de longitud, color verde
(tierno) y café (maduro). Es una especie pionera invasora (45).
17
1.3.2 Principios activos
Los principios activos de las plantas medicinales son moléculas resultantes del
metabolismo celular de las plantas. Se clasifican en metabolitos primarios y
secundarios (46).
Los productos derivados del metabolismo secundario son los más importantes
como principios activos. Los principales constituyentes de Vernonanthura
patents se encuentran distribuidos de la siguiente manera ya muchos de ellos
se debe las propiedades farmacológicas y biológicas del vegetal (47).
Tallos: saponinas y compuestos reductores,catequinas, lactonas, triterpenos y
esteroides, fenóles , taninos y flavonoides.
Hojas: tripertenoides pentacíclicos (lupeol, epilupeol, acetato de lupeol ),
lactonas sesquiterpénicas, flavonoides, fenóles , taninos y catequinas
Flores: catequinas, compuestos reductores, lactonas, triterpenos y esteroides,
fenoles y taninas, aminoacidos (ácido hexadecanoico), flavonoides.
La ß-amirina y el lupeol se encontraron en todos los órganos vegetales, el
glutinol y el acetato de taraxasterol está en tallos, y el taraxasterol y el
neoganmacer únicamente en las flores. La ᾳ-amirina se encontró como
componente de tallos y flores (15) (18).
1.3.3 Actividad biológica de Vernonanthura patens
Sobre esta especie, sus componentes químicos y su actividad biológica, son
pocos los informes reportados:
Fournet y Barrios, (1994), describieron la actividad antimalárica del extracto
acuoso de las hojas, el cual presentó una concentración inhibitoria media
(CI50) de 38,7 ± 10,1 µg/mL contra Plasmodium falciparum. Valadeau y col,
(2009), informaron también, para un extracto acuoso de hojas, la actividad
antileishmanial frente a cepas de Leishmania amazonensis con una CI50 >100
µg/mL (48).
18
Se ha aislado alrededor de 12000 compuestos procedentes de organismos
vegetales y se estima que constituyen tan solo el 10% de los metabolitos
secundarios. Un porcentaje importante posee cierta actividad frente a los
microorganismos (49).
Las plantas tienen una capacidad ilimitada de sintetizar compuestos, en su
mayoría metabolitos secundarios tales como: flavonoides, catequinas y taninos
y otros compuestos de naturaleza fenólica son responsables de la actividad
antimicrobiana (49).
Taninos: Son sustancias de origen vegetal, no nitrogenadas de estructura
polifenolica, solubles en agua alcohol y acetona. Estas sustancias son de sabor
astringente y tienen la propiedad común de curtir la piel, haciéndola
imputrescible e impermeable al fijarse sobre sus proteínas. Además, se han
descrito más de treinta taninos que pueden inhibir a hongos y bacterias (50).
Triterpernos de naturaleza alcohólica pueden alterar la naturaleza coloidal del
protoplasma de la célula provocando su muerte (51).
Lactonas sesquiterpénicas son sustancias amargas que se encuentran en
todas las partes de las plantas en concentraciones que varían entre 0,01 y 8%
del peso seco, siendo las concentraciones mayores generalmente en las hojas.
Presentan gran importancia por la variada acción biológica que han
demostrado: acción citotóxica, antitumoral, analgésica, inhibidores del
crecimiento de bacterias (52).
Flavonoides son estructuras fenólicas que contienen un grupo carbonilo y
cuya actividad frente a los microorganismos se debe a que forman complejos
con las proteínas solubles y extracelulares y con las células de la pared
bacteriana (52).
Fenoles son los compuestos más simples y consisten en un anillo fenólico
sustituido. Estos presentan una actividad fisiológica marcada porque poseen
propiedades antisépticas (53).
19
1.4 Caracterización fitoquímica de extractos de plantas
Los productos naturales pueden contener una gran variedad de sustancias con
posible actividad terapéutica, que se denominan productos bioactivos, los
cuales varían en su proporción, pureza y concentración dependiendo de la
especie, de la época del año en que se cultivó y recolectó la planta y de su
parte utilizada, por lo que se necesitan extraer e identificar estas sustancias
(54).
1.4.1 Extracción de extractos vegetales
Los extractos de plantas medicinales se utilizan por el hombre desde la
antigüedad para la cura de múltiples dolencias. Para lograr una concentración
adecuada de los principios activos contenidos en las plantas y que su acción
sea más efectiva es necesario realizar diversos procedimientos ediantes los
cuales sean extraídos aquellos con solventes adecuados que se seleccionan
de acuerdo a la solubilidad y la estabilidad que posean las sustancias
beneficiosas.
1.4 .2 Recolección y tratamiento del vegetal
Este saber tradicional se ha ido perfeccionando a lo largo del tiempo, tamizado
por el rigor científico de ensayos químicos, farmacológicos, toxicológicos y
clínicos que buscan los principios activos para explicar en forma racional el uso
terapéutico de una planta y que permite además la vigencia de su empleo (55)
La obtención de las drogas vegetales se realiza a partir de las plantas
medicinales, las cuales se pueden clasificar en silvestres y cultivadas.
Selección
La selección de las plantas se realiza según el contenido del principio activo en
las diferentes drogas, así también, que permita su fácil recolección y
manipulación. Se pueden describir dos tipos de selección (55):
20
Aquella que nos permite seleccionar las mejores plantas de cada
cosecha.
Selección que consiste en modificar genéticamente a una planta en
particular, para obtener plantas con características deseadas.
Recolección
Las materias vegetales medicinales deben recolectarse durante la temporada o
período óptimos para asegurar la calidad óptima tanto de las materias primas,
como de los productos acabados. El mejor momento para la recolección debe
determinarse basándose en la calidad y la cantidad de los componentes con
actividad biológica y no el rendimiento total en materia vegetal de las partes de
las plantas medicinales de interés. Esta recolección puede ser manual o
mecanizada (55).
Según Kuklinski, los factores que afectan la concentración de los principios
activos en las drogas vegetales son:
La edad de la especie vegetal: no solo influye en la cantidad total de
principio activo, sino también en la proporción de los componentes de la
mezcla activa.
La época del año: el clima y la época del año influye en la cantidad de
principio activo.
Hora del día: se ha evidenciado que existe una variación del día a la
noche, en los metabolitos vegetales secundarios.
Conservación
Al ser arrancados de su medio natural, los vegetales ven alterado su equilibrio
metabólico por lo que se presentan reacciones y fenómenos de degradación.
Las causas de alteración pueden ser internas y externas:
Causas internas
a. Reacciones enzimáticas.
b. Autooxidaciones.
c. Reacciones entre diferentes componentes de la droga.
Causas externas
21
a. Calor
b. Humedad
c. Radiaciones
d. Microorganismos
e. Insectos, etc.
Desecación
La desecación consiste en eliminar progresivamente la humedad. Una planta
húmeda es fácil presa de bacterias y hongos, que la atacan alterando sus
principios activos.
El proceso de desecación lo podemos dividir en:
Desecación natural: es un proceso lento, económico. Se pueden
emplear cobertizos, bandejas, telas metálicas galvanizadas, papeles
extendidos sobre un armazón de madera, etc.
Desecación artificial: permite un control de la temperatura, de la
humedad y del tiempo que tarda el proceso. Es generalmente el más
adecuado, de corta duración, útil en donde la humedad es muy elevada.
Almacenamiento
Las plantas medicinales o medicamentos herbarios envasados y secos,
incluidos los aceites esenciales, deben almacenarse en un edificio seco y bien
aireado, en el que la fluctuación diaria de la temperatura sea escasa y en el
que esté asegurada una aireación adecuada. También se debe tomar en
cuenta tanto la humedad propia de la droga y la humedad ambiental. Para
controlar este problema se recomienda colocar las drogas en envases
herméticos con un agente deshidratante. El tiempo almacenamiento es variable
dependiendo de la parte de la planta. Las drogas deben ser perfectamente
rotuladas para su fácil identificación (55).
