unidad v metabolismo del dna replicación de...
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UNIDAD V
METABOLISMO DEL DNA
Replicación de DNA
Facultad de Química, UNAM
1630 Genética y Biología Molecular
Durante el Ciclo celular se controla la replicación delDNA y la división de la célula
P-M-A-T
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Energía Química derivada de la hidrólisis de ATP
Enlaces fosfoanhídrido
Enlaces fosfoésterG0’ = -14 kJ/mol
G0’ = -30 kJ/mol
ATP + H2O ADP + Pi
La hidrólisis de ATP favorece termodinámicamente lasreacciones acopladas
Energía Química derivada de la hidrólisis de ATP
Muchas enzimas involucradas en el metabolismo del DNArequieren ATP.
• Tienen sitios de unión a ATP
• Tienen actividad de ATPasa
• Transducen la energíaquímica derivada de lahidrólisis de ATP a energíamecánica.
• Se refleja como cambiosconformacionales en laestructura de la proteína.
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Generalidades de la Replicación de DNA
La replicación de DNA es:
• Semiconservativa
• Semidiscontinua
• Bidireccional
• Dependiente de un cebador de RNA
Mecanismo semiconservativo de la replicación del DNA
Estructura del DNA
Doble Hélice
Cadenascomplementarias
¿Pruebas experimentales del mecanismo de replicación semiconservativo?
Hebras parentales Replicación Hebras hijas
Semiconservativo
Conservativo
Dispersivo al azar
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Experimento de Meselson y Stahl
Separación de DNA porcentrifugación en gradiente deCsCl
Alimentar cultivode E. coli confuente de 15N ypurificar el DNA
Se deja otro ciclode replicación
Experimento de Meselson y StahlComprobación del mecanismo semiconservativo de Replicación
Consistente conun mecanismosemiconservativo
DNA (15N)DNAhíbrido
(15N/14N)
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La replicación del DNA es semidiscontinua
Síntesis continua requiereque las DNA polimerasassintetizen DNA de 5’->3’ yde 3’ a 5’
Síntesis semidiscontinuapredice que una cadena sesintetiza en forma continuay la otra en formadiscontinua.
3’3’
3’
5’
5’
5’
Como la dirección de síntesis de la cadena discontinua esopuesta a la dirección de apertura de la horquilla, se
comienza una nueva cadena.
En cambio, la cadena continua simplemente se sigueelongando
Reiji Okazaki
*
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3’3’
3’
5’
5’
5’
5’
5’
5’
3’
3’
3’
Como la dirección de síntesis de la cadena discontinua esopuesta a la dirección de apertura de la horquilla, se
comienza una nueva cadena.
En cambio, la cadena continua simplemente se sigueelongando
Reiji Okazaki
*
*
Durante la replicación del DNA se sintetizan fragmentos quevarían entre 1000 a 2000 nucleótidos
Replicación semidiscontinua:Una hebra se sintetiza en forma continua y la otra discontinua
Cadena adelantada (leading)/ Cadena retrasada (lagging)
Estos fragmentoscorrsponden a la cadenadiscontinua.
Se llaman fragmentos deOkazaki.
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¿Es la replicación del DNA unidireccional o bidireccional?
En bacterias, que tienen genoma circular cerrado
Replicación del DNA de E.coli por 1.5 generacionesen presencia denucleótidos marcados
Autoradiografía
Demostración experimental de que la replicacióndel DNA es bidireccional
Experimento de Gyurasits y Lake
DNA de Bacillus subtilis (ventajas?)
Pulso de baja intensidaden el inicio
Pulso de alta intensidad
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Resultados del Experimento de Gyurasits y Lake
La replicación de DNA requiere de la síntesis de RNA
• El antibiótico rifampicina inhibe lareplicación del DNA de fago M13cuando se usa un extracto de E. colicomo fuente de enzima.
• La DNasa no hidrolizacompletamente los fragmentos deOkazaki. Deja cadenas de 10 a 12oligonucleótidos de largo.
• La naturaleza de losoligonucleótidos es RNA.
• La síntesis de DNA requiere sercomenzada por cebadores de RNAque luego son elongados por la DNApolimerasa.
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Topología del DNA y Topoisomerasas
La naturaleza de doble hebra del DNA tiene variasimplicaciones para su función biológica:
La Replicación se parece facilitar ya que lainformación genética está codificada por duplicado enla estructura del DNA.
