TRIGLICRIDOS MONOREACTIVO

FINALIDADMtodo para la determinacin de los triglicridos. Prueba enzimtica colorimtrica, solamente para uso diagnstico in vitro.

PRINCIPIO DE ACCIN

Metodologa: Enzimtico colorimtrico

Triglicridos + H2O Lipoprotena Glicerol + cidos Grasos Lipasis

Glicerol + ATP Glicerol Kinase Glicerol-3-Fosfato + ADP Mg+

Glicerol 3 Fosfato + O2 Glicerol Fosfato Fosfato + H2O2 Oxidasis Dihidroxiacetona

2H2O2 + 4 Aminoantipirina + p-clorofenol Peroxidasis Cromgeno cereja + 4 H2O

El H2O2, 4 aminoantipirina y p-clorofenol, en la presencia de la peroxidasis, originan un compuesto de color cereza, cuya intensidad de color es proporcional a la concentracin de triglicridos.

TCNICA

Procedimiento ManualMarcar 3 tubos de ensayo: B (Blanco), M (Muestra), P (Patrn), y proceder como sigue:

BlancoPatrnMuestra

Muestra--------------10 L

Reactivo N 11,0 mL1,0 mL1,0 mL

R Reactivo N 2-------10 L -------

Homogenizar bien y colocar en bao mara 37C por 10 minutos. Leer la absorbancia de la Muestra y del Patrn en 500 nm (490-540 nm), acertando el cero con el Blanco. El color es estable por 30 minutos.

Procedimiento automticoLa mencin el manual o POE para el uso del equipo de anlisis. Coloque la programacin de los reactivos para el equipo automatizado.

REACTIVOS NECESARIOS

15 mL; 100 mL o 250 mL MonoreactivoBuffer PIPES50 mmol/L

4-clorofenol5 mmol/L

4-aminofenazona0.25 mmo/L

Iones de magnsio4,5 mmol/L

ATP2 mmol/L

Lipasas 1300 U/L

Peroxidasas 500 U/L

Glicerol kinasa 400 U/L

Glicerol 3-fosfato-oxidasa 1500 U/L

3 mL estndarTriglicridos200 mg/ dL o 2.28 mmol/L

EQUIPAMIENTOS E INSUMOS OPERACIONALES

Procedimiento Manual Equipamiento: Espectrofotmetro o colormetro Bao mara 37C Pipetas y tubos de ensayo Reloj o cronmetro Biocontrol x

Procedimiento automatizado Equipamiento: Aparatos automticos de bioqumica Biocontrol x

Inserte el nombre, modelo y ubicacin de los equipos, consulte el manual para su uso.

CLCULOS

Triglicridos (mg/dL) = Absorbancia de la muestra x 100 Absorbancia del patrn

Como la reaccin sigue la Ley de Lambert-Beer, el Factor de calibracin puede ser usado. Factor de = Concentracin del patrn (100 mg/dL)calibracin Absorbancia del patrn

mg/dL = Absorbancia de la muestra x Factor de calibracin

RESULTADOSUnidad de Medida: mg/dL Fator de conversin de Unidad (SI): mg/dL x 0,0113 = mmol/L

ACCIONES CORRECTIVAS Muestras com concentraciones superior deben ser diludas 1+4 com solucin salina (0.9%) y repetirse. Multiplicar los resultados por 5. Para corregir el glicerol libre, restar 10 mg/dL (o.11 mmol/L del valor de trigliceridos claculados.

MUESTRAS Suero obtenido libre de hemlisis (para evitar resultados falsamente elevados) o plasma con EDTA o heparina. El analito es estable durante 3 das entre 2 y 8C y 4 meses a -20C.

CONSIDERACIONES ESPECIALES Los reactivos se mantienen estables hasta la fecha de vencimento, an despus de abrir, si se almacena entre 2...8 C entre 20...25C, el RGT se mantiene estable por 4 semanas. Se debe evitar la contaminacin. Proteger de la luz.

Los reactivos contienen azida de sdio (0.05%) como preservativo. No ingerir. Evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas. No interfieren en la prueba valores de hemoglobina hasta 150 mg/dL o de bilirrubina hasta 150 mg/dL. Ascorbato > 4 mg/dL puede dar resultados falsamente bajos.

Solamente para uso diagnstico in vitro.

Seguir con rigor la metodologa propuesta para obtencin de resultados exactos.

El agua utilizada en la limpieza del material debe ser reciente e exenta de agentes contaminantes.

Columnas deonizadoras saturadas liberan agua alcalina, ones diversos y agentes oxidantes y reductores, que pueden alterar de forma significativa los resultados.

El nivel de agua en bao mara debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo.

Determinar el factor periodicamente y a cada lote del producto.

Se recomienda la aplicacin de la ley local, estatal y federal de proteccin ambiental para la eliminacin de reactivos y material biolgico se hace de acuerdo con la legislacin vigente.

VALORES DE REFERENCIA Los valores de referencia, en mg/dL, para el presente mtodo, fueron obtenidos a travs de la determinacin de triglicridos en poblaciones sanas de sexo masculino y femenino.Suero: menor que 160 mg/dL Para convertir los valores de mg/dL en mmol/L ( SI ) multiplicar por 0,0113. Estos valores deben ser usados como orientacin, siendo que cada laboratorio deber crear su rango de valores de referencia, de acuerdo con la poblacin atendida.

LINEALIDADLa prueba es lineal hasta concentraciones de triglicridos de 1000 mg/dL o 11.4 mmol/L

CONTROL DE CALIDADSe pueden utilizar todos los sueros control com valores de triglicridos determinados por este mtodo.

SIGNIFICADO DIAGNSTICOLos triglicridos, constituyentes de varias lipoprotenas, son encontrados en diferentes concentraciones y tienen grande importancia en la clasificacin y fenotipaje de las hiperlipoproteinemias. En varias patologas en que ocurre hiperlipidemia, los triglicridos solamente no se encuentran elevados en el Tipo IIa. Son verificados valores aumentados en varias patologas como en la diabetes, dolencias cardiovasculares, pancreatitis, sndrome nefrtica, uremia, hipotiroidismo, alcoholismo crnico. En procesos de seleccin, la dosificacin de los triglicridos, colesterol, la prueba de refrigeracin srica y otros parmetros pueden fornecer datos consistentes a la clasificacin y fenotipaje de las hiperlipoproteinemias.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS1-BUCOLO, G.; DAVID, H., Clin. Chem., 1973, 476.2 - TONKS, D. B., Quality Control in Clinical Laboratories, 1983.3 - MC GOWAN, M. W.; ARTISS, J. D.; STRANDBERGH, D. R.;ZAK, B., Clin. Chem., 1983, 29-538.4 - TRINDER, P.; Ann. Clin. Biochem, 1969, 6-24.5- Bioclin Dados de arquivo

NombreCargoFirmaFecha

Elaborado por:Hctor Daniel Sierra (Micrbilogo y Qumico Clnico, UNAH)Supervisor del rea de Anlisis Bioqumico.2/mayo/2014

Revisado y Aprobado por:Dra. Heydi Cabrera (Microbiloga y Qumica Clnica, UNAH)Jefe de Laboratorio Central, Secretara de Salud, Honduras. 4/junio/2014

Laboratorio SIERRAC POE Triglicridos Monorreactivo

Laboratorio SIERRACProcedimiento Operativo EstndarTRIGLICRIDOS MONEREACTIVOPgina 0 de 3POE-LS-GC-SBQ-0384Revisin: junio 2014

Revisin: junio 2014