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PROYECTO FONDEF DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO

INFORME FINAL COPIA Nº 1

TITULO DEL PROYECTO: DESARROLLO DE PROCESOS Y TECNOLOGIAS PARA EL DISEÑO Y DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE IMPORTANCIA COMERCIAL CÓDIGO DEL PROYECTO: MR07I1002 FECHA DE EMISION : 6/mayo/2013 FIRMA DEL DIRECTOR DEL PROYECTO:

Robert Simpfendörfer K.

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TABLA DE CONTENIDOS

I. ACTA DE TÉRMINO DEL PROYECTO. 1.1. IDENTIFICACIÓN DEL PROYECTO. 1.2. EJECUCION DEL PROYECTO. 1.3. TABLA DE CONFORMIDAD.

II. INFORME EJECUTIVO. 2.1. RESUMEN EJECUTIVO (CASTELLANO E INGLÉS). 2.2. CUADRO DE SÍNTESIS DE RESULTADOS Y DE OBJETIVOS. 2.3. INFORME FINANCIERO A LA FECHA DE TÉRMINO. 2.4. EVALUACIÓN DE LA EJECUCIÓN DEL PROYECTO. 2.5. PROPUESTA DE CONTINUIDAD DE CADA INSTITUCIÓN BENEFICIARIA.

III. INFORME DE GESTIÓN. 3.1. OBJETIVOS DEL PROYECTO.

3.2. RESULTADOS DEL PROYECTO. 3.3. GESTIÓN DEL PROYECTO.

IV. INFORME CIENTÍFICO TECNOLÓGICO Y ECONÓMICO SOCIAL. 4.1. INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO REALIZADOS POR EL PROYECTO. 4.2. NEGOCIOS TECNOLOGICOS Y PRODUCTIVOS. 4.3. IMPACTOS PRODUCIDOS Y ESPERADOS.

V. ANEXOS. ANEXO 1. EVALUACIÓN ECONÓMICA SOCIAL Y PRIVADA. ANEXO 2. PLAN DE MANTENCIÓN DE LA INFRAESTRUCTURA HABILITADA,

BIENES, EQUIPOS Y OTROS ELEMENTOS ADQUIRIDOS. ANEXO 3. SOLICITUDES Y REGISTROS DE PROTECCION DE PROPIEDAD

INTELECTUAL. ANEXO 4. PUBLICACIONES. ANEXO 5. DOCUMENTOS DE CONFORMIDAD DE lAS EMPRESAS (O DE OTRA

ENTIDAD SOCIA). ANEXO 6. <Nombre del nuevo anexo a incluir>.

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I. ACTA DE TÉRMINO DEL PROYECTO 1

1.1. IDENTIFICACIÓN DEL PROYECTO

TITULO DEL PROYECTO

DESARROLLO DE PROCESOS Y TECNOLOGIAS PARA EL DISEÑO Y DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE IMPORTANCIA COMERCIAL

CÓDIGO FONDEF MR07I1002

DIRECTOR(A) DEL PROYECTO

Robert Simpfendörfer Karow

INSTITUCIÓN(ES) BENEFICIARIA(S)

UNIVERSIDAD DE LOS LAGOS

EMPRESAS Y OTRAS ENTIDADES SOCIAS

Inversiones Patagonia SA., Aguas del Sur SA., Servimar Ltda.

1.2. EJECUCIÓN DEL PROYECTO 2

FECHA DE TOMA DE RAZON POR LA CONTRALORÍA GENERAL DE LA REPÚBLICA

1.abril.2008

PLAZO CONTRACTUAL (indicado en el convenio, en meses)

30 meses

FECHA EFECTIVA DE INICIO 2.mayo.2008 FECHA EFECTIVA DE TÉRMINO. 30.julio.2011 DURACIÓN EFECTIVA (desde la fecha efectiva de inicio hasta la fecha efectiva de término, en meses)

39 meses

1 Se solicita al(a la) Director(a) del Proyecto que responda esta sección con información oficial del proyecto. Esta acta debe ser firmada en el punto 1.3 por los representantes legales de las instituciones beneficiarias de FONDEF y por los representantes de las empresas y de las otras

entidades socias del proyecto. 2 Cualquier diferencia entre la duración contractual y la duración efectiva se explica por las prórrogas autorizadas.

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1.3. TABLA DE CONFORMIDAD 3

Nº Nombre Institución,

Empresa u Otra Entidad Socia

Nombre Representante Legal

¿Se adjunta Documento de Conformidad en Anexos? 4

1 Universidad de Los Lagos

Sr. Oscar Garrido A. Sí (Representante Legal y de la Repr. Institucional)

2 Inversiones Patagonia SA.

Sr. Armando Salinas Sí

3 Aguas del Sur SA. Sr. Andrés

Subercaseaux No*

4 Servimar Ltda. Sr. David Nash Sí

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6 * Se enviará aparte

prontamente.

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3 Sólo se debe incorporar a las instituciones beneficiarias, empresas u otras contrapartes que efectivamente hayan realizado aportes al proyecto, sean estos incrementales o no. 4 Los (las) Representantes Legales de cada institución beneficiaria, empresa u otra entidad socia del proyecto declaran estar en conocimiento y de acuerdo con el contenido total de este informe.

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II. INFORME EJECUTIVO

2.1. RESUMEN EJECUTIVO 5

Versión en castellano. El presente proyecto Fondef tuvo como objetivo central el investigar metodologías de detoxificación de toxinas tipo VPM (veneno paralizante) en 3 moluscos bivalvos vivos, de interés comercial (pesquería artesanal y mitilicultura), como lo son chorito, almeja y cholga. Se estudió procedimientos biológicos y fisico-químicos de detoxificación con el objeto de validar metodologías viables para el diseño y dimensionamiento de módulos de detoxificación aplicables industrialmente. El escenario inicial del proyecto era: (a) aumento de eventos FAN de A. catenella cada vez más hacia el norte desde la región undécima, alcanzando en repetidas ocasiones la isla de Chiloé hacia fines de la década de 2000; (b) impacto de FANs por A. catenella en mitilicultura de la 10ª Región; (c) superposición de intereses operativos entre salmonicultura y mitilicultura; (d) estudios en la Unión Europa de disminución de niveles máximos legales de toxicidad por VPM desde 80 a 7,5 µg eq.STX/100g. Este escenario genera requerimiento de investigación básica y aplicada en metodologías escalables de detoxificación de moluscos contaminados con toxinas marinas del tipo saxitoxinas. Se encontró durante la ejecución de este proyecto que factores biológicos como alimentación con microalga no tóxica impactó acelerando la cinética de detoxificación en los 3 especies de bivalvo: el porcentaje de disminución de la toxicidad VPM en chorito luego de 1 semana de detoxificación en presencia de alimentación con T-Isochrysis sp., fue de 45% en relación a toxicidad de organismos controles, 80% de disminución de toxicidad VPM total en almeja luego de 2 semanas de alimentación con Tetraselmis sp., y en cholga se obtuvo una toxicidad 48 % menor luego de alimentación con la microalga no tóxica T-Isochrysis sp. Los tratamientos estudiados que no ejercieron impacto en aumentar la detoxificación de toxinas tipo VPM en los 3 bivalvos, fueron nivel de oxigenación del agua, temperatura del agua (entre 12 y 18 grados C), salinidad del agua (entre 25 y 35 psu, 30 psu salinidad control), ciclos de inmersión-emersión de diferente duración. Para esto se analizó organismos obtenidos en el medio natural con contaminación con toxinas tipo VPM (FAN de A. catenella de marzo-abril 2009 en Chiloé) y con bivalvos intoxicados en el laboratorio con cepas de A. catenalla provenientes de cepario. Finalmente, con los resultados de detoxificacion obtenidos para cada especie de bivalvo vs condición óptima de detoxificación, se diseño un módulo de detoxificación de moluscos bivalvos contaminados con toxinas tipo VPM (en 2 variantes), para escalamiento a nivel industrial.

5 A partir del proyecto ejecutado, en no más de una página describa lo realizado, destacando los resultados y sus impactos. Este resumen debe ser diferente al resumen ejecutivo incluido en el proyecto reformulado. (ATENCIÓN: ESTE RESUMEN EJECUTIVO SERÁ PÚBLICO).

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Versión en inglés. The present FONDEF project aimed to investigate optimal methodologies for detoxification of PSP-type of toxins (paralyzing shellfish poisoning) in 3 bivalves of commercial interest (fisheries and mussel culture). Different biological processes and physicochemical treatments for detoxification were analyzed in order to validate the design and sizing of modules of detoxification applicable industrially. The previous stage of the project was: (a) increased Bloom events A. catenella from the eleventh region, repeatedly reaching the island of Chiloe, and with increasing frequency in the late 2000s, (b) impact of HABs by A. catenella in mussel-culture at the 10th Region, (c) superposition of operating interests between salmon- and mussel-culture; (d) studies at the European Union for the lowering of the legal maximum levels of PSP toxicity from 80 to 7.5 µg eq.STX/100g. This scenario generates requirement of basic and applied research in scalable methodologies of detoxification of shellfish contaminated with marine toxins of the saxitoxin type. It was found in this project that biological factors such as feeding contaminated bivalves with no toxic microalgae accelerated detoxification kinetics in the 3 bivalve species: the percentage of decreased of PSP toxicity in chorito-mussels after 1 week of detoxification in the presence of T-Isochrysis sp. was 45% compared to controls; 80% decrease in total PSP toxicity in amleja-clam after 2 weeks of feeding with Tetraselmis sp.; and for cholga a 48% lower PSP toxicity was achieved after feeding with the nontoxic microalgae T-Isochrysis sp. Following treatments exerted no impact on the detoxification of STX detox-rate in the 3 bivalves contaminated with PSP-toxins; oxygenation of the seawater, water temperature (between 12 and 18 degrees C), salinity (25 to 35 psu, with salinity 30 psu as control), immersion-emersion cycles of different lengths. For this we analyzed organisms obtained at the natural environment with PSP contamination (Bloom of A. catenella in March-April 2009; M. chilensis cultured in Coldita) and intoxicated at the laboratory with strains of A. catenalla from a culture collection. Detoxifcacion kinetics was monitored under natural conditions in Coldita with culture-mussels, as reference of spontaneous detoxification under natural environmental conditions southern Chiloé. Finally, considering the detoxification results obtained for each bivalve species as well as for the optimal detoxification conditions, we designed a module for detoxification of shellfish contaminated with PSP-toxins (in two variants), for scaling to appliccations at an industrial level.

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2.2. CUADRO DE SÍNTESIS DE RESULTADOS Y DE OBJETIVOS 6

Objetivos del proyecto Objetivo(s) general(es)

Desarrollar los procesos y las tecnologías para la detoxificación de mariscos vivos con presencia de toxinas marinas

Objetivos específicos

1

Optimización de los procesos biológicos, físicos y químicos que más aceleran la detoxificación de moluscos bivalvos vivos con presencia de toxinas marinas VPM en chorito, almeja y cholga.

2

Estandarización de las tecnologías de detoxificación para diferentes toxinas derivadas de STX, y niveles de concentración, en 3 diferentes especies de moluscos vivos filtradores de importancia comercial.

3 Diseño y dimensionamiento de un modulo de detoxificación para moluscos vivos filtradores.

Resultados de Producción Objetivos asociados 7

Nombre Metodologia optima de detoxificacion de chorito a traves de alimentación con T-Isochrysis spp

Descripción Establecimiento de tratamiento de disminución de la toxicidad VPM en M. chilensis

Descripción de logro

Metodología práctica de exposición de chorito Mytilus chilensis contaminado con toxinas del tipo veneno paralizante de los moluscos (VPM), luego de exposición a alimentación con microalga no tóxica T-Isochrysis spp., en agua de mar salinidad 30 psu, luego de 1 semana de exposición, en relación a la condición control en ausencia de alimentación (ver detalles de resultados en Anexo VI.)

1 2

Resultados de Producción Objetivos asociados 8

6 Los resultados deben corresponder a todos aquellos resultados comprometidos y vigentes en el sistema de Seguimiento y Control (S+C) de proyectos FONDEF. 7 Indique el numeral identificador del(de los) objetivo(s) relacionado(s). 8 Indique el numeral identificador del(de los) objetivo(s) relacionado(s).

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Nombre Establecimiento de metodología de disminución de la toxicidad VPM en almeja a través de alimentación con Tetraselmis spp.

Descripción Optimización de procedimiento de disminución de la toxicidad VPM en almeja a través de alimentación con microalga no tóxica

Descripción de logro

Almeja intoxicada en el laboratorio con cultivos del dinoflagelado tóxico Alexandrium catenella, fue detoxificada sobre 80% en relación a ejemplares controles no alimentados, al suministrar microalga no tóxica Tetraselmis spp. Esta microalga no tóxica puede ser cultivada masivamente en condiciones productivas escalables. Este resultado fue similar en magnitud de detoxificación a otros tratamientos estudiados en el proyecto, como por ejemplo presencia del depredador de almeja, Xanthochorus cassidiformis, y a tratamientos simultáneos de alimentación con aumento de salinidad. Sin embargo, no pudo establecerse efecto sinergístico de factores bióticos y fisico-químicos aplicados de manera simultánea.

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Resultados de Producción Objetivos asociados 9

Nombre Estandarización de metodología de disminución de la toxicidad VPM en cholga por medio de alimentación con T-Isochrysis spp. y Tetraselmis spp.

Descripción Optimización de procedimientos de disminución de toxinas tipo VPM en tejidos de cholga

Descripción de logro

Ejemplares de diferente tamaño del bivalvo fueron intoxicados en el laboratorio con cultivos de A. catenella, para luego ser sometidos a tratamientos de detoxificación en presencia de alimentación con microalgas no tóxicas, Tetraselmis spp. y T-Isochrysis spp. Estas microalgas pueden ser escalables en su producción masiva por cultivos a nivel industrial según requerimientos productivos. Con alimentación en presencia de alimento no tóxico se alcanzó niveles de 50% de detoxificación en 2 semanas de tratamiento.

1 2

Resultados de Producción Objetivos

asociados 10

Nombre Diseño de un módulo de detoxificacion de moluscos bivalvos contaminados con VMP, para mitílidos y para almeja.

1 2 3

9 Indique el numeral identificador del(de los) objetivo(s) relacionado(s). 10 Indique el numeral identificador del(de los) objetivo(s) relacionado(s).

10

Descripción Diseño de módulos (2 variantes diferentes) de detoxificacion de bivalvos contaminados con VMP, uno para mitílidos y uno optimizado para almeja.

Descripción de logro

Se diseño en base a modelo conceptual de depuración microbiológica de moluscos bivalvos filtradores similar a tratamientos industriales utilizados en países productores Europeos como España e Italia, adaptando esta tecnología a procesos de recirculación de agua, oxidación y filtración para eliminar riesgos de bioseguridad. Se presenta 2 formatos de módulo de detoxificación, uno para chorito-cholga, y otro en base a piscinas de baja profundidad para apilar contenedores plásticos para almeja.

Resultados de Protección Objetivos asociados

Nombre Resultados de protección se encuentran aún bajo investigación actual; se esta diseñando metodología de detoxificación susceptible de protección.

Resultados de producción asociados

Detoxificación escalable de moluscos filtradores

Descripción de logro

Logro en desarrollo durante el presente y próximo año 2014.

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Resultados de Transferencia y Negocios Objetivos asociados

Nombre Metodologías de detoxificación de moluscos vivos filtradores Resultados de producción asociados

Procesos y tecnologías escalables de detoxificación de moluscos filtradores vivos

2 3

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Descripción de logro

Logro en desarrollo en la actualidad. Se ha desarrollado en el proyecto durante su ejecución formal actividades de difusión de los resultados del proyecto y de sus impactos esperados, como por ejemplo en la 1ª. Feria Expo Mejillón-Quellón, efectuada en esta ciudad con exposición ante pescadores artesanales, agrupaciones de productores de mitílidos por acuicultura y comunidad científica asistente, explicando los resultados del proyecto y sus alcances futuros de acuerdo a la evolución de las mareas rojas en Chile y a la normativa internacional de límites máximos permitidos para la concentración de toxinas paralizantes en moluscos marinos. Paralelamente se ha creado en la Universidad de Los Lagos una Unidad especializada de Transferencia Tecnológica para la adaptación e implementación de las tecnologías apropiables y su traspaso efectivo al sector productor.

Resultados de Producción Científica

Categoría Cantidad Lograda Evento 3

Publicación 3 (preparación)

Tesis o Proyecto de título 2 Tesis; 1 Proyecto Título

Cooperación Internacional recibida o entregada 3 (recibidas)

Nuevo Proyecto Generado 1

Resultados de Formación de Capacidades

Categoría Cantidad Lograda Capacidades profesionales desarrolladas o fortalecidas 3

Capacidades de formación de redes o de equipos de trabajo 1

Capacidades materiales o de infraestructura 2

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2.3. INFORME FINANCIERO A LA FECHA DE TÉRMINO 11

Montos

Comprometidos por Convenio (1)

Montos Efectivamente Aportados (2)

Gastos Totales del Proyecto (3)

% (5)

FONDEF $255.000.000 $254.976.840

$252.921.627

48,8

Institución(es) Beneficiaria(s)

Univers. Los Lagos $157.310.000

$157.340.000 $157.340.000 30,4

Empresas y otras entidades socias

1. Servimar Ltda. $48.600.000

2. Inversiones Patagonia S.A. –

$23.950.000 3. Aguas Del Sur S.A.

$36.600.000

1. Servimar Ltda. $43.530.000

2. Inversiones Patagonia S.A. –

$28.700.600 3. Aguas Del Sur S.A.

$35.347.300

1.. $43.530.000

2. $28.700.600

3. $35.347.300

Total $107.577.900

20,8

Totales $ 521.460.000 $ 519.894.740 $ 517.839.527 100

Monto Reintegrado a FONDEF (6) ( 2.055.213 )

Costo Final del Proyecto (4) $ 517.839.527

11 1) Montos Comprometidos por Convenio: Son los montos señalados como aportes comprometidos en el convenio firmado entre CONICYT y la(s) institución(es) beneficiaria(s). 2) Montos Efectivamente Aportados: Es la suma de las remesas de fondos o aportes realizados al proyecto por FONDEF, por la(s) institución(es) beneficiaria(s) y por las empresas y otras entidades socias al proyecto. 3) Gastos Totales del Proyecto: Es la suma de los gastos informados por el proyecto y aprobados por FONDEF. 4) Costo Final del Proyecto: Es la suma de las remesas de fondos y aportes realizados al proyecto, menos el monto reintegrado a FONDEF. 5) %: Porcentaje de participación en el Gasto Total del Proyecto, por fuente de financiamiento. 6) Monto Reintegrado a FONDEF: Fondos girados por FONDEF a la(s) institución(es) beneficiaria(s), que no fueron utilizados en el proyecto, por lo cual fueron devueltos a CONICYT. Es la diferencia entre el monto efectivamente aportado por FONDEF y los gastos aprobados financiados por FONDEF.

