universidad nacional autonoma de...
TRANSCRIPT
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA UNAN-LEON
ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA
TESIS PARA OPTAR AL TITULO DE:
LICENCIADO EN MEDICINA VETERINARIA.
Tema:
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN FENOTÍPICA DE Staphylococcus aureus MEDIANTE LA TÉCNICA DE FINGERPRINTER (PHP) A PARTIR DE LECHE BOVINA AFECTADA CON MASTITIS SUBCLÍNICA EN SEIS FINCAS DEL MUNICIPIO DE LEON, DURANTE EL PERIODO MAYO 2005-MAYO 2006.
Presentado por: Br. Judyana Fabiola Aguirre Valverde.
Br. Kelia Jasmina Zeledón Aráuz.
Tutores: Dr. Migdonio Quintanilla Darce.
Lic. Alan Enrique Peralta Ramírez
León, 18 de Septiembre del 2007
RESUMEN
La presente investigación contiene aspectos teóricos básicos de la mastitis remarcando
en mastitis subclínica, salud pública, control, prevención y tratamiento de la misma. Se
realizó en la ciudad de León durante el período Mayo 2005 – Mayo 2006.
Además proporciona referencias básicas en base a datos actuales encontrados en las
6 fincas de estudio como: microorganismos aislados frecuentemente en mastitis
subclínica utilizando pruebas diagnosticas indirectas California Mastitis Test (CMT) y a
través de aislamiento, cultivo y antibiograma determinar la sensibilidad y resistencia del
agente a ciertos antibióticos.
Se encontró una prevalencia de 52.1% de mastitis y el microorganismo mayormente
encontrado fue el Staphylococcus aureus, además este resultó con un alto porcentaje
de resistencia a los antibióticos a los que se sometió.
En este trabajo también se realizó tipificación fenotípica mediante la técnica de
fingerprinter, con la cual se pretende identificar y conocer más aún al Staphylococcus
aureus, ya que la mayor parte de las mastitis bovinas son causadas por
Staphylococcus y en mayor proporción por S. aureus son de distribución mundial y los
mas importantes productores de mastitis subclínica.
AGRADECIMIENTO
Agradecemos en primer lugar a Dios nuestro creador por permitirnos llegar hasta este
momento, por la vida, la salud, la inteligencia y sabiduría.
Deseamos dar un reconocimiento especial al proyecto de investigación “Epidemiología
de la mastitis bovina fase II” por su apoyo económico, así como el apoyo y colaboración
de nuestros tutores y asesor.
Queremos dar gracias al Dr. Eleazar Mendoza por ayudarnos a mejorar el contenido.
Finalmente deseamos expresar nuestro agradecimiento a los propietarios y
trabajadores de las fincas de estudio sin los cuales hubiese sido imposible realizar la
investigación.
A todos los que hicieron posible la realización de este trabajo, muchas gracias.
Br. Judyana Fabiola Aguirre Valverde Br. Kelia Jasmina Zeledón Aráuz
DEDICATORIA A mis padres María de Jesús Aráuz, Julián Alonso Zeledón, sin ellos no hubiese sido
posible lograr mis metas y a mi novio Eleazar José Mendoza Guevara, les agradezco
por su apoyo incondicional.
Br. Kelia Jasmina Zeledón Aráuz
DEDICATORIA
A mis padres Sofía Esperanza Valverde y Francisco José Aguirre por la confianza que
depositaron en mí.
A mis abuelos María Benita Luna y Leonardo Valverde por que despertaron mi
verdadera vocación.
A toda mi familia por que siempre me han apoyado y han confiado en mis capacidades.
Br. Judyana Fabiola Aguirre Valverde
INDICE Páginas.
I.- Introducción 2
II.- Planteamiento del problema 3
III.- Antecedentes 4
IV.- Justificación 5
V.- Objetivos 6
VI.- Marco teórico 7
1.- Concepto 7
2.- Etiología 8
3.- Epidemiología 11
4.- Patogenia 14
5.- Síntomas 16
6.- Diagnóstico 16
7.- Tratamiento, Control y Prevención 19
8.- Salud Pública 21
VII.- Hipótesis 23
VIII.- Diseño metodológico 24
1.- Tipo de Estudio 24
2.- Área de Estudio 24
3.- Población y Muestra 24
4.- Técnicas de Procedimiento 25
5.- Plan de Tabulación y análisis 26
IX.- Resultados 27
X.- Discusión 32
XI.- Conclusiones 34
XII.- Recomendaciones 35
XIII.- Bibliografía 36
Anexos
I.- INTRODUCCIÓN
La mastitis es un problema global que produce pérdidas directas e indirectas,
con respecto al nivel de producción, calidad, descarte de vacas, eliminación de leche
alterada, costos de tratamientos, honorarios por servicios profesionales y trabajo
extra.14
En esta entidad se ven afectados el animal, el productor, la industria láctea y la salud
pública3; el impacto de esta enfermedad en la calidad de la leche y el riesgo para la
salud humana ha aumentado el interés por conocer los agentes implicados, sus niveles
de resistencia medioambiental e in Vitro frente a los tratamientos comúnmente
utilizados.5, 7
La mayor parte de la mastitis bovina es causada por S. aureus4, la alta prevalencia y su
progresiva resistencia a la terapia antibiótica se debe a su habilidad para evadir los
sistemas de defensa del hospedador y colonizar la glándula mamaria gracias a su
capacidad de producir numerosos factores de virulencia.2
Muchos son los factores que participan en la patogenia de la mastitis que a diferencia
de otras enfermedades infecciosas del bovino, no se puede erradicar y esta presente
en mayor o menor grado en todos los rebaños lecheros del mundo.8
II.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA:
La mastitis es una enfermedad que causa gran cantidad de pérdidas económicas
a nivel mundial en regiones con producción lechera intensiva y semintensiva. En las
mastitis por bacterias, el uso indiscriminado de antibióticos ha generado resistencia,
esto hace que la enfermedad sea difícil de controlar al aplicar la droga sin tener ningún
efecto; además se desconoce la relación fenotípica entre los S. aureus productores de
mastitis subclínica.
III.- ANTECEDENTES
Existen numerosos factores que influyen en la presentación de la mastitis, estos
responden principalmente a causas traumáticas o a la infección por microorganismos
patógenos entre los cuales algunas especies bacterianas como el S. aureus juegan un
rol particularmente importante, ya que se trasmite mucho más fácilmente durante el
ordeño, ya que su principal reservorio es la glándula mamaria infectada. 8
Estudios efectuados en diferentes países como en Inglaterra y Gales donde se
evaluaron 300 rebaños determinaron que dentro de los principales agentes que circulan
en los hatos lecheros está el S. aureus 7, otros autores que han realizado estudios
recientes ponen de manifiesto una gran similitud en los datos en cuanto a la posición
predominante del S. aureus; la mayoría de los trabajos relacionados con la
determinación de los microorganismos productores de mastitis bovina coinciden que
uno de los agentes mayores productores de la enfermedad es el S. aureus
reportándose mayormente en los pezones de vacas en ordeño.10
En Nicaragua la enfermedad ha sido poco evaluada se estima que un tercio de todas
las vacas lecheras están afectadas por cualquier forma de mastitis en uno o mas
cuartos, según estudios realizados en rebaños lecheros de las principales cuencas
lecheras de Boaco, Chontales1, Estelí y Managua pero los resultados no son de fácil
acceso3.
Según el estudio realizado por Peralta y Berríos, 2004, en 4 hatos lecheros, se
encontró al realizar CMT a 764 cuartos un 28 % de casos de mastitis subclínica de
estos se aisló un 62% de S. aureus al realizar cultivo bacteriológico a las muestras de
leche.3
IV.- JUSTIFICACIÓN
La mastitis esta catalogada como la enfermedad más importante que afecta al
ganado lechero y por ser una entidad difícil de controlar.
Este hecho pone de manifiesto la necesidad de conocer aun más su principal agente
causal, Así mismo incidencia, prevalencia, resistencia, sensibilidad antimicrobiana y
comportamiento en los diferentes hatos lecheros de nuestro medio.
En vista de esta problemática se realizó este estudio con el propósito de aportar datos
que contribuyan y puedan ser utilizados para tomar medidas preventivas y correctivas
con la finalidad de reducir la situación.
