unidad ii. nutricio_n

8/19/2019 Unidad II. Nutricio_n

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NUTRICIÓN MICROBIANA

• La nutrición es el proceso por el que losmicroorganismos toman del mediodonde habitan las sustancias químicasque necesitan para poder llevar a cabo

la síntesis de sus componentes celularesindispensables para sus funciones vitales.

• Dichas sustancias se denominanN u t r i e n t e s o r e q u e r i m i e n t o s

nutricionales.

domingo 21 de febrero de 2016


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Nutrientes o requerimientos nutricionales

- Carbono

- Oxígeno- Hidrógeno- Nitrógeno- Fósforo- Azufre- Potasio

- Magnesio- Sodio- Calcio- Hierro

- Cromo

- Cobalto- Cobre- Manganeso- Molibdeno- Níquel- Selenio

- Vanadio- Zinc

- Vitaminas

- Aminoácidos- Purinas- Pirimidinas

Macronutrientes: Micronutrientes: Factores de crecimiento



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• Factores ambientales:

Para el desarrollo de un microorganismos además de los requerimientosnutricionales, existen un gran número de factores ambientales que influyensobre el crecimiento, supervivencia y actividades metabólicas de losmicroorganismos.

pH, temperatura, oxígeno, CO2 , presencia de agua líquida, presión atmosférica,etc.



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MEDIOS DE CULTIVO

• Son las soluciones de nutrientes utilizadas parael crecimiento de microorganismos en ellaboratorio.

• Los nutrientes existentes en el medio decultivo van a dar a la célula microbiana todos

los ingredientes requeridos para que produzcamás células semejantes a ella misma.

• Los microbios que se introducen en un mediode cultivo para que comiencen a crecer sedenominan inóculo.

• Los microbios que crecen y se multiplican enun medio de cultivo se denominan cultivo.



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• El agente solidificante en los medios de cultivos es el agar, que consiste en unpolisacárido complejo proveniente de un alga marina. El agar se licua a una temperatura

de alrededor de 100 ºC y se empieza a solidificar a una temperatura menor de 40 ºC.

• Los medios con agar suelen utilizarse en tubos de ensayo o cajas de Petri. Los tubos deensayo se denominan tubos de pico de flauta o inclinados cuando el medio se solidificamanteniendo el tubo en un ángulo adecuado para lograr una gran superficie para elcrecimiento. Cuando el agar se solidifica en un tubo de posición vertical, se denomina

profundo. Los cultivos en cajas de Petri, se realizan en placas poco profundas con una tapa que cubre perfectamente la base para evitar la contaminación.

• Utilidad de los medios de cultivo: Aislamiento de bacterias, Estudio morfológico de lascolonias, Conservación de cepas identificadas, Clasificación y tipificación de bacteriaspor estudio de sus propiedades bioquímicas en medios diferenciales, etc.



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Según su origen:

Según su composición:

• Naturales: preparados a partir de sustancias naturales de origenanimal o vegetal.

• Sintéticos: Contienen una composición química definida.

• Semisintéticos: Añaden factores de crecimiento bajo una formade extracto orgánico (extracto de levadura).

• Químicamente definidos o sintéticos: se conoce la composiciónquímica exacta de cada uno de los compuestos que hay en el

medio. (agar almidón)

• Indefinidos o complejos: no se conoce exactamente cuál es lacomposición del medio, se realizan a partir de extractosnaturales. (agar sangre, caldo lactosado, agar nutritivo)



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Según su función.

• Selectivo: favorecen el crecimiento de determinados

microorganismos (Agar McConkey, caldo verde bilis brillante, AgarEMB, Agar sal y manitol).

•Diferenciales: permite diferenciar una especie de otra,ambas en el mismo medio (Agar sangre, Agar citratoSimmons).

•Enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para elcrecimiento de una amplia variedad de microorganismos(caldo tetrationato, caldo selenito cistina).