También, las limitaciones impuestas por la naturalezade doble hélice en el DNA implica que muchoseventos que involucran desenrollamiento (relajación)causan tensión en la molécula.
El DNA puede pasar de una formasuperenrollada a una forma más relajada
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Las distintas formas de enrollamiento de un DNA sepueden resolver por electroforesis en geles de
agarosa
El DNA superenrolladomigra másrapidamente que unamolécula relajada delmismo tamaño.
El DNA separadosolamente difiere ensu topología, por loque a las distintasformas se les llamatopoisómeros.
Aunque los cromosomas eucariontes son lineales, formanasas de DNA que están unidas a la matriz nuclear.
Estas asas representan dominios topológicos que sonequivalentes a los dominios de DNA circular.
Muchos eventos metabólicos del DNA requieren la apertura de la doble hélice.
• La apertura de la doble hélice está restringida puesto que lashebras que se separan no tienen rotación libre. Eldesenrollamiento de las dos hebras se convierte en un eventotopológicamente imposible.
• A un segmento de DNA que está constriñido en la rotación delos extremos, se le llama dominio topológico.
• Un ejemplo canónico de un dominio topológico es un DNAcircular, que es típico del genoma de bacterias, mitocondria,cloroplastos y los plásmidos.
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Mecanismo de la TopoisomerasaUna cadena de la doble hélice es cortada y la enzimapermanece unida covalentemente al fosfato en el extremo 5’.
La hebra intacta del DNA pasa a través del corte y la enzimavuelve a formar el enlace fosfodiéster.
Relación entre las propiedades de lareplicación de DNA y las enzimas que lo
realizan
¿Cómo se unen los fragmentos de Okazaki?
¿Cómo es reconocido el origen de replicación?
¿Cómo se separan las dos hebras de DNA?
¿Cómo se mantienen las dos hebras separadas?
¿Qué enzima sintetiza el cebador de RNA?
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La replicación de DNA comienza en una zona definidadel genoma llamada origen de replicación
En Escherichia coli el locus oriC es de 245 pb
La secuencia del origen de replicación en procariontesestá altamente conservada
El origen de replicación en procariontes es muyconservado
GATC: Sitios de reconocimiento Metiltransferasa Dam
4 cajas dnaA (nonámeros)
3 repeticiones de 13 nucleótidos/ Región donde comienza aabrirse el DNA (65 – 70% A + T) Región P1
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1. La proteína HU causa torsiones en el DNA y facilita su unión ala proteína DnaA
Reconocimiento del oriC
Región P1 Cajas dnaA
Reconocimientodel origen
Complejo ATP-DnaA
Desdoblamiento
2. La unión del complejo HU-ATP-DnaA desestabiliza la doblehélice en la región P1
Complejo ATP-DnaA
Desdoblamiento
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Proteína Dna A
• Tiene una muy alta afinidad por ATP y lo hidrolizalentamente a ADP en una forma dependiente deDNA.
• Actúa como regulador de la iniciación.
• Se une con alta afinidad y de forma cooperativa alas cajas dnaA de oriC. Aprox. 30 subunidades deDnaA por origen de replicación.
• Se une a DNA de cadena sencilla.
• Facilita la unión de la helicasa al origen dereplicación.
3. Unión de DnaB a la región abierta del DNA.
Translocación de laHelicasa y Unión de laprimasa
Primasa
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Proteína DnaB. HelicasaForma un homohexámero.
Tiene dominios que se requierenpara:•Unión a DNA de cadena doble• Activación de la primasa• Hidrólisis de ATP
La helicasa rodea una de las hebras delDNA duplex y se desplaza logrando laapertura de la doble hélica por exclusiónestérica.
Una hebra es excluida del canal interno,mientras que la otra hebra es retenida enel interior del anillo.
Proteína SSB “Single-strand binding”
La proteína SSB se une al DNA de cadena sencilla con altaafinidad y así previene que se vuelva a formar el híbrido DNA-DNA. Actúa de manera cooperativa con la actividad de helicasa.
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DnaG Primasa
La primasa sintetiza oligo-ribonucleótidos de 10 a 12 unidadesde longitud, usando rNTPs. Esdependiente de molde y lasecuencia corresponde al origen dereplicación.