V.- OBJETIVOS
V. 1.- General:
Aislar Staphylococcus aureus e identificar fenotípicamente sus cepas mediante
la técnica de Fingerprinting a partir de leche bovina con mastitis subclínica en 6
fincas de la ciudad de León - Nicaragua en un período de 18 meses
comprendido en los años 2005-2006.
V. 2.- Específicos:
Obtener por medio de CMT Recuento de Células Somáticas (RCS) para
identificar los cuartos de vacas afectadas con mastitis subclínicas.
Tomar muestras estériles de leche de las vacas afectadas con mastitis
subclínica para realizar cultivo bacteriológico.
Realizar cultivos bacteriológicos para la obtención de Staphylococcus aureus
provenientes de vacas con mastitis subclínica.
Realizar antibiograma para determinar la sensibilidad y/o resistencia de S.
aureus a determinados antibióticos.
Tipificar cepas de Staphylococcus aureus mediante la técnica de Fingerprinting.
VI.- MARCO TEORICO
1.- Concepto: El termino deriva del griego “mastos” ubre e “itis” inflamación. Es una reacción
inflamatoria de los tejidos secretores de la glándula mamaria como respuesta a un
agente microbiano o a una reacción traumática. El 80 % de los casos son ocasionados
por la invasión de microorganismos patógenos específicos en los pezones y tejido de la
ubre, el resto de los casos son el resultado de lesiones traumáticas con o sin invasión
secundaria de microorganismos7, se caracteriza por alteraciones físico-químicas y casi
siempre bacteriológicas de la leche, además por la presencia significativamente
aumentada de leucocitos en la leche procedente de la glándula afectada.
La mastitis se clasifica en clínica cuando hay signos de dolor, calor, induración de la
glándula mamaria y la leche presenta alteraciones en sus características
organolépticas.14 Sin embargo la presentación mas importante es la forma subclínica
en esta no se pueden detectar cambios obvios en la apariencia de la leche o de la
ubre,4 pero el nivel de producción de leche disminuye, hay presencia de bacterias en la
leche y la composición de ésta también es alterada, únicamente el incremento en el
numero de células somáticas y el aislamiento de un agente patógeno permitirá su
diagnostico. 9
La mastitis puede ser producida por más de 100 especies de bacterias, se ha
responsabilizado a muchos agentes infecciosos como productores de esta enfermedad,
uno de los agentes mas frecuentes y más importante productor de mastitis subclínica
es el S. aureus. 5
2.- Etiología: El S. aureus es un coco coagulasa positivo de la familia Micrococaceae, el
genero staphylococcus incluye 32 especie y 8 subespecie. Es una bacteria no móvil, no
forma esporas, pilis ni flagelos. Es aerobio facultativo, 6, 9 produce cápsula de
exopolisacaridos que envuelven las colonias, es capaz de vivir en el interior de los
macrófagos y células epiteliales a modo de parásito intracelular. 6
a.- Morfología:
Tiene forma de coco, un diámetro aproximado de 1 µm, típicamente casi perfecta su
forma esférica. Tienen tendencia a presentarse como masas de células aparentando
racimos, pueden agruparse en pares, tétradas o formar cadenas.6, 9
b.- Apariencia tintoreal:
Se tiñe fácil e intensamente con los colorantes básicos usuales de tinción simple
(cristal violeta) y son fuertemente Gram positivas. 6
c.- Propiedades fisiológicas:
Los Staphylococcus son relativamente más resistentes al calor y hasta cierto grado a
los desinfectantes que a las formas vegetativas de la mayor parte de las bacterias.
Mientras casi todas las bacterias mueren en 30 minutos a 60 ºC, los Staphylococcus a
menudo necesitan temperaturas mayores por más tiempo como 80 ºC en 1 hora.
También son resistentes a la desecación y pueden conservarse infecciosos por
periodos prolongados de tiempo y capaces de crecer en concentraciones relativamente
altas de cloruro de sodio, soporta condiciones extremas aunque se inactiva a
temperaturas de congelación.9
Habita tanto en el exterior como en el interior de la ubre infectada, coloniza las heridas
de la piel y las causadas por hiperqueratosis en la punta de los pezones producida
como consecuencia del ordeño. 5
Son sensibles a la actividad bacteriostática del trifenilmetano y otros colorantes y son
característicamente sensibles a los antibióticos eficaces para las bacterias Gram
positivas incluyendo penicilinas y los de amplio espectro como Tetraciclinas, aunque
son específicamente propensos a desarrollar resistencia a medicamentos aplicados
frecuentemente.
Algunas de estas generalizaciones no son aplicables a cultivos puros de
Staphylococcus recién aislados.
d.- Características Bioquímicas:
Son capaces de fermentar lentamente varios tipos de carbohidratos produciendo acido
láctico pero no gas, también se forman pequeñas cantidades de etanol y bióxido de
carbono, aunque como la fermentación de los azucares usuales y alcoholes polihídricos
es irregular se considera que la fermentación de manitol tiene significación diferencial
porque lo hacen fermentar la mayor parte de las cepas coagulasa positivo.
e.- Cultivo
Crecen eficazmente patógenos bajo condiciones aeróbicas en la mayoría de los medios
bacteriológicos usuales de extracto de carne y peptona, pero lo hacen de manera mas
profusa en agar sangre que se usa comúnmente para aislar formas. Estos crecen
rápidamente a 37 °C pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura ambiente
(20 °C). Las colonias en medio sólido son redondeadas, uniformes, sobresalientes y
resplandecientes, con un color amarillo oro intenso. Muchas colonias desarrollan
pigmentos solo después de una prolongada incubación a 20 °C. 5
f.- Estructura antigénica:
Contienen proteínas y polisacáridos antigénicos lo que le permite a las cepas
agruparse limitadamente. El ácido teicoico es una proteína formada por cadenas de
tamaño variable de hasta más de treinta polímeros unidos por puentes fosfodiésteres,
enlazados a los peptidoglucanos de la pared celular, es el principal antígeno de
superficie de S. aureus, participa en la recepción de fagocitos y facilita la unión de las
bacterias a las membranas de las células del huésped. Este agente tiene habilidad para
evadir los sistemas de defensa del hospedador y colonizar la glándula mamaria, esto
se debe a su capacidad de producir numerosos factores de virulencia.
g.- Factores de patogenicidad:
Adhesina: Es una sustancia protéica que favorece el anclaje de las bacterias. Tiene
receptores de superficie que se adhieren al tejido y previenen el arrastre durante el
ordeño.
Capsula externa de polisacáridos: Dificulta la fagocitosis y favorece la multiplicación del
microorganismo formando microcolonias.2
Coagulasa: Esta enzima se correlaciona con el 97 % de las cepas de S. aureus y se
considera la prueba tipo para identificar esta especie, actúa trasformando el fibrinógeno
en fibrina formando una capa sobre la bacteria que le protege de la fagocitosis.
Lipasas: Son varias enzimas que actúan sobre diferentes sustratos (aceites, grasas,
ceras, etc.), que le permiten colonizar áreas de la piel con altas concentraciones de
estas.
Hialuronidasa: Esta enzima actúa sobre el ácido hialurónico presente en el pegamento
de las células de los tejidos, favoreciendo así la difusión de la bacteria en los tejidos.
Estafiloquinasa: Es una fibrinolisina que activa el plasminógeno, lo trasforma en
plasmina y esta actúa sobre la fibrina rompiendo enlaces peptídicos que lisan la fibrina.
Nucleasa: Es una enzima que tiene propiedades endonucleotidicas y exonucleotidicas,
puede actuar sobre el ADN y el ARN produciendo licuación del material, es un factor de
difusión.
Toxinas: Son las responsables de los síntomas clínicos.
• Toxina Alfa o hemolisina Alfa: Tiene acción hemolítica sobre eritrocitos de
diferentes especies lesiona las plaquetas y es dermonecrótica.
• Toxina Beta o Esfingomielinasa: Actúa sobre la esfingomielina de la membrana
de los eritrocitos produciendo hemólisis en frió y en calor.
• Toxina Delta o Hemolisina Es hemolítica lesiona linfocitos, plaquetas y
neutrófilos.