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• Esterilización del medio y Técnica aséptica:

La forma más común de esterilizar los medios de cultivo es por calor. Dado

que el calor puede ocasionar cambios perjudiciales en muchos de ingredientesde los medios de cultivo, el tiempo de calentamiento debe ser tan corto comosea posible. El mejor procedimiento es el calentamiento bajo presión, losaparatos para calentar bajo presión se llaman autoclaves. Las condiciones parala esterilización en un autoclave son generalmente de 15 minutos a 121 ºC.

La técnica usada para evitar la contaminación durante las manipulaciones de loscultivos y de los medios de cultivo estériles se llama técnica aséptica.

Cuando las placas o tubos se abren deben manejarse de tal modo que loscontaminantes aéreos no penetren. La transferencia aséptica de un cultivo,desde un tubo con medio a otro, se acompaña normalmente del uso del asaque ha sido antes esterilizada por incineración a la llama.



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• En los cultivos que ha habido crecimiento sepueden transferir luego a la superficie de

placas con agar, donde se desarrollarancolonias como resultado del crecimiento ydivisión de la células aisladas que han sidosembradas.

• La toma y resiembra por extensión de unacolonia aislada es un método efectivo deobtener cultivos puros a partir de mezclascomplejas que contienen muchos organismos

diferentes.

Crecimiento de colonias confluentesal comienzo de la siembra por estría

2. Siembra en estrías

Se realiza una siembrapor estría en una placa deagar con medio estéril.

Después de una estría inicailSe hacen estrías en ángulo

Colonias aisladasal finalde la siembra por

estría

Se esteriliza el asa yluego se toma unamuestra del tubo



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• Técnica de cultivo de enriquecimiento.

En la técnica de cultivo de enriquecimiento se escogen condiciones en las quesólo se pueden crecer unos pocos microorganismos. Esta es una forma paraaislar un microorganismo deseado a partir de una mezcla o de una muestranatural.

¿Qué criterios debe satisfacer el medio de cultivo si se desea cultivar unmicroorganismo determinado?

- Debe contener los nutrientes adecuados para el microorganismo específico que sedesea desarrollar.

- Debe contener humedad suficiente, un pH ajustado de manera apropiada y unaconcentración conveniente de oxígeno.



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- El medio que se va a sembrar debe ser estéril, es decir, en un principio no debecontener microorganismos, de modo que el cultivo contenga sólo los microbios (y sudescendencia) que se agreguen al medio.

- Se inocula el medio con una muestra del material que se cree que contiene elorganismo, como tierra, agua, etc.

- Por último, el medio de cultivo sembrado debe incubarse a la temperatura correcta.

Algunos ejemplos de cultivos de enriquecimiento:

1.- Si se desea aislar de una muestra de suelo un microorganismo que puedecrecer en presencia de fenol y que se encuentra presente en cantidadesmucho más pequeñas que otras especies. Si la muestra de suelo se coloca en

un medio de enriquecimiento líquido en el que el fenol es la única fuente decarbono y energía, los microorganismos que no puedan metabolizar el fenolno se desarrollarán.



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2.- Los organismos fototróficos se pueden enriquecer utilizando mediosdesprovistos de cualquier fuente de energía, orgánica o inorgánica (pero conCO2 como fuente de carbono) e incubando los cultivos a la luz. Se pueden

emplear inóculos de agua de ríos, lagos, océanos o de tierra.

3.- Las bacterias litotróficas, capaces de utilizar el amoniaco, se puedenenriquecer preparando un medio con NH4 + como única fuente de energía eincubando en la oscuridad. El inóculo puede ser tierra, de aguas de albañal o

de lodo.4.- Los organismos que utilizan compuestos orgánicos como fuente de energíase pueden enriquecer preparando medios de cultivo los cuales el compuestoorgánico en cuestión es la única fuente de energía y de carbono. Por ejemplo,si nos interesa un organismo que pueda utilizar el herbicida 2,4-D (dado 2,4diclorofenoxia-cético) podríamos preparar un medio de cultivo en el cual el2,4-D fuera la única fuente de energía y de carbono.



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5.- Si se desean organismos capaces de crecer a altas temperaturas los cultivosde enriquecimiento se consiguen incubando a altas temperaturas.

6.- Si se desean organismos anaerobios, se pueden preparar cultivos deenriquecimiento desprovistos de O2.

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