MANUAL BIOQUIMICA PRCTICA CTICA.

1. INTRODUCCIN

Para el clnico de rumiantes el suceso del diagnstico y del control de las enfermedades es altamente dependiente de la anamnesis, del examen clnico y muchas veces del diagnstico postmortem. En los ltimos aos viene creciendo el uso racional del recurso del laboratorio clnico como una herramienta ms de diagnstico en el auxilio al clnico de rumiantes. La correlacin de los resultados de laboratorio, juntos con los del examen clnico pueden representar un excelente mtodo de evaluacin, orientando al clnico para la conducta a ser tomada.Dentro de las principales indicaciones para la realizacin de exmenes de laboratorio se destacan: La confirmacin de la presencia o de la causa de una enfermedad; La determinacin de un pronstico ms exacto; La evaluacin de las alteraciones funcionales de algn sistema orgnico; La evaluacin de la respuesta al tratamiento; El monitoreo de la progresin de una enfermedad; La evaluacin del estado inmunolgico de un animal o de un rodeo.Siempre que es posible se debe preferir el servicio de un laboratorio clnico veterinario al laboratorio de anlisis humanos, pues el profesional de este ltimo puede no estar familiarizado con las respuestas de los animales frente a las enfermedades y con la interpretacin de los resultados.En el laboratorio veterinario, para la interpretacin de los resultados se debe estar siempre atento a la especie animal examinada teniendo en vista las distintas particularidades dentro de estas, desde la respuesta sistmica frente a las diferentes enfermedades, hasta los valores de referencia, considerados normales para cada especie.El diagnstico de laboratorio puede y debe ejercer su papel como herramienta de diagnstico para el clnico de rumiantes, entre tantos se debe siempre tener en mente que los exmenes complementarios deben ser solicitados despus de un criterioso examen clnico del paciente y la formulacin clara de las posibles hiptesis diagnsticas.El anlisis sistemtico del hemograma y frotis sanguneo (morfologa de los eritrocitos, presencia de hemoparsitos, corpsculos, estimativa del nmero de plaquetas, conteo diferencial de los leucocitos, presencia de granulaciones txicas, etc.) es un procedimiento de mucho valor, pues puede revelar particularidades relacionadas a algunas enfermedades, adems de auxiliar en el pronstico.

2. RECORDATORIO HISTOLGICO

LA SANGRE

Es un tejido circulante especializado, compuesto de clulas suspendidas en una sustancia intercelular lquida. A diferencia de otros tejidos, las clulas no conservan una relacin espacial permanente entre s, sino que se mueven continuamente de un lugar a otro.La circulacin de la sangre a travs del cuerpo proporciona un medio ambiente constante, en el que todas las clulas y tejidos realizan sus diversas funciones. De esta forma, la funcin principal de la sangre es mantener la homeostasis.En general, el volumen de sangre total para la mayora de los mamferos es aproximadamente el 7 a 8 % del PV.La sustancia intercelular, plasma, comprende el 46 al 65% del volumen total y los componentes celulares constituyen del 35 al 55%.Las clulas presentes pertenecen a 3 tipos principales: eritrocitos, leucocitos y plaquetas.Cuando se centrifuga la sangre, los glbulos rojos ms densos constituyen la parte inferior del hematocrito, formando los leucocitos una capa blanca en la parte superior (capa flogstica), las plaquetas se depositan en la superficie ms alta de la capa de leucocitos.La estructura de la clula hemtica se estudia por diversos mtodos, pero el ms corriente es observar las extensiones teidas de sangre desecada (frotis sanguneo).

ERITROCITO

Son elementos discoidales, bicncavos, de 7,5 um de dimetro, anucleados. En los rumiantes son similares a discos aplanados. El soporte principal en el mantenimiento de la forma celular, se relaciona con la constitucin molecular del complejo coloidal homogneo del que est formado el eritrocito.

La elasticidad se debe a esta matriz coloidal, que permite que el eritrocito cambie de forma cuando circula por los vasos sanguneos, doble los ngulos y se deslice a travs de los pequeos capilares sin que se desgarre ni rompa la membrana celular.Ms de la mitad (60%) del volumen del glbulo rojo consiste en agua y el resto (40%) est formado por sustancias slidas. Casi el 90 % del material slido es protena conjugada compuesta de globina y del pigmento hemo, su combinacin da lugar al color rojo y por esta razn la hemoglobina se considera como un pigmento. El resto de la fraccin slida est constituida por una pequea cantidad de un complejo lpido proteico.El glbulo rojo no es un saco lleno de hemoglobina, sino una estructura molecular compleja responsable de la forma de la clula, as como tambin, de las propiedades fisiolgicas que manifiesta.