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2.4. EVALUACIÓN DE LA EJECUCIÓN DEL PROYECTO 12

2.4.1. El Representante Institucional de cada Institución Beneficiaria El proyecto MR07I1002, titulado “DESARROLLO DE PROCESOS Y TECNOLOGIAS PARA EL DISEÑO Y DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE IMPORTANCIA COMERCIAL”, fue realizado por la Universidad de Los Lagos como Institución principal ejecutora (sin participación de Universidades asociadas). El proyecto tuvo una duración formal de 39 meses (incluido el período de prórroga aprobado). El desarrollo del proyecto siguió sus etapas según cronograma establecido y fue exitoso en cumplir los objetivos específicos establecidos en el proyecto. Se encontró tratamientos experimentales que aceleran la velocidad de depuración de moluscos bivalvos (chorito, almeja, cholga) contaminados con toxinas marinas del tipo VPM (veneno paralizante de los moluscos), y se diseñó un módulo de detoxificación para moluscos filtradores contaminados en el medio natural luego de floraciones con la microalga tóxica Alexandrium catenella. Este proyecto permitió establecer un equipo humano altamente capacitado en el tema de las mareas rojas y su análisis y detección por equipamiento instrumental de punta, se formó recursos humanos jóvenes con elevada competencia en análisis de contaminación y detección de A. catenella, y se generó un proyecto de continuidad en el marco del 3er. Concurso del Programa de Marea Roja, participando así la Universidad de Los Lagos en todos los concursos efectuados hasta ahora en este Programa de FONDEF (como Institución principal y/o asociada). Amanda López Castro, Representante Institucional ante Fondef Universidad de Los Lagos – Osorno.

12 Realice un resumen del punto 3.3.5, análisis realizado después de terminar la ejecución del proyecto, el cual tiene como objetivo revisar los resultados, considerando aciertos y dificultades ocurridos durante el proyecto. Para este caso se solicita un análisis por las siguientes personas.

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2.4.2. El Director(a) del proyecto El citado proyecto Fondef fue realizado en la Universidad de Los Lagos, cumpliéndose los objetivos general y específicos del proyecto. Se contó con una duración total que fue efectiva para el cumplimiento de los objetivos de producción del proyecto, de acuerdo a sus objetivos específicos, sin embargo la mayor dificultad fue contar de manera suficientemente fluida con ejemplares tóxicos de las 3 especies de molusco bivalvo estudiado en el proyecto, chorito, almeja y cholga. Fue difícil acceder a ejemplares contaminados con veneno paralizante (VPM) proveniente de intoxicaciones naturales ocurridas en terreno, debido a que estas abarcaron principalmente la región de Aysén, la cual presenta lejanía operativa con centros de investigación, o con la Universidad de Los Lagos en Osorno. Por esta razón es difícil ejecutar experiencias fisiológicas con ejemplares provenientes desde lugares lejanos de terreno. En la práctica este constituye el principal obstáculo al trabajar con organismos contaminados con toxinas marinas. Por ello se intoxicó en este proyecto ejemplares de las 3 especies de bivalvo filtrador, utilizando cultivos del dinoflagelado tóxico Alexandrium catenella bajo condiciones experimentales, para luego establecer protocolos metodológicos de detoxificación según los objetivos del proyecto. Se pudo encontrar metodologías efectivas de detoxificación de las 3 especies, principalmente en base a alimentación de los moluscos filtradores con microalga no tóxica, la cual fue producida en el laboratorio y debe ser escalada industrialmente para fines operativos de una planta de detoxificación. Se generó finalmente en el proyecto un módulo de recirculación de agua marina para la detoxificación de los 3 moluscos estudiados en el proyecto, en 2 formatos similares, los cuales pueden complementarse operativamente según su estandarización e intereses productivos. Se estableció gracias a la ejecución de este proyecto, redes de cooperación internacional con investigadores de España, y se capacitó un equipo humano de alto nivel para la continuación futura del estudio de las mareas rojas en nuestro país.

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2.5. PROPUESTA DE CONTINUIDAD DE CADA INSTITUCIÓN BENEFICIARIA

Continuidad Investigación en Marea Roja a través de FAN de A. catenella en la Universidad de Los Lagos. El proyecto MR07I1002 ha significado para la Universidad de Los Lagos abrir un campo de investigación aplicada con conocimientos científicos basales de alto impacto potencial en el ámbito de las mareas rojas por veneno paralizante, VPM, en moluscos sensibles de nuestras costas (principalmente sur-austral) a este creciente fenómeno oceanográfico. Esto significó capacitación de recursos humanos (tanto académicos como profesionales y estudiantes de pregrado) con un alto nivel académico, en un tema disciplinario muy amplio y con complejidades muy significativas tanto a nivel ambiental – ecológico como operativo de bioseguridad a nivel de laboratorio. Se obtuvo los respectivos permisos de la Autoridad Sanitaria para recolección en terreno y transporte hasta el Laboratorio de Bioquímica de Organismos Acuáticos en Osorno, de moluscos contaminados con marea roja en terreno. Esto ha seguido siendo investigado en Osorno en los diferentes ámbitos involucrados en el presente proyecto, como por ejemplo metabolización de toxinas tejido-específicas en los 3 moluscos estudiados en el proyecto, cinética de biotransformación y eliminación de formas tóxicas del veneno paralizante tipo STX, generación de variantes de diferente toxicidad de cultivos de A. catenella bajo condiciones diferenciales de crecimiento, entre otros aspectos de la investigación realizada. Se ha seguido monitoreando FANs de A. catenella en Chiloé en un laboratorio de servicios asociado al proyecto, en Castro, con capacidad analítica para detección de células de A. catenella, a través de uno de los investigadores del proyecto (M. Caniggia). En Osorno se implementó las metodologías de investigación en cultivo de A. catenella, los procesos de intoxicación y detoxificación de moluscos filtradores por VPM (diferentes formas de las toxinas tipo STX), y de respuesta fisiológica y metabólica de las toxinas tipo STX en moluscos filtradores, aspectos con una componente de alto impacto en ciencia fundamental, necesaria para el estudio e implementación de medidas de mitigación por FANs de A. catenella en organismos moluscos (con alcance local y también a nivel mundial, pues no se conoce tratamientos efectivos de detoxificación en el mundo aplicables industrialmente).

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Estas líneas de investigación asociadas a los objetivos específicos del presente proyecto han seguido desarrollándose en Osorno y seguirán siendo investigadas para la obtención de futuras publicaciones científicas y de difusión; además se planea la ejecución de futuros proyectos de investigación en estos ámbitos basales y aplicados asociados al proyecto. Igualmente han seguido desarrollándose en el laboratorio de Bioquímica de Organismos Acuáticos en la Universidad de Los Lagos en Osorno metodologías con potencial de resguardo de propiedad intelectual en la implementación de procesos para detoxificación en moluscos vivos (no se conoce patentes a nivel mundial), las cuales aun no han sido suficientemente elaborados (en ámbitos experimentales no comprometidos en el presente proyecto dentro de sus objetivos específicos) hasta la fecha de termino de éste. Se ha evaluado durante la ejecución del proyecto una serie de metodologías experimentales de detoxificación que no estaban contempladas originalmente como objetivos del mismo y que han continuado siendo investigadas una vez finalizado el proyecto en su período de ejecución formal; de éstas experiencias se espera rindan frutos futuros de impacto relevante en la detoxificación de mareas rojas tipo VPM en bivalvos marinos. Se contempla que los objetivos del proyecto han generado y abierto material de investigación para al menos 5 años posteriores a la ejecución del proyecto, lo cual continuará plasmándose en publicaciones, nuevos proyectos de investigación y transferencia tecnológica en nuestra Institución en el futuro próximo. Igualmente se contempla el fortalecimiento de las redes internacionales (con los investigadores de España contactados durante la ejecución del presente proyecto, Dres. Juan Blanco, José Franco y Ana Cabado), para la generación de trabajo conjunto de investigación y proyectos de I+D. Paralelamente a la ejecución del proyecto se ha estado utilizando los bienes de equipamiento adquiridos en el proyecto, para la ejecución de los resultados experimentales de otros proyectos actualmente vigentes de I+D Fondef, como ser en los proyectos D08I1075 y D09I1256, en los cuales se ha efectuado los análisis instrumentales con el equipamiento del proyecto MR07I1002, el cual ha sido mantenido en condiciones operativas óptimas. Finalmente, ha continuado la línea de trabajo en mareas rojas por veneno paralizante en la Universidad de Los Lagos, con la adjudicación de otro proyecto Fondef en detoxificación de moluscos como es el caso del recurso “loco”, en el proyecto MR10I1016, el cual estudia la detoxificación de un importante gastrópodo marino carnívoro que se intoxica con saxitoxinas a través del consumo de bivalvos contaminados con VPM (principalmente chorito y cholga, en aguas interiores de la región de Aysén, zonas de muy frecuente ocurrencia de eventos FAN de A. catenella). Este proyecto presenta interés básico y aplicado, por ser este recurso

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endémico de nuestras costas y no hay muchas publicaciones de sus características de depuración y metabolización de toxinas de la familia de las saxitoxinas. El equipamiento del proyecto MR07I1002 servirá para la realización de los análisis instrumentales requeridos para el nuevo proyecto del concurso III del Programa “Marea Roja” adjudicado por la Universidad de Los Lagos. La Institución cuanta con una Unidad operativa de Transferencia Tecnológica y Emprendimiento y Negocios, recientemente creada, con la cual se pretende seguir generando todas aquellas iniciativas para la protección de los resultados esperados con potencialidad de resguardo intelectual, en las cuales se continúa trabajando actualmente, y en todas las instancias de transferencia tecnológica al sector productor pertinentes, como se detalla en Anexo V .

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III. INFORME DE GESTIÓN 3.1. OBJETIVOS DEL PROYECTO 13

3.1.1 Objetivo(s) General(es) Objetivo General (Indicado en el proyecto reformulado) Desarrollar los procesos y las tecnologías para la detoxificación de mariscos vivos con presencia de toxinas marinas

El Objetivo General del proyecto fue cumplido, estudiando procedimientos aplicables en las 3 especies de molusco comprometidos en el presente proyecto, sin embargo igualmente serían extrapolables a otros invertebrados marinos que puedan revestir interés futuro, según la evolución de las mareas rojas en Chile, como también a otros tipos de toxina diferentes de la toxina paralítica estudiada en este proyecto (por ejemplo veneno amnésico de creciente incidencia en nuestro país, en diferentes zonas geográficas de nuestro litoral. Se cumplió con el establecimiento de procesos que disminuyen la toxicidad de veneno paralizante en las especies chorito, almeja y cholga.

3.1.2 Objetivos Específicos Objetivo Específico N°1: Optimización de los procesos biológicos, físicos y químicos que más aceleran la detoxificación de moluscos bivalvos vivos con presencia de toxinas marinas VPM en chorito, almeja y cholga.

Objetivo específico fue cumplido completamente. Se estudió en el proyecto una serie de tratamientos biológicos, físicos y químicos (algunos estudiados según la literatura para otras especies en el mundo), descartándose algunos tratamientos muy simples y económicos, los cuales no mostraron impacto en la reducción de toxicidad VPM en las 3 especie de molusco bivalvo. Sin embargo, se estableció para cada especie procesos que aceleraron el decaimiento de la toxicidad de veneno paralizante, principalmente alimentación con microalga no tóxica en las 3 especies de bivalvo filtrador. En la literatura se ha informado de tratamientos que disminuyen la carga tóxica de moluscos filtradores hasta en un 35-40%, mientras que en el proyecto se encontró tratamientos de alimentación con un impacto de

13 Señale los objetivos generales y específicos programados. Informe los LOGRADOS, los NO LOGRADOS, así como los NUEVOS objetivos incorporados durante el desarrollo del proyecto. Señálelos como tales. (Deben estar debidamente visados por el respectivo comité de área de FONDEF).

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hasta un 50 % de disminución de toxicidad VPM (mayor aún en almeja, como se describe en Anexo 6.).

Objetivo Específico N°2: Estandarización de las tecnologías de detoxificación para diferentes toxinas derivadas de STX, y niveles de concentración, en 3 diferentes especies de moluscos vivos filtradores de importancia comercial.

Logrado completamente. Hubo disminución de toxicidad VPM con todas las variantes tóxicas de la familia STX, sin embargo la cinética de detoxificación fue diferente para diferentes especies biológicas y diferentes formas de la toxina. Por ejemplo, chorito disminuyó rápido en 1 semana, pero STX limpio muy lento. Falta estandarizar toxicidades en las cuales componente de STX sea muy alto, en comparación a otras formas de la toxina paralizante. Almeja limpio completamente GTX2,3, mientras que STX disminuyó su concentración mas lentamente. Se estudió igualmente si había efecto sinergístico entre diferentes factores bióticos, físicos o químicos operando simultáneamente, y no se pudo establecer la manifestación de factores operando de manera simultánea de un modo sumatorio entre diferentes factores.

Objetivo Específico N°3: Diseño y dimensionamiento de un modulo de detoxificación para moluscos vivos filtradores.

Se cumplió el objetivo de manera parcial. Fue diseñado un módulo de detoxificación de moluscos, con 2 variantes para chorito y almeja, según modelos de depuración microbiológica en países productores de Europa, sin embargo, la expectativa original del proyecto era establecer un módulo operativo en condiciones de terreno (aunque no fuese un objetivo específico comprometido del proyecto ante el Comité de área, o en el proyecto reformulado). Sin embargo, dentro del período de ejecución del proyecto hubo FAN de A. catenella principalmente en la Región de Aysén, y no en la región de Los Lagos (isla de Chiloé en particular), y los costos operativos de instalación de un módulo como el diseñado en el proyecto escapaban a las capacidades operativas del mismo, por los costos operativos, de infraestructura y de lejanías de las zonas afectadas con marea roja.

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3.2. RESULTADOS DEL PROYECTO

3.2.1. Resultados de Producción Nombre Metodología de detoxificación de chorito M. chilensis en base a

alimentación con microalga no tóxica. Categoría Proceso Descripción Alimentación constante de ejemplares de chorito (provenientes de medio

natural o de cultivo contaminados con toxinas VPM) durante 7 días en agua de mar 30 psu oxigenada. Cultivo óptimo para detoxificación resultó ser T-Isochrysis sp. Toxicidad disminuyó en un 45% en éste lapso de tiempo.

Calidad Proceso Mejorado en relación a lo descrito internacionalmente Descripción del logro (refiérase a los atributos)

Alimentación de chorito permite acortar de manera significativa período de toxicidad sobre los límites legales máximos permitidos, obteniéndose detoxificación de toxinas paralizantes en menor tiempo. Atributo muy relevante dependiendo de las consideraciones productivas, épocas de cosecha, precios internacionales del producto, necesidades productivas. Permite sostener emprendimiento de detoxificación con ésta y las otras especies investigadas en el proyecto.

Nombre Metodologías de detoxificación de almeja contaminada con VPM, en base a alimentación con microalga no tóxica, y combinación de tratamientos biológicos y abióticos.

Categoría Proceso Descripción Alimentación de almeja contaminada con VPM, suministrando microalga

no tóxica Tetraselmis sp., durante 2 semanas de detoxificación en agua marina aireada. Igualmente se obtuvo resultados óptimos de detoxificación en presencia de cambio de salinidad y suministro de Tetraselmis sp., y cambio de salinidad más presencia de gastrópodos depredadores, como se describe en Anexo 6.

Calidad Proceso mejorado Descripción del logro (refiérase a los atributos)

Almeja presenta toxicidad durante todo el año en algunos lugares del sur austral del país, por lo cual este resultado abre posibilidades de tratamiento de extracción de lugares con cierre cautelar permanente, en diferentes modalidades de aplicación según costos operativos en diferentes zonas costeras. El tratamiento óptimo mostró disminución de la toxicidad VPM en hepatopáncreas, en un porcentaje cercano a 80%.

Nombre Metodología de disminución de toxicidad VPM en cholga, alimentando con microalgas no tóxicas durante 2 semanas.

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Categoría Proceso biológico Descripción Disminución de la toxicidad VPM en niveles cercanos a 50% en presencia

de alimentación con Tetraselmis sp o de T-Isochrysis sp. Toxicidad VPM fue obtenida por intoxicación en el laboratorio, mientras que detoxificación fue monitoreada por 2 semanas en presencia de alimentación continua e inmersión constante en agua de mar aireada.

Calidad Proceso mejorado Descripción del logro (refiérase a los atributos)

Disminución de toxicidad VPM en tejidos totales comestibles de cholga en presencia de alimentación con microalga no tóxica. Toxicidad en sur del país puede ser extremadamente elevada en esta especie, por lo cual el resultado permite establecer procesos de detoxificación más rápida en plantas detoxificadoras de estas 3 especies de bivalvo. Costo asociado es principalmente producción de microalga no tóxica en grandes volúmenes.

Nombre Diseño de módulos de detoxificación para moluscos filtradores vivos, e 2 variantes de operación e infraestructura diferentes.

Categoría Experimental Descripción Módulos en base a estanques de contenedores de 700 l para moluscos

vivos (chorito y cholga) y piscina de detoxificación para almeja, en los cuales los ejemplares son transportados y dispuestos en bandejas plásticas portátiles con flujo de agua desde costados y fondo. Módulos funcionan con principio de recirculación de agua según sistemas de recirculación para la acuicultura, y con medidas de bioseguridad para eliminación completa de riesgo de contaminación biológica o química (toxinas STX) de organismos para consumo humano, y del medio ambiente en el entorno a los módulos.

Calidad Mejorado Descripción del logro (refiérase a los atributos)

Diseño de 2 módulos de detoxificación para moluscos vivos, en base a sistemas de depuración microbiológica en países productores de bivalvos, más metodologías de recirculación de agua marina para la eliminación de residuos que requieren normas de bioseguridad. Módulos permiten estrategias nuevas de mitigación de eventos tóxicos de floración de microalgas en lugares de creciente distribución geográfica y frecuencia de manifestación.

3.2.2. Resultados de Protección Categoría (Patente) Nombre Se encuentran aún bajo investigación; no hay hasta la fecha de término

formal del proyecto. Se continuará en ello durante 24 meses. Descripción Resultado de

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Producción asociado Nivel de desarrollo Ámbito Descripción del logro

3.2.3. Resultados de Transferencia y Negocios Categoría Difusión de los resultados del proyecto Nombre Actividades de difusión de los resultados del proyecto entre los miembros

de las empresas contraparte, pescadores artesanales, mitilicultores del sur del país.

Descripción Se participó de actividades de difusión de los resultados del proyecto en seminarios internacionales ante la comunidad científica nacional, expertos internacionales (Puerto Montt, enero 2011), en la 1ª. feria de Mitilicultura “Expo Mejillón-Quellón” (abril 2010), con reuniones de exposición de los resultados del proyecto ante organizaciones de pesca artesanal, productores de chorito de la isla de Chiloé.

Resultado de Producción asociado

Metodologías de detoxificación de bivalvos contaminados con VPM, chorito, almeja y cholga, con potencialidad de escalamiento.

