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UNIVERSIDAD NACIONAL DE ENTRE RÍOSFacultad de Ciencias de la Alimentación

Ingeniería en Alimentos

Trabajo Práctico Nº2Citología I: Observación microscópica de células eucariotas

Objetivo: ofrecer adiestramiento en el manejo de microscopios ópticos mediante la observación de células sanguíneas (eucariotas) en un preparado en fresco y preparado fijado y teñido

a) observación de células sanguíneas (eucariotas) en un preparado en fresco

Fundamentos: Esta modalidad de preparados se observan con aumentos de 10x y 40 x y con mínima iluminación, debido a su tamaño y a su coloración propia, graduando la llegada de luz mediante el diafragma del condensador. Si la llegada de luz es demasiado intensa, encandila al observador y no se pueden ver detalles del preparado.

La muestra se extraerá del frasco en el cual se encuentra con una pipeta Pasteur (en ningún caso pipetear directamente), y se colocará sobre el portaobjetos apenas tocando este con la punta de la pipeta. Si al colocar el cubreobjetos sobre la muestra escapara muestra por los bordes será contenida con papel absorbente, el cual será desechado inmediatamente

Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos con una tonalidad rosada debido a la presencia de la hemoglobina que es una proteína coloreada. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes.

Cátedra de Biología 1



Los glóbulos blancos o leucocitos que también están presentes, aunque en mucha menor cantidad, no se identifican fácilmente por la ausencia de coloración propia.

Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.

Materiales:

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Muestra de sangre humana anticoagulada Gotero

Procedimiento:

1. Con movimientos suaves homogeneizar muy bien la muestra de sangre.

2. Depositar una gota pequeña de sangre en la parte central de un portaobjetos.

3. Colocar un cubreobjetos sobre la gota de sangre de manera que se pueda obtener una fina película de sangre, evitando que queden atrapadas burbujas de aire entre el portaobjetos y el cubreobjetos.

4. Secar cuidadosamente con papel absorbente la muestra que pueda haber escapado de los bordes del cubreobjetos.

5. Observar al microscopio. 6. Describir en forma escrita y gráfica la observación realizada.

b) Observación microscópica de células eucariotas en una muestra de sangre en un preparado fijado y teñido

Fundamentos:Esta modalidad de preparados se pueden observar con objetivos de

10x y 40 x, pero para lograr una mejor observación se coloca una gota de aceite de cedro en la zona del preparado que se quiere observar y allí se sumerge el objetivo de 100 x

Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. No tienen




núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes (disco bicóncavo). Diámetro 7 µm.

Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo, teñido de morado. Hay varias clases de leucocitos:

1. Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo, esférico y que en ocasiones deja ver apenas un borde de citoplasma de color azulado. Diámetro: 7 – 10 µm.

2. Monocitos: son los leucocitos de mayor tamaño, diámetro entre 15 – 20 µm. poco frecuentes, núcleo grande, redondo o pleomórfico, con citoplasma grisáceo.

3. Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o lobulado. Pueden ser eosinófilos, con abundantes granulaciones citoplasmáticas teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos con citoplasma ligeramente rosado, y basófilos con escasas granulaciones oscuras cubriendo núcleo y citoplasma. El diámetro oscila entre 12 – 15 µm.Las plaquetas son visibles, muy pequeñas, 2 – 3 µm, se observan teñidas de color rosado, dispuestas en forma aislada o en grupos.

Materiales: Microscopio Portaobjetos Mechero Cubeta de tinción Colorante May-Grunwald Colorante Giemsa

Procedimiento:7. Con movimientos suaves homogeneizar muy bien la muestra de

sangre. Cátedra de Biología 3



8. Depositar con una pipeta Pasteur una gota de sangre cercana a uno de los extremos del portaobjeto.

9. Apoyar otro portaobjeto formando un ángulo de 45° con el primero y deslizarlo sobre toda la superficie del portaobjeto de manera que se pueda obtener una fina película de sangre.

10. Dejar secar el frotis.11. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir

gotas de colorante May-Grunwald hasta cubrir la superficie. Dejar actuar 3 minutos. En esta etapa del método de tinción se produce la fijación por método químico de la muestra a observar, debido al alcohol metílico que se encuentra presente en la composición del colorante.

12. Agregar sobre el colorante algunas gotas de agua y mezclar soplando suavemente sobre el preparado, y dejar actuar durante 3 minutos. Evitar la desecación del colorante agregando más líquido. En esta etapa ocurre el proceso de tinción de los núcleos.

13. Volcar el colorante y agregar gotas de colorante Giemsa diluido hasta cubrir el preparado. Dejar actuar 15 minutos.

14. Lavar la preparación bajo el chorro de la canilla. 15. Dejar secar aireando el portaobjetos o bien al calor ligero de la

llama del mechero. 16. Observar al microscopio. 17. Describir en forma escrita y gráfica la observación realizada.

Cuestionario:

1. ¿Por qué los glóbulos rojos humanos, siendo células eucariotas no poseen núcleo?

2. ¿Qué ventajas y desventajas posee el preparado fijado y teñido frente al preparado en fresco?


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