La membrana celular es permeable al agua, sodio, cloruros y algunos polisacridos, pero es impermeable a la hemoglobina. En consecuencia, laosmolaridad del eritrocito est determinada por la hemoglobina y, puesto que la osmolaridad del plasma equivale a la del glbulo rojo, las clulas y el plasma son isotnicos entre s, sin que tengan tendencia a la absorcin de agua. Sin embargo, si los glbulos rojos se suspenden en una solucin con osmolaridad menor q la del plasma (hipotnica) las clulas se hinchan.Si la cantidad de agua que penetra en la clula excede de un volumen crtico, la clula se rompe, a lo que llamamos hemlisis.Los eritrocitos viven aproximadamente 120 das y despus se eliminan de la circulacin antes de desintegrarse por completo. Los glbulos rojos viejos son fagocitados en bazo, mdula sea e hgado por clulas fagocitarias. El hierro de la hemoglobina se recupera y se usa para la formacin de nuevos eritrocitos. La parte porfirnica del pigmento se utiliza para formar bilirrubina que es un pigmento biliar.Las clulas y los tejidos del organismo dependen de los eritrocitos para el aporte de 02, la ausencia de un ncleo, la forma y el contenido de hemoglobina, contribuyen a hacer al eritrocito ms eficaz en el transporte de 02.

LEUCOCITOS

Son clulas tpicas que poseen ncleo, citoplasma y otros organelos celulares, y todos son mviles en cierto grado. Los glbulos blancos abandonan la sangre y se desplazan al interior de los tejidos para realizar sus funciones.Los Glbulos blancos estn encargados de la defensa del organismo.El nmero total de leucocitos es bastante menor que de eritrocitos y varia en las diferentes especies animales. Pueden presentarse grandes fluctuaciones en el recuento de leucocitos, como consecuencia de cualquier tipo de estrs, ejercicio, alimentacin, edad, raza y una gran variedad de otras condiciones. Por tanto, los recuentos totales de leucocitos, para que sean significativos clnicamente, deben desviarse considerablemente de los valores normales al efecto de que un clnico pueda valorar un proceso de enfermedad.Los leucocitos se clasifican en dos grupos principales, tomando como base la presencia o ausencia de grnulos citoplasmticos especficos. Los que contienen grnulos citoplasmticos son los granulocitos y los que carecen de ellos son los agranulocitos.

GRANULOCITOS:

Los tres tipos de granulocitos se designan de acuerdo con la reaccin tintorial de sus grnulos especficos: Los eosinfilos tienen grnulos acidfilos claros (se tien de rojo con la eosina) Los basfilos poseen grnulos basfilos (prpura) marcados Los neutrfilos tienen grnulos que no son ni acidfilos ni basfilos

Frecuentemente, los neutrfilos, reciben el nombre de leucocitos polimorfonucleares(PMN), como consecuencia de la variada configuracin de los ncleos.

NEUTRFILO

El neutrfilo maduro es de aproximadamente 10-12 um de dimetro, tiene granulaciones finas en el citoplasma y un ncleo lobulado. La cromatina nuclear es densa, aglomerada y en grumo. Las bandas de cromatina finas y definidas entre los glbulos son frecuentes en los neutrfilos de los rumiantes. Las clulas viejas tienen ms lbulos nucleares que las jvenes. Por ello, los neutrfilos con ncleos en forma de V, U o de S sin constricciones se consideran como inmaduras y se designan como clulas en bandas o asegmentadas. Enfermedades bacterianas determinan generalmente un incremento en el nmero de neutrfilos circulantes. Es importante anotar el nmero de estas clulas al hacer el recuento diferencial ya que es un indicio de que la mdula sea est liberando nuevas clulas para combatir la infeccin. Clnicamente, este incremento de clulas jvenes recibe el nombre de desviacin a la izquierda y es un signo pronstico favorable. Por el contrario, una cantidad anormal de neutrfilos con hipersegmentacin nuclear se conoce como desviacin a la derecha y puede ser un signo de pronstico desfavorable o un sntoma de infeccin crnica.La funcin de los Neutrfilos es fagocitar y destruir bacterias mediante el contenido de sus diversos grnulos.

EOSINFILO

Los eosinfilos tienen un tamao similar al de los neutrfilos (12um) y se encuentran en menor cantidad. El citoplasma es ligeramente basfilo, pero en general no podemos observarlo debido a la presencia de gran cantidad de granulaciones gruesas que lo cubren totalmente, dejando libre el ncleo. ste presenta en general dos lbulos. Los eosinfilos tienen actividad fagoctica. Modulan y regulan las reacciones alrgicas.Los eosinfilos interaccionan con otras clulas por la expresin de mltiples receptores en su superficie.

Los eosinfilos son clulas fagocitarias que demuestran especial afinidad por los complejos antgeno-anticuerpo, por lo que la mayora de los eosinfilos son atrados por quimiotaxis. Tambin los eosinfilos pueden ser atrados por sustancias liberadas de los basfilos como la histamina.Los eosinfilos pueden regular la respuesta alrgica y las reacciones de hipersensibilidad mediante la neutralizacin de la histamina por la histaminasa y a su vez producir un factor inhibidor derivado de los eosinfilos para inhibir la degranulacin de las clulas cebadas o de los basfilos, que contienen sustancias vasoactivas.