Nivel de desarrollo Preliminar Ámbito Instituciones de investigación superior, organizaciones de productores,

empresas contraparte, revistas de divulgación científica. Descripción del logro Resultado se encuentra aún en etapa preliminar; en la Institución existe

una unidad de Transferencia que dará énfasis a lograr traspaso a productores de la tecnología obtenida en el proyecto.

3.2.4. Resultados de Producción Científica Categoría Cantidad Comprometida Cantidad Lograda

Eventos nacionales 2 3

Eventos internacionales 0 1

Publicación: artículo científico en revista nacional

1 1

Publicación: artículo científico en revista internacional de corriente principal

2 2

Publicación: libro o capítulo de libro 0 0

Tesis o Proyecto de título (Magíster) 2 3 (pregrado)

Tesis o Proyecto de título (Doctorado) 0 0

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Cooperación Internacional recibida o entregada

1 3

Nuevo Proyecto Generado 1 1

3.2.5. Resultados de Formación de Capacidades Categoría Cantidad Comprometida Cantidad Lograda

Capacidades profesionales desarrolladas o fortalecidas

2 2

Capacidades de formación de redes o de equipos de trabajo

1 1

Capacidades materiales o de infraestructura

2 2

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3.3. GESTIÓN DEL PROYECTO

3.3.1. Plazos efectivamente utilizados vs. plazos considerados inicialmente Plazo original del proyecto fue de 30 meses. Sin embargo, este período fue establecido de manera administrativa, debido a la imposibilidad de anticipar episodios de floraciones tóxicas en terreno, con la finalidad de contar con organismos intoxicados su el medio natural. Durante la ejecución formal del proyecto en estos 30 meses hubo sólo 1 evento de floración de A. catenella al sur de la isla de Chiloé, y el resto de las experiencias fueron desarrolladas con contaminación de los moluscos bajo condiciones de laboratorio. Estos protocolos de intoxicación son lentos, generan efectos adversos sobre los moluscos, causando inesperadas mortalidades, y por ello se solicitó prórroga de 9 meses además del lapso inicial de 30 meses de ejecución. Igualmente se esperaba durante la prórroga solicitada que se manifieste nuevamente un evento FAN de A. catenella en el canal Coldita (puesto que la prórroga abarcaba el período de verano-otoño de 2011, meses en los cuales aumenta la probabilidad de ocurrencia de esta floración tóxica, y se dispuso para ello cuelgas conteniendo chorito, almeja y cholga en long-line en el canal Coldita, para su eventual intoxicación con VPM en terreno. Sin embargo, aquél verano no se presentó evento FAN de A. catenella al sur de Chiloé. Por esta razón se continuó con las experiencias de intoxicación en el laboratorio de las 3 especies de molusco en Osorno. De esta manera, la duración final efectiva del proyecto fue de 39 meses.

3.3.2. Gasto ejecutado vs. presupuesto inicial Los montos comprometidos para la ejecución del proyecto sufrieron modificaciones muy menores respecto de los montos comprometidos según los respectivos convenios. La Institución beneficiaria, Universidad de Los Lagos, aportó un monto igual al comprometido originalmente (100%), correspondiente a $ 157.340.000, de manera similar a las 3 empresas contraparte, las cuales en conjunto aportaron $ 107.577.900, correspondientes al 98,6% con respecto a los montos comprometidos inicialmente (estando sí dentro de los márgenes reglamentarios). Por su parte, a Fondef fue devuelto un monto correspondiente al 0,81 % en relación al monto aportado efectivamente por Fondef, debido a gastos no efectuados en el proyecto y a gastos rechazados por deficiencias administrativas involuntarias (total devuelto a Fondef de $2.055.213; cheque por $1.552.151, y luego otro cheque por $ 503.062 correspondiente a los gastos rechazados).

3.3.3. Participación de las Instituciones y Empresas (u otras entidades socias)

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1.- La Universidad de Los Lagos aportó en Osorno con laboratorios experimentales de investigación en los cuales se efectuó el trabajo de intoxicación-detoxificación de los moluscos contaminados con marea roja tipo VPM. En Osorno cuenta la Institución con laboratorios húmedos de mantención de animales libres de contaminación biológica, y las medidas de bioseguridad en el Laboratorio de Bioquímica para impedir evacuación de riesgo biológico. No se utilizó el Centro Marino perteneciente a la Universidad de Los Lagos en METRI, para evitar de manera absoluta cualquier riesgo de contaminación con células vivas (o quistes de resistencia) de A. catenella (provenientes desde el medio ambiente o de cultivos del laboratorio en Osorno). Igualmente la Institución cuenta en el Centro I-mar con un cepario nacional de Alexandrium catenella, bajo la dirección del Dr. Daniel Varela, de quien se obtuvo toda la ayuda requerida en el proyecto, y la obtención de 3 cepas de diferente origen y toxicidad par todas las experiencias de intoxicación con VPM efectuadas en Osorno. Igualmente se contó con la gentil y reiterada colaboración del Dr. Nestor Lagos, de la Universidad de Chile, pionero de la investigación nacional en análisis instrumental de las toxinas derivadas de la STX, donde fueron efectuados repetidas veces cromatogramas de HPLC confirmatorios de los perfiles y concentraciones de nuestras muestras intoxicadas de las 3 especies de molusco bivalvo (del medio natural o de intoxicación de laboratorio). También se contó con la colaboración de la Dra. Cristina Hernández, Jefa del Laboratorio de la Autoridad Sanitaria en Puerto Montt, donde se efectuaron análisis de bioensayos de ratón con diferentes muestras de molusco tóxico, igualmente para validación de nuestras toxicidades obtenidas por análisis instrumental por HPLC. Se estandarizó metodologías de detección microscópica de A. catenella en laboratorio de servicios en Castro, bajo la dirección de un investigador del proyecto, Mauricio Caniggia, lo cual igualmente ha continuado prestando servicios de alto impacto en la isla de Chiloé, debido a las épocas reiteradas de contingencia por eventos FAN de A. catenella y por transporte de acuicultura de salmonídeos desde región de Aysén hacia la región de Los Lagos. Igualmente se estableció contactos muy provechosos durante la gira tecnológica en Galicia, particularmente con los Dres. Juan Blanco (Centro de Investigaciones Marinas), Dr. José Franco (Instituto Oceanográfico de Vigo), y la Dra. Ana Cabado (Anfaco-Cecopesca, Vigo), expertos a nivel mundial en estudio, detección y detoxificación de moluscos bivalvos (procesos térmicos de inactivación, no en moluscos vivos). Igualmente se accedió durante la gira tecnológica a Vigo a los investigadores del laboratorio de referencia de toxinas marinas de Vigo, para todo tipo de colaboración que fue necesaria durante la ejecución del proyecto. Por parte de las empresas, se mantuvo contacto fluido con los directores de 2 de las empresas contraparte, con asiento en la décima región, puesto que la otra empresa se encuentra en Santiago. Las empresas participaron activamente en el análisis de los resultados del proyecto en la medida de su concreción, en las reuniones del Directorio del proyecto, como también en la obtención del material biológico (no tóxico y contaminado con VPM), y con el uso de sus instalaciones en los centros de cultivo al sur de la isla de Chiloé, para mantener especies centinela en cuelgas de cultivo de chorito para la intoxicación de natural de los moluscos en eventuales episodios FAN de A.

catenella. 2.- No hubo durante la ejecución del proyecto cambios en las Instituciones participantes, ni en las empresas contraparte, no hubo incorporaciones de empresas o Instituciones nuevas al proyecto, tampoco hubo abandono de líneas de investigación en el proyecto, cumpliéndose con los objetivos

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experimentales trazados inicialmente. Sí se abordó experiencias nuevas no contempladas inicialmente, las cuales han seguido siendo investigadas posteriormente a la ejecución formal del proyecto, las cuales se aspira generen nuevos ámbitos de investigación aplicada en el futuro, y nuevos proyecto de I+D (nacionales/internacionales).

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3.3.4. Organización y equipo de trabajo

a) Organigrama funcional del proyecto

Directorio

Director

Director Alterno

Investigador Investigador Investigador

Profesional Profesional Profesional

Personal Apoyo Admin.

Técnicos Técnicos

Tesista Tesista

Investigador

Profesional

Personal Apoyo Admin.

Personal Apoyo Admin.

Tesista

b) Descripción del rol individual en el equipo de trabajo 14 Nº Nombre Institución o

Empresa (o entidad socia)

Capacidad/Competencia Función desempeñada

1 Robert Simpfendörfer Univ. Los Lagos Investig. Metabolismo moluscos /Detoxif. VPM

Dirección General

2 Alberto Medina Univ. Los Lagos Investig. Cultivos marinos /Acuicultor

Director Alterno

3 Juan Carlos Uribe Univ. Los Lagos Investig. Recirculación en Acuicultura

Diseño módulo y detoxific. moluscos

4 Carlos Varela Univ. Los Lagos Invest. Cultivo moluscos bivalvos y gastrópodos

Diseño módulo y detoxificación moluscos bivalvos

14 Debe incluirse al personal de las empresas y de otras entidades socias

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5 Mauricio Caniggia Lamar Asoc. Investig. Fitoplancton /Acuicultor mitílidos

Detoxificación moluscos y detección FAN A. catenella

6 Thomas Colnot Investigador

Independiente Toxicólogo /Dr. Ecotoxicología

Metabolismo y detoxific. bivalvos

7 Oscar Mora Univ. Los Lagos Acuicultor/Logística en terreno/ Recirculación

Operatividad muestreos/ S&C

8 Mónica Ojeda Univ. Los Lagos Ingeniero Alimentos /Inocuidad alimentaria

Procesos detoxificación/HPLC

9 Paul Güttler Univ. Los Lagos Acuicultor /Logística terreno

Experiencias terreno y lab./ S&C proyecto

10 Javier Marín Univ. Los Lagos Veterinario /Inocuidad alimentos

Procesos detoxific. Escalables/TransTecnol

11 Margarita Sandoval Univ. Los Lagos Contabilidad/Audit. Apoyo administrativo y adquisiciones.

12 Isolde Peralta Univ. Los Lagos Secretaria – adquisición. Apoyo administrativo

13 Francisco Muñoz Evaluador Econ. Ingeniero Comercial Evaluador Económico/ Transferencia Tecnol.

14 Armando Salinas Invers. Patagonia Gerente General Directorio Proyecto 15 David Nash Servimar Ltda. Gerente General Directorio Proyecto 16 Andrés Subercaseaux Aguas del Sur Gerente General Directorio Proyecto 17 Sergio Navarro Univ. Los Lagos Estud. Biol. Marina Tesista M. chilensis 18 Karla Castro Univ. Los Lagos Estud. Biol. Marina Tesista V. antiqua 19 Viviana Espina Univ. Los Lagos Estud. Biol. Marina Tesista A. atra

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3.3.5. Evaluación de la ejecución del proyecto 15 a) El(la) Representante Institucional de cada Institución Beneficiaria

El Proyecto Fondef titulado: “DESARROLLO DE PROCESOS Y TECNOLOGIAS PARA EL DISEÑO Y DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE IMPORTANCIA COMERCIAL”, código MR07 I 1002, fue ejecutado entre 2.5.2008 y 30.7.2011 (30 meses de ejecución más extensión aprobada por Fondef). El proyecto fue dirigido por el académico Prof. Robert Simpfendörfer, del Departamento de Acuicultura de nuestra Casa de Estudios. El proyecto mencionado fue ejecutado con normalidad dentro de sus plazos formales, y ha significado un aporte para la Universidad de Los Lagos, institución que ha sido participante (como Institución ejecutora y/o Asociada) en los 3 Concursos del Programa Marea Roja, tanto por académicos de la sede Puerto Montt como de Osorno. Este proyecto permitió establecer tecnologías y metodologías analíticas para el estudio y mitigación de las mareas rojas, situación que afecta muy especialmente a la 10ª. Región (en la cual la Universidad de Los Lagos es su única Institución estatal), alcanzando las floraciones de algas nocivas una notoriedad especial en la década de 2000 al afectar diversas zonas con actividad tanto de extracción de moluscos bivalvos (almeja) como de cultivo por mitilicultura (chorito) al sur de la décima Región de Los Lagos, en particular en la isla de Chiloé y Guaitecas. Igualmente en el presente proyecto se especializó un grupo humano altamente calificado, se ha formado tesistas de nuestra carrera de Biología Marina, y finalmente se ha adjudicado nuestra Institución la participación en 2 Proyectos del Concurso actual No. III del Programa de “Marea Roja”. Las dificultades mayores en la ejecución del proyecto tuvieron que ver con la lejanía de las zonas geográficas afectadas por mareas rojas (sur de la isla de Chiloé), y el hecho de que hubiera sólo un evento de marea roja en el transcurso de la ejecución del proyecto, lo cual dificulta acceder a moluscos vivos contaminados con mareas rojas tipo veneno paralizante. Sin embargo estos obstáculos fueron resueltos en este proyecto específicamente produciendo contaminación en el laboratorio en Osorno. Por las razones explicitadas, se valora profundamente los significativos aportes que efectúa Fondef para el desarrollo Científico y Tecnológico en especial en Universidades estatales Regionales, como lo ha sido también en este caso el proyecto MR07I1002 en particular. Atte.,

15 Este análisis es posterior a la ejecución del proyecto, y tiene como objetivo revisar los resultados, considerando aciertos y dificultades ocurridas durante el proyecto. Refiérase además a la participación de las instituciones, empresas y otras entidades socias. Para este caso se solicita un análisis por las siguientes personas:

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b) El(la)Director(a) del proyecto El proyecto MR07I1002 constituyó un significativo aporte a la investigación Científica y Tecnológica para la Universidad de Los Lagos, para todo el equipo de trabajo del proyecto, y para el Director del mismo de manera muy particular. No es menor el desafío de investigación (básica y aplicada) requerido para aspirar a alcanzar aportar a la mitigación de las mareas rojas en nuestro país, comprendiendo igualmente que este es un fenómeno de alcance mundial con impactos muy amplios y crecientes en distribución geográfica, frecuencia de ocurrencia, desplazamiento hacia zonas cada vez más pobladas, tanto en el hemisferio norte como el sur del mundo. Y la ejecución del presente proyecto fue un estupendo desafío. Contempló la incertidumbre de la ocurrencia de episodios de floración de A. catenella en medio natural, necesaria para la obtención de animales invertebrados contaminados con toxinas del tipo del veneno paralizante, para luego aplicar metodologías de detoxificación que permitan de manera efectiva y reproducible la detoxificación de bivalvos de importancia comercial, como lo es chorito, almeja y cholga. Este proyecto contempló interacción con investigadores de los ámbitos del cultivo de moluscos, interacciones tróficas, recirculación de agua, metabolismo de toxinas marinas tipo STX, medidas de resguardo toxicológico en el laboratorio, siendo la temática de las mareas rojas un tema complejo e interdisciplinario de las ciencias biológicas. A nivel mundial se conoce tratamiento parcialmente efectivos de detoxificación, principalmente por estrés oxidativo (mayor o menor impacto sobre algunos moluscos, con riesgos de perder cualidades organolépticas de los moluscos), y el nivel de detoxificación (moluscos vivos) que se ha reportado en la literatura no supera de 40 % de detoxificación en relación a moluscos no tratados. En el presente proyecto se alcanzó niveles algo superiores a esta magnitud de detoxificación, alcanzándose niveles de 50% de detoxificación en un lapso determinado, lo cual es un logro relevante. Sin embargo, la aspiración personal era lograr porcentajes mayores de detoxificación (para lo cual se continúa trabajando), los cuales impacten con mayor efectividad tratamientos de detoxificación industrial de relevancia y bajo costo para productores, más aún en épocas críticas como las que vive en estos días la mitilicultura, por los bajos precios de venta internacional, por los aparentes efectos del cambio climático sobre los menores períodos de Bloom de fitoplancton no tóxico para engorda de moluscos, y por la disminución paulatina (sin explicación razonable) en la captación de semilla para la mitilicultura. Por ello este proyecto ha sido un ámbito de investigación muy relevante para nuestra institución que con seguridad (aspiración personal) seguirá rindiendo frutos en corto y mediano plazo para nuestra Institución, con impacto en la mitigación de la marea roja por veneno paralizante de los moluscos. Las dificultades en la ejecución del proyecto fueron abordadas exitosamente debido a la intoxicación de laboratorio de los moluscos comprometidos en el proyecto, sin embargo los tiempos experimentales de este tipo de investigación son lentos y muestran gran variabilidad de acuerdo a las características fisiológicas de los moluscos. Por esta razón, el presente proyecto ha continuado bajo investigación luego de la finalización de su período formal, y seguirá dando nuevas ideas de campos de acción frente a este creciente fenómeno oceanográfico global.

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IV. INFORME CIENTÍFICO TECNOLÓGICO Y ECONÓMICO SOCIAL.