El extremo 3‘ del últimoribonucleótido es extendido comoDNA por la acción de la DNApolimerasa. Se forma una unióncovalente entre RNA y DNA
INICIACION
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Una vez que el cebador está en su lugar comienza lasíntesis de DNA: ELONGACION
La actividad de DNA polimerasacataliza la adición de un dNTP alextremo 3’-OH de unpolidesoxinucleótidocomplementario al DNA molde.
Opera un mecanismo dedesplazamiento nucleofílico .
ELONGACION
DNA POLIMERASAS
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DNA polimerasa I (A. Kornberg)
Fue la primera DNA polimerasadescrita y caracterizada.
Representa la función de otras DNApolimerasas.
Enzima dependiente de molde (DNA)
Síntesis de una cadena de DNA endirección de 5’ 3’
Es un monómero de 102 kDaTiene 3 actividades:1. Polimerización DNA2. Actividad de exonucleasa 3’-> 5’3. Actividad de exonucleasa 5’ -> 3’
Fragmento Klenow de la DNA Pol I
324 520 928
Exo 5’-3’ Exo 3’-5’ Pol
N C
La FIDELIDAD se refiere alseguimiento exacto de la secuenciaque sirve como molde. En promedio,las DNA pols, 1 error por cada 108 nts
La actividad de exonucleasa 3’ 5’ dela DNA polimerasa contribuye a lafidelidad pues tiene actividadcorrectora (proofreading).
Hay dos propiedades importantes de las DNAPOLIMERASAS:
FIDELIDAD Y PROCESIVIDAD
La PROCESIVIDAD se refiere a la capacidad de una DNApolimerasa de elongar una cadena de DNA por muchos nucleótidosantes de disociarse del complejo que forma con el sustrato.
La DNA polimerasa I tiene una procesividad baja.
La DNA polimerasa III tiene una procesividad alta.
Competencia cinética entre la actividad de Polimerasa y de Exonucleasa
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Descubrimiento de la DNA polimerasa III
Mutantes de E. coli en el gen de Pol I son viables, por lo que la DNAPol I no es la principal enzima en replicación.
Sin embargo, en E. coli w.t.; por cromatografía de intercambio iónico,copurifica y enmascara otra actividad de DNA polimerasa.
Subunidad : 129 kDa, tiene actividad de DNA polimerasa
Subunidad : 27.5 kDa, tiene actividad de exonucleasa 3’ 5’
La DNA polimerasa III está compuesta por muchassubunidades distintas. Holoenzima Pol III
La DNA polimerasa III requiere de la subunidad para incrementar su procesividad
Cuando se une la subunidad se incrementa la procesividad dela DNA pol III de 10 nts. a mas de 50,000 nts. Así, puedesintetizar 1000 nts/seg.
La subunidad es el factor de procesividad y actúa como unaabrazadera o pinza móvil que se une al DNA.
Forma un homodímerofuncional compuesto por dossubunidades de 40.6 kDaque permanecen unidos aDNA circular cerrado.
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El ensamblado del complejo requiere la unión deATP que es hidrolizado durante el cargado de la
subunidad al DNA
En la DNA polimerasa III hay dos núcleos delelemento catalítico (core).
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Para que la DNA polimerasadimérica pueda sintetizar DNAsobre ambas cadenas, el molde deDNA de la cadena retrasada sedebe doblar unos 180o paraaparecer que va en la mismadirección que la cadenaadelantada.
Función de la DNA pol III dimérica
TERMINACIÓN DE LA REPLICACIÓN ENPROCARIONTES
Las dos horquillas dereplicación se aproximan a lamisma región que contienelas cajas Ter. Son secuenciasde 22 pb, tambien llamadossitios de terminación. Estánpresentes en tandem (seis)en forma invertida.
A estas secuencias se unenlas proteínas (TBP).
La presencia de estasproteínas de unión a DNAcausa que se detenga elavance de las horquillas.
TBP: Termination binding protein.Proteína de 36 kDa que afecta laactividad de la DNA helicasa(DnaB).
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TERMINACIÓN. Desenrrollamiento y Síntesisreparativa.
Las dos hebras duplex, productos de lareplicación están enrrolladas
La topoisomerasa IV contribuye a ladesnaturalización y descatenación de lashebras. Mutantes en el gene de TopoIVexhiben cromosomas que no se hanseparado totalmente.
Ocurre síntesis reparativa para llenar loshuecos
Función de la DNA polimerasa I en la replicación
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Función de la DNA ligasa en la replicación
1. Formación delintermediarioEnzima ATP
2. Transferenciadel adenilo al 5’-P
3. Formacióndel enlacefosfodiéster
La DNA ligasa de E. coli es una enzima de 75 kDa.