• Toxina Gamma o Hemolisina Gamma: Produce lisis de eritrocitos de diferentes
especies.
• Enterotoxinas: Se han identificado a la fecha 7 diferentes toxinas que se
denominan A, B C1 y C2, D, E y F producen intoxicación y envenenamiento por
la ingestión de alimentos contaminados por S. aureus. El cuadro clínico aparece
a las 4 a 8 horas de la ingestión y se caracteriza por nauseas, vómitos, diarrea y
cólicos.
• Exotoxinas Pirógenas: Se han identificado 3 diferentes sustancias pirógenas que
se denominan A, B y C las 3 producen fiebre en diferente intensidad.5, 9
3.- Epidemiología
a.- Fuentes de contaminación:
Interior y exterior de ubres infectadas, heridas de la piel, hiperqueratosis, tracto
urogenital, respiratorio, digestivo, tonsilas, membranas mucosas. El hombre también
puede ser portador del microorganismo, los fómites, maquina de ordeño, toallas,
cánulas y jeringas para la administración intramamaria, vectores (por mordedura de la
piel del pezón y contacto). 3, 5, 4
b.- Mecanismo de transmisión:
Directo: No ocurre
Indirecto: Principalmente se trasmite por fómites contaminados al momento del ordeño,
manos del ordeñador o maquinas de ordeño.
c.- Morbilidad y Mortalidad:
EL estudio de Peralta y Berríos, 2004, en la misma población de estudio muestran que
la morbilidad es de 54 % en vacas lecheras con al menos un cuarto afectado y la
mortalidad por mastitis subclínica es nula.3
d.- Factores predisponentes y favorecedores:
Susceptibilidad de la vaca que guarda relación con:
• Fase de lactancia: La fase temprana (primeros meses) es la etapa más
susceptible. En el período de periparto las vacas están mas expuestas porque
los neutrófilos actúan con mayor lentitud y los leucocitos polimorfonucleares
(PMN) sanguíneos de vacas en lactación temprana sufren mayor grado de
apoptosis en comparación con vacas a mitad del periodo de lactancia. Además
en este período metabolicamente están sometidas a tensión fisiológica lo que
compromete la resistencia a la enfermedad y producir casos subclínicos y
clínicos. 4
• Factores coadyuvantes en vacas paridas: El edema de la ubre, ordeño
incompleto, el volumen de fluido en la glándula el aumento de presión
intramamaria, la dilatación del canal del pezón, el goteo de calostro o leche entre
ordeños permite la entrada de bacterias en la cisterna del pezón de la glándula.
• Frecuencia de ordeño, volumen y rapidez del flujo: A mayor frecuencia de
ordeño menor probabilidad de penetración bacteriana en el canal del pezón.
Factores genéticos y hereditarios:
• Raza: las mayores productoras son más susceptibles, el aumento de la
producción acarrea una dilución de los factores de defensa, se rompe el
equilibrio entre flora y resistencia.
• Forma de los pezones y anatomía del conducto del pezón: Los pezones
puntiagudos son más susceptibles a padecer hiperqueratosis y lesiones varias.
Factores dependientes del medio ambiente y entorno del hospedador:
• Factores relacionados con el manejo: estrés o tensión, el ambiente húmedo y
calido junto con radiación solar, hacinamiento, insectos, escasa ventilación,
están asociados a mayor incidencia de mastitis y disminución de la producción
láctea.
• Actividades relacionadas con el ordeño.
• Higiene del personal, de aparatos, utensilios y sala de ordeño.
• Higiene de la vaca: lavado de ubre y pezones, previo al ordeño, y desinfección
de estos post ordeño. 8, 14
e.- Factores determinantes del hospedador
Grietas y lesiones en la piel del pezón en especial del orificio producida por
mecanismos físicos, químicos traumáticos y/o infecciosos.
f.- Factores determinantes del agente
• La capacidad del microorganismo de sobrevivir en el medio cercano a la vaca,
esto es su resistencia o influencias ambientales incluyendo limpieza y
desinfección.
• Su capacidad para adherirse al epitelio mamario y establecer una reacción
mastítica.
• Su resistencia a la antibioterapia. 4
4.- Patogenia La capacidad de producir procesos mórbidos depende de una combinación de
los factores predisponentes y favorecedores antes descritos.
En el desarrollo de la mastitis se hayan implicadas las siguientes fases:
a.- Fase de invasión:
La invasión del pezón se presenta generalmente durante el ordeño. Los organismos
presentes en la leche o en la punta del pezón colonizan el canal y la cisterna. Actúan
los mecanismos de defensa del huésped constituido por la integridad de las barreras
físicas del huésped (el pezón y el canal). 4
La vía de entrada es el orificio del pezón, el S. aureus se adhiere e invade células
epiteliales mamarias, endoteliales y fibroblastos mediante un crecimiento microbiano
ascendente.5 El orificio está total o parcialmente ocluido con queratina, cuando ésta se
desprende y se elimina del epitelio y hay fisuras, es propicio para la retención de
microorganismos y para que se establezca la infección.
El ácido teicoico es el principal antígeno de superficie de los Staphylococcus, participa
en la fagocitosis y facilita la unión de las bacterias a las membranas de las células de
huésped y a las células endoteliales. La coagulasa se une a la protrombina del
huésped, con la formación de una estafilotrombina que activa a la trombina y de esta
manera se forma fibrina a partir del fibrinógeno. Una pequeña cantidad de coagulasa
permanece unida a la célula y actúa como factor aglutinante, que probablemente
contribuye a la adhesión de las bacterias a la piel desvitalizada y a las superficies
extrañas.9
Las bacterias se encuentran envueltas en vacuolas cubiertas de membrana en el
citoplasma de las células epiteliales mamarias. Puede escapar del fagosoma hacia el
citoplasma e inducir apoptosis.
Después de la exposición a un antígeno específico se desarrollan las defensas
específicas como: activación, proliferación y diferenciación de linfocitos T y B,
producción de inmunoglobulinas, linfocinas, interleucinas e interferón γ.3
Los S. aureus se multiplican rápidamente e invaden el tejido mamario después puede
establecerse una población bacteriana en el conducto glandular y utilizando esta
residencia como base puede ocurrir una serie de multiplicación y diseminación en el
tejido mamario en dependencia de la susceptibilidad animal.
Una vez infiltradas las bacterias en el canal del pezón se multiplican y producen toxinas
que causan la destrucción del tejido mamario cuya función es producir leche. Es decir
el potencial productivo de la ubre disminuye dado que la cantidad de células
productoras de leche es menor. 4
b.- Fase inflamatoria:
Se inicia una vez que la bacteria ingresa en la ubre y constituye la segunda línea de
defensa. Dentro de la ubre las bacterias se multiplican y producen toxinas, enzimas y
otras sustancias que estimulan la producción de un sinnúmero de químicos en las
células inflamatorias de la vaca que son utilizadas para prevenir la inflamación del
tejido mamario.4, 10, 14
c.- Fase de infección:
La mastitis se desarrolla a partir de la entrada de S. aureus en la glándula y se
multiplica provocando galactoforitis, discoloidalismo, inflamación local, descamación
celular, se produce vasodilatación aumentando el flujo de sangre hacia la glándula
mamaria y se aumenta la permeabilidad vascular. Las prostaglandinas, leucotrienos,
proteasas y metabolitos de oxigeno tóxico aumentan la permeabilidad capilar en la
glándula y la inflamación ocurre debido a la filtración de fluido en el tejido. 3, 14
Los fagocitos dejan los vasos sanguíneos y entran en el tejido (Diapédesis) inicialmente
neutrófilos y luego los macrófagos. Puede haber una resolución si la respuesta
específica e inespecífica del hospedador es adecuada, ocurriendo la fagocitosis y
destrucción total de las bacterias; cuando existen bacterias intracelularmente
protegidas de las defensas del hospedador y de los efectos de los antibióticos se da
una infección subclínica recurrente. 14
5.- Síntomas: Existen diferentes tipos de mastitis según cómo se clasifique el proceso, el más
utilizado es según la sintomatología, teniendo así: mastitis clínicas y mastitis subclínica,
siendo ésta última objeto de nuestro estudio por presentar mayores repercusiones para
la producción de leche. 3
Mastitis subaguda o subclínica:
Inflamación leve con anormalidades persistentes en la leche. Puede haber o no signos
benignos e inespecíficos: Leche anormal, secreción acuosa que se observan en la
placa de ordeño y principalmente resultados positivos al CMT por un elevado recuento
de células somáticas.3
6.- Diagnóstico:
Poseen valor indudable los métodos de laboratorio que consisten en exámenes
de muestras de leche para identificar células, bacterias y cambios químicos y para
comprobar la sensibilidad y resistencia de gérmenes específicos. También existen
pruebas prácticas de campo basadas en los cambios debidos al proceso inflamatorio,
solamente tienen valor como pruebas de selección y deben complementarse con
exámenes de laboratorio.