4.1. INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO REALIZADOS POR EL PROYECTO

El proyecto Fondef MR07I1002 buscó la estandarización de metodologías para la detoxificación de moluscos bivalvos vivos, los cuales revisten interés comercial por pesquería de extracción o por mitilicultura. Hasta el momento había solamente tratamientos de inactivación térmica de moluscos filtradores (Lagos et al., 2001, US-Patent 6.171.626 B1; Reboreda et al., 2010, Toxicon 55: 235-243) sin embargo, estos tratamientos son limitados en su aplicación industrial debido al impacto en calidad del producto, como textura y sabor. No se conoce alguna aplicación industrial de la patente descrita anteriormente. En el proyecto se trabajó primeramente con ejemplares de molusco intoxicados en el medio natural, aprovechando las ocasiones de evento FAN (floración algal nociva) ocurridos en la isla de Chiloé, debido a acceso a cultivo de chorito de las empresas contraparte en el canal Coldita, sur de Quellón. 2 empresas contraparte del proyecto poseen cultivo de mitílidos en cuelga “long-line” en esta localidad, por lo cual se pudo acceder a organismos contaminados en el medio natural. En el verano de 2009 ocurrió una floración de Alexandrium catenella entre regiones de Aysén y Los Lagos, afectando marcadamente organismos filtradores de la undécima región (con toxicidades superiores a 5.000 µg eq.STX/100g de veneno paralítico en bivalvos de la región de las Guaitecas). En esta oportunidad la floración alcanzó a la isla de Chiloé a fines de marzo de 2009, intoxicando los moluscos de la mitilicultura del canal Coldita (entre otros lugares de la isla). Los animales intoxicados con VPM alcanzaron toxicidades de 2000 µg eq. STX/100g, los cuales fueron transportados vivos hasta Osorno, al Laboratorio de Bioquímica de Organismos Acuáticos, para la realización de las experiencias de detoxificación comprometidas en el proyecto. Se obtuvo tratamientos de detoxificación promisorios con varios de los resultados, entre ellos exposición de los mitílidos contaminados con VPM a la presencia de microalga no tóxica comercial (Nannochloropsis sp., en diferentes concentraciones; ver Fig. 15 y 16 del Anexo 6.), a la presencia del caracol carnívoro Concholepas concholepas, y a aumentos de salinidad. Sin embargo estos tratamientos mostraron gran variabilidad en el nivel de toxicidad individual de los ejemplares, por lo cual mostraron sólo tendencias promisorias, sin significancia estadística. Por esta razón se ha continuado trabajando en estos tratamientos prometedores luego de la ejecución del proyecto en su etapa formal de duración, para establecer los mecanismos metabólicos activados en la detoxificación de toxinas tipo VPM en chorito, y si éstos son dependientes de la dosis del factor operante. En Anexo 6. se detalla los resultados obtenidos al detoxificar chorito luego de intoxicación en el laboratorio con cultivos de A. catenella. (Sección 6.4.1 .). Luego de este episodio de FAN natural de A. catenella al sur de la isla de Chiloé, no volvió a presentarse intoxicación natural de bivalvos de interés para el proyecto

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con toxinas del tipo VPM. Por esta razón, se procedió a la obtención de ejemplares tóxicos provenientes de decomiso. Sin embargo, como se detalla en la Sección 6.4.2., estos ejemplares decomisados no sirvieron para las experiencias de detoxificación experimental, debido a la variabilidad en el estado fisiológico de los organismos decomisados, los cuales presentan en ocasiones varios días en emersión, y muy probablemente, se han encontrado “apozados” por prácticas habituales pero informales (y altamente riesgosas en términos ecológicos) de detoxificación espontánea al sur de la isla de Chiloé (bancos al sur Quellón). Igualmente, la mayoría de los organismos decomisados (principalmente almeja en Quellón), contenía niveles bajos de toxina VPM, sólo levemente superiores a los valores límite permitidos, esto es, valores entre 100 a 200 µg eq.STX/100g, los cuales dificultan encontrar diferencias estadísticamente significativas, por encontrarse en zona menos exponencial de decaimiento de la toxicidad. Consecuentemente se prosiguió con la obtención de organismos intoxicados montando cuelgas con mallas de organismos libres de toxina (de las 3 especies), en las cuelgas de chorito del canal Coldita, sin embargo esta esperada intoxicación natural de las 3 especies de bivalvo no fue lograda en terreno debido a ausencia de FAN de A. catenella al sur de Chiloé durante la época estival de los últimos 3 años. La obtención de ejemplares de la undécima región no fue contemplada en la ejecución de este proyecto, debido a la dificultad operativa en recolección de ejemplares a 500 km de distancia desde Osorno, y por la compleja conectividad con la zona de las Guaitecas desde la décima región continental. Los ejemplares no se obtienen en buenas condiciones fisiológicas como para experiencias de detoxificación con organismos vivos. Por ello se procedió a resolver este obstáculo en Osorno con la intoxicación de bivalvos vivos con células de A. catenella obtenidas por cultivo del dinoflagelados tóxico en Osorno. Las ventajas de este tratamiento es hacerse independiente de eventos naturales de FAN del dinoflagelado tóxico, pero la mayor desventaja es que los perfiles de toxinas tipo STX en el laboratorio son probablemente menos variados que ejemplares de molusco intoxicados con el dinoflagelados del medio natural. La otra situación tuvo que ver con el nivel de volumen de cultivo de A. catenella, pues para la intoxicación importante de bivalvos (cercana a 1.000 µg eq.STX/100g) se requería de aproximadamente 5 millones de células de A. catenella por ejemplar de bivalvo intoxicado, lo cual es un monto considerable. Para ello se requirió cultivar volúmenes cercanos a 10 litros de A. catenella por cada montaje experimental, con 15 a 20 ejemplares de bivalvo (dependiendo del tamaño de éstos), procedimiento experimental que es algo lento debido a que cada cultivo de células de A. catenella tarda entre 25 a 40 días de crecimiento óptimo para la intoxicación de los bivalvos. Igualmente los resultados son científicamente

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válidos en el laboratorio, debido a que la literatura especializada avala este procedimiento, aunque la validación igualmente requiere obtención de ejemplares contaminados con los perfiles tóxicos obtenidos en el medio natural. En esto se continúa trabajando en la actualidad. La intoxicación en el laboratorio igualmente presentó desafíos de estandarización en cuanto a condiciones del cultivo de A. catenella para una adecuada toxicidad del cultivo y de las condiciones óptimas de toxicidad por cada célula de A. catenella, como se describe en Anexo 6. Por su parte, los bivalvos presentan reacción toxicológica adversa la toxicidad por consumo de A. catenella, lo cual en ocasiones es mortal para los bivalvos, o éstos presentan cierre de valvas, sin conocerse las razones fisiológicas para estos resultados. Luego de estos procesos de implementación de las metodologías necesarias para la obtención de los resultados necesarios en el proyecto se procedió a la obtención de las metodologías óptimas de detoxificación, como se detalla en Anexo 6., donde se detalla los tratamientos que mayor impacto mostraron en la detoxificación de las 3 especies de bivalvo. Finalmente, aunque no fue establecido como un objetivo ejecutable del proyecto, se pretendió implementar un módulo de detoxificación de bivalvos en terreno, en zonas costeras del canal Coldita, con lo cual se contaba con la total colaboración de las empresas contraparte del proyecto establecidas y que operan en esta localidad. Sin embargo, esta aspiración no logró ser concretada principalmente por no ocurrir nuevamente evento FAN de A. catenella en la zona de estudio del proyecto (zona oceanográfica al sur de Quellón, en la costa sur del canal Coldita), por lo cual el transporte de ejemplares tóxicos desde otras zonas fue inviable operativamente (desde undécima región, o desde Osorno), debido a las complejidades de mantención fisiológica de los organismos vivos transportados en volúmenes semi-industriales. Actualmente se estudia las variables metabólicas de la detoxificación de toxinas tipo VPM en las 3 especies de molusco, como programa estable del Laboratorio de Bioquímica de Organismos Acuáticos de la Universidad de Los Lagos, y como compromiso de continuidad con el Programa de Marea Roja de Fondef. Esquema simplificado y descripción de los módulos de detoxificación de moluscos vivos diseñados en el proyecto: (ver detalles en Anexo 6 .).

34

Módulo de detoxificación en base a estanques de 700 l, principalmente para chorito y cholga. Descripción constituyentes de pileta y estanques de DETOXIFICACIÓN: Módulo de detoxificación en base a piscina de 90.000 l, detallando sus componentes estructurales y operativos. Detalles del funcionamiento de ambos, se describen en Anexo 6 de este Informe.

35

Constituyentes módulo de detoxificación, formato piscina (en ROJO):

1

2 4

4

3

5

6

7

8

9

10

36

Constituyentes módulo de detoxificación, formato piscina (en ROJO):

N° Componente sistema de detoxificación de bivalvos vi vos 1 Piscina de detoxificación para almeja (en bandejas plásticas

transportables manual o automatizadamente) 2 estanque decantador para oxidación por ozonización 3 generador de ozono 4 bombas de recirculación de agua 5 filtros biológicos 6 filtros físicos por tamaño (20 y 1 µm) y C activo 7 filtros UV en serie 8 toma de agua marina fresca 9 eliminación de agua recirculación tratada (sin riesgo químico ni biológico) 10 Caseta de control operativo.

37

4.2. NEGOCIOS TECNOLÓGICOS Y PRODUCTIVOS

4.2.1. Síntesis de actividades realizadas en Transferencia

Proyecto involucró hasta el final del período formal de ejecución, y más allá de éste, actividades de I&D (las cuales fueron muy demorosas en la obtención de los resultados científicos comprometidos en el proyecto). La Transferencia Tecnológica constó principalmente durante la ejecución del proyecto en exposición periódica ante miembros del Directorio del proyecto, con reuniones de exposición del avance de los resultados ante los miembros de las empresas contraparte, y a través de charlas de difusión como la efectuada durante la 1ª. feria de mitilicultura de Chiloé, “Expo Mejillón-Quellón”, efectuada ante las organizaciones de pesca artesanal, mitilicultores de Chiloé y comunidad científica, en abril de 2010, como se detalla en Anexo 5. del presente Informe. Recientemente se ha creado el la Institución una Unidad especializada de Transferencia Tecnológica y Emprendimiento y Negocios, con la cual se buscará implementar todas las posibilidades de transferir los resultados del proyecto a comunidades de pesca artesanal, como por ejemplo la industria de extracción de almeja de la undécima región, la cual ha estado severamente afectada por cierres cautelares muy prolongados durante los últimos 4 años, en ocasiones con toxicidad VPM durante el año completo (como fue detectado por otro Proyecto del Concurso II del Programa “Marea Roja”, dirigido por la UACh). Frente a zonas de recurrente cierre de extracción por FAN productora de veneno paralizante, como sucede en la undécima y duodécima regiones, los resultados del presente proyecto tienen potencialidad de aportar impactos muy significativos y con creciente pertinencia económica debido a aumento en frecuencia, distribución geográfica de los eventos FAN de A. catenella en el sur de nuestro país. En el marco del presente proyecto, se buscará las estrategias óptimas de transferencia de las variantes de módulos de detoxificación de moluscos bivalvos contaminados con VPM, ya sea provengan de bancos naturales o de cultivo en cuelgas.

4.2.2. Diagrama del Modelo de Negocios

El modelo de negocios consiste en transferir las tecnologías de detoxificación desarrolladas a la cadena de producción de los moluscos bivalvos. De esta manera y en términos generales, el proceso de depuración se puede ubicar en tres puntos principales: En el productor de moluscos, en el procesador y en una empresa de servicios.

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Considerando aquello se postulan tres líneas de transferencia tecnológica y de negocios, las que se presentan en el diagrama del Modelo de negocios. Principales actores:

• Universidad de los Lagos: Desarrollador tecnológico, coordinador de actores de la transferencia tecnológica. Genere la tecnología y realiza las actividades para que esta quede a disposición de los usuarios y del mercado final. Genera ingresos a través de la venta de la tecnología.

• Detoxificadores: correspondiente a las empresas que incorporan la

tecnología de detoxificación en sus procesos productivos. Dichas empresas corresponden principalmente a productores de moluscos, plantas de proceso y empresas prestadoras de servicios, quienes invierten en el equipamiento necesario para realizar dicha actividad.

• Mercado final: Mercado nacional e internacional, considerando la

participación de distribuidores mayoristas y minoristas.

Diagrama de modelo de negocios: página siguiente.

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Figura: Modelo de Negocios

Línea de negocios 3

Línea de negocios 2

Línea de negocios 1

Mercado final nacional e Internacional.

Empresas procesadoras y exportadoras

Productores de moluscos bivalvos

Productores de moluscos bivalvos

Empresas procesadoras y exportadoras

Empresas de servicios de depuración

Productores de moluscos bivalvos

Empresas procesadoras y exportadoras

Detoxi-ficación

Detoxi-ficación

Detoxi-ficación

Productor de la Tecnología Universidad de Los Lagos

$

$

$

40

4.3. IMPACTOS PRODUCIDOS Y ESPERADOS 16

4.3.1. Impactos Económico-Sociales El proyecto buscó generar estrategias de detoxificación para paliar efectos adversos de frecuentes episodios de floración de A. catenella en aguas del sur del país, con eventos cada vez más septentrionales desde regiones XII a XI (década de ’90) y desde región XI a X (década de 2000). Estos eventos FAN afectan tanto a especies de gran interés comercial como almejas y cholgas en bancos naturales (principalmente región de Aysén) como cada vez con mayor amenaza sobre cultivo de chorito en la actividad mitilicultora de la Xa. Región de Los Lagos. El proyecto busca alternativas de gran impacto para comunidades de pesca artesanal en zonas donde ha habido cierre cautelar permanente en el sur-austral (amplias zonas geográficas de la región de Aysén norte). El proyecto permite igualmente alternativas de mitigación de impactos adversos generados por decomisos de moluscos afectados por VPM, muchos de los cuales presentan valores sólo levemente superiores al límite legal permitido. Estas estrategias de detoxificación por módulos permiten enfrentar situaciones de gran sensibilidad para la pesca artesanal y comunidades costeras del sur de nuestro país. El impacto económico social del proyecto se basa en dos puntos de vista principales: 1.-En la capacidad de utilizar producto afectado por mareas rojas, ya sea por estrategias de manejo como de detoxificación en sistemas diseñados para este efecto. Dichos productos afectados podrán ser llevados a un nivel aceptable según normativa para el consumo humano. 2.- Utilizar el sistema de detoxificación de manera estándar para incrementar la seguridad de todos los moluscos bivalvos comercializados. Esto entrega un valor agregado al producto final, que puede ser premiado por el consumidor final, a través de una disposición a pagar un mayor precio o a través de su preferencia de compra. Ambos puntos de vista generan a su vez un impacto positivo en las ventas ya sea por un mayor volumen comercializado (por el uso de moluscos que antas no se podían comercializar) o por un mayor precio. Ello genera un mayor dinamismo en la industria que resulta finalmente en más empleo, mejores salarios y más estabilidad de los puestos de trabajo. Junto a ello, toda la industria de proveedores de la cadena productiva se verá beneficiada de igual manera.

16 Describa cómo los resultados del proyecto generarán impactos en cada una de las áreas que se indican a continuación. Para cada tipo de impacto, establezca: a) cuáles ya se han producido o se están produciendo; b) cuáles se producirán en el futuro. Señale las principales acciones que serán implementadas en cada área para asegurar la obtención de estos impactos.

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También, se debe destacar que la normativa internacional se hace más estricta en relación al nivel de las toxinas permitidas. Por ejemplo, se estudia actualmente en la CEE la disminución del límite permitido de toxina PSP de 80 a 7,5 µg eq.STX/100g de carne de molusco (más de 10 veces de disminución en el límite máximo permitido en alimentos). Esta situación puede ser abordada a través de esta tecnología, generando un aumento de la competitividad de los productos nacionales.

4.3.2. Impactos Científico-Tecnológicos En el presente proyecto se abordó una temática que ha sido extensamente estudiada a nivel mundial, durante algo más de 1 década, y que no ha arrojado resultados científico-tecnológicos de relevancia en medidas prácticas viables industrialmente de manera masiva (sólo hay algunos ejemplos de medidas especie-específicas, como por ejemplo protocolos de lavado-cocción de moluscos). En este proyecto se abordó aspectos no conocidos hasta ahora en el metabolismo de toxinas tipo VMP en moluscos, como por ejemplo el potencial impacto de depredadores sobre la metabolización de toxinas marinas del tipo saxitoxinas, resultados de alto impacto científico y que seguirán siendo caracterizados en el futuro para viabilizar su aplicación tecnológica. Se contó con la colaboración de destacados investigadores a nivel mundial en el presente proyecto, tanto a nivel nacional (Dr. Nestor Lagos, U. de Chile) y en países desarrollados (Dr. Juan Blanco, Centro de Investigaciones Marinas de Galicia, Dr. José Franco, Instituto Oceanográfico de Vigo, Dra. Ana Cabado, de Anfaco-Cecopesca, Vigo, todos expertos en toxinas marinas tipo VPM a nivel mundial).

4.3.3. Impactos Institucionales El proyecto Fondef MR07I1002 generó conocimiento en un área extremadamente sensible para comunidades costeras del sur del país, afectadas por eventos cada vez más frecuentes de FAN (floración algal nociva) por A. catenella, y de cobertura geográfica creciente. Para esto se estructuró en Osorno un grupo humano capacitado en el análisis metodológico instrumental y detección de marea roja a través de A. catenella (tanto de células vegetativas como de la toxicidad a través de derivados de la Saxitoxina en tejidos de moluscos marinos), como también en las metodologías de intoxicación y detoxificación experimental de moluscos filtradores, con fines científicos y tecnológicos buscando establecer medidas potenciales de mitigación de los fenómenos FAN de A. catenella. Estas medidas tecnológicas igualmente presentan potencial de adaptabilidad a otros tipos de toxina marina que afectan diferentes recursos acuáticos en zonas del norte de nuestro país. Se generó un proyecto para el Concurso III del Programa de Marea Roja en detoxificación de otras especies de molusco afectado por toxicidad VPM en el sur del país (regiones X a XII), como es el “loco”, y se espera continuación de esta línea de investigación en proyectos futuros de investigación tanto

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científica como tecnológica, con generación de publicaciones científicas y de divulgación con alto impacto y que aporten a la generación de medidas de mitigación frente a ocurrencia FAN por A. catenella cada vez más frecuente.

4.3.4. Impactos Ambientales Estos fueron primeramente el riesgo de bioseguridad de traslado de moluscos contaminados con VPM. Para ello se obtuvo permiso adquirido de la Autoridad Sanitaria 10ª. Región de Los Lagos, con la confección de Actas correspondientes de transporte de Autoridad Sanitaria de moluscos contaminados con VPM, ejemplares de decomiso por ej en Quellón, transporte de los organismos en contenedores aislantes térmicos sin escurrimiento de líquidos, y todo lo realizado y utilizado en el laboratorio fue tratado con cloro activo y autoclavado antes de su eliminación. En el caso de ambos módulos de detoxificación de moluscos bivalvos contaminados con VPM, se contempla tratamiento de agua en sistema de recirculación, con oxidación por ozonización de todas las aguas residuales de las piscinas de descontaminación, o estanques con choritos (inactivación completa de riesgo biológico y químico por destrucción de materia orgánica), y posterior tratamiento de filtros físicos y UV, de tal manera de impedir absolutamente evacuación de aguas con riesgo de contaminación al medio ambiente con células del dinoflagelado y sus toxinas marinas asociadas.

4.3.5 Impactos Regionales El proyecto MR07I1002 posee potencial de gran impacto en regiones luego de implementación de los resultados del mismo. El fenómeno de las mareas rojas por veneno paralizante (producido por el dinoflagelado A. catenella) ha manifestado regiones de gran afección, las cuales han evolucionado las últimas décadas, alcanzando durante la última década la mitilicultura nacional. Durante décadas pasadas afectaba solamente la pesquería artesanal y el consumo espontáneo en localidades ribereñas de las regiones de Magallanes y Aysén, sin embargo, durante la década del 2000 comenzó a afectar localidades de mayor densidad poblacional en la décima región de Los Lagos, afectando la isla de Chiloé. Por esta razón, el proyecto puede mitigar episodios FAN de A. catenella tanto para la pesquería de extracción como para cultivos de chorito, mejorando igualmente épocas de baja en el fitoplancton marino (inviernos cada vez más prolongados en la época de aparición estival de fitoplancton necesario para la engorda de los ejemplares de cultivo. Las mareas rojas igualmente pueden trasladarse latitudinalmente, con lo cual se abre posibilidades de mitigación futuras frente a desplazamientos geográficos de los episodios FAN de A. catenella (o bien de otras microalgas tóxicas como VAM o VDM), y también puede adaptarse tecnologías a otras especies no abordadas en el presente proyecto, para las cuales están apareciendo eventos FAN de otros microorganismos productores de toxinas, como sucede en regiones del norte del país, por ejemplo en el cultivo de ostiones.