22
1.4.3 Métodos de Extracción
Permiten obtener los productos en formas farmacéuticas adecuadas para su
administración oral o externa de acuerdo al lugar de acción que se recomiende
(Solares, 2013)
Los métodos para extraer los principios activos contenidos en dicha planta, los
cuales necesitan de un líquido extractivo que va a depender del procedimiento
técnico y de la naturaleza química del principio activo.
A continuación, se citarán los métodos de extracción más importantes:
Maceración. - Se entiende por maceración al contacto prolongado
durante cierto tiempo de la droga con el menstruo constituyendo un
conjunto homogéneamente mezclado en el cual el menstruo actúa
simultáneamente sobre todas las proporciones de la droga, circulando a
través en todas las direcciones y sentidos y disolviendo sus principios
activos hasta producirse una concentración en equilibrio con la del
contenido celular. (Selles, 1992)
Percolación o lixiviación. -consiste en que el menstruo (generalmente
alcohólico o mezcla hidroalcohólica) atraviesa la masa de droga
pulverizada siempre en un solo sentido, alcanzando concentraciones
crecientes de tal modo que el equilibrio entre el solvente dentro y fuera
del marco nunca se alcanza, por lo que la droga bañada siempre por
nuevas proporciones de menstruo acaba por ceder todos sus
componentes solubles de manera progresiva. (Selles, 1992)
Decocción. - Consiste en llevar a la mezcla de droga más menstruo a la
temperatura de ebullición del agua, manteniendo esta temperatura
durante un período variable que suele oscilar de 15 a 30 minutos.
(Selles, 1992)
Infusión. - Es el proceso en cual se somete a la droga previamente
humedecida al contacto con el solvente a una temperatura igual a la de
ebullición del agua por cinco minutos, se deja enfriar hasta temperatura
ambiente y se prepara al 5%.
Digestión. - “Es una maceración realizada a una temperatura suave que
oscila alrededor de los 50 o 60° C”. (Selles, 1992)
23
1.4.4 Extractos
Son preparados concentrados de consistencia sólida, líquida o intermedia,
derivados generalmente de material vegetal desecado, se obtienen al evaporar
parcial o totalmente el disolvente en los líquidos extractivos de origen vegetal.
Los extractos pueden clasificarse en (56):
Extractos fluidos o líquidos: Son preparados líquidos de drogas
vegetales que contienen alcohol como disolvente y/o conservador, de
modo que cada mL Contiene los constituyentes terapéuticos de 1g de la
droga estándar que representa. Los extractos fluidos farmacopéicos se
preparan mediante percolación.
Extractos semisólidos o blandos: Son aquellos que tienen una
consistencia seca y son fácilmente pulverizables, se obtienen por
evaporación del disolvente y desecación del residuo. Los extractos
secos no deben presentar un contenido de humedad mayor del 5%.
(Voigt, 1982)
Extractos secos: Son aquellos que poseen una concentración de
principio activo superior a la de la droga* original y tienen consistencia
semisólida. El disolvente suele ser agua o mezclas hidroalcohólicas. Los
extractos blandos son poco estables y resultan difíciles de manipular;
por lo que no se utilizan (56).
1.5 Tamizaje Fitoquímico de extractos vegetales
Son pruebas preliminares sencillas y rápidas que permiten detectar
cualitativamente la presencia de determinados grupos de compuestos. Se
ayudan de la micro química para evidenciar estos grupos de constituyentes
mediante formación de precipitados, coloraciones, etc (57).
1.5.1 Técnicas para el tamizaje fotoquímica
Ensayo de Sudán III.- Permite reconocer en un extracto la presencia de
compuestos grasos, se considera positiva si aparecen gotas o una
24
película coloreada de rojo en el seno del líquido o en las paredes del
tubo de ensayos, respectivamente.
Ensayo de Mayer y el de Wagner. - Permiten identificar alcaloides, se
debe añadir 2 o 3 gotas de la solución reactiva de Mayer o Wagner
respectivamente, se observa opalescencia, turbidez definida, precipitado
coposo, entonces se considera positiva la presencia de este tipo de
metabolito. En el caso de alcaloides cuaternarios y/o aminoácidos libres,
estos sólo se encontrarán en el extracto acuoso y para considerar su
presencia debe observarse la aparición de turbidez definida o
precipitado coposo en todos los casos, ya que la aparición de
opalescencia puede dar un resultado falso, pues puede provenir de una
extracción incompleta de bases primarias, secundarias o terciarias.
Ensayo de Shinoda. - Permite reconocer la presencia de flavonoides en
un extracto vegetal. El ensayo se considera positivo cuando el alcohol
amílico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo, intensos en
todos los casos.
Ensayo de antocianidinas. - Permite identificar en los extractos la
existencia en estas estructuras de secuencia C6-C3-C6 del grupo de los
flavonoides. La aparición de un color rojo a marrón en la fase amílica es
indicativa de un ensayo positivo.
La presencia de estructuras tipo polisacárido, que forma un coloide
hidrófilo de alto índice de masa, que aumenta la densidad del agua
donde se extrae, denota la presencia de mucílagos.
Ensayo de resina. - Permite identificársete tipo de compuestos y se
considera positivo cuando aparece un precipitado.
Ensayo de espuma. - Permite reconocer la presencia de saponinas,
tanto del tipo esteroidal como triterpénicas.
Ensayo de Fehling. - Permite reconocer la presencia de azucares
reductores. Este se considera positivo si la solución se colorea de rojo o
aparece un precipitado rojo.
Ensayo de resina. - Permite identificársete tipo de compuestos y se
considera positivo cuando aparece un precipitado.
25
Ensayo de Baljet. - Permite reconocer en un extracto la presencia de
compuestos con agrupamiento lactónico, en particular coumarinas,
aunque otros compuestos láctonicos pueden dar también positivo este
ensayo. En estas condiciones se considera la presencia de esta familia
de compuestos por la aparición de una coloración y un precipitado.
Ensayo de Borntrager. -Permite identificar quinonas. Si la fase acuosa
alcalina se colorea de rosado a rojo, el ensayo se considera positivo.
Ensayo Liebermann - Burchard. - Permite determinar la presencia de
triterpenos y/o esteroides debido a que ambos tipos de productos
poseen un núcleo de androstano, generalmente insaturado en el anillo B
y la posición 5-6.
Ensayo de Ninhidrina. - Permite determinar la presencia de
aminoácidos libres o de aminas en general. Este ensayo se considera
positivo cuando se desarrolla un color violáceo
1.6 Actividad antimicrobiana
En el siglo XX el descubrimiento de los antibióticos se convirtió en la solución a
las múltiples enfermedades producidas por agentes infecciosos. Las bacterias
como todos los seres vivos exhiben mecanismos biológicos, que las facultan
para adecuarse a diversas presiones ambientales (58).
Aunque la resistencia a los antibióticos es una expresión natural de la evolución
y genética bacteriana, ciertos factores también contribuyen al aumento de la
expresión y diseminación de esta característica inherente (58).
El ataque a los microorganismos, por parte de los antimicrobianos, se pueden
dar de diferente manera (59):
Inhibición a la síntesis de la pared celular.
Funciones de la membrana celular.
Traducción del material genético.
Síntesis del ácido nucleico.
26
Los antibióticos son productos metabólicos de un organismo que es perjudicial
o inhibitorio para otros microorganismos en muy pequeñas cantidades, estas
sustancias pueden actuar de dos maneras (59):
Microbiocidas: Matan las formas vegetativas de los gérmenes,
específicamente se denominan bactericidas, refiriéndose a bacterias y
fungicidas refiriéndose a hongos.
Microbiostatico: inhibe el crecimiento de microorganismos y se
denominará, bacteriostático o fungistático, según se refiera a bacterias u
hongos.
1.6.1 Resistencia antimicrobiana
La aparición de los antibióticos en la terapéutica médica se hizo patente el
problema de resistencia bacteriana, un hecho oculto hasta ese momento a los
seres humanos, pero existente en el mundo microbiológico. Los antibióticos
que utilizamos para el tratamiento de pacientes afectos de infecciones,
usualmente son copia o modificación de sustancias elaboradas por
microorganismos (60).