Se utiliza una gran variedad de pruebas que han quedado restringidas casi
enteramente a la determinación de la cantidad de ADN y el número aproximado de
leucocitos en la muestra.
Las pruebas de diagnóstico más frecuentes son:
Clínico: Basado en los hallazgos de la exploración clínica del animal, de la glándula y
de la leche.
Epidemiológico: Basado en datos proporcionados por el propietario y las observaciones
realizadas por nosotros mismos; la distribución de la enfermedad, los factores de
riesgo, los mecanismos de transmisión y las fuentes de infección.
Bioquímico: Detecta alteraciones en la leche.
• Determinación del pH en la leche: Las glándulas afectadas por mastitis
presentan pH alcalino aproximadamente similar al del plasma (7.4). Se atribuye
a la disminución de la lactosa e incremento de las sales que pasan de la sangre
a la leche.
• Detección de la albúmina sérica: Se puede realizar por difusión en agar donde
se encuentran anticuerpos contra la albúmina sérica, las muestras de leche se
colocan en pocillos; el agar se incuba por 2 días y se observa una difusión del
precipitado formado por la albúmina y el anticuerpo en el agar.
• Cambio en la composición de leche y conductividad eléctrica: Se basa en el
aumento de sodio y cloro y disminución del potasio, provocándose por lo tanto
un aumento en la conductividad.
• Determinación de Cloro en la leche: La relación lactosa:cloro es influenciado por
el estado lactacional y la presentación de mastitis. En caso de mastitis el
contenido de cloro aumenta en proporción a la lactosa.
• Identificación de componentes intracelular en la leche debido al daño celular
mediante la medición de actividad de enzimas. La N-acetil glucosaminidasa
(NAGasa) aumenta su actividad y es liberada por neutrófilos en los procesos
inflamatorios de la ubre. Hay disminución de la capacidad de síntesis del epitelio
mamario, la síntesis de caseína y lactosa disminuye en vacas con mastitis.
Microbiológico:
Cultivo y aislamiento de los agentes implicados. Es el método Estándar de examen
para descubrir mastitis. Debe efectuarse con muestras de cada cuarto individual o de
muestras compuestas que incluyan leche de los 4 cuartos.
Citológico:
Recuento de células somáticas. Las bacterias y su multiplicación producen inflamación
de la ubre y estimulan la respuesta inmune en la glándula mamaria tras la llegada de
los leucocitos, los neutrófilos son los responsables de los recuentos de células
somáticas (RCS) altos en la leche de ubres con mastitis.
Existen 2 Métodos:
Directos:
a.- Ópticos.
b.- Electrónicos
Indirectos:
a.- Test de California para Mastitis (CMT): Refleja con exactitud el número total de
leucocitos y de polimorfonucleares en leche, la prueba consiste en agregar un
detergente (Alquil-aril-sulfonato de sodio) mas púrpura de Bromocresol a la muestra de
leche causando la liberación de ADN de las células presentes y este se convierte en
combinación con agentes protéicos de la leche en una gelatina; entre mayor es la
presencia de células se libera mayor concentración de ADN por lo que aumenta la
respuesta y la formación de gelatina. Los resultados se leen como Negativos, Traza,
1+, 2+ y 3+ según la cantidad de gel.3, 4, 7
b.- Test de Wisconsin: el reactivo utilizado es el mismo que el de la prueba de
California para mastitis diluido en proporción de 1:1 usando agua destilada.
c.- Prueba de catalasa.
d.- De Whiteside.
e.- De la antimorfina de Negretti o la Clásica 3, 4
7.- Tratamiento, Control y Prevención.
Se sugiere dar tratamiento antibiótico hasta en el período seco con productos
intramamarios con persistencia prolongada, acompañada de tratamiento sistémico
tomando en cuenta la efectividad de la terapia antibiótica, realizando previamente
antibiograma para obtener más efectividad con la terapia al elegir el fármaco apropiado,
tomando en cuenta el riesgo de residuos en la leche.
Para la selección de la terapia antimicrobiana deben considerarse varios factores en
particular la susceptibilidad de la droga, la vía de administración, dosis, posibles efectos
secundarios, problemas residuales de leche o carne y la óptima relación costo-
beneficio.
a.- Tipos de fármacos sugeridos para la intervención terapéutica:
Se sugieren antibióticos de amplio espectro y larga duración para el tratamiento
adecuado de la mastitis subclínica bovina. 3
Antibióticos sugeridos para la intervención terapéutica
• Norfloxacina 5% 30 ml EV cada 24 horas por 3 – 4 días.
• Sulfato de Gentamicina 100 -150 mg IMM 1 vez al día durante 3 días. 6 mg/kg
IM por 3 días.
• Ciprofloxacina 30 mg/kg por día.
• Eritomicina Dosis: 4 a 8 mg/KPV IM cada 12 a 24 horas, de acuerdo a la
gravedad del cuadro a tratar.
• Cefoperazona 250 mg IMM una sola Vez
b.- Control y Profilaxis
Las medidas higiénicas especialmente durante el proceso del ordeño son importantes
porque reducen la contaminación de los pezones con organismos patógenos y se
disminuye los casos de neoinfecciones intramamarias.
Los planes de control de mastitis incluyen la ejecución de los siguientes pasos:
Mantener un ambiente limpio, seco y ventilado
Controlar la propagación de vectores
Examen de vacas que se deseen introducir a la explotación como reposición
Identificación de las vacas afectadas
Ordeño en escala de sanas a enfermas
Rutina de ordeño adecuada e higiénica
Uso adecuado y mantenimiento del equipo de ordeño
Descarte de vacas con mastitis crónica
Elaboración de CMT periódicamente
Optimizar las defensas del hospedador
Seguimiento del estado sanitario de la ubre
Tratamiento de problemas de la piel, de ubre y pezones
Tratamiento de casos clínicos durante la lactación
Terapia de secado al final de la lactación 5
Pasos de una correcta rutina de ordeño: Es fundamental realizar una rutina de ordeño
adecuada e higiénica para un control y profilaxis exitosa de la mastitis que incluye:
Desplazamiento cuidadoso y tranquilo de las vacas
Usar agua potable preferiblemente tibia para lavar los pezones por lo menos
durante 15 segundos
Secar inmediatamente los pezones después del lavado
Utilizar toallas de papel desechable para cada ubre
Examinar los primeros chorros de leche con el fin de observar cualquier
anormalidad y descartar leche con alto contenido bacteriano
En caso de alta incidencia de mastitis por agentes ambientales, la desinfección
de pezones previo al ordeño puede ser útil
Ordeño de las vacas agrupadas por lotes (numero de lactación y estado de
salud de la ubre)
Colocar la maquina de ordeño dentro del minuto de preparación de la ubre
Cortar el vacío para retirar las pezoneras de la ubre con cuidado
Desinfección del pezón después de la retirada de las pezoneras o después
del ordeño manual. 14
8.- Salud Pública:
Los Staphylococcus son anaerobios facultativos fuertemente fermentadores. Son
de gran importancia desde el punto de vista sanitario por que causan mastitis y pueden
provocar enfermedades o intoxicaciones en los humanos.
El S. aureus interviene en la mayor parte de los procesos supurados de heridas en el
hombre y los animales. Puede localizarse en cualquiera de los tejidos corporales es la
bacteria que con más frecuencia produce piemia. En el hombre es uno de los agentes
etiológicos de osteomielitis, sinusitis, tonsilitis, nefritis amigdalitis, estomatitis, enteritis,
forunculitis, mastoiditis, endocarditis y queratitis ulcerativa y participa como agente
secundario interviene en la viruela difterica, angina séptica, escarlatina, tuberculosis y
neumonía.