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V. ANEXOS

ANEXO 1. EVALUACIÓN ECONÓMICA SOCIAL Y PRIVADA 17 A1.1. Evaluación Económica Social

A1.1.1. ¿Qué productos, servicios o procesos se ha considerado en la evaluación económica social? Se considera la detoxificación de moluscos bivalvos para la utilización, depuración, proceso y exportación de moluscos bivalvos filtradores afectados por marea roja. Actualmente no existen sustitutos efectivos para esta tecnología. Por otro lado, los moluscos contaminados con marea roja no poseen una utilización alternativa. Se espera que exista una alta aceptación de la tecnología por parte de los usuarios, ya que esta posibilita la utilización de moluscos contaminados con marea roja, los cuales actualmente no poseen otro destino.

A1.1.2. ¿Cuáles son los beneficios y tipo de impactos económico-sociales cuantificados?

a) Indique cuáles serán los principales ítems de beneficios a nivel país. El principal beneficio a nivel país es el incremento de las exportaciones de moluscos bivalvos, por medio de la utilización de moluscos contaminados con marea roja, con su posterior detoxificación, lográndose ingresos adicionales del orden de MM$25.000 en el decimo año de evaluación. Se incrementa la posibilidad de explotar áreas que sufren frecuentemente episodios de blooms fitoplanctónicos relacionados con marea roja, por medio de la explotación de bancos naturales y a través de los cultivos acuícolas. Esto a su vez genera una mayor necesidad de mano de obra y fomenta la inversión principalmente en la XI y XII regiones, generando empleos por el orden de MM$2369.

17 Utilizando el formato de evaluación desarrollado para la presentación inicial del proyecto,

recalcule los indicadores económicos del proyecto con base en los resultados obtenidos, el análisis del estado del arte y las condiciones económicas actuales. Analice las principales diferencias con la evaluación ex–ante (Informe de síntesis enviado a las instituciones en la adjudicación). Informe los indicadores obtenidos. Incluya los detalles de la evaluación económica social, económica privada y memoria de cálculo utilizada. Esta evaluación debe ser consistente con los impactos indicados en el punto 4.3. (INCLUYA FORMATO ACTUALIZADO QUE SE UTILIZA EN LA POSTULACION)

44

Luego de la realización del proyecto, se ha actualizado la información de la industria para la construcción de la evaluación. En términos generales la situación planteada por el proyecto se mantiene, donde los eventos FANs continúan periódicamente con cierres de áreas de extracción.

b) Indique cuáles son las variables más críticas

SIN PROYECTO

Unidades en millones de pesosE

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Exp

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ch

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Incr

eme

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an

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e

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cha

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ost

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Variables Críticas Var. 1 Var. 2 Var. 3 Var. 4 Var. 5 Var. 6

Unidad (m3, kg, l, ton, etc.) ton ton US$/kg US$/kg % %Valor Escenario Pesimista 54.900 585 2,25 12,42 5% 0%

Valor Escenario Optimista 67.100 715 2,75 15,18 6% 5%

Valor Más Probable 61.000 650 2,50 13,80 5% 0%

CON PROYECTO

Unidades en millones de pesos

% d

e In

crem

ento

de

expo

rtac

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s de

C

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epur

ació

n

% d

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crem

ento

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por

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ón

Cos

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pura

ción

Cap

acid

ad p

lant

a de

de

pura

ción

Variables Críticas Var. 1 Var. 2 Var. 3 Var. 4

Unidad (m3, kg, l, ton, etc.) % % $/kg Ton

Valor Escenario Pesimista 23% 5% 51 1.350

Valor Escenario Optimista 28% 6% 41 1.650

Valor Más Probable 25% 5% 46 1.500

c) Indique cuál es la velocidad de logro del impacto. Se estima que el primer impacto se logra al quinto año de haber iniciado el proyecto. El proyecto no posee un impacto ambiental negativo, ya que se considera el tratamiento de las aguas utilizadas en la depuración.

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A1.1.3. ¿Cuál es el horizonte de evaluación y la curva de adopción? El horizonte de evaluación corresponde a un periodo de diez años, se espera lograr incrementar el volumen exportado de moluscos. Como especies representativas se utiliza el chorito y el ostión. Para el primer caso, se espera obtener un incremento de un 25% en las exportaciones. En el segundo caso, se espera un incremento de un 5% en las exportaciones. Se espera que se llegue al 100% de adopción en el noveno año de evaluación.

A1.1.4. ¿Cuál es la situación actual? (En la cual no se consideran proyecciones con el proyecto). En la situación sin proyecto se considera la actual industria procesadora y exportadora de mitílidos y pectínidos, la cual se basa principalmente en cultivos acuícolas. Se considera el cultivo de mitílidos presenta un crecimiento estimado en un 5% anual partiendo de las 61.000 toneladas exportadas en el 2012, mientras que el cultivo de pectínidos se mantiene constante en 650 toneladas exportadas. Se consideran precios de venta FOB de mercado, US$ 2,5/ kg para los mitílidos, mientras que en el caso de los pectínidos estos ascienden a US$ 13,8/kg. Se considera en la evaluación la compra de moluscos frescos y su posterior procesamiento y exportación. A nivel de eventos FAN, ha existido un incremento en frecuencia, distribución geográfica e intensidad en nuestro país, en diferentes zonas geográficas; avance de VPM desde Magallanes a Aysén en década del 1990, de Aysén a Los Lagos, en la década de 2000. Ej. VPM en Chiloé: 2002; 2006; 2009; 2010, junto con el cierre permanente de extracción de moluscos bivalvos en amplias zonas de nuestro mar interior. Junto a ello, esto fenómenos son muy poco predecibles en cuanto a su ocurrencia e intensidad.

A1.1.5. ¿Cuál será la situación futura a causa de la ejecución del proyecto? En la situación con proyecto se considera una situación base similar a la observada en la situación con proyecto, sin embargo, se incorpora las zonas afectadas con marea roja, con posibilidades de explotación de moluscos, ya sea por medio de extracción o por medio del cultivo. De esta manera se obtiene un incremento de un 25% del volumen de exportación para mitílidos, mientras que en pectínidos este se incrementa en un 5%. La utilización de moluscos contaminados con marea roja se logra mediante su detoxificación a través de la implementación de plantas depuradoras, la inducción al lavado del hepatopáncreas de los moluscos y la implementación de procesos biológicos, físicos y/o químicos que permitan lograr la inocuidad de las aguas utilizadas en la depuración.

46

Se considera un incremento en los costos de procesamiento de alrededor de $46/kg de detoxificados, lo que permite obtener una rentabilidad atractiva. Para ello se consideran inversiones relacionadas con las instalaciones necesarias para implementar una planta de detoxificación, cuya capacidad se estima en 1.500 toneladas anuales.

A1.1.6. ¿Cuáles son los beneficios económico-sociales no cuantificados? Exportación de otros moluscos filtradores, como la almeja, navajuela, entre otros. Incremento en la oferta en el mercado nacional de moluscos vivos. Reducción en el gasto publico por tratamientos de intoxicaciones.

A1.1.7. ¿Cuál es el impacto regional del proyecto? Desarrollo: X región Impacto: III, IV, X, XI y XII

A1.1.8. ¿Cuáles son los indicadores de la evaluación económica-social?

VAN (8%)

millones de pesos

TIR %

2.734 36,31

47

A1.2. Evaluación Económica Privada A1.2.1. ¿Cuáles son los negocios considerados en la evaluación económica

privada? a) Negocio Tecnológico para la Institución y Contrapartes (Considere el principal). El negocio tecnológico consiste en la venta de la tecnología de detoxificación de moluscos afectados por marea roja. Se considera el cobro de una patente de uso y servicio de transferencia tecnológica por MM$40 por empresa. El paquete tecnológico se transfiere a 16 unidades de negocio (empresas). Los costos se relacionan con costos fijos relacionados con remuneraciones y variables relacionados con las actividades de transferencia tecnológica de los resultados a las empresas. Se considera además un Gastos de administración, ventas y comercialización por un 3% de las ventas,

b) Negocio Productivo o de Servicios (Considere el principal) El negocio productivo consiste en la incorporación de la tecnología de detoxificación de moluscos bivalvos contaminados con marea roja, por parte de las empresas procesadoras y exportadoras, lo que permite recuperar el 100% de los moluscos contaminados. Para la evaluación, la tecnología es incorporada por plantas de proceso, quienes compran normalmente moluscos para su proceso y exportación. Se considera un incremento de un 25% en sus exportaciones mediante la exportación de moluscos detoxificados, provenientes tanto de cultivos como extraídos del medio natural en zonas afectadas por marea roja. Es altamente probable que el negocio sea estable en el tiempo, ya que el proyecto genera continuidad y seguridad en la producción de moluscos, ya que muchas veces se pierden cosechas y extracciones por la acción de la marea roja. Los activos complementarios considerados son las inversiones necesarias para instalar un sistema de depuración, principalmente estanques y sistemas de recirculación y detoxificación. Al cuarto año se inicia la industrialización de la tecnología, mientras que al noveno año se alcanza el régimen.

A1.2.2. ¿Qué horizonte de evaluación se ha considerado? Se ha considerado un horizonte de evaluación de 10 años, en base a la fácil implementación de los resultados y a la adopción de la tecnología desarrollada.

48

A1.2.3. ¿Cuáles son los indicadores económicos del negocio tecnológico principal para la institución de I&D?

VAN

Tasa de descuento

TIR %

MM$85 10% 18 48

A1.2.4. ¿Cuáles son los indicadores económicos del negocio productivo o de servicios principal para un agente intermedio tipo?

VAN Tasa de

descuento

TIR %

MM$55 10% 18

A1.2.5. ¿Cuáles son los indicadores económicos del negocio productivo o de servicios principal para la suma de todos los posibles agentes intermedios?

VAN Tasa de

descuento

TIR %

MM$704 10% 20

18 Es posible utilizar otra tasa pertinente para el sector en la ev. del negocio tecnológico o productivo

49

A1.3. Memorias de Cálculo.

A1.3.1. Memoria de cálculo de la evaluación económico-social.

Situación Sin Proyecto

a) Identificación de Variables Críticas:

SIN PROYECTO

Unidades en millones de pesosE

xpo

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Ch

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Exp

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acio

nes

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eme

nto

an

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e

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ost

ión

Variables Críticas Var. 1 Var. 2 Var. 3 Var. 4 Var. 5 Var. 6

Unidad (m3, kg, l, ton, etc.) ton ton US$/kg US$/kg % %Valor Escenario Pesimista 54.900 585 2,25 12,42 5% 0%

Valor Escenario Optimista 67.100 715 2,75 15,18 6% 5%

Valor Más Probable 61.000 650 2,50 13,80 5% 0%

b) Cálculo de Ingresos: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Exportación tonChorito 61.000 64.050 67.253 70.615 74.146 77.853 81.746 85.833 90.125 94.631 99.363 104.331Ostión 650 650 650 650 650 650 650 650 650 650 650 650

Ingresos MM$Chorito 68.625 72.056 75.659 79.442 83.414 87.585 91.964 96.562 101.390 106.460 111.783 117.372Ostión 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037Total 72.662 76.093 79.696 83.479 87.451 91.621 96.001 100.599 105.427 110.496 115.819 121.409 Ingresos con corrección social

AÑO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

INGRESOSMoneda nacional 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Moneda extranjera equivalente 73.388 76.854 80.493 84.313 88.325 92.538 96.961 101.605 106.481 111.601Total ingresos 73.388 76.854 80.493 84.313 88.325 92.538 9 6.961 101.605 106.481 111.601

c) Cálculo de Costos:

50

Proceso de moluscos

Costos estimados

ChoritoPrecio promedio de exportación Chorito 2,50 US$/kgRendimiento Congelado Chorito 22%Crecimiento industria Mitílidos 5%Toneladas exportadas 61.000Toneladas compradas 277.273Proceso Chorito 280 $/kgCompra Chorito 120 $/kg

OstiónPrecio promedio de exportación Ostión 13,80 US$/kgRendimiento IQF Ostión 80%Crecimiento industria Pectínidos 0%Toneladas exportadas 650Toneladas compradas 813Proceso Ostión 250 $/kgCompra ostión 3150 $/kg

Empaque 70 $/kgOtros 25 $/kgComercialización 40 $/kg Costos Variables MM$ChoritoProceso 17.080 17.934 18.831 19.772 20.761 21.799 22.889 24.033 25.235 26.497 27.822 29.213Materia Prima 33.273 34.936 36.683 38.517 40.443 42.465 44.589 46.818 49.159 51.617 54.198 56.908Empaque y comercialización88 92 97 102 107 112 118 123 130 136 143 150Total 50.440 52.963 55.611 58.391 61.311 64.376 67.595 70.975 74.524 78.250 82.162 86.270

OstiónProceso 163 163 163 163 163 163 163 163 163 163 163 163Materia Prima 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559Empaque y comercialización110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110Total 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832

Costos Fijos MM$

ChoritoGerentes 816 857 900 945 992 1.041 1.094 1.148 1.206 1.266 1.329 1.396Técnicos 255 268 281 295 310 325 342 359 377 396 415 436Otros 85 89 94 98 103 108 114 120 126 132 138 145Total 1.156 1.214 1.274 1.338 1.405 1.475 1.549 1.627 1.708 1.793 1.883 1.977

OstiónGerentes 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48Técnicos 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15Otros 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5Total 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68

51

Costos con corrección social

AÑO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

COSTOSMano de obra calificada 1.134 1.188 1.244 1.303 1.365 1.430 1.498 1.570 1.645 1.724Mano de obra no calificada 6.557 6.880 7.219 7.575 7.949 8.341 8.753 9.185 9.639 10.116Insumos (M/N) 35.832 37.496 39.243 41.077 43.003 45.025 47.148 49.377 51.718 54.176Insumos (M/E) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Bienes de capital (M/N) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Bienes de capital (M/E) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Otros (M/N) 10.554 11.073 11.618 12.191 12.792 13.423 14.086 14.782 15.513 16.280Otros (M/E) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9Total costos 54.077 56.638 59.326 62.148 65.112 68.224 71. 491 74.922 78.524 82.306

d) Cálculo de Inversiones: No se requieren inversiones ya que se supone que la capacidad instalada de las plantas de proceso absorbe el crecimiento esperado.

Situación Con Proyecto

a) Identificación de Variables Críticas:

CON PROYECTO

Unidades en millones de pesos

% d

e In

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ento

de

expo

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ione

s de

C

horit

os p

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epur

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n

% d

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Cos

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e de

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ción

Cap

acid

ad p

lant

a de

de

pura

ción

Variables Críticas Var. 1 Var. 2 Var. 3 Var. 4

Unidad (m3, kg, l, ton, etc.) % % $/kg Ton

Valor Escenario Pesimista 23% 5% 51 1.350

Valor Escenario Optimista 28% 6% 41 1.650

Valor Más Probable 25% 5% 46 1.500 b) Cálculo de Ingresos:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Exportación tonChorito 61.000 64.050 67.253 70.615 74.146 77.853 81.746 85.833 90.125 94.631 99.363 104.331Ostión 650 650 650 650 650 650 650 650 650 650 650 650

Ingresos MM$Chorito 68.625 72.056 75.659 79.442 83.414 87.585 91.964 96.562 101.390 106.460 111.783 117.372Ostión 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037 4.037Total 72.662 76.093 79.696 83.479 87.451 91.621 96.001 100.599 105.427 110.496 115.819 121.409

Ingreso extra MM$Chorito 0 0 0 0 2.085 4.379 9.196 14.484 20.278 23.953 27.946 29.343Ostión 0 0 0 0 101 202 404 605 807 908 1.009 1.009Total 0 0 0 0 2.186 4.581 9.600 15.090 21.085 24.862 28.955 30.352

52

Ingresos con corrección social AÑO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

INGRESOSMoneda nacional 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Moneda extranjera equivalente 73.388 76.854 80.493 84.313 90.533 97.164 106.657 116.845 127.777 136.712Total ingresos 73.388 76.854 80.493 84.313 90.533 97.164 1 06.657 116.845 127.777 136.712

c) Cálculo de Costos: A los costos de la situación sin proyecto se le suman los siguientes Costos por planta depuradora de capacidad de 1500 toneladas/año Costos Mensual (M$) Anual (M$)Electricidad 25.000RRHH 4 150 7.200Costos administración 300 3.600Asistente 2 400 9.600Otros 5% 1.020Total 46.420

Costo total de depuración por kg 46

53

Costos Variables MM$ChoritoProceso 17.080 17.934 18.831 19.772 20.761 21.799 22.889 24.033 25.235 26.497 27.822 29.213Materia Prima 33.273 34.936 36.683 38.517 40.443 42.465 44.589 46.818 49.159 51.617 54.198 56.908Empaque y comercialización88 92 97 102 107 112 118 123 130 136 143 150Total 50.440 52.963 55.611 58.391 61.311 64.376 67.595 70.975 74.524 78.250 82.162 86.270

ExtraProceso 0 0 0 0 519 1.090 2.289 3.605 5.047 5.962 6.955 7.303

Materia Prima 0 0 0 0 1.011 2.123 4.459 7.023 9.832 11.614 13.549 14.227Empaque y comercialización 0 0 0 0 3 6 12 19 26 31 36 38

Total 0 0 0 0 1.533 3.219 6.760 10.646 14.905 17.606 20.541 21.568

Ostión MM$Proceso 163 163 163 163 163 163 163 163 163 163 163 163Materia Prima 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559 2.559Empaque y comercialización110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110Total 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832 2.832

ExtraProceso 0 0 0 0 4 8 16 24 33 37 41 41

Materia Prima 0 0 0 0 64 128 256 384 512 576 640 640Empaque y comercialización 0 0 0 0 3 5 11 16 22 25 27 27

Total 0 0 0 0 71 142 283 425 566 637 708 708

Costos Fijos MM$ChoritoGerentes 816 857 900 945 992 1.041 1.094 1.148 1.206 1.266 1.329 1.396Técnicos 255 268 281 295 310 325 342 359 377 396 415 436Otros 85 89 94 98 103 108 114 120 126 132 138 145Total 1.156 1.214 1.274 1.338 1.405 1.475 1.549 1.627 1.708 1.793 1.883 1.977

OstiónGerentes 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48Técnicos 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15Otros 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5Total 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68

Extra

Técnicos 0 0 0 0 8 17 36 56 78 92 108 113Otros 0 0 0 0 3 6 12 19 26 31 36 38Total 0 0 0 0 11 23 48 75 104 123 143 150

18.233Ton a depurarChoritos 0 0 0 0 8.426 17.694 37.157 58.523 81.932 96.782 112.912 118.558Ostión 0 0 0 0 20 41 81 122 163 183 203 203

Plantas necesarias 1.500 de capacidad0 0 0 0 6 12 25 40 55 65 76 80

Costos de depuración 46 $/kgmm$ 0 0 0 0 389 816 1.713 2.698 3.776 4.460 5.203 5.463 Costos con corrección social

AÑO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

COSTOSMano de obra calificada 1.134 1.188 1.244 1.303 1.373 1.447 1.534 1.626 1.724 1.817Mano de obra no calificada 6.557 6.880 7.219 7.575 8.147 8.758 9.628 10.563 11.567 12.392Insumos (M/N) 35.832 37.496 39.243 41.077 44.078 47.276 51.863 56.784 62.062 66.366Insumos (M/E) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Bienes de capital (M/N) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Bienes de capital (M/E) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Depuración 0 0 0 0 381 800 1.679 2.644 3.702 4.372Otros (M/N) 10.554 11.073 11.618 12.191 13.112 14.094 15.495 16.999 18.615 19.943Otros (M/E) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9Total costos 54.077 56.638 59.326 62.148 67.095 72.380 80. 205 88.624 97.678 104.899

54

d) Cálculo de Inversiones: Por planta depuradora se requiere la siguiente inversión: Capacidad Planta depuradora 1.500 toneladas

Inversión M$ TotalEstanques 30 200 6.000Sistema de Detoxificación 6.000 6.000Infraestructura 8.000 8.000Otros 5% 1.000Total 21.000 Al considerar 16 plantas se tiene la siguiente inversión en la industria: INVERSIONESEn moneda nacional 0 0 0 126 126 273 315 315 210 231En moneda extranjera 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Total inversiones 0 0 0 126 126 273 315 315 210 231

A1.3.2. Memoria de cálculo de la evaluación económica privada

Negocio Tecnológico para la Institución (Considere el principal)

a) Cálculo de Ingresos Se consideran ingresos originados en la venta de paquetes tecnológicos a través de licencias y servicio transferencia tecnológica a las empresas interesadas, se consideran 16 paquetes comercializados.