Algunos microorganismos lo utilizan a la resistencia bacteriana como
mecanismo de defensa, esto es un fenómeno que existía antes del
descubrimiento de los antibióticos y de su uso, pero que con su introducción en
el tratamiento de enfermedades infecciosas se ha intensificado debido al
fenómeno denominado “presión selectiva” contra las bacterias, considerado
como uno de los factores más importantes para la aparición y diseminación de
la resistencia a los antibióticos (61).
La resistencia a los antimicrobianos o resistencia bacteriana, se produce
cuando los microorganismos (bacterias, hongos, virus y parásitos) sufren
cambios al verse expuestos a los antimicrobianos (antibióticos, antifúngicos,
antivíricos, antipalúdicos o antihelmínticos, etc.) (61).
27
1.6.2 Tipos de resistencia
Las bacterias por su capacidad de adaptación, pueden desarrollar mecanismos
de resistencia frente a los antibióticos. La resistencia antibiótica puede ser (62):
Natural (intrínseca). -La resistencia natural es propia de cada familia,
especie o grupo bacteriano.
Adquirida. -Es la que puede llevar a un fracaso terapéutico cuando se
utiliza un antibiótico supuestamente activo sobre el germen que produce
la infección.
Resistencia transmisible. - Es la más importante, estando mediada por
plásmidos, transposones o integrones, que pueden pasar de una
bacteria a otra.
Las bacterias se hacen resistentes a los antibióticos desarrollando mecanismos
de resistencia que impiden al antibiótico ejercer su mecanismo de acción.
Los mecanismos de resistencia de las bacterias son fundamentalmente tres
(62):
Inactivación por enzimas. - La bacteria produce enzimas que inactivan
al antibiótico; las más importantes son las betalactamasas y muchas
bacterias son capaces de producirlas.
Modificaciones bacterianas que impiden la llegada del antibiótico al
punto diana: Las bacterias producen mutaciones en las porinas de la
pared que impiden la entrada de ciertos antibióticos (betalactámicos) o
alteran los sistemas de transporte (aminoglucósidos en los anaerobios).
Alteración por parte de la bacteria de su punto diana. - Impidiendo o
dificultando la acción del antibiótico. Aquí podemos contemplar las
alteraciones a nivel del ADN girasa, del ARNr 23S de las enzimas PBPs
(proteínas fijadoras de penicilina) necesarias para la formación de la
pared celular.
28
1.6.3 Métodos para evaluar la actividad antimicrobiana
Son usados para determinar In vitro la susceptibilidad de bacterias ante
agentes microbianos, pero estos no son igualmente sensibles o no se basan en
los mismos principios, permitiendo que los resultados sean influenciados por el
método seleccionado, los microorganismos usados y el grado de solubilidad de
cada compuesto evaluado (63).
Los métodos se clasifican en:
Métodos de difusión: Son ampliamente usadas para evaluar extractos
de plantas con actividad antimicrobiana. Estudia los compuestos polares
y sus resultados son altamente reproducibles.
Métodos de dilución: Es utilizado para determinar la concentración
mínima bactericida y la concentración mínima inhibitoria. Estudia las
sustancias polares y no polares.
Método bioautografía: Es útil para la purificación de sustancias
antibacterianas, o como una técnica de tamizaje fitoquimico preliminar, o
un fraccionamiento bioguiado, realizando el ensayo a través de
cromatogramas, que permitan la localización de los compuestos activos,
incluso en matrices complejas como los derivados de productos
naturales.
Método conductimetrico: Detecta el crecimiento microbiano como un
cambio en la conductividad eléctrica o impedancia del medio de cultivo.
Factores que influencian en la actividad antimicrobiana
1.6.3.1 Factores que influyen en las pruebas antimicrobianas
Las listas están basadas en varias consideraciones, incluyendo factores
microbiológicos y clínico-farmacológicos, tanto como indicaciones y eficacia
aprobadas por la Food Drugs Administration (FDA). Para evitar malas
interpretaciones, los informes clínicos deberían incluir sólo aquellas drogas
apropiadas para uso terapéutico (64).
29
La correlación exacta entre los resultados in vitro y la respuesta clínica es
muchas veces difícil de predecir, ya que existen numerosos factores que
influencian la interacción de los agentes antimicrobianos y los microorganismos
en un determinado paciente. Entre los factores podemos resaltar (65):
Factores del agente antimicrobiano
Farmacocinética
Unión a proteínas del plasma
Vías de administración
Acción bacteriostática o bactericida
Concentración en el sitio de la infección
Factores del huésped
Enfermedad
Estado inmunológico
Formación de absceso
Presencia de cuerpo extraño
Función renal y hepática
Cumplimiento del tratamiento
Factores del microorganismo
Virulencia
Alta concentración de microorganismos
Infección mixta
Desarrollo de resistencia durante el tratamiento
La metodología usada para realizar el antibiograma toma en consideración
algunos de estos factores para determinar más eficientemente cómo un
microorganismo podría responder in vivo a un determinado antibiótico (64).
30
1.6.3.2 Antibiograma
El antibiograma define la actividad in vitro de un antibiótico frente a un
microorganismo determinado y refleja su capacidad para inhibir el crecimiento
de una bacteria o población bacteriana (65).
La realización de un antibiograma se basa en el patrón de resistencia de cada
bacteria. Así, los antibióticos a los que esa bacteria es intrínsecamente
resistente o cuya sensibilidad puede inferirse por otros, no suelen informarse
en el antibiograma (66).
Así también, el antibiograma mide la sensibilidad de una bacteria frente a
diferentes antimicrobianos in vitro y a partir de estos resultados predice la
eficacia in vivo. Con un antibiograma se pueden obtener resultados cualitativos
que indican si la bacteria es sensible o resistente a un antibiótico, o
cuantitativos que determinan la concentración mínima (CMI) de antimicrobiano
que inhibe el crecimiento bacteriano (en µg/ ml o en mg/l) (66).
La interpretación de los resultados del antibiograma (sensible, intermedio o
resistente) se realiza en función de los valores establecidos basados en
propiedades microbiológicas, farmacocinéticas y de eficacia clínica, para definir
la sensibilidad (éxito terapéutico) o resistencia de las diferentes especies
bacterianas a cada antimicrobiano (66).
31
CAPITULO II
MARCO METODOLÓGICO
Se realizó un estudio que por sus características y desarrollo es considerada
como etnofarmacologicas.
Por cuanto la Etnofarmacología es la exploración científica interdisciplinaria de
los agentes biológicamente activos y tradicionalmente empleados o conocidos
por el hombre. Por eso para su mejor ejecución y descripción se divide en 4
etapas (67).
2.1 Estudio etnobotánica.
En la primera etapa se realizó un estudio etnobotánico para identificar las
plantas con propiedades antimicrobianas reportadas por los informantes clave
(ancianos, vendedores de plantas medicinales y curanderos) mayores de 35
años de la parroquia Pacuyacu del canton Lago Agrio de la provincia de
Sucumbíos y determinar cuál de ellas tenía mayor valor de uso para utilizarla
en la investigación.
Por lo tanto, el estudio se ha realizado bajo el siguiente esquema:
2.1.1 Descripción del Área de Estudio
La presente investigación se realizó en la provincia de Sucumbíos en el cantón
Lago Agrio de la Parroquia Pacuyacu (Gráfico N.1); está ubicada en el extremo
oeste del cantón Lago Agrio. Limitada al Norte con el Río San Miguel y la
parroquia de Santa Elena, al Sur con la parroquia Shushufindi y Tarapoa, al
este con la parroquia Palma Roja, al oeste con las parroquias General Farfán y
Dureno. Según el censo del (INEC 2011), la población de Pacuyacu es de 6600
Segmentando a la población de acuerdo a grupos de edad, el 60% de la
población se encuentra en edad de trabajar, en el rango de 15 a 64 años de
edad. Superficie (hectáreas): 21435 (68).
32
GRÁFICO No 2. cantón Lago Agrio de la parroquia Pacuyacu
Fuente: Ministerio del ambiente, Ecuador
2.1.2 Aplicación de cuestionario etnofarmacológico
Para la encuesta se consideró el 42.7% de la población que es a partir
de 35 años y el 57.3% se descarta debido a que este grupo se
encuentran los niños y jóvenes. Por lo cual el número de habitantes
considerados para la encuesta es de 2800.