Es un microorganismo contagioso habitante de la piel y mucosas de animales y el
hombre, es una bacteria oportunista de la flora cutánea que se reproduce
intensamente en la piel cuando las circunstancias son favorables; en caso de trastorno
metabólico, manifestaciones eczematosas o lesiones cutáneas locales. El cuadro
clínico es muy variado, desde la epidermitis superficial con la formación de pústulas
hasta la piodermis profunda con fístula.9
Desde el punto de vista sanitario la mastitis séptica siempre origina leche contaminada
lo cual constituye un riesgo potencial para la población, al estar expuesta al consumo
de leche con antibióticos, que representan productos en cierto modo tóxicos y
aleargénicos para el consumidor o generar resistencia antimicrobiana por la exposición
continua a estos fármacos.
Ciertas cepas de S. aureus liberan exotoxinas (enterotoxinas) las cuales son
termoresistentes, por tanto no son destruidas por la pasteurización. La ingestión de
éstas luego de 2 a 8 horas demuestra un cuadro caracterizado por vómitos, diarreas,
nauseas, cólicos y postración, raras veces es fatal.9
El uso indiscriminado a través de los años de los fármacos utilizados para la
terapéutica antimicrobiana ha inducido la aparición de microorganismos patógenos
multiresistentes, ocasionando en algunos casos fracaso terapéutico que puede incluso
causar la muerte del animal. En el caso particular de los patógenos mamarios a nivel
internacional han demostrado un aumento de la resistencia bacteriana a los
antimicrobianos de uso habitual en la mastitis. El problema de la multiresistencia
bacteriana se agrava aun más si se considera que investigaciones tanto clínicas como
epidemiológicas demuestan que cada vez son menos las barreras para la transferencia
de genes de resistencia entre microorganismos patógenos, incluso entre bacterias de
géneros y familia diferentes como también la transferencia horizontal de bacterias
resistentes de los animales al hombre viceversa.13
.
VII.- HIPOTESIS
En las 6 fincas objeto de estudio habrá un 40% de Staphylococcus aureus del total de
microorganismos aislados en vacas con mastitis subclínica
VIII.- DISEÑO METODOLÓGICO 1.- Tipo de Estudio El estudio aplicado en la investigación es descriptivo de tipo transversal.
2.- Área de Estudio Se realizo en 6 fincas dedicadas a la producción intensiva y semintensiva de leche,
ubicadas en diferentes puntos de la zona peri urbana de la ciudad de León, Nicaragua.
3.- Población y Muestra Debido a que en nuestro estudio buscábamos características específicas la población
se redujo hasta llegar a ser la misma que la muestra. La elección de la muestra es de
tipo No probabilístico por conveniencia, seleccionándose 248 vacas distribuidas en los
6 hatos lecheros; para ello se tomaron en cuenta los siguientes criterios:
Doble ordeño
Tipo de explotación (intensiva o semintensiva)
Producción superior a 2.5 litros
Ubicación de las fincas
Accesibilidad geográfica
Disponibilidad económica
Aceptación e interés mostrado por los propietarios en la participación de la
investigación.
Para obtener la información se realizaron visitas periódicas a los diferentes hatos
lecheros utilizándose como método para recolectar la información la observación
participante; haciéndose inspección de la higiene de la sala de ordeño, de ordeñadores,
vaca, la rutina de ordeño. Posteriormente se realizo CMT a cada una de las vacas
luego recolectándose muestras de leche para realizar cultivo bacteriológico,
antibiograma y fingerprinter (PHP).
4.- Técnicas de Procedimiento: Para diagnosticar mastitis subclínica se realizo Test de California.14
Teniendo como referencia los siguientes rangos de células somáticas según el grado
de reacción.
CMT Tipo de Reacción RCS
Negativo Mezcla permanece
líquida < 200.000
Trazas Ligeramente Viscosa 150.000 – 400.000
1 Mezcla viscosa 500.000 – 1.500.000
2 Viscosidad franca 1.600.000 – 5.000.000
3 Gel adherido al fondo > 5.000.000
Fingerprinter: Se refiere a identificación por medio de huellas digitales o de los dedos, basado en el
metabolismo bacterial y características fisiológicas o bioquímicas de varios sustratos.
El Phene Plate System es un sistema automatizado para la subtipificación simple y
rápido de bacterias para estudios epidemiológicos, nosocomiales y ecológicos. El
sistema está basado en la evaluación de la cinética de reacciones bioquímicas
realizados en 96 microplacas. Las microplacas contienen 2-8 juegos de reactivos
deshidratados que expresamente han sido seleccionados para varios grupos de
microorganismos. 15
Todas aquellas vacas en las cuales al menos un cuarto resultó positivo al CMT fueron
diagnosticadas con mastitis subclínicas.
Una vez diagnosticadas se tomó una muestra de leche de los cuartos afectados para
realizar el cultivo bacteriológico correspondiente a fin de identificar y determinar la
sensibilidad bacteriana IN VITRO de los microorganismos implicados. La toma de las
muestras de leche se realizó con medidas de asepsia y antisepsia para luego ser
remitidas al laboratorio de microbiología de la Facultad de Ciencias Médicas de la
UNAN-León para su posterior examen microbiológico.
5.- Plan de tabulación y análisis Los resultados obtenidos de las muestras tanto del CMT, cultivo bacteriológico y
fingerprinting se introdujeron en una base de datos creada en el programa SPSS
versión 12 donde se realizó un análisis de las variables expresado en tablas y gráficos
de distribución de frecuencia y porcentaje en el programa Microsoft Excel
IX.- RESULTADOS
De los 1004 cuartos muestreados a través de CMT se encontró un 52.09 % de casos
de mastitis. Anexo Gráfico 1.
De la misma población un 46.51 % resultó negativo a la prueba. Anexo Gráfico 1.
De igual manera el 1.4 % de cuartos resultaron improductivos. Anexo Gráfico 1.
De 418 muestras enviadas al laboratorio para realizar el análisis bacteriológico, no
hubo crecimiento en un 56.70 %, Staphylococcus aureus se aisló en un 33.73 %,
Tétradas en un 3.58 %, Streptococcus α-hemolítico en 1.67%, Streptococcus ß-
hemolítico del grupo “A” 1.91 % en igual porcentaje de Staphylococcus epidermidis,
Pseudomona y Enterobacter 0.24 %. Anexos Gráfico 2.
De los 181 microorganismos aislados un 77.90% fue S Aureus, 4.42% de S.
Epidermidis, 3.87% de Streptococcus α-hemolítico, 4.42% Streptococcus ß-hemolítico
del grupo “A”, Tétradas 8.29%, Enterobacter 0.55% y Pseudomona 0.55%. Anexos
Gráfico 3.
De 33.73% del total de microorganismos aislados que corresponde a 141
Staphylococcus aureus, se sometieron a antibiograma y resultó: 82.79% sensible y
17.21% resistente a Vancomicina, 79.2% sensible y 20.8% resistente a Oxacilina,
95.15% sensible y 4.85% resistente a Eritomicina, 95.28% sensible y 4.72% resistente
a Gentamicina, 83.33% sensible y 16.67% resistentes a Penicilina, 94.12% sensibles y
5.88% resistentes a Ceftriaxone, 95.18% sensibles, 4.82% resistentes a Ciprofloxacina,
97.92% sensible y 2.08% resistente a Norfloxacina y 93.44% sensible y 6.56%
resistente a Trimetroprim sulfa. Anexos Gráfico 4.
De 140 cuartos muestreados en la finca 1 utilizando CMT, 56.43% resultó con mastitis
subclínica, 13.57% mastitis clínica, 28.57% negativo y en 1.43% se observó cuartos
improductivos. Anexos Gráfico 5.
De 68 muestras obtenidas de vacas con mastitis subclínica de la finca 1 el 60.29% fue
negativo, en 29.41% hubo crecimiento de Staphylococcus aureus, 2.94% de
Staphylococcus epidermidis, 2.94% de Tétradas y 1.48% de Pseudomonas. Anexos
Gráfico 6.