BASFILO

El ltimo tipo de leucocito polimorfonuclear es el basfilo, es el menos abundante, razn por la cual es difcil encontrarlos en los extendidos. Son algo ms pequeos que los anteriores, con un dimetro de 8-10 um. Su citoplasma es acidfilo y est cubiertopor granulaciones grandes, irregulares, de color negro purpreo que cubren tambin el ncleo. Por esta causa no es posible observar claramente su forma.Poseen grnulos de heparina e histamina. Estas sustancias son mediadoras qumicas que modulan la inflamacin. Tienen funcin en estados alrgicos en la hipersensibilidad retardada.La liberacin masiva del contenido de estos grnulos puede causar shock anafilctico que puede llegar a la muerte del animal si no es controlado.

AGRANULOCITOS:

LINFOCITO

Son leucocitos agranulocitos que juegan un rol fundamental en la respuesta inmune.Los linfocitos son clulas de alta jerarqua en el sistema inmune, principalmente encargadas de la inmunidad especfica o adquirida.Estas clulas se localizan fundamentalmente en los rganos linfoides. Tienen receptores para antgenos especficos y, por tanto, pueden reconocer y responder al que se les presente. Por ltimo, los linfocitos se encargan de la produccin de anticuerpos y de la destruccin de clulas anormales. Estas respuestas ocurren en el interior de los rganos linfoides, los cuales, para tal propsito, deben suministrar un entorno que permita la interaccin eficiente entre linfocitos, macrfagos y antgeno extrao.Se pueden encontrar de distintos tamaos, grandes, medianos y pequeos (de 6 a 9um).Los linfocitos pequeos son los que se encuentran ms comnmente y su dimetro es aproximadamente igual o ligeramente mayor al de un hemate. El ncleo es redondo, basfilo, puede presentar agregados de cromatina y una pequea escotadura en su contorno.

El citoplasma se limita a una estrecha franja que rodea al ncleo de colorazul-celeste; en general no se observan granulaciones en l. Aunque estructuralmente iguales, mediante marcadores citoqumicos es posible distinguir 3 tipos de linfocitos: linfocitos B, T y nulos.Segn la variedad de linfocito de que se trate su vida media celular puede variar entre unos pocos das hasta meses y aos. Su duracin como clulas libres del tejido conjuntivo es en general de pocos das.Cumplen un rol fundamental en la respuesta inmune. Relaciones complejas entre linfocitos B, linfocitos T y clulas presentadoras de antgeno generan las respuestas de defensa inmune humoral y celular. A su vez, los linfocitos nulos participan en los mecanismos de defensa dando origen a clulas asesinas.

MONOCITO

El monocito es el mayor de todos los leucocitos, de 12 a 20 um de dimetro.Hay dificultad considerable en la identificacin de algunos monocitos, porque son formas de transicin entre los linfocitos pequeos y grandes, los que en conjunto se parecen entre s. Esta afirmacin es especialmente cierta cuando se examinan extensiones de sangre de ganado vacuno.La exposicin que sigue se refiere a las formas ms tpicas.El citoplasma de los monocitos es bastante ms abundante que el de los linfocitos y es de color azul grisceo plido, con frecuencia con un aspecto granuloso. En muchos casos hay presentes grnulos azurfilos pulverulentos. El ncleo puede ser oval, en forma de rin o de herradura, la cromatina nuclear se tie ms dbilmente que en el linfocito. Existe uno o ms nuclolos, pero no son visibles en las extensiones teidas.En el bovino son difciles de distinguir de los grandes linfocitos, ya que el ncleo puede presentar perfiles y formas de cromatina muy diferentes. Puede ser esfrico o espiral, con la cromatina dispersa o en grumos. Los grnulos azurfilos no son un carcter comn de los monocitos del ganado vacuno.En los monocitos de la oveja y de la cabra, el ncleo puede ser oval, ligeramente deprimido e incluso lobulado en tres segmentos con la cromatina en grumos o filamentos. El citoplasma, de color azul gris, es abundante y tiene generalmente vacuolas agrupadas pero no son frecuentes los grnulos azurfilos.Los monocitos viven unos tres das en la corriente sangunea y alcanzan su capacidad funcional total cuando abandonan la circulacin migrando a travs de los capilares para penetrar los tejidos, en donde se convierten en macrfagos y eliminan los restos tisulares y sustancias extraas. Cualquier acumulo de monocitos en el interior de los tejidos refleja condiciones de cronicidad.Los monocitos son clulas con gran capacidad bactericida. Ante estmulos de sustancias qumicas siguen a los neutrfilos en las reacciones inflamatorias. Por la fagocitosis aumentan de tamao y pueden fijarse a los tejidos del bazo, hgado, pulmn dando lugara los macrfagos tisulares que forman el sistema retculo endotelial encargado de remover el material extrao que circula en la sangre.