La muestra se determinó a través de la fórmula:
Dónde: n es la muestra, N es la población, y Ne2 es el margen error de
5%, teniendo una confianza del 95%.
Se procedió a visitar a los mercados, casa de curanderos y lugares de
alta concurrencia.
Se explicó de forma verbal el objetivo del estudio y se aplicó el
cuestionario aplicando cada una de las preguntas (Anexo N.1) para que
la población de respuesta de acuerdo a sus conocimientos.
33
2.1.3 Análisis de datos etnobotánicos
Posteriormente se procedió a tabular el cuestionario aplicado: se
identificó las especies referidas con fines medicinales, indicaciones o
usos, modo de uso, forma de preparación, partes usadas de la planta,
ubicación de la planta, tiempo de uso, resultados de su uso,
precauciones, vía de información y edad de las personas en las que se
usaron los vegetales.
La información etnobotánica proporcionada fue recopilada y organizada
en una base de datos empleando la hoja de cálculo de Excell.
Se empleó la fórmula para determinar el índice de valor de uso de las
plantas mencionadas.
Se estimó el nivel de uso significativo para cada especie y para verificar
su aceptación cultural.
2.2 Obtención del extracto hidroetonólico de Vernonanthura patens.
Una vez identificado el vegetal con mayor nivel de uso significativo y la parte de
la especie a estudiar se procedió a la obtención de extracto hidroetanólico a
partir de las hojas frescas de la Vernonanthura patens mediante el método
común denominado Maceración
2.2.1 Lavado y Desinfección de la planta
Se seleccionó las hojas que se encuentran en buen estado y se eliminó
las raíces.
Se realizó el lavado del vegetal, por inmersión con agua potable y con la
solución desinfectante de hipoclorito de sodio al 2%.
Se lavó el vegetal en agua corriente y se sumergió en agua potable
varias veces y luego en la solución desinfectante por 5 minutos.
Se dejó reposar en papel de empaque para que eliminar el exceso de
agua.
34
2.2.2 Maceración de la muestra
Se procedió a añadir al vegetal un litro de etanol al 96% por un tiempo
de 15 días.
2.2.3 Filtración
Para filtrar se procedió a utilizar una bomba de vacío y un embudo
Buchner.
2.3 Análisis de calidad del Extracto hidroetanólico de la planta.
2.3.1 Determinación de cenizas totales.
Se pesó 2g de la porción de ensayo pulverizado y tamizado en un crisol
de porcelana previamente tarado.
Calentamos suavemente la porción de ensayo aumentando la
temperatura hasta. carbonizar.
Incineramos en un horno mufla a una temperatura de 700 a 750 °C
durante 2 horas.
Enfriamos el crisol en una desecadora.
Pesamos repitiéndose el proceso hasta que dos pesadas sucesivas no
difieran en más de 0,5 mg por g (masa constante).
Obtenemos la masa constante en intervalos de 30 min.
Se procedió a determinar las cenias totales mediante la siguiente formula:
𝐶𝑇 = (𝑀2 – 𝑀/ 𝑀1 − 𝑀) 𝑥100
CT: porcentaje de cenizas totales en base hidratada.
M: masa del crisol vacío (g).
M1: masa del crisol con la porción de ensayo (g).
M2: masa del crisol con la ceniza (g).
35
2.3.2 Determinación de cenizas solubles en agua.
Se añadió de 15 a 20 ml de agua a las cenizas totales obtenidas.
Tapamos el crisol con un vidrio reloj y hervimos suavemente en la
plancha térmica durante 5 minutos.
Filtramos la solución a través del papel de filtro libre de cenizas.
Transferimos el filtro con el residuo al crisol inicial, carbonizamos en
mechero y luego incineramos en un horno mufla a 700 a 750 °C durante
2 horas.
Colocamos en una desecadora y pesamos cuando alcance la
temperatura ambiente.
Repetimos el procedimiento hasta alcanzar el peso constante.
Se procedió a determinar las cenias totales mediante la siguiente formula:
𝐶𝑎 = (𝑀2 − 𝑀 /𝑀1 − 𝑀) 𝑥100
Ca: porcentaje de cenizas solubles en agua en base hidratada.
M2: masa del crisol con las cenizas totales (g).
Ma: masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g).
M1: Masa del crisol con muestra de ensayo (g).
M: Masa del crisol vacío.
2.3.3 Cenizas insolubles en ácido clorhídrico al 10%
Se determinó a partir de las cenizas totales.
Se trató las mismas con ácido clorhídrico al 10% y se empleó una mufla
a 700 a 5000°C durante 2 horas.
Los resultados se obtuvieron por la expresión siguiente:
𝐵 = (𝑀2 – 𝑀/ 𝑀1 – 𝑀) 𝑥100
B: porcentaje de cenizas insolubles en ácido clorhídrico
M: masa del crisol vacío (g).
36
M1: masa del crisol con la porción de ensayo (g).
M2: masa del crisol con la ceniza (g).
2.3.4 Determinación de agua (humedad residual)
Pesamos 2 g con desviación permisible de 0,5 mg.
Transferimos a una cápsula de porcelana previamente tarada y
desecada a 105 °C hasta masa constante.
Desecamos a 105 °C durante 3h.
Colocamos la cápsula en la desecadora donde se dejó enfriar a
temperatura ambiente y se pesó.
Colocamos nuevamente en la estufa durante 1h, volviéndolo a pesar,
hasta obtener una masa constante.
Expresión de los resultados:
𝐻𝑔 = (𝑀2 − 𝑀1/ 𝑀2 – 𝑀) 𝑥100
Hg: perdida en peso por desecación (%).
M2: masa de la cápsula con la muestra de ensayos (g).
M1: masa de la cápsula con la muestra de ensayo desecada (g).
M: masa de la cápsula vacía.
2.4. Análisis fitoquímico
Con el extracto hidroetanólico obtenido a partir de hojas de Vernonanthura
patens se procedió a realizar el tamizaje fitoquímico en base a pruebas
preliminares sencillas y rápidas que permitieron detectar cualitativamente la
presencia de determinados grupos de compuestos mediante la formación de
precipitados, coloraciones, etc.
Tipos de ensayos aplicados al extracto hidroetanólico de la Vernonanthura
patens:
37
24.1 Ensayo de Espuma (saponinas)
Se colocó 1 ml de extracto hidroetanólico en un tubo de ensayo y se
agitó la muestra fuertemente. Posterior a esto no se observó la
formación de espuma en la superficie del líquido.
La presencia de saponinas no se encuentra en el extracto vegetal
prueba (-)
2.4.2 Ensayo de Benedic (Fenoles)
En un tubo de ensayo se colocó 1 ml del extracto y se adicionó de 1 gota
de FeCl3.
Se desarrolló una coloración rojo-vino, lo cual determinó la presencia de
fenoles.
2.4.3 Ensayo de Shinoda (Flavonoides)
En un tubo de ensayo se colocó 1 ml del extracto, con la ayuda de una
paleta se agregó una pequeña cantidad de limaduras de Mg y 3 gotas de
HCl concentrado.
Se observó la aparición de coloración carmelita, dando positivo para la
presencia de flavonoides. (+)
2.4.4 Ensayo de Borntrager (Quinonas)
Se colocó una alícuota del extracto en un tubo de ensayo y se colocó
unas gotas de hidróxido de sodio al 5%.
Se agitó mezclando las fases y se dejó en reposo para posteriormente
observa la reacción.
No se observó ninguna reacción de coloración, dando negativo para
quinonas (-).
38
2.4.5 Ensayo de Chalconas
En un tubo de ensayo se colocó 1ml de extracto y luego se añadió 1 ml
ácido sulfúrico.
Se observó la presencia de un color amarillo, dando la prueba (+) para
Auronas.
2.4.6 Ensayo de Rosentaler (Terpenos)
En un tubo de ensayo se colocó 1ml de extracto y luego se añadió 1
gota de reactivo de Rosentaler y se calentó.
Se observó una colororación parda dando a la prueba (+) para terpenos.
2.4.7 Ensayo de Dragendorff (Alcaloides)
A la alícuota del extracto se añadió 1 gota de HCl concentrado; se
calentó suavemente y se dejó enfriar hasta la acidez.