En el antibiograma realizado en la finca 1 utilizando: Vancomicina resultó 52.63%
sensible y 47.36% resistente, Gentamicina 78.95% sensible y 21.05% resistente,
Ciprofloxacina 78.95% sensible y 21.05 resistente, Penicilina 73.68% sensible y
26.32% resistente, Oxacilina 65% sensible y 25% resistente, Ceftriaxone 78.95%
sensible y 21.05% resistente y Trimetroprim sulfa 71.43% sensible y 28.57% resistente.
Anexos Gráfico 7.
En la finca 2 se muestrearon 212 cuartos a través de CMT, 59.43% resultó con mastitis
subclínica, 7.08% mastitis clínica, 32.08 dió negativo al test y en 1.41% se observó
cuartos improductivos. Anexos Gráfico 8.
De 90 muestras tomadas de vacas con mastitis subclínica en la finca 2 el 90% resultó
negativo, en 4.45% creció Staphylococcus aureus, en 2.22% creció Staphylococcus
epidermidis, en 1.11% Streptococcus α hemolítico, 1.11% Streptococcus β hemolítico
y 1.11% Tétradas. Anexos Gráfico 9.
Al realizar antibiograma a S. aureus aislados de muestras de la finca 2 utilizándose
sensidiscos de: Vancomicina, Gentamicina, Ciprofloxacina, Penicilina, Oxacilina,
Eritromicina y Ceftriaxone hubo sensibilidad de un 100% en todos los antibióticos antes
descritos. Anexos Gráfico 10.
Los cuartos muestreados en la finca 3 fueron 172 utilizando CMT, de los cuales 20.35%
resultó con mastitis subclínica, 0% de casos clínicos, en 77.91% no hubo reacción a la
prueba, y 1.74% de cuartos improductivos. Anexos Gráfico 11.
De 22 muestras tomadas de vacas con mastitis subclínica en la finca 3 el 59.09%
resultó negativo, en 27.27% creció Staphylococcus aureus y Tétradas en 13.64.
Anexos Gráfico 12.
Al realizar antibiograma a S. Aureus aislados de muestras de la finca 3 utilizándose
sensidiscos de: Acido nalidíxico, Eritromicina, Oxacilina, Penicilina, Vancomicina,
Gentamicina, Ciprofloxacina, Ceftriaxone, Trimetroprim sulfa, Cefalexina hubo
sensibilidad de un 100% en todos los antibióticos antes descritos, y 100% resistencia a
Nitrofurantoína . Anexos Gráfico 13.
Los datos que se obtuvieron de 32 cuartos muestreados en la finca 4 utilizando CMT
son: 62.50% con mastitis subclínica, 0% de clínicas, 37.50 negativos y 0% de casos
improductivos. Anexos Gráfico 14.
De 21 muestras tomadas de vacas con mastitis subclínica en la finca 4 el 47.62%
resultó negativo, en 28.57% creció Staphylococcus aureus, en 4.76% Staphylococcus
epidermidis y Tétradas19.05%. Anexos Gráfico 15.
En la finca 4 se obtuvieron datos de sensibilidad en un 100% de S Aureus a los
siguientes antibióticos: Vancomicina, Gentamicina, Trimetroprim sulfa, Penicilina,
Ceftriaxone y Ciprofloxacina. En Eritromicina 66.67% sensible y 33.33% resistente.
Anexos Gráfico 16.
De 196 cuartos muestreados en la finca 5 utilizando CMT, resultó 39.29% con mastitis
subclínica, 0% clínica, 59.18% negativos y 1.53 de cuartos improductivos. Anexos
Gráfico 17.
De 74 muestras tomadas de vacas con mastitis subclínica en la finca 5 el 77.03%
resultó negativo, en 5.41% creció Staphylococcus aureus, en 2.70% Staphylococcus
epidermidis, en 2.70% Streptococcus α hemolítico, 9.46% Streptococcus β hemolítico,
1.35% Tétradas y 1.35% Enterobacter. Anexos Gráfico 18.
Al realizar antibiograma en la finca 5 hubo 100% de sensibilidad a: Eritromicina,
Gentamicina, Vancomicina, Ciprofloxacina, Trimetroprim sulfa y Oxacilina, resistencia a
Penicilina en 33.33% y sensibilidad en 66.67%. Anexos Gráfico 19.
En la finca 6 donde se muestrearon a través de CMT 252 cuartos, 60.32% resultó con
mastitis subclínica, 0% de clínicas, 38.49% negativos y 1.19% improductivos. Anexos
Gráfico 20.
De 143 muestras obtenidas de vacas con mastitis subclínica de la finca 6 el 24.48%
fue negativo, en 70.62% hubo crecimiento de Staphylococcus aureus, 0.70% de
Staphylococcus epidermidis, 1.40% de Streptococcus α hemolítico y 2.80% de
Tétradas. Anexos Gráfico 21.
Los resultados obtenidos a través del antibiograma de S. aureus en muestras tomadas
de la finca 6 fueron: Ciprofloxacina y Trimetroprim sulfa 100% de sensibilidad,
Vancomicina 85.71% de sensibilidad y 14.29% de resistencia, Ceftriaxone 98.08% de
sensibilidad y 1.92% de resistencia, Penicilina 82.61% de sensibilidad y 17.39% de
resistencia, Eritromicina 96.51% de sensibilidad y 3.49% de resistencia, Gentamicina
98.65% de sensibilidad y 1.35% de resistencia, Oxacilina 80% de sensibilidad y 20% de
resistencia, Norfloxacina 97.92% de sensibilidad y 2.08 de resistencia. Anexo Gráfico
22.
Haciendo comparación de datos obtenidos a través de CMT en el año 2004 con datos
del 2006 encontramos: 28.8% de mastitis en el 2004 y 52.1% en el 2006, 70.7% en el
2004 y 46.5% en el 2006 negativos al test e improductivos 0.5% en el 2004 y 1.4 en el
2006. Anexos Gráfico 23.
Se hizo una comparación de mastitis subclínica y clínica de las diferentes fincas y los
resultados fueron: 62.50% de subclínica y 0% clínicas en la finca 4, en la finca 6
subclínica 60.32% y clínica 0%, en la finca 2 subclínica 59.435 y 7.08% de clínicas,
56.43% de subclínicas y 13.57% de clínicas en la finca 1, en la finca 5 subclínica
39.29% y 0% de clínica y en la finca 3 subclínica 20.35% y clínica 0%. La Media
Internacional Aceptable de mastitis subclínica es del 10 al 12 %, sería ideal que las
fincas estuviesen por debajo de ésta sin embargo, la media de las fincas es de 48%. La
Media Internacional de Mastitis clínica es del 5%, encontrándose la mayoría por debajo
de ésta. Anexo Gráfico 24.
X.- DISCUSIÓN DE RESULTADOS
De 418 muestras que se sometieron a cultivo en el 56.70% no hubo crecimiento esto se
atribuye a que las pruebas microbiológicas no son 100% exactas, los resultados
dependen de algunas variables entre ellas:
Que el microorganismo causal no era bacteria y por ello necesitarían cultivos
especiales para su crecimiento, que se estuviese eliminando intermitentemente o fuera
inactivada por los mecanismos de respuesta del huésped. Que haya sido contaminada
con otros microorganismos que inhiban el crecimiento del S. aureus.
Con respecto al crecimiento bacteriano de los resultados obtenidos, una vez más se
comprueba que dentro de los principales gérmenes encontrados en casos de mastitis
subclínica está el S. aureus. Anexos Gráficos 2 y 3.
Al hacer comparación de CMT de este estudio con el anterior (2004) en la misma
población, hubo un aumento de 28.3% en el número de casos de mastitis subclínica,
esto se puede deber a un fallo en los planes de control y prevención. Además hubo una
disminución en un 24.19% de los casos que dieron negativo al test, ya que son
inversamente proporcional a los positivos. Con relación a los cuartos improductivos se
observó 0.9% más que en el estudio anterior, con esto se podría concluir; que las
subclínicas no tratadas debidamente evolucionaron a clínicas y éstas a su vez a
improductivas. Anexos Gráfico 23.