TROMBOCITOS

Los trombocitos o plaquetas son cuerpos irregulares redondos u ovoides pequeos, de 2 a 4 um de tamao, derivados de la porcin citoplsmica de grandes clulas de la medula sea llamadas megacariocitos. Por lo tanto, no contienen ncleo y puesto que pueden observarse pocos detalles con el microscopio ptico se han denominado elementos formes en lugar de clulas.Puesto que todas las estructuras se hallan directamente relacionadas con sus actividades hemostticas de adherencia, coagulacin y retraccin del coagulo, es lgico considerar a los trombocitos como clulas funcionales. El nmero total de plaquetas vara entre 350-500 mil/mm3 de sangre. Es difcil de obtener valores constantes, porque los trombocitos tienden a aglomerarse cuando entran en contacto con la superficie del vidrio. En consecuencia, salvo que exista una perdida grave, los recuentos totales no son significativos. En las extensiones teidas y secas son visibles dos zonas definidas del trombocito. La zona externa se tie de azul plido y la porcin central aparece de prpura oscuro. Como consecuencia de su pequeo tamao y de la tendencia a formar grumos, es difcil de ver la mayor parte de los detalles con el microscopio ptico.Partiendo de la exposicin anterior es evidente que cualquier alteracin en la activacin superficial, alteracin de los orgnulos o interacciones bioqumicas anormales pueden contribuir a que se altere la funcin tromboctica, determinando hemorragias o trombosis. La prdida grave de trombocitos recibe el nombre de trombocitopenia y puede ser determinada por medicamentos, deficiencias vitamnicas y plantas venenosas, as como tambin por algunas enfermedades autoinmunes.Aunque el trombocito es nicamente un pequeo fragmento citoplsmico, juega un papel vital en el mantenimiento de la hemostasia.

3. DEFINICIN DE HEMOGRAMA COMPLETO

El hemograma completo es la prueba de laboratorio en la que se van a cuantificar y evaluar diferentes grupos celulares, glbulos rojos (eritrocitos), glbulos blancos (leucocitos), los trombocitos o plaquetas, el contenido de hemoglobina y otros parmetros relacionados con su cantidad, contenido y forma.El hemograma es un anlisis de sangre en el que se mide en global y en porcentajes los tres tipos bsicos de clulas que contiene la sangre, las denominadas tres series celulares sanguneas:

Serie eritrocitaria o serie roja Serie leucocitaria o serie blanca Serie plaquetaria

Cada una de estas series tiene una funcin determinada, y estas funciones se vern perturbadas si existe alguna alteracin en la cantidad o caractersticas de las clulas que las componen.La SERIE ROJA est compuesta por los hemates o glbulos rojos. Su funcin primordial es transportar el oxgeno desde los pulmones (a donde llega a travs de la respiracin) a todas las clulas y tejidos del organismo.Los principales parmetros de la serie roja son el recuento de hemates, eritrocitos o glbulos rojos, el valor hematocrito, la concentracin de hemoglobina, los ndices eritrocitarios y el ndice de reticulocitos. La determinacin de todos ellos va dirigida al diagnstico de las anemias.

NDICES ERITROCITARIOS:

El hematocrito mide el porcentaje de hemates en el volumen total de la sangre. La hemoglobina es una molcula que forma parte del hemate, y que es la que transporta el oxgeno y el dixido de carbono; se mide su concentracin en sangre. Los ndices eritrocitarios proporcionan informacin sobre el tamao (VCM), la cantidad (HCM) y la concentracin (CHCM) de hemoglobina de los hemates; el ms usado es el VCM o volumen corpuscular medio.

Todos estos valores varan dentro de la normalidad segn la edad y el sexo.El aumento de HEMATES se observa en casos de deshidratacin, shock y estados de excitacin o esfuerzo fsico.La disminucin de hemates se asocia a anemia, final de la gestacin y hemlisis.El VALOR HEMATOCRITO hace referencia a la cantidad de eritrocitos presentes en sangre. Su valor suele darse en porcentaje y en el caso de los bvidos oscila entre 25 y 40%.Las causas del aumento y disminucin del valor hematocrito son las mismas que las de los hemates.

LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA

Est estrechamente relacionada con los otros dos parmetros, de forma que sus variaciones obedecen a causas similares a las de los anteriores. Sus valores estn comprendidos entre 8 y 14gr/100ml (en bovinos).

LOS NDICES ERITROCITARIOS

Son una gran ayuda en el diagnstico de determinadas anemias y de las caractersticas de los glbulos rojos. Se contemplan el volumen corpuscular medio y la concentracin media de hemoglobina corpuscular.