Luego a la solución ácida se añadió el reactivo de Dragendorff y se
observa la reacción.
No se observó la presencia de precipitado dando un resultado negativo
para alcaloides (-).
2.5. Análisis microbiológico mediante método de difusión en disco (Kirby-
Bauer)
Se procedió a preparar los medios de cultivo con agar Mueller Hinton
para lo cual se pesó 7.6 g del medio con la finalidad de hacer varias
repeticiones.
También se preparó medios con agar cerebro corazón para reactivar las
cepas de Escherichia coli
Se reactivó las cepas de Escherichia coli en caldo cerebro corazón por
24 horas a 37°C para lo cual se procedió a sembrar la cepa en el medio
mencionado a una concentración de 0.5 McFarland.
Se esterilizó los materiales a usar para el proceso de siembra.
39
Una vez que se preparó los medios y se esterilizó los materiales a usar
se procedió a plaquear los medios.
En la cámara de flujo laminar y con la ayuda de un hisopo estéril se
procede a sembrar la cepa de Escherichia coli sobre la superficie de
agar Müller-Hinton: medio de cultivo microbiológico utilizado
comúnmente para realizar la prueba de susceptibilidad a antibióticos.
Una vez que el medio está seco se procedió a colocar con una pinza los
discos esterilizados del estándar, antibiótico y extractos. Luego con una
micropipeta se impregnó 20 ul del extracto de Vernonanthura patens a
diferentes concentraciones (25, 50, 75 y 100%) y se incubó a 37 °C por
24 horas.
Finalmente se observó la presencia de halo y se midió los halos de
inhibición incluyendo el diámetro de los discos.
40
CAPITULO III
RESULTADOS Y DISCUSIONES
3.1 Etapa I: Estudio etnobotánico
Se realizó una investigación sobre el uso de la planta medicinal a los habitantes
de la parroquia de Pacayacu del cantón Lago Agrio ubicado al noreste de la
capital Nueva Loja de la provincia de Sucumbíos.
CUADRO No.1. Análisis cuantitativo de las diferentes especies medicinales
en la parroquia de Pacayacu del cantón Lago Agrio de la provincia de
Sucumbíos.
Nombre
Científico Familia
Plantas
Conocidas Uso popular
Categorí
a de uso
Método
de pre.
Vía de
admini
stració
n
Parte de
la planta
Chamaemelum
nobile Asteraceae Manzanilla Cólicos estomacales Gs I Be
T, H, Fl
Melissa officinalis lamiaceae Toronjil
Dolor de estómago y
calmante del estrés Gs, Ot I Be
H,T
Plantago major
Plantaginace
ae Llanten
Diarreas, diurético,
expectorante
GS, Ru,
Rs I, Tr, D Be
H, R
Vernonanthura
patens Asteraceae Laritaco
Dolor de cabeza,
mordedura de
serpiente y Cáncer,
cicatrizar herida, tos
Ot, I, Rs,
P I, Tr Be/ Ue
H, T
Zilgideroceas Aristolochiac
eae Jengibre
Dolor de garganta,
dolor de estómago,
dolores reumáticos ,
dolores articulares
Rs, Gs,
Om I Be
H, R
Vaccinium
meridionale Ericaceae Mortiño
Cáncer y
enfermedades
cardiacas y dolor del
corazón
I,C I, Mc Be
H
Tilia platyphyllos Malvaceae Tilo
Calmar los nervios,
estrés, malestares
digestivos, gripe y
tos.
Gs, Rs,
Ot I Be
Fl, H
Equisetum
telmateia Equisetaceae
Cola de
caballo Diurético Ru I Be
T, H
Mentha piperita Lamiaceae Menta
Dolor de cabeza y
digestivo Gs ,Ot I Be
H
Aerva Amaranthace Escancel Resfriados e Rs, Ru I, D Be, Ue H,T
41
sanguinolenta ae infecciones de la
vejiga
Mentha spicata Lamiaceae
Hierba
buena
Indigestión,
inflamaciones
del hígado, mareos y
dolor de cabeza
Gs, H, Ot I Be
H
Cymbopogon
citratus Poaceae
Hierba
Luisa Calmante, flatulencia Gs, Ot I Be
H
Aloysia citriodora Verbenaceae Cedrón Dolores de estómago Gs I, Tr Be, Ba H
Foeniculum
vulgare Apiaceae Hinojo
Diarrea, tos y
diurético
Gs, Rs,
Ru I Be,Co
H,
Cinnamomum
verum Lauraceae Canela
Diarrea,
estreñimiento,
digestión lenta y tos
Gs, Rs S I, D Be, Ue,
Ba H, Ct
Borago officinalis Boraginaceae Borraja
Diurético, estrés, tos
y bajar la fiebre Ru,Ot,Rs I Be, Co
H
Bauhinia forficata Fabaceae
Pata de
vaca
Infecciones urinarias,
bajar de peso y
resfríos
Ru,Ot,Rs I, Mc, D Be
H
Origanum vulgare
L. Lamiaceae Orégano
Tos, dolor estomacal
y enfermedades
respiratorias
Rs,Gs I Be
H
Eucalyptus
globulus Myrtaceae Eucalipto
Resfriados, tos,
catarro y congestión
nasal
Rs I, D Be, Ba
H, Pt
Piper aduncum Piperaceae Matico
Enfermedades
infecciosas de la piel,
diarrea agudas y
dolor estomacal
I, Gs I, MC Be, Ue
H
Ocimum
basilicum Lamiaceae Albahaca
Digestión, depresión,
jaqueca y
agotamiento
Gs, Ot I Be, Co
H
Viola odorata L Violaceae Violeta Dolor del vientre Ot I Be
H
Categoría de uso: C (cardiovascular), Gs (gastrointestinal), H (hepático), I(Inmunologico), Ot (otros), OM
(osteomuscular), P (piel), Rs (respiratorio), Ru (renal/urológico).
Método de preparación: I (infusión), D (decocción), Tr (triturado), Mc (macerado).
Vía de administración: Ba (Baños), Be (bebidas), Co (comida), Ue (uso externo).
Parte usada: Ct (corteza), Fl (Flor), Fr (fruto), H (hojas), Pl (planta completa), T (tallo).
En el cuadro No.1 se muestra el inventario etnobotánico, en el área estudiada
se obtuvo registros de un total de 22 plantas medicinales distribuidas en 18
familias, en cada una de ellas constan su nombre científico, uso medicinal,
método de preparación, forma de administración y parte dela plante usada por
los habitantes de la Parroquia Pucuyacu.
42
GRÁFICO No. 3. Familias de plantas medicinales utilizadas por los
habitantes de la parroquia Pucuyacu del cantón Lago Agrio de la
provincia de Sucumbíos, Ecuador.
En el gráfico No.1 se observan las familias con mayor número de especies
medicinales citadas en el estudio, siendo: Laminaceae (5 especies), seguidas
por Asteracea (2 especies). Estos resultados se encuentran en concordancia
con Moncada J y Morales A en el 2017, Zambrano en el 2015, Ansaloni R en el
2010, Gallegos M en el 2016 y Torre L en el 2008, que en sus estudios
etnobotánicos en el Ecuador tienen como las familias con mayor número de
especies medicinales citadas por informadores a la Lamiaceae y Asteraceae
(7)(10)(69)(70)(71).
GRÁFICO No. 4. Partes de las plantas medicinales utilizadas por los
habitantes de la Parroquia Pucuyacu del cantón Lago Agrio de la
provincia de Sucumbíos, Ecuador.
43
En el gráfico No.3 con base en las encuestas realizadas en la Parroquia
Pucuyacu, se evidenció que las hojas son las estructuras más utilizadas en la
preparación de la medicina, representando el 59,8% del total de menciones,
seguido por la utilización del tallo (23,3%), Flores (6.5%), raíz (5,6%), corteza
(3%) y toda la planta (1,7%). Siendo similar a lo reportado por Moncada J y
Morales A en el 2017, Zambrano en el 2015, Ansaloni R en el 2010 y Torre L
en el 2008, que en sus investigaciones señalan a las hojas como las partes
más utilizadas por los pobladores para fines medicinales (7) (10) (69) (71).