Se considera que la media de las fincas está por encima de la Media Internacional de
mastitis subclínica debido al déficit sanitario de las explotaciones, inadecuado manejo,
diseño de instalaciones que existe en las diferentes fincas de nuestro medio. Como la
mastitis clínica presenta síntomas y pérdidas económicas detectables, el productor
hace énfasis en su tratamiento es por ello que quizás este tipo de mastitis se mantenga
por debajo de la media internacional. Anexos Gráfico 24.
La finca 4 presenta mayor porcentaje de cuartos con mastitis subclínica, se atribuye al
manejo inadecuado y a la ausencia de higiene pre y post ordeño así como de las
instalaciones equipos y ordeñador. La finca donde se presentó menos casuística de
mastitis subclínica fue la nº 3 en donde se practica una adecuada rutina de ordeño,
higiene del medio, personal además por la genética del hato. Donde se presentó mayor
número de casos clínicos fue en la finca 1 consideramos que se debe al uso irracional
de medicamentos sin previa prescripción medica y mal uso de estos. El mayor
porcentaje de cuartos improductivos está en la finca 5 puede deberse a que el
microorganismo causal no sea una bacteria o sea difícil controlar, por ello evolucionan
a improductivos. Anexos Gráficos 5, 8, 11, 14, 17, 20 y 24.
De los 141 S. aureus aislados se encontró mayor resistencia en la finca 1, en un 24.87
% a todos los antibióticos utilizados en el antibiograma, esto es por el uso inadecuado
de antibióticos. Esta bacteria tiene el mayor porcentaje de resistencia a Vancomicina;
fármaco no empleado en Medicina Veterinaria. Anexos Gráfico 7.
El mayor porcentaje de resistencia bacteriana fue al antibiótico Oxacilina y en segundo
lugar de importancia la Vancomicina, que es una droga no empleada como tratamiento
en veterinaria, lo cual demuestra que cada vez son menos las barreras para la
transferencia de genes de resistencia entre microorganismos patógenos, como también
para la transferencia horizontal de bacteria resistentes del hombre a los animales y
viceversa.
XI.-CONCLUSIONES
La mastitis no debe ser tratada sino prevenida y controlada.
La leche contaminada proveniente de mastitis séptica constituye un riesgo potencial
para la población.
Hay un aumento en el número de casos nuevos de mastitis subclínica y por con
consiguiente el número de mastitis clínica y cuartos improductivos.
La presencia de Beta toxina es un factor coadyuvante a la aparición de cepas
formadoras de factores de adhesión.
Se rechaza la hipótesis nula y se admite la hipótesis alternativa debido a que
sobrepasó significativamente la relación porcentual inicial. Es superior en un 37 %.
XII.- RECOMENDACIONES
Teniendo en cuenta la importancia que tiene la mastitis subclínica, así como las
cuantiosas pérdidas que ocasiona en los hatos lecheros se sugiere:
Generar educación continua a los productores de la importancia de controlar la mastitis
haciendo énfasis en las pérdidas económicas que le trae como consecuencia.
Implementar programas de capacitación orientado a incrementar el nivel tecnológico de
la fincas.
Realizar programas de monitoreo del estatus sanitario del hato y de su resistencia
bacteriana, fomentando el uso racional de antimicrobianos en animales de producción.
Para decidir un tratamiento óptimo, con antibióticos más efectivos, identificar la especie
bacteriana a través de análisis bacteriológicos.
Realizar CMT a las vacas introducidas en el hato para conocer el estado de sus
glándulas mamarias.
Las instancias gubernamentales deberían aplicar leyes que conduzcan al pago de la
leche por calidad como incentivo al productor y de ésta forma disminuir el riesgo que
implica para la salud pública.
XIII.- BIBLIOGRAFIA
1. ARMENTEROS, MABELING. Situación de la mastitis bovina en rebaños
lecheros de los departamentos de Boaco y Chontales en Nicaragua.
www.veterinaria.org revista/redvet/n111104_ltm_243k.
2. ALBEITAR. (ZARAGOZA, ESPAÑA) Volumen nº 50/134. Mayo 2006, Nº 95,
56 pp. Eficacia de una vacuna comercial polivalente para la prevención de la
mastitis bovina.
3. BERRÍOS, ROGER. PERALTA, ALLAN (2004). Estudio epidemiológico de la
mastitis subclínica bovina en cuatro hatos lecheros del departamento de
León e identificación y sensibilidad antimicrobiana in Vitro de los agentes
etiológicos implicados.
4. BLOOD, D. C. [et.al]. (1992) Medicina Veterinaria. Editorial Mc-GRAW-HILL
INTERAMERICANA. Séptima edición, Tomo I. 539, 540, 542, 543, 558 pp.
5. BLOWEY, ROGER – PETER EDMONDSON (1995). Control de la mastitis.
Editorial Acribia S.A. Zaragoza, (España). 1, 2, 3, 4, 36, 37, 38 pp.
6. CARTER, G. R (1986). Fundamentos de bacteriología y micología
veterinaria. Acribia S.A. Zaragoza, (España DAHME E., WEISS (E) (1989)
Anatomía patológica espacial veterinaria. .Acribia S A Zaragoza. (España).
7. GUERRA RODRIGUEZ, VICTOR. La mastitis y sus pruebas diagnósticas en
campo. Distrito Federal, México.
www.ergomix.com/articulos_935GDL.htm93k
8. KRUZE J. La rutina de ordeño y su rol en los programas de control de
mastitis bovina. www.veterinaria.org/articulo/medico/veterinario volumen 30
n2 valdivia 1998.
9. LARA TORUÑO, MARIA EUGENIA. Perfil de resistencia de antimicrobianos
de staphylococcus aureus resistente a la Metilcilina, Marzo 2003, UNAN-
León Facultad de Ciencias Médicas.
www.minsa.gob.ni/bns/monografias/full_text/pediatria/perfil%20de%20resist.p
df .
10. LUCERO S, MARÍA AMPARO. Aspectos básicos sobre el desarrollo de
Mastitis. www.vet_uy agro y veterinaria.
11. PINEDA, ELIA BEATRIZ [et.al] Metodología de la investigación. Washington
D. C. 1994. OMS Segunda edición. 122, 149, 152, 157 pp.
12. PIURA LÓPEZ, JULIO (2000). Introducción a la metodología de la
investigación científica. Cuarta edición.
13. QUIÑONES, J. MARTÍN. Resistencia bacteriana en cepas patógenas
aisladas de mastitis en vacas lecheras de la V región, región metropolitana y
X ª región, Chile.
14. SARAN, ARTHUR – CHAFFER, MARCELO (2000). Mastitis y calidad de la
leche. Editorial Inter-médica S. A. I. C. I. Buenos Aires, Argentina.
15. www.phplate.se/infofiler
16. Heisig y col, 1995, Molbak y col, 1999.
ANEXOS
Tabla 1. Distribución de la población.
GRANJA NUMERO ANIMALES PORCENTAJE
1 40 16.12
2 45 18.14
3 8 3.22
4 37 14.91
5 58 23.38
6 60 24.19
Total 248 100%
Ubicación geográfica de las fincas objeto de estudio en el municipio de León.
52.09% 46.52%
1.39%
0
100
200
300
400
500
600
1
Gráfico 1. Resultados CMT del total de la población objeto de estudio (6 fincas)
PositivosNegativosImproductivos
n = 1004
56.70%
33.73%
1.91% 1.67% 1.91% 3.59% 0.24% 0.24%
0
50
100
150
200
250
Cuartos afectados
Nin
guno
Stap
hylo
cocc
usAu
reus
Stap
hylo
cocc
usep
ider
mid
is
Stre
ptoc
occu
s al
fahe
mol
itico
Stre
ptoc
occu
s be
tahe
mol
itico
del
gru
po¨A
¨ Tetra
das
Ente
roba
cter
ssp
.
Pseu
dom
ona
ssp.
Bacterias aisladas
Gráfico 2. Aislamiento Bacteriológico en 418 muestras de leche bovina diagnosticada con Mastítis Subclínica.
Gráfico 3. Distribución de crecimiento bacteriano a partir de leche bovina con mastitis subclínica
4%4%4%8%
78%
1%1%
Staphylococcus Aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus alfa hemolitico
Streptococcus beta hemolitico delgrupo ¨A¨Tetradas
Enterobacter ssp.