EL VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM)

Permite clasificar las anemias en normocticas, macrocticas y microcticas, en funcin del volumen promedio que presenten los hemates circulantes, se mide en fentolitros (FL) y se calcula segn la frmula:VCM= hematocrito (%) / n de hematesSu valor en bvidos oscila entre 40 y 60 fentolitros.LA CONCENTRACIN MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR (CMHC)

Define la relacin entre el peso de la hemoglobina y el volumen de los glbulos rojos, se expresa en porcentaje o en gr/100cm3. Se calcula segn la frmula:CMCH= hemoglobina (gr/100cm3) x 100 / hematocrito (%)

LA HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM)

Expresa el peso de hemoglobina por hemate, permite, como la anterior, clasificar las anemias en hipocrmicas, normocrmicas e hipercrmicas. Para calcularla utilizamos la frmula:HCM= hemoglobina (gr/100cm3) x 100 / n de hematesSu valor oscila entre 11 y 17 picogramos (pg).

LOS RETICULOCITOS

Son eritrocitos jvenes e inmaduros, su estudio permite evaluar la capacidad de respuesta de la mdula sea en situaciones de anemia. En condiciones normales no aparecen en sangre perifrica o son muy escasos. Su observacin requiere una tincin vital.La determinacin de su ndice permite clasificar las anemias en regenerativas (hay respuesta por parte de la mdula) y no regenerativas.Se calcula multiplicando el porcentaje de reticulocitos por el hematocrito observado y dividiendo por el hematocrito normal de la especie (en caso del bovino, 32% promedio).El resultado obtenido (contaje de reticulocitos corregido) se divide por el tiempo de maduracin (para un hematocrito de 32%, aproximadamente 2) y obtenemos el ndice de reticulocitos.ndice de reticulocitos inferior a 2 indica anemia no regenerativa.Por encima de 2 significa anemia regenerativa.Por encima de 3 indica anemia regenerativa y sugiere hemlisis.Se habla de anemia en bvidos cuando los glbulos rojos se encuentran por debajo de 5 millones por ul de sangre, el valor hematocrito es inferior a 24% y la concentracin de hemoglobina baja por debajo de 8gr/dl.

La anemia es grave cuando el recuento de hemates baja de 2,5 millones por ul y, prcticamente, mortal cuando los glbulos rojos se sitan por debajo de 1,5 millones por ul.

LA SERIE BLANCA

Est formada por los leucocitos o glbulos blancos. Sus funciones principales son la defensa del organismo ante las infecciones y la reaccin frente a sustancias extraas.El recuento de leucocitos tiene dos componentes. Uno es la cifra total de leucocitos en 1mm3 de sangre venosa; el otro, la frmula leucocitaria, mide el porcentaje de cada tipo de leucocitos, que son: neutrfilos, monocitos, linfocitos, eosinfilos y basfilos. El aumento del porcentaje de un tipo de leucocitos conlleva disminucin en el porcentaje de otros.Estos valores varan dentro de la normalidad segn la edad.

EL LEUCOGRAMA:

El leucograma incluye el recuento total de leucocitos as como su recuento diferencial (frmula leucocitaria).El recuento de glbulos blancos nos informa del nmero de leucocitos por ul de sangre; en el bovino est comprendido entre 4000 y 10000/ul en los adultos y entre 6000 y12000/ul en los terneros. La disminucin (leucopenia) de los leucocitos se observa en circunstancias de estrs, en procesos vricos, estadios iniciales de enfermedades bacterianas graves y en septicemias en fase terminal. El incremento de los leucocitos (leucocitosis) aparece en las bacteriemias o procesos infecciosos en general.

Valores 3 veces por encima de los valores normales pueden indicar presencia de:

Leucosis. Linfocitos.

Son las clulas sanguneas predominantes en los bvidos, se pueden diferenciar dos tamaos, pequeos y grandes. Su nmero oscila entre 2500 y 7500 por ul (45-70% de leucocitos). El incremento (linfocitosis) se observa por procesos autoinmunes, inflamatorios crnicos o tumorales (leucemia linfocitaria). La disminucin (linfopenia) aparece en situaciones de estrs e inmunodeficiencias.

NEUTRFILOS

Los neutrfilos pueden ser jvenes (en banda o en cayado) y maduros (polimorfonucleares de 2-6 lobulaciones). Su nmero en el bovino oscila entre 600 y 4000/ul (15-45% del total).

Cuando abundan las formas jvenes se dice que la curva de Arneth (representacin grfica de la clasificacin de los neutrfilos en funcin del nmero de lobulaciones) est desviada a la izquierda, mientras que la ausencia de stas se califica como desplazamiento a la derecha de la curva de Arneth. El incremento de los neutrfilos (neutrofilia) con desvo a la izquierda nos indica proceso inflamatorio agudo, mientras que la neutrofilia con desvo a la derecha define un proceso crnico.

El estrs, asimismo, genera neutrofilia.La neutropenia se asocia a procesos inflamatorios muy graves o septicemias terminales.

EOSINFILOS

La cantidad de eosinfilos en el bovino se sita entre 0 y 24000/ul (0-20%). Su incremento (eosinofilia) indica reacciones alrgicas o de hipersensibilidad o enfermedades parasitarias. La disminucin (eosinopenia) no tiene significado clnico.

BASFILOS

Son muy escasos (0-200/ul o 0-2%). No tienen significacin clnica.

