unidad iii ensayos confirmatorios 27 03 3º

Unidad III:

Pericias Químicas de Manchas de Sangre

Parte 3

Ensayos confirmatorios

1. Ensayo del Luminol

2. Pruebas microscópicas

3. Identificación espectroscópica

4. Identificación espectrofotométrica

5. Identificación cromatográfica

6. Transformación de porfirinas

7. Ensayos microcristalográficos


http://static.howstuffworks.com/gif/luminol-crimescene.jpg


Esta técnica es altamente sensiblea la presencia de manchas que hansido limpiadas.También se emplea para visualizarhuellas sanguinolentas de zapatosdejadas en la escena del delito.


• derivado del ácido ftálico (3-aminonaftilhidracina)

• sólido verdoso poco soluble

• reacción de quimioluminiscencia con peróxidos en presencia de complejos de Fe como catalizadores.

• usada para la visualización de manchastan diluidas que son invisibles al examenocular directo


Este producto puede ser preparado enel laboratorio ó bien adquirido en supreparación comercial.

Laboratorio: presenta la dificultad deser difícil de preparar y estabilizar.


Método

Altamente sensible

Específico

Permite tratar rápidamente grandessuperficies y localizar manchasinvisibles al examen ocular directo.

No interfiere en la ejecución deensayos similares.


Se aplica por aspersión sobre la zonadonde se cree puede existir un rastrode sangre, de donde viene su principalventaja: se puede aplicar en extensassuperficies, detectando sangre hasta anivel de trazas.

es una prueba inmunocromatográfica de confirmación dela presencia de trazas de sangre humana.Se comercializa como complemento de BLUESTAR®.Es una prueba muy simple de usar.DOS ó TRES minutos son suficientes para comprobar,si la traza revelada por BLUESTAR® es o no sangrehumana.

La hemoglobina humana (hHb), reacciona con unconjugado compuesto de partículas azuladas yanticuerpos monoclonales de hemoglobinahumana.

Hexagon OBTI®


• Puede usarse aún en manchas secas

• Método:

a.Tinción con colorantes hemáticosapropiados ( MG-G)

b.Observación al MO.

Dificultad: mamíferos: carnero, vacuno,equino.


MO sangre

Pruebas de aglutinación ( grupo y factor: GR intactos).

humana

animal

menstrual

vaso

mamífero

3.Identificación espectroscópica

• Método: comparación visual con unpatrón

• Coloración de la hemoglobina en medioácido

Hb hematina +HCl

• Método de Sahli:

Reactivo: HCl = 11,2 mlH2Od csp 1000 ml

reactivomuestra

4.Identificación espectrofotométrica

• Fundamento:

Hb MetaHb CianmetaHb

NaHCO3= 1gKCN = 0,05 gFeCNK= 0,2 g H2Od csp= 1000ml

reactivo de Drabkin

reactivomuestra

Filtro verde

540 nm


• Cromatografía sobre papel.

• Técnica resolutiva, específica,prácticay sensible.

• No interfieren: citocromos,herrumbre,oxidantes directos, sales metálicas

• Peroxidasa vegetales: se destruyenpor tratamiento térmico a 100º - 10 ‘


Cromatografía en capa delgadaMateriales: Placas de vidrio

Placas de Silicagel GLíquido resolutivo: MetOH- AcAc= 99:1Revelador: mezclar al momento de usar,volúmenes iguales de sol. de bencidina(acética o alcohólica) +H2O2 10 VolTécnica: se recomienda usar placascompradas.

7.Ensayos microcristalográficos

a. Modificación de Bertrand

MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml

Reactivo

flamear

5. Identificación cromatografica

Mancha: tratarla con 0,5 ml de H2Od,macerar hasta obtención del pigmentohemático

Machas antiguas: HCl 0,02N: hematina ácida.

Cromatografía ascendente

6. Transformación de porfirinas

Luz de Wood: filtro azul

fluorescencia

mancha

semen

H2SO4 c

fluorescencia

sangre


Fundamento: obtener derivados dedescomposición de la Hb de forma ycolor definidos realizando tratamientosadecuados con reactivos H+ o HO-


•Método de Teichmann: al tratar la muestra de sangre con AcAc aparecerán cristales castaños característicos

60 º


a. Modificación de Bertrand

MgCl2= 1gGlicerol= 5mlAcAc g= 20 mlH2O d= 1ml

Reactivo

flamear


b. Modificación de Nippe

KCl= 0,1gKBr= 0,1gKI=0,1gAcAc=100ml

Reactivo

flamear


c. Modificación de Bruno y Ross

FNa = 0,056g AcAcg = 100mlH2O d= 1ml

Reactivo

flamear

unidad iii ensayos confirmatorios 27 03 3º

Education