GRÁFICO No. 5. Formas de preparación de las plantas medicinales
utilizadas por los habitantes de la parroquia Pucuyacu del cantón Lago
Agrio de la provincia de Sucumbíos, Ecuador.
En el gráfico No.4 se observan que los porcentajes de las formas de
preparación para el uso de las plantas medicinales en la parroquia Pucuyacu del
cantón Lago Agrio el cantón Riobamba son variadas. La mayoría de las
preparaciones son realizadas en forma de infusión (71%), seguido decocción
(17,7%) y el macerado y el triturado (5,6% cada uno). Según Moncada J y
Morales A en el 2017, Zambrano en el 2015, Ansaloni R en el 2010 y Torre L
en el 2008, la infusión es la forma de preparación más habitual para las plantas
medicinales, lo que concuerda con el resultado obtenidos (7) (10) (69) (71).
44
GRÁFICO No. 6. Sistemas del cuerpo que se tratan con plantas
medicinales utilizadas por los habitantes de la parroquia Pucuyacu del
cantón Lago Agrio de la provincia de Sucumbíos, Ecuador.
En el gráfico No.5 se reportan los sistemas del cuerpo que se tratan con las
plantas medicinales, las categorías del sistema del cuerpo humano que
presentan mayor número de especies de plantas medicinales empleadas para
el tratamiento de enfermedades o afecciones relacionadas con éstas son: el
sistema gastrointestinal (30,8%), el sistema respiratorio (26,2%) y el sistema
renal/urológico (8,4%). Al igual que en otros estudios como el de Gallegos M en
el 2016, Zambrano en el 2015 y Ansaloni R en el 2010, las aplicaciones de las
plantas medicinales para desordenes gastrointestinales son las más habituales
(70) (7) (10).
CUADRO No. 2. Lista de enfermedades tratadas con plantas medicinales,
agrupadas por sistema del cuerpo, por los habitantes de la parroquia
Pucuyacu del cantón Lago Agrio de la provincia de Sucumbíos, Ecuador.
Sistema del cuerpo
(Categorías )
Enfermedades o afecciones tratadas por la
etnomedicina según la información de los
habitantes
Cardiovascular Enfermedades del corazón, dolor del corazón.
Gastrointestinal Diarrea, cólicos estomacales, dolor de estómago,
45
En el cuadro No.2 se reportan las enfermedades mencionadas por los
habitantes, estas fueron clasificadas en 9 categorías de acuerdo al sistema del
cuerpo donde las plantas medicinales son usadas para controlar la afección, lo
que concuerda con la investigación de Zambrano en el 2015 (7)
CUADRO No. 3. Nivel de uso significativo de las diferentes especies de
plantas medicinales usadas por los habitantes de la parroquia Pucuyacu del
cantón Lago Agrio de la provincia de Sucumbíos, Ecuador.
flatulencia, digestión lenta, estreñimiento e
indigestión.
Hepático Inflamación del hígado.
Inmunológico Cáncer.
Osteomuscular Dolor de las articulaciones y reumatismo.
Otros/Todo el cuerpo
Fiebre (cualquier tipo de fiebre), dolor de
cabeza, mareos, mordedura de serpiente,
calmante (nervios), estrés, jaqueca y
agotamiento, dolor del vientre.
Piel
Cicatrizante, heridas e inflamaciones en la piel y
enfermedades infecciosas de la piel.
Renal/urológico
Diurético, infección de la vejiga e infecciones
urinarias.
Respiratorio
Expectorantes, dolor de garganta, gripe,
bronquitis, tos y resfríos, enfermedades
respiratorias, catarro y congestión nasal.
Plantas
Conocidas Nombre Científico
UST
(%)
Manzanilla
Chamaemelum
nobile 67%
Toronjil Melissa officinalis 78,5%
Llanten Plantago major 56,1%
Laritaco
Vernonanthura
patens 67,2%
46
UST (%): el nivel de uso significativo Tramil.
En los resultados indicados en el cuadro No.3 se muestran las especies
vegetales que fueron citadas por los informadores clave con su respectivo nivel
de uso significativo. Se reportan las 13 especies vegetales con un UST superior
o igual al 20%. El nivel de uso significativo permitió identificar la importancia de
cada una de las 22 especies de plantas medicinales reportadas para este
estudio. Las especies más importantes para los habitantes de la parroquia
Jengibre Zilgideroceas 11,2%
Mortiño
Vaccinium
meridionale 11,2%
Tilo Tilia platyphyllos 22,4%
Cola de
caballo
Equisetum
telmateia
11,2%
Menta Mentha piperita 33,6%
Escancel
Aerva
sanguinolenta 33,6%
Hierba buena Mentha spicata 22,4%
Hierba Luisa
Cymbopogon
citratus 44,8%
Cedrón Aloysia citriodora 56,1%
Hinojo Foeniculum vulgare 11,2%
Canela
Cinnamomum
verum 22,4%
Borraja Borago officinalis 22,4%
Pata de vaca Bauhinia forficata 11,2%
Orégano
Origanum vulgare
L. 22,4%
Eucalipto
Eucalyptus
globulus 11,2%
Matico Piper aduncum 22,4%
Albahaca Ocimum basilicum 22,4%
Violeta Viola odorata L 11,2%
47
Pacuyacu de acuerdo a este índice fueron: toronjil (Melissa officinalis, UST:
78,5%), laritaco (Vernonanthura patens, UST: 67,2%), manzanilla
(Chamaemelum nobile, UST: 67%), llanten (Plantago major, UST: 56,07%),
cedrón (Aloysia citriodora, UST: 67,07%), hierba luisa (Cymbopogon citratus
UST: 44.8%), menta (Mentha piperita, UST: 33,6), escancel (Aerva
sanguinolenta, UST:33.6), orégano (Origanum vulgare L., UST: 22,4%), canela
(Cinnamomum verum, UST: 22,4%), borraja (Borago officinalis, UST: 22,4%) y
tilo (Tilia platyphyllos, UST: 22,4%).
Para esta investigación fue seleccionada la laritaco (Vernonanthura patens), la
cual tiene un valor de uso superior al 20%, siendo una especie vegetal de gran
importancia para la población del cantón Riobamba, los resultados mostraron
que el 67,2% de los informadores claves usan Vernonanthura patens y esta
planta forma parte del conocimiento ancestral para el tratamiento de
afecciones, de las 46 citaciones de esta planta 28 citaciones (60,8%) fueron
para el tratamiento de afecciones infecciosas. Esta especie vegetal es
económica debido a su bajo costo de venta al público, es una planta accesible
para la población ya que crece de forma silvestre y también se la puede
encontrar en todos los mercados del cantón Lago Agrio.
3.2 Etapa II: Comprobación taxonómica e identificación botánica
La comprobación taxonómica e identificación botánica fue investigado en el
Herbario Nacional del Ecuador (QCNE) Quito que la planta de estudio
corresponde a familia: Asteraceae, género: Vernonanthura y nombre científico:
Vernonanthura patens y conocida también como Laritaco.
Calidad de la muestra.
La calidad de la droga cruda (muestra) fue determinada con la finalidad de
garantizar la inocuidad y repetibilidad de los resultados.
48
CUADRO No. 4. Principales parámetros fisicoquímicos realizados en el
extracto de Vernonanthura patens. Realizado en el Laboratorio de Productos
Naturales. Facultad de Ciencias Químicas. ESPOCH, diciembre del 2017.
Calidad de la muestra
Ensayos
Promedio
Desv.
Estándar
Cenizas totales 18,09%± 0,069
Cenizas solubles en
ácido (HCl) 6,99 ± 4,99
Cenizas solubles en
agua 0,641% ±0,274
Humedad 6,945% ± 0,075
Se procedió a realizar los parámetros permitidos de acuerdo a la norma técnica
ecuatoriana NTE INEN 2 392:2013: Hierbas Aromáticas, siendo estos los más
importantes para la determinación de la calidad del extracto hidroetanólico de
las hojas de la Vernonanthura patens.