REPLICACIÓN DE DNA EN EUCARIONTES
En eucariontes, la replicación comienza en muchos sitios a lolargo de los cromosomas.
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Los orígenes de replicación de metazuarios no están definidos poruna secuencia específica, como el oriC.
Sino que consisten en:• Sitios de inicio de alta frecuencia• Sitios de inicio de baja frecuencia
Los orígenes de replicación se establecen durante la fase G1 delciclo celular y dependen de mucho parámetros:
• Estructura nuclear
• Contenido de G+C ([G+C], mayor que el resto del genoma)
• Modificaciones en el DNA. Baja metilación en G y C.
•Estructura de la cromatina. Histonas H3 metiladas y H4 acetiladas.
Permite modificar el número y localización de los orígenes de rep.
ELONGACIÓN EN EUCARIONTES
DNA POLIMERASAS
Se han identificado mas de 20 DNA polimerasas en eucariontes.
La mayoría participa en eventos de reparación de DNA.
Las DNA polimerasas replicativas son:
DNA polimerasa . Procesividad baja. Tiene actividad de primasa.
DNA polimerasa . Procesividad alta en presencia de PCNA.
DNA polimerasa . Procesividad alta. No requiere PCNA.
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Proliferating-Cell Nuclear Antigen (PCNA)
• PCNA es una proteína de 29kDa.
• Forma un trímero alrededor delDNA.
• Incrementa la procesividad dela DNA pol delta hasta 40 veces.
•Se ha demostrado su interacciónin vitro con mas de 50 proteínas.Entre ellas:
• Ciclina D1, cdk2 y el inhibidorde cdks
TERMINACIÓN EN EUCARIONTES
El dilema de los cromosomas lineales
Durante la terminaciónen procariontes, hayhidrólisis del cebadorpero el extremo 3’ de lacadena funciona paracebar la síntesis que asícompleta la cadena.
Sin embargo, en loscromosomas lineales deeucariontes, después deeliminar al cebador no hayforma de completar lasíntesis.
Esto implica que los cromosomas se irían acortando después decada ronda de duplicación
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TERMINACIÓN EN EUCARIONTES
El dilema de los cromosomas lineales. La Solución
Telomerasa. Enzima que adicionasecuencias cortas que se repitenen los extremos de loscromosomas. Telómeros.
Las secuencias repetidas varíanentre especies:
Tetrahymena TTGGGG
Humano TTAGGG
Paramecium TTGGGG
Trypanosoma TTAGGG
Arabidopsis TTTAGG
La telomerasa es una DNA polimerasa que utiliza RNAcomo molde
La telomerasa estácompuesta por dossubunidades:
• Subunidad catalítica(proteína)
• Subunidad de RNAasociada
Funciona como moldepara elongación deuna de las cadenas.
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Mecanismo de acción de la telomerasa
Mecanismo de acción de la telomerasa
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El resultado:
La telomerasa está presente encélulas embrionarias, pero encélulas somáticas su actividad esmuy baja.
METABOLISMO DEL DNA
Reparación de DNA
Facultad de Química, UNAM
1630 Genética y Biología Molecular
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El DNA puede ser dañado de muchas maneras, pero este dañosolamente conduce a una mutación cuando no es reparado.
• Daño: Se refiere a cambios químicos en el DNA.• Mutación: Se refiere a cambios en la secuencia de basesdel DNA.
Agentes físicos naturales que dañan al DNA.Radiación UV solar.
Formación de dímeros de timina.
Entrecruzamientocovalente de pirimidinasadyacentes en la mismacadena de DNA.Generalmente son timinas.
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Agentes químicos naturales que dañan al DNA.AFLATOXINAS
Formación de aductos covalentes con el DNA
Agentes químicos sintéticos que dañan al DNA.
EMS => Acetilación / Nitrosamina => Metilación
Metilación o acetilación de las bases en los átomos (O/N) queparticipan en la formación de puentes de H, desestabiliza ladoble hélice de DNA y hace esa zona susceptible a mutación.
La presencia de estas regiones dañadas puede causar detenciónde la replicación, o si ésta continúa, está sujeta a errores.
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Agentes físicos que causan daño al DNA.
Rayos X y rayos gamma.