ITEM 0 1 2 3 4 5 6 7INGRESOSLicencias o Royalties u Otros Pagos(**) 60 30 60 90 90 60 90Otros Ingresos 0 0 0 0 0 0 0 0Ingresos totales 0 60 30 60 90 90 60 90

PERIODO

b) Cálculo de Costos Los costos fijos tienen relación con el personal necesario para realizar las actividades de transferencia tecnológica, los variables son estimados en función del nivel de ingresos a un 15% de las ventas. Se consideran Gastos de administración, ventas y comercialización por 3% de los ingresos generados.

55

ITEM 0 1 2 3 4 5 6 7COSTOSCostos fijos 24 24 24 24 24 24 24 24Costos Variables 0 9 5 9 14 14 9 14Gastos de administración, ventas y comercialización 0 2 1 2 3 3 2 3Depreciación y amortización 0 2 2 2 2 2 2 2Costos totales 24 36 31 36 42 42 36 42

PERIODO

c) Cálculo de Inversiones Las inversiones se consideran en torno a los MM$15 relacionados con equipos de oficina y un vehículo para movilización.

ITEM 0 1 2 3 4 5 6 7INVERSIONES (***)Costo de LICENCIAS a pagar a terceros (*) 0 0 0 0 0 0 0 0Inversión en equipos e instalaciones 15 0 0 0 0 0 0 0Capital de trabajo 6 0 0 0 0 0 0 0Valor residual 0 0 0 0 0 0 0 5

PERIODO

Negocio Productivo o de Servicios Tecnológicos (Considere el principal)

a) Cálculo de Ingresos Se consideran los ingresos diferenciales de una empresa que incorpora la tecnología de depuración, lo que le permite incrementar el ingreso de materia prima que al ser depurada queda apta para ser comercializada. ITEM 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10INGRESOSProducto/Servic io/Proceso más importante 0 219 305 384 377 383 382 362 379 379 379Otros Ingresos 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Ingresos totales 0 219 305 384 377 383 382 362 379 379 379

PERIODO

b) Cálculo de Costos Los costos se relacionan con los de proceso y depuración indicados en el capitulo anterior, tratados en forma incremental con la producción adicional depurada.

ITEM 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10EGRESOSCostos fijos 0 4 3 3 2 2 2 2 2 2 2Costos Variables 0 199 278 350 344 350 349 331 347 347 347Gastos de administración, ventas y comercialización 0 7 9 12 11 12 11 11 11 11 11Depreciación y amortización 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Egresos totales 1 210 291 364 358 363 363 343 360 360 360

PERIODO

c) Cálculo de Inversiones Las inversiones realizadas corresponden a la planta de depuración detallada en el capitulo anterior, el capital de trabajo y a el pago de la tecnología a la Universidad.

56

ITEM 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10INVERSIONESCosto de LICENCIAS/Royalties a pagar a la Institución 40Inversión en equipos e instalaciones 21 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Capital de trabajo 35 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0Valor residual 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 162

PERIODO

57

ANEXO 2. PLAN DE MANTENCIÓN DE LA INFRAESTRUCTURA HABILITADA, BIENES, EQUIPOS Y OTROS ELEMENTOS ADQUIRIDOS 19

A2.1. Listado de obras de infraestructura 20

Nº Nombre y

descripción de la infraestructura

Usos Unidad

Institucional Dirección (calle, Nº, ciudad)

No procede

19 Identifique cada obra de infraestructura y cada equipo cuyo valor facturado sea mayor a US$5.000. 20 Listado definitivo, identificando la obra, descripción, superficie construida, la unidad institucional responsable y la dirección del lugar en que se encuentra

58

A2.2. Listados de bienes (equipos y otros) 21

Nº Nombre del equipo Marca Serie Modelo Nº inventario Precio de compra

(MM$) 1 Cromatógrafo líquido

HPLC-FLD-DAD Jasco C10646

0865 PU-2089 75779 31,3565

2 Microscopio invertido Trinocular con cámara

fotográfica y platina

Leica S40-Slider

11521253

DMIL Led 149252 7,34167

Nº Usos 22 Unidad

Institucional Dirección (calle N°, ciudad)

1 1, 2, 3. Depto. Acuicultura, Lab. Bioquímica

Av. Fuchslocher 1305, Osorno (Universidad de Los Lagos)

2 2, 3. Lamar Asoc. Serrano 565, Castro.

A2.3. Plan De Mantenimiento 23

Nº 24

Nombre del equipo Actividades principales

de mantención Período entre mantenciones

Unidad Institucional

1 Cromatógrafo HPLC Limpieza exterior, lavado conductos cabezales bomba, lavado con agua dest. Inyector,

Limpieza completa mensual, lavado

Laboratorio Bioquímica Organismos

21 Listado definitivo, identificando el equipo, su nombre, características y código del equipo y de inventario, precio facturado, la unidad institucional a que está asignado, el responsable de la unidad y la dirección del lugar en que se encuentra. 22 Usos dentro de las líneas de Investigación y Desarrollo del proyecto: (1) Docencia, (2) Investigación, (3) Servicios, (4) Capacitación,(5) Asesorías , Otros describir 23 El contrato de finiquito incluirá el plan de mantenimiento, operación y cuidado de equipos y mantención de obras así como los seguros de rigor. El plan de mantenimiento se debe realizar según estándares establecidos por la institución. 24 Mantenga la numeración del cuadro anterior.

59

mantención mangueras y conectores con etanol 20%.

y mantención mangueras cada vez que se usa.

Acuáticos, U. Los Lagos.

2 Microscopio invertido Limpieza externa sistema óptico y platina, lavado superficies portamuestra con alcohol 10%. Mantención sistema mecánico, lubricación engranajes platina.

Cada vez luego de ser utilizado. Lubricación semestral.

Laboratorio Lamar, Castro.

ANEXO 3. SOLICITUDES Y REGISTROS DE PROTECCION DE PROPIEDAD INTELECTUAL 25

No hay hasta el momento.

ANEXO 4. PUBLICACIONES 26 Publicaciones científicas comprometidas, 2 ISI, 1 scielo, están en preparación: Las 2 publicaciones ISI corresponden a resultados de detoxificación para Mytilus chilensis y Venus antiqua, respectivamente, y la publicación scielo corresponde a cholga Aulacomya

atra. (Ver resultados principales constituyentes de estas publicaciones en el Anexo 6.)

EVENTOS y Gira Tecnológica:

-Tesis (portadas) -Presentaciones y Reuniones periódicas del Programa “Marea Roja” -Reuniones ante Autoridades (ISP) -Taller internacional Floraciones Algales Nocivas, Puerto Montt, Enero 2011.

25 Copia de las solicitudes presentadas durante la ejecución del proyecto. Por ejemplo, solicitudes de patentes, registros de marca, etc. Debe corresponder con la tabla: 3.2.2. Resultados de Protección. 26 Copia de todas las publicaciones científico-tecnológicas, eventos, tesis, etc. realizadas a partir de las actividades desarrolladas por el proyecto. Debe corresponder con la tabla 3.2.4. Resultados de Producción Científica. Inserte una lista con estructura bibliográfica por cada categoría y señale si se encuentra en prensa: Presentaciones a eventos nacionales, Presentaciones a evento internacionales, Artículos científicos en revistas nacionales, Artículos científicos en revistas internacionales de corriente principal, Libros, Capítulos de libros, Tesis Magíster, Tesis Doctorado, Proyectos de Título, Cooperación internacional recibida o entregada, Nuevos proyectos generados, Otras publicaciones científicas.

60

Tesis ejecutadas en el proyecto: (Portada 2 tesis de pregrado)

61

62

Gira Tecnológica a Vigo (Galicia) Visita como programa fue a 4 lugares de relevancia en estudio mareas rojas en Galicia -Instituto Oceanográfico de Vigo. -CRLMB (Laboratorio de Referencia de Bio-toxinas Marinas) -Intecmar -2 plantas depuradoras de Pontevedra. Además, como parte de la estadía: -Visita al Centro de Investigaciones Marinas (CIMA), Vilanova de Arousa, Pontevedra. El CIMA depende de la Xunta de Galicia. Se visitó en el CIMA al Dr. Juan Blanco, experto en modelos de intoxicación /detoxificacion de moluscos marinos. -Visita a ANFACO, Laboratorio de Control de Calidad que monitorea toda la actividad conservera en Galicia y de España, a cargo de la Dra. Ana Cabado. Eventos nacionales e internacionales: 1.-Talleres internos del programa “Marea Roja”; reuniones y presentaciones en las fechas: Santiago, 23.6.’08; Puerto Montt, 9.5.’09; Concepción, 31.8.’09; Santiago, 11.5.’10.) Reunión Autoridades Sernapesca e ISP: (Santiago, 09.dic.2009)

"" DESARROLLO DE PROCESOS Y DESARROLLO DE PROCESOS Y TECNOLOGIAS PARA EL DISETECNOLOGIAS PARA EL DISE ÑÑO Y O Y

DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE

IMPORTANCIA COMERCIAL "IMPORTANCIA COMERCIAL "

MR07 I 1002MR07 I 1002Programa Marea RojaPrograma Marea Roja

CONICYTCONICYT

I.S.P. I.S.P. –– Santiago,Santiago, 9.12.20099.12.2009

UNIVERSIDAD DE LOS LAGOS

63

Taller del Programa: fecha presentación: 22.04.2010, Puerto Montt.

SituaciSituacióón Internacional, n Internacional, tendencias mundiales del tendencias mundiales del

fenfenóómeno marea roja.meno marea roja.Puerto Montt, 22.4.2010Puerto Montt, 22.4.2010

Programa Marea Roja

FONDEF - CONICYT

Programa Marea Roja

FONDEF - CONICYT

2.-Presentaciones difusión del proyecto a)Expo Mejillón-Quellón, 1ª. feria de mitilicultura en Quellón (fecha presentación: 23.04.2010, Quellón, Chiloé)

“ DESARROLLO DE PROCESOS Y TECNOLOGIAS PARA EL DISEÑO Y

DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE

IMPORTANCIA COMERCIAL "

““ DESARROLLODESARROLLO DE PROCESOS Y DE PROCESOS Y TECNOLOGIAS PARA EL DISETECNOLOGIAS PARA EL DISEÑÑO Y O Y

DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DIMENSIONAMIENTO DE UN MODULO DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE DETOXIFICACION DE MOLUSCOS VIVOS DE

IMPORTANCIA COMERCIAL "IMPORTANCIA COMERCIAL "

Proyecto “MR07 I 1002”

FONDEF – CONICYT

1ª. Feria

“EXPO Mejillón-Quellón”

Proyecto “MR07 I 1002”

FONDEF – CONICYT

1ª. Feria

“EXPO Mejillón-Quellón”

b) 3er. Curso de Invierno Centro I-mar, sobre “INOCUIDAD ALIMENTARIA DE MOLUSCOS BIVALVOS”, Puerto Montt

64

(fecha presentación: 19.08.2010, Centro I-mar, U. Los Lagos)

Tratamientos anti-toxina de FANs

Dr. Robert Simpfendörfer

Fondef MR07I1002

Universidad de Los Lagos

STX

3) Seminario Internacional “Floraciones de algas Nocivas en el sur de Chile: Avances y

Desafíos”, Puerto Montt, Enero 2011: (fecha presentación: 13.enero.2011)

Estrategias de detoxificación de moluscos contaminados con biotoxinas marinas, en

base a matriz biológica y tipo de toxina

Robert SimpfendörferUniversidad de Los Lagos

Osorno

65

66

67

68

69

70

71

72

ANEXO 6. 27 Descripción de los Resultados Científico-Tecnológicos 6.1.- Estudio de detoxificación de chorito en terreno. Zona de estudio de detoxificación natural de bivalvos de cultivo (FAN de A. catenella en marzo-abril de 2009). (Fig. 1). Canal Coldita se encuentra señalado con flecha amarilla.

Fig. 1.- LOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DEL CANAL COLDITA

(sur de Quellón) 27 Si Usted encuentra necesario incluir otros documentos en este informe como anexo, detállelos acá. Como por ejemplo: Plan de negocio detallado, Planes de trabajo inicial y efectivamente ejecutado (Carta Gantt), Planilla presupuestaria inicial y de ejecución total del proyecto, anexos científicos y tecnológicos. Detalles específicos de la información técnica descrita en del 4.1. de este informe, etc.

→

73

Se observa en la Fig. 2 la cinética de detoxificación de toxinas tipo VPM en tejidos totales de chorito, luego de intoxicación natural en el canal Coldita. Se aprecia claramente (con muy buena regresión lineal, la detoxificación en terreno de los bivalvos cultivados en cuelga, con un período de detoxificación de 6 semanas hasta el límite máximo permitido. Este tiempo fue considerado como de referencia para las experiencias de detoxificación en el laboratorio (con ejemplares contaminados en el medio natural o bajo condiciones experimentales de intoxicación con cultivos de A. catenella). Fig. 2.- Tiempo de depuración espontánea en terreno en choritos en cultivo durante FAN de A. catenella marzo-abril 2009, canal Coldita. Se muestra gráfico semi-log. Análisis fueron realizados por bioensayos de ratón, en laboratorio de la Universidad de Chile en Castro. 6.2.- Evaluación BIOENSAYO DE RATÓN en laboratorios certificados en la Isla de Chiloé. Ejemplares de Mytilus chilensis fueron muestreados desde cultivo en cuelgas en el canal Coldita, sur de Chiloé. Los ejemplares se encontraban tóxicos con toxicidad VPM debido a FAN de A. catenella ocurrido a fines del verano 2009 (marzo). La cinética espontánea de depuración bajo condiciones de cultivo en el medio ambiente natural fue monitoreada por análisis HPLC en el laboratorio en Osorno y

Curva detoxificacion Mytilus chilensis Mauchil

y = 3541,1e-0,6777x

R2 = 0,99251

10

100

1000

10000

0 1 2 3 4 5 6 7

Tiempo (semanas)

PS

P (

ug e

q.S

TX

/100

g)

74

enviando muestras a 2 laboratorios de análisis reconocidos por la Autoridad Sanitaria. La sensibilidad del método de bioensayos de ratón no es muy baja, por lo cual el límite de detección queda solo un poco por debajo de límite legal que permite la norma sanitaria para la extracción y comercialización de moluscos bivalvos. Por ello muchos decomisos generan dudas en pescadores afectados por encontrarse valores levemente superiores a 80 µg eq.STX/100g de tejido fresco. Esta razón hizo necesario un procedimiento de “calibración” en el comienzo de este proyecto, al enviar muestras a laboratorios diferentes: se envió muestras homogeneizadas previamente de chorito tóxico a los laboratorios de la Aurtoridad Sanitaria en Quellón y Puerto Montt, y a los laboratorios de la Universidad de Chile en Castro y de la UACh en Puerto Montt. En 1 sólo análisis preliminar en estos 4 laboratorios se encontró una diferencia superior a 40 % para una misma muestra según los laboratorios diferentes (choritos con toxicidad promedio de 1400 µg eq.STX/100g). Se continuó trabajando con 2 laboratorios durante la cinética de detoxificación de los choritos de cuelga (ver Fig. 2) contaminados durante marzo de 2009 en Coldita, estos laboratorios fueron el de la Universidad de Chile en Castro y el de la Autoridad Sanitaria en Quellón. Las figuras 3 a 5 muestran las curvas semilogarítmicas de detoxificación espontánea de la toxicidad VPM total medida por bioensayos de ratón, resultados que muestran cinéticas claramente de 1er. Orden y con curvas muy similares de cinética de detoxificación para M. chilensis en los 3 orígenes geográficos investigados en el canal Coldita, sectores Mauchil , Coldita , Piedra Blanca (separados entre ellos por 1 km de distancia en el sector sur-oriental del canal). Se aprecia curvas altamente coincidentes en los resultados obtenidos para ambos laboratorios de análisis certificados, lo cual permite concluir que la metodología se encuentra muy bien estandarizada en los laboratorios encargados de monitoreo para asegurar seguridad alimentaria en nuestra población. Un tema sensible para la pesca artesanal sigue siendo aquellas muestras decomisadas con algo más de 80 µg eq.STX/100g, las cuales podrían ser negativas debido al mayor margen de error de la metodología al acercarse a su límite de detección. Sin embargo, el análisis comparativo de las curvas de detoxificación en canal Coldita, no mostraron mayor error metodológico al acercarse los valores de toxicidad a los valores permitidos legalmente para comercialización. Se concluye que los laboratorios instalados en el sur de Chile para el monitoreo de VPM en moluscos para consumo humano, se encuentran trabajando bajo condiciones equivalentes según sus resultados, considerando más aún que se trata de un bioensayo.

75

Cinética Detoxificación "MAUCHIL" 2009M. chilensis

y = 3541,1e -0,6777x

R2 = 0,9925

y = 2624e -0,6827x

R2 = 0,9551

10

100

1000

10000

1 2 3 4 5 6

Tiempo (Semanas)

PS

P

(ug

eq.S

TX

/ 10

0 g)

80 µµµµg eq.STX/100 g

T1 = 2.4.2009 Figura 3.- Detoxificación de chorito proveniente de Mauchil, canal Coldita, monitoreado por bioensayos de ratón en 2 laboratorios de la décima región.