En el Cuadro No. 4 se observa que el valor obtenido de cenizas totales es de
18,09 % estando por encima del límite máximo de 5% descrito en la norma
INEN 2392:2013, esto es debido a que puede contener elementos propios del
suelo. Las cenizas Solubles en agua fueron inferiores a las ácidos solubles
(0,641% 0,274 y 6,99 4,99) pero superior a los parámetros descritos en la
norma INEN 2392:2013 en el que indica un rango permisible del 2% para
cenizas insolubles en ácido (72).
El porcentaje de humedad de la planta se obtuvo una cifra superior al rango
permitido que es 5% por lo cual la muestra fue sometida a un proceso de
secado y minimizar el factor.
49
3.3 Etapa III: Caracterización fitoquímica del extracto de Vernonanthura
patens.
Reacciones de caracterización
Los resultados obtenidos en el extracto de la especie en estudio se aprecian en
el siguiente cuadro. Las reacciones de coloración o aparición de precipitados,
aplicadas según las técnicas de tamizaje fotoquímico, son específicas para el
grupo químico que se está investigando.
CUADRO No. 5. Resultados de la determinación de compuestos químicos
presentes en el extracto hidroetanólico de Vernonanthura patens realizado
en el Laboratorio de Productos Naturales. Facultad de Ciencias Químicas.
ESPOCH, diciembre del 2017.
Técnica
Composición
del extracto
hidroetanólico
Extracto
hidroetanólico
Dragendorff Alcaloides -
Cloruro férrico Fenoles +
Shinoda Flavonoides +
Borntrager Quinonas -
Espuma Sponinas -
Rosentaler Terpenos +
H2SO4
concentrado Auronas +
Interpretación:(+) Presencia, (-) No Presencia
Los compuestos bioactivos de las plantas son el foco de estudio de muchos
investigadores debido a sus funciones y valor nutricional. Los resultados
obtenidos en la Cuadro No. 5 se indican el estudio fitoquímico realizado al
extracto hidroetanólico de las hojas de Vernonanthura patens, donde se
detectó la presencia de los siguientes metabolitos secundarios: Fenoles,
Flavonoides, Terpenos y Auronas. Los compuestos fenólicos y flavonoides
50
poseen las mismas bondades biológicas, incluyendo actividad antibacteriana,
antiviral, antinflamatoria, antialérgica, antioxidante, antitrombótica y
vasodilatadora (Siddhuraju & Becker, 2003). Mientras que los terpenos poseen
la capacidad de causar una desestabilización en la integridad y permeabilidad
de la membrana, al interferir con la disipación de la fuerza de los protones. Por
tanto, la presencia de terpenoides y compuestos fenólicos podrían explicar la
actividad antimicrobiana de la planta empleando para este estudio (73). Estos
resultados son similares con los estudios realizados en Vernonanthura patens por
Martinez E en el 2017, Manzano P en el 2015, Manzano P en el 2014, Manzano
P en el 2013, en lo que se determina la presencia de estos metabolitos
secundarios en el extracto de las hojas de la planta (13) (15) (16) (74).
3.4 Etapa IV: Evaluación de actividad antimicrobiana del extracto
Vernonanthura patens
CUADRO No. 6. Resultado de la actividad antimicrobiana del control de
solventes. Laboratorio de Microbiología Clínica. Facultad de Ciencias
Químicas. ESPOCH, diciembre del 2017.
Halos de inhibición (mm)
Bacteria DMSO Agua destilada
estéril
Escherichia coli 0 0
En los resultados indicados en el Cuadro No. 6 se observa que el DMSO y el
agua destilada no poseen actividad antimicrobiana debido a que no se
evidencia el halo de inhibición para este solvente. Lo que coincide con
Manzano en el 2012 en su estudio “Aislamiento y caracterización de la fracción
hexánica de las hojas de Vernonanthura patens (Kunth) H. Rob. Con actividad
antifúngica”, se comprobó que el DMSO utilizado como disolvente y como
control negativo, no influía en los resultados de la evaluación biológica (16).
51
GRÁFICO No. 7. Evaluación de la actividad antimicrobiana del extracto
hidroetanólico de Vernonanthura patens in vitro frente a Escherichia coli.
Laboratorio de Microbiología Clínica. Facultad de Ciencias Químicas.
ESPOCH, diciembre del 2017.
La actividad antimicrobiana fue testada por el método de difusión de discos.
Los resultados de la actividad del extracto hidroetanólico de Vernonanthura
patens contra microorganismos de ensayo se reportan en el gráfico Nro 5.
Todos los tratamientos mostraron actividad antimicrobiana. El potencial
antimicrobiano va a depender del género de la planta, del solvente para la
extracción de los compuestos bioactivos y las cepas microbianas contra las que
se va evaluar. El extracto fue activo para Escherichia coli. El extracto
hidroetanólico sin diluir (100%: Tratamiento1) que inhibe a la Escherichia coli (ø
inhibición = 19.3 mm) continuado con el (75%: Tratamiento 2) inhibe a la
Escherichia coli (ᶲ inhibición = 14,3 mm) seguido con el (50%: Tratamiento 3)
inhibe a la Escherichia coli (ᶲ inhibición = 10,3 mm) y con el Tratamiento 4)
inhibe a la Escherichia coli (ᶲ inhibición = 7,6 mm).
Para el análisis estadístico de la evaluación de la actividad antimicrobiana se
aplicó el análisis univariante, estableciendo que existen diferencias significativas
en los tratamientos aplicados a los cultivos de Escherichia coli, en base a los datos
analizados se establece que la concentración del extracto está directamente
relacionada y es proporcional al efecto inhibitorio encontrado en el estudio. El test
52
de Tukey con un intervalo de confianza al 95% estableció que existen diferencias
significativas en el tamaño de los halos de inhibición en Escherichia coli por efecto
de los tratamientos aplicados, son estadísticamente diferentes con p-Valor < 0,05
El conjunto de resultados obtenidos de la evaluación de la actividad antimicrobiana
del extracto hidroetanólico de Vernonanthura patents, no fue posible contrastarlo
con otros estudios debido a que son muy escasos en las revistas científicas, las
pocas investigaciones que existen se han realizado con solventes distintos al
hidroetanólico, por lo que dichos estudios no se pueden comparar con los de esta
investigación ya que sus componentes fitoquímicos varían en presencia y
cantidad.
53
CONCLUSIONES
De las 107 encuestas realizadas a los habitantes del cantón Pacuyacu,
se refirieron 22 especies de plantas medicinales pertenecientes a 18
familias de las cuales la Lamiaceae fue la más representativa, la parte
de la planta que más usaban fueron las hojas y la forma de preparación
más citada fue la infusión. Por lo cual la planta que fue seleccionada
para este estudio es la Vernonanthura patens, debido a que tuvo un
nivel de uso significativo de 67.2% siendo considerada
significativamente desde el punto de vista de aceptación cultural por los
habitantes.
Se obtuvo el extracto hidroetanólico al 80% por maceración a partir de
las hojas frescas de Vernonanthura patens.
El tamizaje fitoquímico de Vernonanthura patens determino la presencia
de metabolitos como compuestos fenoles, flavonoides, terpenos y
auronas; los mismos que otorgan la propiedad antimicrobiana a la
planta.
Existe actividad antimicrobiana en el extracto hidroetanólico de las hojas
de Vernonanthura patens in vitro frente a Escherichia coli, lo que permite
incrementar el arsenal de usos medicinales de la planta estudiada y
enriquecer la medicina folclórica ecuatoriana.
54
RECOMENDACIONES
Se sugiere continuar la investigación de Vernonanthura patens, para la
búsqueda específica de compuestos con actividad antimicrobiana, para
lo cual se propone ensayar con más patógenos de importancia médica.
Se recomienda un estudio más detallado acerca de la necesidad de
conservar las especies medicinales y su potencial beneficio agregado
para la población, que permita entender mejor las interacciones entre el
conocimiento local sobre las plantas medicinales y la salud de la
persona.
Realizar estudios encaminados en aislar, identificar, separar y elucidar la
o las moléculas(s) presente en el extracto hidroetanólico de
Vernonanthura patens responsable de la actividad antimicrobiana y
determinar su mecanismo de acción, con el fin de generar alternativas
para la obtención de nuevos antimicrobianos de amplio espectro a partir
de una fuente de origen natural.