MONOCITOS

Su nmero en el bovino oscila entre 25 y 840/ul (2.7%) Se observa monocitos en infecciones bacterianas, procesos fngicos crnicos,enfermedades inmunomediadas, crisis hemolticas graves y necrosis tisularimportante. Los procesos inflamatorios agudos se caracterizan por leucocitosis, neutrofilia,desvo a la izquierda de la curva de Arneth y monocitos. Los procesos inflamatorios crnicos presentan leucocitosis y neutrofiliamoderadas, desvo a la derecha de la curva y monocitosis.LA SERIE PLAQUETARIA

Compuesta por plaquetas o trombocitos, se relaciona con los procesos de coagulacin sangunea.En el hemograma se cuantifica el nmero de plaquetas y el volumen plaquetario medio(VPM), que proporciona informacin sobre su tamao. El recuento de plaquetas tambin vara con la edad.

RECUENTO DE PLAQUETAS O TROMBOCITOS

El recuento de plaquetas puede ser directo o por aproximacin teniendo en cuenta el nmero de ellas por campo. Menos de 3-4 plaquetas por campo de inmersin (normal de11-25) indican trombocitopenia.A travs de un contaje directo, menos de 100000 plaquetas por ul, indica trombocitopenia, siempre que el frotis se haya realizado inmediatamente despus de la extraccin.Cuando el recuento se encuentra entre 40000 y 75000 por ul hay dificultades para retraer el cogulo.

TIEMPO DE SANGRA

Es una prueba que se realiza en vivo y permite evaluar la funcin plaquetaria. Para medirla hacemos una puncin con una lanceta en el morro u oreja depilada y cada 20 segundos sacamos la gota de sangre, sin tocar el punto de incisin, con un papel secante hasta que al retirar el papel no aparezca manchado, lo que querr decir que la herida ha dejado de sangrar. Esto sucede entre los 2 y 5 minutos.Los trastornos de coagulacin pueden alargar este tiempo hasta los 15-20minutos.

TIEMPO DE COAGULACIN

El tiempo de coagulacin puede apreciarse de una forma aproximada, colocando una gota de sangre sobre un porta y atravesndola cada 30 segundos con una aguja, hasta que en uno de los pases se fijan los primeros hilos de fibrina. Tiempos superiores a 5 minutos indican alteracin del tiempo de coagulacin.Otras pruebas, como el tiempo de protrombina y el tiempo parcial de tromboplastina, permiten la evaluacin de los diferentes factores de coagulacin.

4. INTERPRETACIN DEL HEMOGRAMA PARA SU APLICACINPRCTICA

El hemograma es una prueba que sirve para orientar hacia el diagnstico de diversas enfermedades que se han sospechado por la historia clnica y la exploracin fsica.A veces, los datos que nos da son suficientes para confirmar o descartar la enfermedad sospechada, pero con frecuencia se necesita utilizar otras pruebas diagnsticas que aporten ms informacin.

ANEMIA

Se define como la disminucin de la cantidad de hemoglobina de los glbulos rojos o del nmero de glbulos rojos por unidad de volumen; o sea que se trata de la disminucin de la concentracin de hemoglobina circulante.Invariablemente la anemia se acompaa con un descenso del valor de hematocrito y casi siempre del nmero de hemates.La consecuencia directa de una anemia es la hipoxia en los tejidos por la disminucin del oxgeno circulante tisular.

La anemia es una consecuencia de muchas enfermedades o alteraciones y no una enfermedad en s misma.Los glbulos rojos se forman a partir de una clula pluripotenciada de la que tambin se forman plaquetas y leucocitos en la medula sea; por el estmulo de la eritropoyetina la clula pluripotenciada pasa a unipotenciada para luego de varios cambios llagar a reticulocito medular.El reticulocito pasa a la circulacin y pierde su ncleo quedando a los 5 das formado el hemate maduro.

En el desarrollo normal intervienen factores:a) intrnsecos u hormonales: eritropoyetina, andrgenos, TSH, T3 y T4, glucocorticoides, ACTH, etc.b) extrnsecos o nutricionales: hierro, cobre, cobalto, Vit B12, cido flico y oxgeno.

Al valorar una anemia debe tenerse en cuenta todas aquellas situaciones en las que pueda existir una alteracin de la distribucin entre volmenes plasmtico y globular, ya que sta puede dar a falsas disminuciones de la concentracin de Hb (falsa anemia por hemodilucin). Tal sucede con ciertas condiciones fisiolgicas, como por ejemplo, durante la preez (anemia fisiolgica).Debido a su frecuente asociacin a numerosos procesos patolgicos, las causas de anemia pueden ser muy diversas, aunque su mecanismo comn es el desequilibrio entre la formacin de hemates por la medula sea (eritropoyesis) y su eliminacin por el sistema mononuclear fagoctico (SMF).El descenso de la eritropoyesis se caracteriza fundamentalmente por una alteracin cualitativa o cuantitativa de los eritroblastos y una disminucin del nmero de reticulocitos en sangre perifrica (anemia arregenerativa). Por el contrario, el aumento de eritroblastos y reticulocitos es ndice de elevada capacidad de regeneracin medular (anemia regenerativa). Con mucho ms frecuencia de anemia es la ferropenia (anemia ferropenia).Tipos de anemia:

Desde el punto de vista fisiopatolgico, la anemia se puede clasificar en dos grandes grupos:

A) anemia regenerativaB) anemia arregenerativa

ANEMIA REGENERATIVA

Se caracteriza por una intensa regeneracin eritroblstica medular que intenta compensar el dficit hemoglobnico perifrico.Puede obedecer a dos causas principales:

a) hemorragiab) hemlisis

La anemia de origen hemorrgico aparece secundariamente a una perdida perifrica importante de sangre por rotura de un vaso sanguneo de gran i mediano calibre (hemorragia interna muchas veces ocultas o hemorragias externas fcilmente detectables).

En el caso de gran hemorragia con prdida abundante de sangre se produce una anemia en la que existe disminucin simultnea del nmero de hemates y de la cantidad d de plasma sanguneo. Debido a ello, el hematocrito e incluso la concentracin de hemoglobina conservan unos valores situados dentro de la normalidad y no disminuyen hasta despus de algunas horas de haberse producido la hemorragia, es decir cuando se ha producido la hemodilucin con que el organismo tiende a compensar la reduccin del volumen sanguneo.Las pequeas hemorragias pueden ser causa de anemia, pero esto sucede cuando presentan un carcter crnico, ya que en este caso produce una disminucin de la concentracin de hemoglobina secundaria a una prdida o expoliacin del hierro del organismo a travs de la misma (anemia hipocrmica ferropnica).Las anemias hemolticas son las que aparecen secundariamente a la rotura de los hemates a nivel de la microcirculacin (hemlisis intravascular) o a su excesiva eliminacin por las clulas del SMF (hemlisis extravascular).

ANEMIA ARREGENERATIVA

Se caracteriza por la incapacidad medular de compensar el descenso de la concentracin de hemoglobina a travs de un aumento de la eritropoyesis y puede obedecer a dos mecanismos principales:

a) lesin de la medula madre pluripotenteb) alteracin de la maduracin eritroblstica

La anemia por lesin de la clula madre pluripotente aparece como consecuencia de un descenso de la capacidad de auto duplicacin o diferenciacin y casi siempre se acompaa de una alteracin simultnea de las restantes lneas celulares sanguneas (leucocitos y plaquetas). Su forma ms comn es la que aparece como aplasia medular (AM) o lesin secundaria a una agresin medular por sustancias qumico orgnicas (txicos industriales, medicamentos o radiaciones ionizantes) o por mecanismo inmune (Ac).

Las anemias por alteracin de la maduracin eritroblstica pueden clasificarse de acuerdo con su mecanismo fisiopatolgico en 2 tipos:

a. por alteracin de la maduracin nuclearb. por alteraciones de la maduracin citoplasmtica

Las alteraciones de la maduracin nuclear obedecen casi siempre a la carencia de ciertos factores indispensables para la sntesis del cido desoxirribonucleico (ADN): el cido flico y la vitamina B12.

Las anemias se clasifican en:

a) POR EL DIMETRO DE LOS GR (VCM)1. Normocticas: eritrocito normal2. Microcticas: disminucin en el volumen del eritrocito por carencias de hierro o hemoglobina.3. Macrocticas: aumenta el volumen y disminuye en nmero por carencia de vitamina B124. Megalocticas: aumenta el volumen y disminuye en nmero por carencia de vitamina B12 y cobre.b) Por el contenido de hemoglobina (HBCM):1. Normocrmica: coloracin normal2. Hipocrmica: con hemoglobina disminuida3. Policrmica: con coloraciones distintas.c) Por el mecanismo de produccin fisiopatolgica:1. Hemorrgica2. Hemoltica3. Por deficiencias de formacin

ALTERACIN DEL CUADRO LEUCOCTICO:

LEUCOPENIA

1) Una leucopenia balanceada es ocasionada por una disminucin de todos los tipos de leucocitos.2) De ordinario la leucopenia es causada por la reduccin de uno cualquiera de los tipos leucocitarios, en cuyo caso recibe los nombres de:a) Neutropenia (agranulocitosis, granulocitopenia).b) Linfopeniac) Eosinopenia

CAUSAS GENERALES DE LEUCOPENIA: La leucopenia que se encuentra en infecciones abrumadoras y en ciertas enfermedades producidas por virus se debe por lo comn a un descenso de la produccin de clulas, a consecuencia de una inhibicin de la mdula sea. Muchas infecciones que en su forma habitual localizada producen una leucocitosis, pueden ocasionar leucopenia cuando se generalizan o llegan a ser abrumadoras. La leucopenia representa una debilitacin del proceso defensivo del organismo y no es necesariamente debida a falta de estimulacin de la produccin de leucocitos.