Ionizan moléculas querodean al DNA generandoradicales libres, algunos deestos contienen oxígeno quetienen un electróndesapareado. Son especiesaltamente reactivas ypueden atacar la moléculadel DNA causando rupturasen una o en las doscadenas.
Los radicales libres que se forman también pueden modificarquimicamente una base, como la guanina.
Generación de 8-oxo-guanina. Causa transversiones: GC -> TA
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Tipos de mutaciones de pares de bases.
CATTCACCTGTACCAGTAAGTGGACATGGT
CATGCACCTGTACCAGTACGTGGACATGGT
CATCCACCTGTACCAGTAGGTGGACATGGT
Transición (T-A to C-G) Transversión (T-A to G-C)
CATCACCTGTACCAGTAGTGGACATGGT
Deleción o eliminación
CATGTCACCTGTACCAGTACAGTGGACATGGT
Inserción
Sustituciones de pares de bases transición: pirimidina a pirimidina transversión: pirimidina a purina
Secuencia silvestre
Cuando los daños no son reparados, se puedengenerar cambios en las secuencia de las basesdurante la replicación, por lo lo que se genera unamutación.
REPARACIÓN.
•Corrección directa del DNA dañado.
• Eliminación de la región dañada del DNA yrellenarlo con DNA recien sintetizado.
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Reparación Directa de Daños al DNA. Fotoreactivación
Sistema de reparación que se activa enpresencia de luz.
Fotoliasa. Detecta al DNA dañado y seune a éste. La enzima absorbe luz azul yse activa. Rompe los enlaces covalentesentre los dímeros de timina.
La enzima se disocia y se separa delDNA.
Reaccióndependientede FADH
Reparación de DNA por EsciciónImplica la remoción del DNA dañado y de secuencias adyacentestambién.
BER: “Base excision repair”
NER: “Nucleotide excision repair”
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Reparación de DNA por Escición de Nucleótidos (NER)
Escinucleasa uvrABC realizaeste tipo de reparación endímeros de timina, otrosfotoproductos y bases dañadas.
Escinucleasa (246 kDa) estácompuesta por tressubunidades (A, B y C)
UvrA se une al DNA en laregión dañada.
UvrB/UvrC tienen actividad deendonucleasa y corta en loslados adyacentes de la cadenaliberando un oligonucleótido deunos 12-13 nts de largo.
La región “vacía” es rellenadapor una DNA polimerasa I ysellada por una DNA ligasa.
• Cuando se expone E. colia altos niveles de radiacióno a un mutágeno, ocurreun daño extensivo en elDNA. La célula respondeinduciendo la vía SOS dereparación.• Se activan los genesumuC y umuD cuyosproductos componen lassubunidades de la DNApolimerasa V.• DNA PolV replica el DNA,aun en regiones donde haydaño y es muy propensa acometer errores.• Se observa una alta tasade mutación
• Cepas de E. coli nulas en umuC son inmutables.
Reparación sujeta a errores
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Reparación por escición de nucleótidos en eucariontes
1. Reparación global degenoma. El heterodímero XPC-hHR23B localiza lesiones quedistorsionan a la doble hélice deDNA.
2. Reparación acoplada ala transcripción. La RNApolimerasa identifica el dañoen el DNA. Se detiene latranscripción.
Reparación por escición de nucleótidos en eucariontesUna vez que se ha reconocido el daño, participana las mismas
proteínas en la reparación.
• TFIIH (XPB + XPD) que tieneactividad de helicasa es reclutado.
• XPA y RPA contribuyen a mantenerabierta la doble hélice de DNA.
• XPA guía a las endonucleasas pararealizar el corte del DNA.
• Endonucleasa XPG corta el DNA enel lado 3’.
• El complejo ERCC1-XPF corta dellado 5’ de la cadena dañada.
• El oligonucleótido (24-32nts) con laregión dañada es liberado.
• El hueco es rellenado por la DNApolimerasa o .
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Enfermedades asociadas con defectos en la replicación oreparación del DNA
Asociadas con una alta frecuencia de mutaciones en cromosomas ygenes. Algunas se asocian a una alta predisposición a tumores.
• Xeroderma pigmentosum•Mutaciones en genes involucrados en reparación por escición denucleótidos. Melanoma
• Ataxia telangiectasia• Mutaciones en genes que detectan daño al DNA.• Riesgo incrementado a rayos X.
•Anemia Fanconi.• Mutación en gene involucrado en reparación al DNA.