Pseudomona ssp.
n = 181
82,79%
17,21%
79,20%
20,80%
95,15%
4,85%
95,28%
4,72%
83,33%
16,67%
94,12%
5,88%
95,18%
4,82%
97,92%
2,08%
0,00%
10,00%
20,00%
30,00%
40,00%
50,00%
60,00%
70,00%
80,00%
90,00%
100,00% 93,44%
6,56%
Van
com
icin
a
Oxa
cilin
a
Erit
rom
icin
a
Gen
tam
icin
a
Pen
icili
na
Cef
triax
one
Cip
roflo
xaci
na
Nor
floxa
cina
Trim
etro
prin
sul
fa
Antibióticos utilizados
Gráfico 4. Sensibilidad antibacteriana in vitro del S. aureus como causante de mastitis subclínica bovina
Sensibilidad
Resistencia
56.43%
13.57%
28.57%
1.43%
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Subclínicas Clínicas Negativos Improductivos
Gráfico 5. Resultados CMT de la finca N° 1
n = 140
Gráfico 6. Aislamiento bacteriológico en muestras de leche bovina diagnosticada con mastitis subclínica en la finca 1.
3%3%
1%
61%
29%
3%
NegativosS. AureusS. EpidermidisStrep. Alfa hemolíticoTetradasPseudomonas
n = 68
65%
35%
52,63%
47,37%
78,95%
21,05%
78,95%
21,05%
78,95%
21,05%
78,95%
21,05%
71,43%
28,57%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
Oxacilina Vancomicina Gentamicina Ciprofloxacina Ceftriaxone Penicilina Trimetroprimsulfa
Antimicrobianos utilizados
de mastitis subclínica bovina en la finca 1Gráfico 7. Sensibilidad antibacteriana in vitro del S. aureus como causante
Sensibilidad
Resistencia
59.43%
7.08%
32.08%
1.41%
0
20
40
60
80
100
120
140
Subclínicas Clínicas Negativos Improductivos
Gráfico 8. Resultados CMT en la finca N° 2.
n = 212
Gráfico 9. Aislamiento bacteriológico en muestras de leche bovina diagnosticada con mastitis subclínica en la finca 2.
1% 2%1%
1%4%
91%NegativosS. AureusS. EpidermidisStrep. Alfa hemolíticoStrep. Beta hemolítico ¨A¨Tetradas
n = 90
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Vancomicin
a
Penicilina
Oxacilina
Ciproxacina
Ceftriaxo
ne
Eritromicin
a
Gentamicina
Antimicrobianos utilizados
Gráfico 10. Sensibilidad antibacteriana in vitro del S. aureus como causante de mastitis subclínica bovina en la finca 2.
SensibilidadResistencia
20.35%
0%
77.91%
1.74%
0
20
40
60
80
100
120
140
Subclinicas Clinicas Negativos Improductivos
Gráfico 11. Resultados CMT en la finca N° 3.
n = 172
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0% 0%
100%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Eritrom
icina
Penici
lina
Trimetr
oprim
sulfa
Ciprofl
oxac
ina
Gentam
icina
Ceftria
xone
Vanco
micina
Oxacil
ina
Cefazid
ina
Amoxici
lina
Acido N
alidíx
ico
Nitrofur
antoi
na
Antibióticos utilizados
Gráfico 13. Sensibilidad antibacteriana in vitro del S. aureus como causante de mastitis subclínica bovina en la finca 3.
SensibilidadResistencia
Gráfico 12. Aislamiento bacteriológico en muestras de leche bovina diagnosticada con mastitis subclínica en la finca 3.
59%
14%
27%
NegativosS. AureusTetradas
n = 22
62.50%
0%
37.50%
0%
Gráfico 14. Resultados CMT en la finca N°4
n = 320
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
Subclínicas Clínicas Negativos Improductivos
Gráfico 15. Aislamiento bacteriológico en muestras de leche bovina diagnosticada con mastitis subclínica en la finca 4.
47%
5%
19%
29%
Negativos S. Aureus S. Epidermidis Tetradas
n = 21
c
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
66,67%
33,33%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Vanco
micina
Gentam
icina
Trimetr
oprim
sulfa
Penici
lina
Ceftria
xone
Ciprofl
oxac
ina
Eritrom
icina
Antimicrobianos utilizados
Gráfico 16. Sensibilidad antibacteriana in vitro del S. aureus como causante de mastitis subclínica bovina en la finca 4.
SensibilidadResistencia
39.29%
0%
59.18%
1.53%
0
20
40
60
80
100
120
Subclinicas Clinicas Negativos Improductivos
n = 196
Gráfico 17. Resultados CMT en la finca 5
Gráfico 18. Aislamiento bacteriológico en muestras de leche bovina diagnosticada con mastitis subclínica en la finca 5.
78%
5%3%3%9%
1%
1%
Negativos S. Aureus S. Epidermidis
Strep. Alfa hemolítico Strep. Beta hemolítico ¨A¨ TetradasEnterobacter
n = 74
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
100%
0%
66,67%
33,33%
100%
0%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Vanco
micina
Trimetr
oprim
sulfa
Oxacil
ina
Ciprofl
oxac
ina
Eritrom
icina
Penicil
ina
Gentam
icina
Antimicrobianos utilizados
Gráfico 19. Sensibilidad de S. aureus causante de mastitis subclínica en la finca 5.
SensibilidadResistencia
60.32%
0%
38.49%
1.19%
0
20
40
60
80
100
120
140
160
Subclinicas Clinicas Negativos Improductivos
Gráfico 20. Resultados CMT en la finca 6
n = 252
Gráfico 21. Aislamiento bacteriológico en muestras de leche bovina diagnosticada con mastitis subclínica en la finca 6.
1%1%3%
71%
24%
NegativosS. AureusS. EpidermidisStrep. Alfa hemolíticoTetradas
n = 143
80%
20%
96,51%
3,49%
86,71%
14,29%
98,65%
1,35%
98,08%
1,92%
97,92%
2,08%
82,61%
17,39%
100%
0%
100%
0%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Oxacil
ina
Eritrom
icina
Vanco
micina
Gentam
icina
Ceftria
xone
Norflox
acina
Penici
lina
Ciprofl
oxac
ina
Trimetr
oprim
sulfa
Antimicrobianos usados
Gráfico 22. Sensibilidad antibacteriana in vitro del S. aureus como causante de mastitis subclínica bovina en la finca 6.
SensibilidadResistencia
Gráfico 23. Comparación resultados de CMT, 2004 - 2006.
28.8%
52.09%
70.7%
46.51%
0.5% 1.4%
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Positivos Negativos Improductivos
2004
2006
n1 = 764
n2 = 1004
62.50% 60.32% 59.43% 56.43%
39.29%
20.35%
0% 0%
7.08%13.57%
0% 0%
0,00%
10,00%
20,00%
30,00%
40,00%
50,00%
60,00%
70,00%
Subclínicas Clínicas
Gráfico 24. Comparación de fincas con respecto a la Media Internacional Aceptable de Mastitis.
F4F6F2F1F5F3
Media de fincas Media Internacional Aceptable
protocolo Pruebas confirmatorias Nº Finca Ident Mannitol DNA Coagulasa1 F6 53 TD neg pos pos 2 F1 17 DD pos pos pos 3 F4 8 TD pos pos pos 4 F6 22 TI neg pos pos 8 F6 19 TI no creció6 F4 6 TI neg pos pos 7 F1 40 TD neg neg pos 8 F6 19 TI neg pos pos 9 F6 11 DD neg pos pos 10 F4 6 TD neg pos pos 11 F1 29 TI neg pos pos 12 F14 big cocci neg neg pos
13 F14 small cocci neg neg neg
15 F1 29 TI neg pos pos 16 F2 89 DI eg pos pos 17 F6 10 DD neg pos pos
n
18 F6 21 DI neg pos pos 8 F6 19 TI no creció
20 F2 29 DD neg neg pos 21 F5 26 DI pos pos pos 22 F4 7 DI pos pos pos 23 F4 6 DD neg pos neg 24 F6 20 DD neg pos pos 25 F2 34 DI neg neg neg 26 F5 TD pos pos pos
Comportamientos de las cepas S. Aureus mediante fingerprinter.