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DOI: 10.5772/59866
ANEXOS
ANEXO No. 1. CUESTIONARIO ETNOFARMACOLÓGICO APLICADO A LOS
INFORMADORES CLAVE DEL CANTÓN PACUYACU.
ANEXO N° 2. FORMAS DE ADMINISTRACIÓN DE PREPARADOS DE
PLANTAS MEDICINALES POR LOS HABITANTES DE LA PARROQUIA
PACUYACU DEL CANTÓN LAGO AGRIO
GRÁFICO NO. 7. PORCENTAJE DE LAS FORMAS DE ADMINISTRACIÓN DE
LAS PLANTA MEDICINALES UTILIZADAS POR LOS HABITANTES DE LA
PARROQUIA PACUYACU DEL CANTÓN Lago AGRIO, ECUADOR.
ANEXO No. 3. PLANTAS CON VALOR DE USOS SUPERIOR AL 20%
GRÁFICON°8. PORCENTAJE DE VALOR DE USO SIGNIFICATIVO DE LAS
PLANTAS MEDICINALES USADAS POR LOS HABITANTES DE LA
PARROQUIA PACUYACU. DEL CANTÓN Lago AGRIO, ECUADOR.
ANEXO No. 4. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL
EXTRACTO HIDROETANÓLICO DE Vernonanthura patens.
CUADRO NO. 7. RESULTADOS DE LA DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ANTIMICROBIANA DEL EXTRACTO HIDROETANÓLICO DE Vernonanthura
patens. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. FACULTAD DE
CIENCIAS QUÍMICAS. ESPOCH, DICIEMBRE DEL 2017.
Bacteria
Halos de inhibición (mm)*
T1
(100%) T2 (75%) T3 (50%) T4 (25%)
Escherichia
coli 19.3 14.3 10.3 7,6
*Promedio de tres repeticiones
ANEXO No. 4. ACONDICIONAMIENTO DEL EXTRACTO HIDROETANÓLICO
DE Vernonanthura patens
MUESTRA Y SOLVENTE MACERACIÓN
ANEXO No. 5. TAMIZAJE FITOQUIMICO DEL EXTRACTO HIDROETANÓLICO
DE Vernonanthura patens.
ANEXO No. 6. EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
EXTRACTOS Escherichia coli
ANEXO No. 7. ANALISIS ESTADÍSTICO
Análisis univariado de varianza
Para la presente investigación se utilizó el programa SPSS versión 23 con la
finalidad de realizar el análisis estadístico. Con los datos obtenidos en la
investigación se realizó un análisis univariado, porque la experimentación está
basada en una sola variable dependiente que es la bacteria Escherichia coli
Tabla 1-1: Factores Inter- Sujetos
Etiqueta de
valor
N
Tratamien
to
1 T1 3
2 T2 3
3 T3 3
4 T4 3
5 DMSO 3
6 Agua 3
Realizado por: Rivera Flor, 2018
En la Tabla 1-1 nos explica que tenemos los tratamientos 1,2,3, 4 a diferentes
concentraciones (100,75,50,25%) con un tratamiento 5 que corresponde al
DMSO (Dimetilsulfóxido) y un tratamiento 6 que corresponde al Agua, con tres
repeticiones cada uno.
Tabla 2-1: Prueba de Efectos inter- sujetos
Variable dependiente: Escherichia_coli
Origen Tipo III de
suma de
cuadrados
gl Media
cuadrática
F Sig.
Modelo
corregido
899,611a 5 179,922 323,86
0
,000
Intersección 1334,722 1 1334,722 2402,5
00
,000
Tratamiento 899,611 5 179,922 323,86
0
,000
Error 6,667 12 ,556
Total 2241,000 18
Total
corregido
906,278 17
Realizado por: Rivera Flor, 2018
Dónde:
gl: grados de libertad de la distribución t-Student que sigue el estadístico de
contraste.
Sig (bilateral): valor que permite decidir la aceptación o no de la hipótesis nula.
Es la significación muestral de la hipótesis nula, es decir, el p-valor. Si p ≥ α, se
acepta la hipótesis nula. Si p ≤ α, se rechaza la hipótesis nula.
F: El estadístico F o F-test (se llama F en honor al estadístico Ronald Fisher)
se obtiene al estimar la variación de las medias entre los grupos de la variable
independiente y dividirla por la estimación de la variación de las medias dentro
de los grupos.
El modelo univariado nos arroja que la bacteria Escherichia coli frente al
extracto hidroetanólico de Vernonanthura patenscon que contiene los
tratamientos (100,75,50,25%) influyen directamente porque como se refleja en
la Tabla 2-1 de pruebas de efectos inter sujetos los niveles de significancia
para los tratamientos aplicados a diferentes concentraciones me arrojo un valor
menor a 0,05.
Planteamiento de la hipótesis
Ho: No existen diferencias significativas en la concentración de Escherichia coli
con los tratamientos aplicados p ≥ 0,05
Hi: Existen diferencias significativas en la concentración de Escherichia coli con
los tratamientos aplicados p < 0,05
Decisión:
Estadísticamente se rechaza la hipótesis nula porque el nivel de significancia
es menor a 0,05 (p=0,05). Se acepta la hipótesis alternativa (Hi) lo que significa
que existen diferencias significativas en la concentración de Escherichia coli
con los tratamientos aplicados del extracto hidroetanólico de Vernonanthura
patenscon p ≥ 0,05
Tabla 3-1: Sub conjuntos homogéneos
Tukey Ba,b
Tratamien
to
N Subconjunto
1 2 3 4 5
DMSO 3 ,00
Agua 3 ,00
T4 3 7,67
T3 3 10,33
T2 3 14,33
T1 3 19,33
Realizado por: Rivera Flor, 2018
En la Tabla 3-1 se expresa el análisis de Tukey para las medias de las
concentraciones de Escherichia coli (mm) respecto a los tratamientos
aplicados, muestra homogeneidad entre las medias obtenidas en los
tratamientos DMSO y Agua, pero sin ningún aporte a la investigación. Sin
embargo, las medias de los tratamientos T2, T3, T4 y T1 son aquellos que
proyectan mayor significancia en la investigación.
Tabla 4.1: ANOVA
Escherichia_coli
Suma de
cuadrado
s
gl Media
cuadrática
F Sig.
Entre grupos 899,611 5 179,922 323,86
0
,000
Dentro de
grupos
6,667 12 ,556
Total 906,278 17
Realizado por: Rivera Flor, 2018
Planteamiento de la hipótesis
H0: No existen diferencias significativas en la concentración de
Escherichia_coli por efecto de los tratamientos aplicados p ≥ 0,05
H1: Existen diferencias entre las concentraciones de Escherichia_coli por
efecto de los tratamientos aplicados. Al menos dos muestras son diferentes p <
0,05
Decisión
Estadísticamente se rechaza la hipótesis nula y se acepta la hipótesis
alternativa ya que su valor de significancia es menor a p < 0,05
Gráfico 1-1: Medias para la bacteria Escherichia_coli vs
Tratamiento_ Extracto Hidroetanólico de Vernonanthurra patens
Realizado por: Rivera Flor, 2018
Con un análisis comparativo de medias el Gráfico 1-1 presenta que los
tratamientos T1, T2, T3, T4 que equivale a la concentración de 100,75,50,25 %
mm son aquellos que tuvieron mayor actividad antimicrobiana frente a la
bacteria Escherichia_coli ya que el extracto hidroetanólico de Vernonanthurra
patens, tiene un efecto inhibitorio. Se puede notar que a mayor concentración
de extracto mejor será la reducción de la Escherichia coli como lo demuestra el
tratamiento uno (T1), mientras que para los tratamientos DMSO y agua no tuvo
la misma significancia porque su valor es cero por lo que se puede notar que
no hubo actividad del extracto frente a la bacteria, además, no hubo ninguna
reacción que influya en los resultados de la evaluación demostrando el
crecimiento de la bacteria.
Se puede corroborar lo proyectado por el grafico 1-1 en la tabla 3-1 ya que
obtuvimos cinco grupos en los cuales coinciden con el grafico de medias y el
sub grupo 1 con los tratamientos restantes.