•Síndrome de Bloom.• Mutación en una helicasa de DNA.• Hipersusceptibilidad a rayos X y a la luz solar.
•Síndrome de Cockayne (CSA/CSB)• Defecto en reparación acoplada a transcripción.• Susceptibilidad a luz solar.
• Síndrome de Werner.• Mutación en un gen de DNA helicasa.• Envejecimiento prematuro.
Recombinación de DNA
1630 GENÉTICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR
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• RECOMBINACIÓN.Se refiere al rearreglo de la información en
moléculas de DNA e involucra lainteracción de dos moléculas de DNA.
• RECOMBINACIÓN HOMÓLOGA. Involucra elintercambio genético entre dos moléculas de DNA(o dos segmentos de la misma molécula de DNA)que comparten una región de secuenciashomólogas.
• RECOMBINACIÓN SITIO ESPECÍFICO. Involucra elintercambio genético en secuencias definidas deDNA (Ej. Integración del DNA de fago al genoma de E.coli)
• TRANSPOSICIÓN DE DNA. La inserción de unamolécula de DNA (transposón) en el cromosoma.
Mecanismos de la recombinación.
Para que ocurra la recombinación deben darse los siguienteseventos:
1. Ruptura de las dos cadenas de DNA homólogas
2. Apareamiento de las dos cadenas de DNA homólogas
3. Regeneración de los enlaces fosfodiester para unir lascadenas homólogas
4. Ruptura de las otras dos cadenas y volver a unirlas.
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Modelos de recombinación. Modelo de Holliday
Aunque el modelo deHolliday describe conprecisión los eventos queocurren, no explicaalgunos aspectos delmecanismo.
¿Cómo explicar queocurran dos cortes en lasposiciones exactascorrespondientes encadenas homólogas deDNA?
“Holliday junction”
Modelo de la vía RecBCD
• Proteína RecBCD:
• Corte en el extremo 3’ de lasecuencia “Chi”
• RecBCD también tieneactividad de helicasa.
• Unión de RecA y SSB al DNA
• Invasión y desplazamientodel DNA duplex.
• Formación del asa D
• Apareamiento en la regiónhomóloga.
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Modelo de la vía RecBCD
• Apareamiento en la regiónhomóloga.
• Corte en la cadenadesplazada
• Apareamiento.
•Sellado por la DNA ligasa
• RuvA + RuvB = Helicasadependiente de ATP.Desplazamiento de la rama.
• RuvC: Resolvasa, hace loscortes en las dos cadenas parala generación de las dosmoléculas de DNA duplexrecombinadas.
RecA y RecBCDSe identificaron en mutantes de E. coli que aceptaban el
plásmido F, pero eran incapaces de recombinarlo.
RecA es una proteína de 38 kDa. Promueve intercambio decadenas in vitro. Se distinguen tres etapas.
Pre-sinápsis. RecA se une alDNAss
Sinápsis. Alineamiento de lassecuencias complementarias queparticipan en el intercambio (50 –150 pb).
Post-Sinápsis. La cadena sencilladesplaza y reemplaza a la cadena(+) del DNA de doble cadena.
- + +
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Esta enzima tiene cinco actividades:
exonucleasa V; helicasa,endonucleasa; ATPasa yexonucleasa sobre DNAss
La actividad de helicasa genera asasgrandes antes de que el DNA sevuelva a renaturalizar.
Cuando RecBCD encuentra unasecuencai Chi, se disocia lasubunidad D y la la enzima RecBCactúa como helicasa para abrir elDNA en un evento dependiente deATP. Se realiza el corte en el DNA yse genera la cadena sencilla de DNAque es estabilizada por RecA y SSBpara iniciar el proceso derecombinación.
RecBCD
RuvA + RuvB. Desplazamiento de la rama.Estas proteínas se unen en cruce de Holliday y son lasresponsables del desplazamiento de la rama.
RuvA es un homotetrámero con simetría cuadrada plana quereconoce y se une al cruce de Holliday. Esto facilita la unión delhexámero RuvB. Helicasa dependiente de ATP, abre la cadenay la desplaza lo necesario para la migración de la rama.
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www.sdsc.edu/journals/mbb/ruva.html
Actividad de RuvA
RuvC Resolvasa.
Una vez que se han recombinado las cadenas y se handesplazado, debe ocurrir un corte para liberar el par de DNAduplex.
Hay secuencias consenso de reconocimiento:
5’- (A/T)TT (G/C)-3’