Cinética Detoxificación "COLDITA" 2009M. chilensis

y = 2727,3e -0,705x

R2 = 0,9803

y = 1703,5e -0,6029x

R2 = 0,91551

10

100

1000

10000

1 2 3 4 5 6

Tiempo (Semanas)

PS

P (

ug e

q.S

TX

/100

g)

80 µµµµg eq.STX/100 g

T1 = 2.4.2009

76

Figura 4.- Detoxificación de chorito proveniente de sector Coldita, monitoreado por bioensayos de ratón en 2 laboratorios de la décima región de Los Lagos.

Cinética Detoxificación "Piedra Blanca" 2009M. chilensis

y = 611,57e -0,5634x

R2 = 0,9728

y = 565,72e -0,5964x

R2 = 0,96631

10

100

1000

1 2 3 4 5 6

Tiempo (Semanas)

PS

P

(ug

eq.S

TX

/100

g)

80 µµµµg eq.STX/100 g

T1 = 2.4.2009

Figura 5.- Detoxificación de chorito proveniente de sector Piedra Blanca, canal Coldita, monitoreado por bioensayos de ratón en 2 laboratorios de la décima región de Los Lagos. 6.3.- Situación FAN de A. catenella al sur de Chiloé durante la ejecución del proyecto . En el presente proyecto se trabajo en la 10ª. Región, pues los costos operativos de viajar a la 11ª. Región con la frecuencia que hubiese sido requerida para la obtención de ejemplares contaminados con VPM de las 3 especies de molusco bivalvo, no eran viables con los recursos disponibles en el presente proyecto. Más aún las empresas asociadas al proyecto operan con cultivos de mitílidos en la 10ª Región sur, por lo cual se debió contar con episodios FAN al sur de la isla de Chiloé en el período de ejecución del proyecto. Esto sucedió en 2 ocasiones, en los veranos de 2009 y de 2010. Sólo se alcanzó toxicidad VPM en moluscos de

77

cultivos de chorito al sur de Quellón durante marzo de 2009, ejemplares con los cuales se realizó la cinética de detoxificación espontánea bajo condiciones de terreno durantes las semanas siguientes a la máxima intoxicación de chorito con veneno paralizante (toxinas marinas tipo STXs). Con estos ejemplares contaminados de chorito con VPM, también se efectuó (contando para ello con autorización formal de la Autoridad Sanitaria de Puerto Montt (Dr. Roa, encargado área Mareas Rojas) detoxificación experimental en el laboratorio en Osorno, bajo las diferentes condiciones bióticas y abióticas descritas en el proyecto. Las manifestaciones FAN de A. catenella en el sur fueron de impredecible comportamiento, lo que dificultó una planificación de obtención de moluscos contaminados con toxinas tipo STX’s. La segunda ocasión de evento FAN de A. catenella durante la ejecución del proyecto fue en marzo-abril de 2010 en los límites entre las regiones de Los Lagos y Aysén. Sin embargo esta floración fue breve en el tiempo hacia en norte de la zona afectada (sur de la isla de Chiloé), y mas intensa hacia la undécima región, como se aprecia en la Fig. 6 . Esta situación se observa muy frecuentemente en eventos FAN, con floraciones de difícil predicción en su comportamiento temporal y latitudinal en nuestras costas, con la complejidad de manejo que esto implica para los sectores de pesca artesanal y de cultivo de mitílidos. En esta ocasión de verano de 2010, la floración no alcanzó al canal Coldita, sin reportarse toxicidad VPM en moluscos del sur de la isla de Chiloé. Para el proyecto esto imposibilitó contar nuevamente con ejemplares del bivalvo contaminados en el medio natural, con la variedad de formas tóxicas de la familia del veneno paralizante manifestada naturalmente en el medio ambiente. Por esta razón, se prosiguió con los objetivos experimentales del proyecto a través de intoxicación experimental en el laboratorio en Osorno, con organismos libres de contaminación VPM, pero exponiéndolos en el laboratorio a concentraciones elevadas de A. catenella obtenidas por cultivo de microalgas en el laboratorio en Osorno.

78

Estación Latitud Longitud

1 43°18'53'' 73°36'39''

2 43°39'15'' 74°02'49''

3 43°35'34'' 73°31'43''

4 43°54'20'' 73°25'44''

5 44°11'43'' 73°23'00''

6 44°29'21'' 73°27'18''

7 44°49'02'' 73°29'01''

Estación Latitud Longitud

1 43°18'53'' 73°36'39''

2 43°39'15'' 74°02'49''

3 43°35'34'' 73°31'43''

4 43°54'20'' 73°25'44''

5 44°11'43'' 73°23'00''

6 44°29'21'' 73°27'18''

7 44°49'02'' 73°29'01''

Fig. 6. FAN de A. catenella según SERNAPESCA, durante verano 2010 (febrero a abril). Ver valores de escala relativa de abundancia de células en siguiente TABLA.

79

Escala de Abundancia Relativa: (Escala en página web Sernapesca) Definición de nivel de abundancia ESCALA Alexandrium catenella (cel/L) Ausente 0 0

Raro 1 1-2

Escaso 2 3-10

Regular 3 11-42

Abundante 4 43-170

Muy abundante 5 171-682

Extremadamente abundante 6 683-2730

Hiper abundante 7 2731-10922

Origen: WWW.SERNAPESCA.CL

6.4.- Detoxificación moluscos marinos (3 especies de bivalvo).

6.4.1.- CHORITO (Mytilus chilensis)

a.-Variabilidad de la toxicidad en ejemplares de Mytilus chilensis.

(INTOXICACIÓN EN EL LABORATORIO)

Se comenzó averiguando la toxicidad alcanzada por diferentes individuos en un

grupo de bivalvos intoxicados por células vivas de A. catenella, para conocer la

variabilidad de intoxicación según el estado fisiológico de los ejemplares libres de

80

contaminación. Los ejemplares utilizados en la experiencia 1 (A), fueron los que

mostraron una mayor variabilidad en la concentración toxicológica, entre 165 y 828

µg eq.STX/100g de tejido, en contraste los ejemplares de la experiencia 2 (Fig. 7,

B) fueron los que mostraron una menor variabilidad en la toxicidad. (Fig. 7,D).

81

Fig. 7: Perfil toxicológico de M. chilensis alimentados con A. catenella (cepa toxica ACC07). A y B:

ejemplares alimentados con 7.360.400 cél/ejemplar. Fig. C: alimentados con 5.211.109

cél/ejemplar. D: Toxicidad total VPM de M. chilensis en las tres experiencias. La línea roja indica el

límite legal máximo de toxicidad permitido (80µg STX eq./100g de tejido). Promedios ± SD (n= 5).

b.-Determinación de la cinética de intoxicación-det oxificación de ejemplares

de Mytilus chilensis.

Los ejemplares expuestos a A. catenella cepa ACC07, se alimentaron en 5

oportunidades con a: 1.504.479 cél/ejemplar (día 0), b: 868.009 cél/ejemplar (día

2) 0, c: 3.935.000 cél/ejemplar (día 3), d: 2.248.571 cél/ejemplar (día 4), e:

2.976.137 cél/ejemp. (día 7), durante 7 días (Fig. 8).

Los resultados revelan que los niveles de toxinas contenidas en sus tejidos,

superan el límite legal máximo de seguridad pública (80 µg STXeq./100g de

tejido), desde el muestreo 4. Se evidenciaron diferencias de toxicidad significativas

entre los días de muestreo 4 y 16, siendo este último, el día donde se alcanzó el

máximo valor promedio de saxitoxina. Durante la detoxificación los ejemplares

contaminados solo disminuyeron la concentración de toxinas hasta el día 44,

arrojando diferencias significativas con respecto del máximo valor de toxicidad

alcanzado. Se encontró que las toxinas con mayor presencia en los bivalvos

contaminados fueron las GTX-2,3 y STX. No se detectaron las toxinas del grupo

N-Sulfocarbamatos.

82

Fig. 8: Curva de intoxicación y detoxificación de ejemplares de M. chilensis alimentados con la

microalga tóxica A. catenella cepa ACC07. A: toxinas GTX-2,3 y toxinas STX. Las flechas rojas

indican cada periodo de alimentación. B: Toxicidad total de las toxinas VPM en M. chilensis, en los

diferentes días de muestreos. Promedios ± SD (n=3).

GTX-2,3

83

c,-Determinación del perfil toxicológico de los dif erentes tejidos del bivalvo

M. chilensis, expuesto a tres cepas tóxicas del dinoflagelado A. catenella.

Los tejidos de M. chilensis expuesto a la cepa ACC02, se caracterizaron por tener

una alta proporción de toxinas del grupo carbamatos, particularmente GTX 5,

además se observaron toxinas C-1,2 del grupo N-sulfocarbamatos (Fig. 9, A). La

concentración de las toxinas acumuladas en los diferentes tejidos siguió en orden

decreciente: Sistema digestivo (glándula digestiva) > musculo aductor > branquia >

pie (musculo retráctil del biso) > manto (Fig. 9, B).

La cepa tóxica ACC07 en M. chilensis, tuvo una mayor presencia de toxinas GTX-

2,3, seguidas por las toxinas C-1,2, GTX 5 y STX (Fig. 10, A). El sistema digestivo

(glándula digestiva) fue el tejido de M. chilensis expuesto a la cepa ACCH-01, (Fig.

11,B). En las tres cepas tóxicas de A. catenella, el tejido con mayor toxicidad,

mostrando diferencias significativas con respecto a los demás tejidos fue el

sistema digestivo (glándula digestiva), en especial en las experiencias de M.

chilensis expuestos a las cepas ACC07 y ACCH-01. No se detectaron toxinas del

grupo decarbamatos en ninguna de las tres experiencias.

84

Fig. 9: Concentración de las toxinas VPM cepa ACC02 en los diferentes tejidos del bivalvo M.

chilensis. A: Toxicidad relativa de las toxinas VPM, donde SD: Sistema digestivo (intestino y

glándula digestiva). Br: Branquia, Mn: Manto, MA: Músculo aductor y Pie: Pie (pie y músculo

retráctil del biso). B: Toxicidad total VPM en tejidos de M. chilensis. La línea roja indica el límite

legal máximo de toxicidad permitido (80 µg STX eq. /100g de tejido).

A

85

Fig. 10: Concentración de las toxinas VPM cepa ACC07 en los diferentes tejidos del bivalvo M.

chilensis. A: Toxicidad relativa de las toxinas VPM, donde SD: Sistema digestivo. Br: Branquia, Mn:

Manto, MA: Musculo aductor y Pie: Pie (pie y musculo retráctil del biso). B: Toxicidad total VPM en

los tejidos de M. chilensis.

A

86

Fig. 11: Concentración de las toxinas VPM cepa ACCH-01 en los diferentes tejidos del bivalvo M.

chilensis. A: Toxicidad relativa de las toxinas VPM, donde SD: Sistema digestivo (intestino y

glándula digestiva). Br: Branquia, Mn: Manto, MA: Musculo aductor y Pie: Pie (pie y musculo

retráctil del biso). B: Toxicidad total de las toxinas VPM en los tejidos de M. chilensis.

d.-Determinación de la toxicidad de A. catenella (cepa ACC07), expuesto a

diferentes luminosidades y temperaturas.

A

87

La mayores toxicidades celulares de A. catenella para las toxinas GTX-2,3 fueron

registradas bajo luz ultravioleta y luz roja con 1,37 y 1,34 µg/célula A. Catenella

(x106), respectivamente, teniendo la luminosidad azul y amarilla valores de

toxicidad intermedios (Fig. 12). No se evidenciaron diferencias estadísticamente

significativas después de 10 días de experimentación bajo estas condiciones de

laboratorio. En la experiencia de temperaturas la toxicidad fue levemente variable,

sin presentar diferencias estadísticamente significativas. A una temperatura de

12ºC, para las toxinas GTX-2,3, la concentración tóxica fue de 0,86 µg/célula A.

catenella (x106), con respecto a la condición control (0,95 µg/célula A. catenella

(x106) (Fig. 12). No se evidenció en A. catenella de cultivo presencia de toxinas de

los grupos N-sulfocarbamatos (C-1, 2, 3 ,4) y decarbamatos (dcGTX) en esta

experiencia.

88

Fig. 12: Toxicidad por célula de A. catenella cepa ACC07, cultivadas a diferentes luminosidades y

temperaturas. A: Toxicidad relativa de toxinas GTX-2,3. B: Toxicidad relativa de toxinas STX. C:

Toxicidad total de toxinas VPM. Promedio ± SD (n=3).

e.- Cinética de detoxificación de M. chilensis contaminado con A. catenella

cepa ACC07, bajo diferentes condiciones experimenta les bióticas y

abióticas.

89

���� Ejemplares de M. chilensis contaminados en condiciones de laboratorio.

Los ejemplares utilizados en todas las experiencias de detoxificación fueron

intoxicados con A. catenella cepa tóxica ACC07. Se monitoreó la toxicidad VPM

por HPLC luego de detoxificación por 7 días, se aprecia una concentración

significativa de toxinas del grupo carbamatos en particular de las toxinas GTX-2,3,

seguidas por las toxinas STX y GTX5. También hubo presencia de toxinas del

grupo N-sulfocarbamatos C-3,4 pero en menor concentración tóxica. No se

detectaron toxinas del grupo decarbamatos. (Fig. 13).

Fig. 13: Detoxificación de M. chilensis alimentados con A. catenella cepa ACC07, durante un

período de 7 días. A: Perfil toxicológico en M. chilensis. Donde A.m. (Acanthina monodon), 35‰

(Salinidad 35 psu)), 25‰ (Salinidad 25 psu), Tetra (Tetraselmis suecica), Iso (Isochrysis galbana) y

E24:I24 (Ciclos de 24 horas emersión-inmersión). Promedio ± SD (n=3).

En base a esto las condiciones experimentales que mostraron una tendencia a

aumentar la cinética de detoxificación de los ejemplares de M. chilensis y por ende

a disminuir el tiempo de detoxificación a valores cercanos o inferiores al límite

legal (80 µg STXeq./100g de tejido), fueron, la condición biótica, utilizando la

90

alimentación de los ejemplares de M. chilensis con la microalga Tetraselmis

suecica. Del mismo modo las condiciones experimentales que revelaron

diferencias significativas con respecto a la condición control (100%), fueron solo

las condiciones bióticas de alimentación con la microalga Isochrysis galbana, con

una disminución en promedio de 43 (%), siendo esta la que presentó mayor

detoxificación y la exposición al depredador Chorus giganteus con un 36,7 (%).

Por otra parte las condiciones, donde hubo una menor detoxificación de toxinas

VPM e incluso el porcentaje de toxicidad al final del periodo de detoxificación de 7

días fue mayor que la condición control, fueron las condiciones experimentales

abióticas, de exposición de M. chilensis a K2SO4 y la condición experimental,

donde los ejemplares se pusieron en acuarios sin aireación (Fig. 14).

Fig. 14: Porcentaje de µg equivalentes de STX/100g (%) para las condiciones experimentales de

detoxificación del bivalvo M. chilensis alimentados con A. catenella cepa ACC07. Donde A.m.

(Acanthina monodon), X.c. (Xanthochorus cassidiformis), Ch.g. (Chorus giganteus), Tetra

91

(Tetraselmis suecica), Iso (Isochrysis galbana), 35‰ (Salinidad 35 ppm), 25‰ (Salinidad 25 ppm),

25‰+Tetra (Salinidad 25 ppm mas Tetraselmis suecica), E24:I24 (Ciclos de 24 horas emersión-

inmersión), Aireación 1h/día, Sin aireación, 0,01g/l (K2SO4), 0,25g/l (K2SO4) y 1g/l (K2SO4). Se

presenta Promedio ± SD (n indicados en la Figura).

���� Ejemplares de M. chilensis contaminados en el ambiente (canal Coldita,

Chiloé).

Los ejemplares utilizados en esta experiencia estaban contaminados en el

ambiente, específicamente en una floración algal nociva ocurrida el año 2009

(marzo-abril), provenientes desde Canal Coldita, Isla de Chiloé. Las condiciones

experimentales de detoxificación se realizaron bajo condiciones de laboratorio.

El perfil toxicológico fue predominado por toxinas carbamatos GTX-2,3, STX y

GTX5, durante los 21 días de detoxificación (Fig. 15). (No se detectaron toxinas

del grupo decarbamatos y N-sulfocarbamatos).

Para determinar la cinética de detoxificación, los valores se ajustaron a un modelo

exponencial con escala log y además, así determinar las tasas de detoxificación

durante las 3 semanas de experimentación. Las condiciones experimentales que

arrojaron de manera promisoria una disminución de la toxicidad en el tiempo,

fueron la exposición de los bivalvos a los depredadores Concholepas concholepas

(C.c.) y Xanthochorus cassidiformis (X.c.) y la alimentación con la microalga no

tóxica Nannochloropsis sp. (Nanno 0,35g/l). En contraste las condiciones

experimentales que tuvieron un menor impacto en la detoxificación fueron la

exposición a salinidades de 16,5‰ y 22‰ (Fig. 16).

92

Fig. 15: Contenido de toxina VPM total en función del tiempo en el bivalvo M chilensis,

contaminados en el ambiente natural; COLDITA, 2009), seguido de 3 semanas de detoxificación en

el laboratorio. Donde, C.c. (Concholepas concholepas), X.c. (Xanthochorus cassidiformis), 38‰

(Salinidad 38 psu), 22‰ (Salinidad 22 psu), 16,5‰ (Salinidad 16,5 psu), Em 14h (Emersión

durante 14 horas), Nanno 0,35 g/l (Nannochloropsis sp.), Nanno 0,5 g/l (Nannochloropsis sp.).

Líneas de decaimiento tóxico en escala semi-Log.

93

Las tasas de detoxificación promedio para todas las condiciones probadas indican

que la salinidad de 38‰ fue la condición con mayor tasa de detoxificación,

seguida en orden decreciente por Loco (C.c.) > Nannochloropsis sp. 0,5 g/l (Nanno

0,5 g/l) > Xanthochorus cassidiformis (X.c.) > Emersión durante 14 horas (E14h) >

Salinidad 16,5‰ > Nannochloropsis sp. 0,35 g/l (Nanno 0,35g). Sin embargo estas

tasas de detoxificación no mostraron diferencias estadísticamente significativas

entre sí, debido a la elevada diferencia en los niveles individuales de toxicidad

VPM total (Fig. 16).

Fig. 16: Tasas de detoxificación del bivalvo M. chilensis contaminado en el ambiente, Canal

Coldita. Donde, C.c. (Concholepas concholepas), X.c. (Xanthochorus cassidiformis), 38‰

(Salinidad 38 psu), 22‰ (Salinidad 22 psu), 16,5‰ (Salinidad 16,5 psu), Em 14h (Emersión

durante 14 horas), Nanno 0,35 g/l (Nannochloropsis spp) y Nanno 0,5g/l (Nannochloropsis spp).

Los valores representan el promedio ± desviación estándar, SD (n=4).

94

Conclusión de detoxificación para Mytilus chilensis: De esta manera, las condiciones que mostraron mayor disminución de la toxicidad VPM total fueron la condición experimental “alimentación con T-Isochrysis sp.” Y presencia de Chorus giganteus, para la detoxificación VPM de M. chilensis (Fig. 14).

6.4.2.- ALMEJA, Venus antiqua. La almeja es un bivalvo muy apetecido por consumidor nacional y en el extranjero. Es un filtrador que habita playas arenosas, a diferentes profundidades. La mayor complejidad que presenta esta especie en la última década, en particular desde fines de la década de 2000, es que sus mayores bancos naturales al sur de la isla de Chiloé, se encuentran afectados prácticamente por cierre cautelar permanente, debido a floraciones tóxicas frecuentes por A. catenella. No se conoce a cabalidad la dinámica de intoxicación de almeja por A. catenella, como es una especie bentónica de sustratos blandos, sería posibles que se esté permanentemente reintoxicando a través de quistes de A. catenella, sin necesidad de detectarse FANs superficiales del dinoflagelado tóxico, como los monitoreados por IFOP o SERNAPESCA (ver www.Sernapesca.cl). Esta situación no se encuentra suficientemente caracterizada, y no se conoce medidas efectivas de mitigación actualmente, más allá del cierre cautelar. Almeja fue obtenida por decomiso en el presente proyecto, con bajos niveles de toxicidad VPM. Para experiencias de detoxificación en el laboratorio es indispensable contar con diferentes estrategias de tener ejemplares contaminados. Problemas con almeja decomisada fue su período no determinado de mantención bajo condiciones fisiológicamente sub-óptimas, en emersión, sin alimentación, en presencia de gases tóxicos de fermentación por metabolismo anaeróbico del bivalvo. Los ejemplares decomisados igualmente tenían una elevada probabilidad de provenir de mallas apozadas, por lo cual el estado fisiológico del metabolismo aeróbico de los ejemplares era deficiente para experiencias de aclimatación –

95

desintoxicación en el laboratorio en Osorno. Por esta razón, esta no fue una estrategia efectiva en acceder a ejemplares tóxicos con VPM en el caso de almeja. Por ello se contaminó los ejemplares con toxinas paralíticas alimentando ejemplares no tóxicos de almeja (en condición fisiológica óptima en el laboratorio), con células de A. catenella provenientes de cultivo en el laboratorio. En el presente proyecto se realizó diferentes experiencias de intoxicación-detoxificación de almeja, para corroborar en nuestras manos la información conocida de literatura y los resultados de otros proyecto en ejecución paralela, como lo fue constatar los tejidos más intoxicados del animal luego de exposición a A. catenella en el laboratorio, la cinética de detoxificación bajo condiciones de laboratorio, la variabilidad en los niveles de intoxicación en ejemplares de diferente tamaño al ser expuestos a A. catenella, y el efecto de diferentes condiciones bióticas y abióticas en la cinética de detoxificación en esta especie: RESULTADOS: -Intoxicación de almeja según tejidos más contaminados: Se corroboró que sistema digestivo es el más contaminado en esta especie (datos no mostrados) -Cinética de intoxicación-detoxificación de almeja con células de A. catenella bajo condiciones de laboratorio:

���� Ver Figuras 17 y 18. -Efecto de variables biológicas (presencia depredadores, alimentación con microalgas no tóxicas) y efecto de factores abióticos (salinidades, oxigenación del agua, ciclos de inmersión-emersión):

���� Ver FIGURAS 19 a 21. Almeja es una especie que presenta un metabolismo particular, puede mantener sus valvas cerradas por períodos prolongados frente a situaciones de estrés biológico o fisico-químico. Esta situación hizo complejo el período de intoxicación de los ejemplares, debido a que la tasa de filtración fue altamente variable por parte de estos ejemplares, e igualmente, al parecer hay variables genéticas en los niveles de intoxicación, pues mismos niveles de consumo de células de A. catenella, se tradujeron en niveles muy variables de toxicidad VPM, en diferentes grupos de almeja en el laboratorio.

96

Tejido que más se contaminó con veneno paralizante fue la glándula digestiva, como se ha descrito profusamente en la literatura (y encontrado por investigadores del proyecto “almeja” del 2º. Concurso Marea Roja), sin embargo, hubo una clara variabilidad entre diferentes ejemplares individuales de almeja, los cuales manifestaron diferentes niveles de toxicidad en otros tejidos. Por ejemplo, en algunos casos los músculos aductores de almeja presentaron 0 toxicidad, mientras que en otros ejemplares de nivel similar de intoxicación con VPM, mostraron toxicidad de algunas formas derivadas de STX en músculo aductor de almeja. En las Fig. 17 y 18 se observa la curva deintoxicación-detoxificación de las formas de STX principales en tejidos de almeja, al ser expuesta a alimentación con A. catenella, cepa ACC02. Se observa que la forma GTX2,3 desaparece de los tejidos de almeja luego de 55 días, mientras que STX permanece aún en tejido digestivo del animal luego de este período prolongado, bajo condiciones de laboratorio. Experiencias de detoxificación en el laboratorio. (Figs. 19 a 21). Almejas obtenidas libres de contaminación en cercanías de Puerto Montt. Fueron contaminadas en el laboratorio con A. catenella de cultivo celular, hasta niveles de toxicidad VPM entre 400 y 3000 µg eq.STX/100g, como promedio de toxicidad fue de 1000 µg eq.STX/100g.

Intoxicación-detoxificación ALMEJA con STX

-0,2

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

1,8

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60 63 66

Tiempo (días)

To

xic

ida

d V

PM

to

tal

(u

g e

q.S

TX

/1

00

g) 1

Fig. 17.- Toxicidad total VPM x 1000. Intoxicación ocurrió en 6 ocasiones, en los días 1, 4, 6, 9, 15 y 24 desde el inicio del período de intoxicación. La detoxificación espontánea bajo condiciones control comenzó desde el día 36 post-inicio de la intoxicación.

97

Intox.-detoxificación ALMEJA GTX2,3

-0,4

-0,2

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

0 7 14 18 21 28 42 56

Tiempos (días)

To

xic

ida

d

GT

X2

,3

(u

g e

q.S

TX/1

00

g)

x 1

00

0

Intox.-Detoxificación ALMEJA STX

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0 7 14 18 21 28 42 56

Tiempo (Días)

To

xic

idad

ST

X (

ug

ST

X/

10

0g

)

x 1

00

0

Fig. 18.- Toxicidad VPM de ALMEJA dada por las formas tóxicas GTX2,3 y STX en tejidos totales de almeja durante el período de intoxicación-detoxificación de esta especie, en condiciones de laboratorio.

98

Toxicidad VPM total ALMEJA

(Hepatopancreas)

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

Control

toxi

ciclo

s E-I

ciclo

s E-I

VP

M (

uge

q.S

TX

/1

00

g)

(%

)

Hp

Fig. 19.- Detoxificación de almeja (se muestra sólo el tejido más intoxicado, Hepatopáncreas), bajo condiciones bióticas y abióticas de detoxificación (indicadas en la figura), operando durante 2 semanas.

Toxicidad VPM total ALMEJA

(Hepatopáncreas)

0

50

100

150

200

250

300

350

Control ↑ salinidad +

X.c.

E + ↑

salinidad +

Tetra

E + ↑

salinidad +

X.c.

VP

M (

uge

q.S

TX

/1

00

g)

(%

)

Hp

Fig. 20.- Detoxificación de ejemplares de almeja intoxicados en el laboratorio con VPM. Se muestra 3 condiciones de detoxificación operando de manera conjunta como se indica en la figura. X.c. corresponde a Xanthochorus cassidiformis. Detox durante 2 semanas.

99

Toxicidad VPM total ALMEJA

(Hepatopáncreas)

0

20

40

60

80

100

120

140

160

Control Tetraselmis X. cassidiformis

VP

M (

ug

eq

.ST

X/1

00

g)

(%

)Hp

Fig. 21.- Detoxificación de Hepatopáncreas de almeja durante 2 semanas, luego de tratamiento en presencia de Tetraselmis sp., y de exposición al depredador indicado en la figura (X.c.). Promedio + SD (n=3).

6.4.3.- CHOLGA (Aulacomya atra). Cholga corresponde a un recurso habitualmente afectado por mareas rojas en las regiones australes del país, particularmente regiones décima a duodécima. Es además el molusco que ha generado la mayor cantidad de mortalidad en seres humanos en el país, debido a los elevadísimos niveles de intoxicación por VPM en canales australes. Consumo de 1 sola cholga puede ser letal, al presentar toxicidad cercana a 5000 µg eq.STX/100g, niveles habituales en cholga en regiones de Aysén y Magallanes. Se ha reportado igualmente que la cinética de detoxificación de cholga en su hábitat natural es muy lenta (Lagos et al., 2008), por lo cual se hace altamente relevante contar con protocolos de detoxificación de impacto a nivel productivo. En el presente proyecto se realizó experiencias de

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intoxicación-detoxificación de cholga con cultivo de A. catenella, cepa ACC02. Se analizó los aspectos comprometidos en el proyecto, como ser impacto de la salinidad, presencia de depredadores, ciclos de inmersión-emersión y alimentación con microalgas no tóxicas (T-Isochrysis spp., Tetraselmis spp.). Se observa en la Fig. 22 los resultados obtenidos, donde se aprecia que en presencia de alimento cholga detoxifica toxinas tipo VPM a la mitad de la toxicidad observada en ejemplares controles, tanto con T-Iso como con Tetraselmis. Procedimiento: Intoxicación durante 1 semana, con niveles de aprox. 5 millones de células de A. catenella por ejemplar intoxicado, mantener durante 1 semana (expresión del máximo de toxicidad VPM) y cinética de detoxificación luego de 2 semanas de tratamiento experimental. Estos resultados en cholga fueron en magnitud similares a los obtenidos para chorito. Sin embargo resta por analizar otras variables ambientales que actualmente se encuentran en estudio (con potencial de impacto mayor en cinética de detoxificación), los cuales no estaban comprometidos originalmente entre los objetivos específicos del proyecto.

Detoxificiación en labratorio; 14 díasAulacomya atra (n=3)

(PSP t0 = 480 µg eq.STX/100 g)

050

100150200250300350400450500

Control X.cassidif.

Salin.25 Salin.35 Tetrasel. T-Iso.spp.

Tratamiento detoxificación

PS

P (

µg e

q.S

TX/1

00 g)

Fig. 22.- Detoxificación de ejemplares de cholga luego de 2 semanas expuestas a las condiciones experimentales indicadas en la figura. Se muestra promedios + SD (n=3).

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6.5.- Diseño y dimensionamiento de módulos de detox ificación de moluscos vivos . Conceptos incorporados: Según requerimientos de tratamientos biológicos y fisico-químicos con 3 bivalvos filtradores, se desarrollo 2 conceptos de sistemas de detoxificación de bivalvos vivos, con diferentes requerimientos y características de cultivo/alimentación en confinamiento. Se consideró para esto (a) los sistemas de depuración microbiológica utilizada en países de la comunidad europea, como España, en conjunto con (b) tecnologías de recirculación de agua marina utilizada en la acuicultura de peces. (Módulo 1 ) Se diseñó módulos según las características de alimentación de bivalvos filtradores como chorito (Mytilus chilensis) y cholga (Aulacomya atra), y otro para almeja (Venus antiqua). (Para almeja en particular se puede optimizar un Módulo tipo 2, por su sensibilidad al agua corriente y estrés al ser apilada en bandejas con muchas capas de ejemplares). Ambos módulos deben mantener moluscos durante 1 a 2 semanas en condiciones de inmersión en agua marina (salinidad promedio 30 psu), a temperatura ambiente (no se encontró impacto de la temperatura en la cinética de detoxificación de los moluscos bivalvos), bajo diferentes condiciones óptimas de detoxificación para cada especie de molusco. Los resultados óptimos de detoxificación de toxinas tipo VPM encontrados en el proyecto fueron:

(detoxificación en el medio natural tardó aproximadamente 5 a 6 semanas, ver curvas semilog en Figs. 2 a 5 de decaimiento de la toxicidad presentadas para 3

localidades del canal Coldita: depuración espontánea bajo condiciones de terreno, abril 2009).

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Chorito : mantención en inmersión durante 1 semana en agua de mar 30 psu (aireación no provocó cambios en la cinética de detoxificación), en presencia del cultivo de la microalga no tóxica T-Isochrysis sp., a concentración de 500 células/ml. La disminución de la toxicidad VPM total fue de un 46 % respecto de ejemplares controles tóxicos. Almeja : tratamiento 1; mantención de ejemplares en inmersión continua en agua de mar 30 psu, en presencia de microalga no tóxica Tetraselmis sp., en concentración de 500 células/ml (82 % de disminución de la toxicidad VPM total en tejidos blandos del animal). Tratamiento 2; mantención de ejemplares vivos en presencia de salinidad 35 psu más alimentación con Tetraselmis sp., en la misma concentración anterior (80 % de disminución de la toxicidad VPM total en partes blandas totales de almeja). Cholga : mantención de ejemplares del molusco en inmersión continua en agua de mar 30 psu, en presencia de la microalga no tóxica Tetraselmis sp. o T-Isochrysis sp. Con ambos tratamientos de alimentación, se obtuvo 48 % y 52 % de disminución de l a toxicidad VPM total de las partes blandas comestibles del animal, respectivamente. MÓDULO 1

1) Mytilus chilensis: inmersión durante 1 semana en presencia de alimentación no tóxica, a través de la microalga T-Isochrysis sp. (cultivo vivo, en concentración de 500 células/ml), o de la microalga Nannochloropsis sp. (cultivo de células en pasta, adquiridas comercialmente). 2) Aulacomya atra: Inmersión continua en sistema de canastillos plásticos en contenedores de 700 l, durante 1 semana, en presencia de la microalga no tóxica Tetraselmis sp. o T-Isochrysis sp., en las concentraciones indicadas anteriormente para los otros bivalvos filtradores.

MÓDULO 2 3) Venus antiqua: Inmersión en bandejas plásticas superpuestas, en inmersión continua, y en cada bandeja dispuesto el bivalvo en capas no superiores a 5 cm. La inmersión durará 2 semanas en agua de mar a salinidad 30 psu, en presencia de la microalga no tóxica T-Isochrysis sp. (en concentración de 500 células/ml). Igualmente resultó el tratamiento en presencia de aumento de salinidad a 35 psu más alimentación con un porcentaje algo superior de detoxificación en este caso.

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Descripción módulo 1 : (esquema con las bombas y sistema de recirculación que contempla filtro biológico para capturar NH4

+, serie de filtros de 20 µm y 1 µm y filtro UV, antes de reciclar agua marina en el circuito, o de su eliminación al medio ambiente) Estanques con oxigenación individual, no por flujo de agua corriente. ���� (FIGURAS 23, A-C). Descripción del módulo: 2 líneas de 12 estanques cada una, con capacidad cada estanque para 700 l de agua marina en los cuales van los moluscos dispuestos en bandejas plásticas apiladas. Cada estanque tiene capacidad para 150 kg de bivalvos vivos. El requerimiento de microalga no tóxica es de 1000 l de cultivo celular/semana. En el caso de utilizar microalga comercial en pasta, se requiere la cantidad de 18 kg/semana (por ej., Nannochloropsis sp.) El módulo consta de un estanque decantador de evacuación (en gris claro en el esquema) de capacidad 10.000 l, con suministro de ozono, para esterilizar la evacuación de los estanques del módulo, luego el agua es recirculada hacia el set de recirculación, el que consta de filtro biológico, filtros físicos de tamaño 20 µm y 1 µm, y luego filtro UV, para reutilización del agua marina o para su eliminación al medio ambiente (libre de carga biológica o química).

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Fig. 23 (A). Módulo de detoxificación de moluscos vivos, en base a estanques. Vista anterior del sistema.

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Fig. 23 (B). Módulo de detoxificación de moluscos vivos, en base a estanques. Vista posterior.

Fig. 23 (C). Módulo de detoxificación de moluscos vivos, en base a estanques. Vista superior. Módulo 2, en base a piscinas de cemento : (símil sistema depuración microbiológica) ���� (FIGURAS 24, A-C)

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Piscina de depuración microbiológica de moluscos bivalvos vivos, Pontevedra, Galicia, España. Características del módulo: Piscinas de cemento de dimensiones 10 m ancho x 15 m largo x 70 cm profundidad. Agua de mar con flujo regulable, para recambio si es necesario cambiar salinidad, y sistema de captación de efluentes y recirculación de agua similar a módulo 1. La cantidad de microalga en pasta comercial (por ej., Nannochloropsis sp.) es de 50 kg/semana. La cantidad de bandejas apiladas en esta piscina es de 450, cada una con capacidad de 10 kg de almeja. El tiempo de mantención en inmersión será dependiente de la toxicidad inicial, la cual deberá ser monitoreada previamente y al finalizar el período de depuración. En ejemplares de toxicidad inicial de 500 µg eq.STX/100g, el tiempo de mantención será de 2 semanas hasta alcanzar límites legales, mientras que al disminuir la toxicidad inicial (como ocurre por ej con la gran mayoría de los decomisos en regiones australes del país, con toxicidades de almejas decomisadas entre 100 y 200 ug eq.STX/100g), el tiempo de mantención será de 1 semana o menor aún (dependiendo de toxicidad inicial).

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Fig. 24 (A). Módulo de detoxificación de moluscos vivos, en base a piscina. Vista anterior.

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Fig. 24 (B). Módulo de detoxificación de moluscos vivos, en base a piscina. Vista posterior del sistema.

Fig. 24 (C). Módulo de detoxificación de moluscos vivos, en base a piscina. Vista superior.

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Consideraciones finales: La depuración microbiológica en países de la CEE (España e Italia) consiste en disminuir la carga microbiana de los moluscos (por ser países con gran carga microbiológica en sus agua costeras). Esto se consigue principalmente a través de inmersión en agua marina corriente principalmente en 2 sistemas de contenedores; estanques portátiles apilados verticalmente, en los cuales fluye el agua verticalmente desde arriba abajo, y la carga bacteriana (principalmente) va disminuyendo en lapso de días. El agua debe ser clorada antes de ser eliminada al medio ambiente (u otros tratamiento industriales que eviten eliminación de microbios concentrados en los efluentes de las plantas de depuración). El otro sistema consiste en piscinas de 0,5 – 1 m de profundidad con agua corriente a flujo lento, donde los moluscos son dispuestos en bandejas plásticas durante algunos días (dependiendo de la carga microbiana original). Ambos tratamientos son efectivos en disminuir la carga microbiológica. En el caso de la depuración toxicológica, se requiere mayor tiempo de incubación (principalmente en presencia de microalga no tóxica), para acelerar el tiempo de depuración tóxica. Es menor el gasto en flujo de agua, pues esta debe estar quieta por tiempos mayores, sin embargo el costo esta dado a través de los sistemas de cultivo de microalgas vivas que requieren principalmente luz 24 h continuas, y burbujeo de aire, además de costos menores en nutrientes para cultivo y crecimiento masivo de microalgas. Igualmente se requiere costos en monitoreo biológico-tóxico para normas de bio-seguridad en especies que requieren control para no ser diseminadas.