CAUSAS QUE PUEDAN PRODUCIR UNA LEUCOPENIA:

1. Infecciones virales (Fiebre Catarral Maligna, DVB) bacterianas y protozoarios2. Estados caqucticos y de debilitacin3. Trastornos hematopoyticos (anemias, leucemias)4. Agentes qumicos (ATBs, Sulfas, antihistamnicos)5. Leucocitosis:

La elevacin del nmero de neutrfilos ocurre con una frecuencia tan superior a la del aumento del nmero de clulas de otros tipos que, en general el trmino leucocitosis implica neutrofilia a menos que se le agregue un adjetivo por ejemplo, leucocitosis eosinoflica.

5. RECOLECCIN DEL MATERIAL PARA REALIZAR ELHEMOGRAMA

EXTRACCIN DE SANGRE

Los lugares de eleccin para la extraccin de sangre en el ganado vacuno son las venas yugular, coccgea y mamaria; mientras que en el ovino es la vena yugular.La primera de ellas requiere, si no se es medianamente experto, la utilizacin de algn tipo de compresor (cadena o cuerda) o simplemente la presin con el dedo, mientras que en las otras dos no es necesario ingurgitar la vena.La vena mamaria sera nuestra ltima eleccin porque la situacin en la que se encuentra obliga a colocarnos en una posicin comprometida al alcance de las extremidades posteriores del animal.

Antes de proceder a la extraccin sangunea desinfectaremos la zona de puncin, pincharemos con la aguja acoplada a una jeringa o a cualquier otro sistema (tubo de vaco), con un ngulo de 30, aproximadamente, en relacin al vaso (en caso de la coccgea el pinchazo ser prcticamente perpendicular) y aspiraremos suavemente para tratar de evitar la hemlisis.Recogida la cantidad de sangre suficiente, extraeremos la aguja y haremos presin sobre el punto, con el algodn utilizado en la desinfeccin, para evitar la formacin de hematomas.

MATERIAL UTILIZADO PARA LA EXTRACCIN

La sangre puede ser recogida con jeringa y, posteriormente, pasarla a recipientes de diferente capacidad para su trasporte, en tubos abiertos o, mejor an, en tubos de vaco que, dado su hermetismo, garantizan la esterilidad de la muestra, deseable en toda extraccin.

ANTICOAGULANTES

Dependiendo de los exmenes a realizar necesitaremos sangre entera, plasma o suero.Para los primeros dos utilizaremos tubos que contengan anticoagulante, mientras que en el caso del suero recogeremos la sangre en tubos limpios de este tipo de sustancias.En el caso del plasma, una vez recogida la sangre, procederemos a su centrifugacin para separar los elementos formes y decantar el sobrenadante. Mientras que en el caso del suero, una vez empezada la coagulacin, separaremos el cogulo de las paredes del tubo con una aguja o filamento fino y dejaremos que ste se vaya retrayendo exudando el lquido, en este caso el suero.

El suero es un plasma que no contiene fibringeno ni protrombina, sustancias que han servido para formar el cogulo y que permanecen con l. Por otra parte, la composicin mineral del suero es ligeramente inferior a la del plasma.Los sueros hemolizados o lipmicos interfieren en muchas determinaciones, especialmente en las que miden la actividad de las diferentes enzimas.Por cada 10 centmetros cbicos de sangre se obtienen 3 a 5cm3 de suero o plasma.

LOS ANTICOAGULANTES MS UTILIZADOS SON

FLORURODE SODIO (10mg/ml sangre) CITRATO OXALATOSODICO. No se usa, genera cambios morfolgicos. Se utiliza para pruebas de coagulacin,HEMOSTASIA y VELOCIDAD de SEDIMENTACIN GLOBULAR. Conservar en heladeraEDTA (Etilendiamino- tetraactico)Solucin: 10gr/100ml agua destilada2 gotas/7-8ml de sangre(1,5mg/ml sangre)

VENTAJAS

1. Mantiene la morfologa eritrocitaria y leucocitaria.2. Si la sangre se mantiene a 4C, asegura la conservacin de las clulas sanguneas durante 24hs.3. Inhibe la aglutinacin plaquetaria, facilitando el recuento de las mismas.ES EL ATC DE ELECCIN PARA LA REALIZACIN DE EXAMENESHEMATOLOGICOS POR CONSERVAR MEJOR EL VOLUMEN CELULAR Y LASCARACTERISTICAS MORFOLOGICAS DE LAS CLULAS EN LOS FROTIS DESANGRE.

HEPARINA

2 gotas/10ml de sangre (sol- 1%) (el efecto anticoagulante mximo es de 10-12hs)

VENTAJAS:1. Reduce al mnimo la hemlisis.2. No afecta el tamao ni las formas de las clulas.

DESVENTAJAS

1. Si no se mezcla rpido y uniformemente con la sangre luego de extrada, se pueden formar microcogulos.2. No es recomendable su empleo para la confeccin de frotis sanguneo.3. Debe conservarse en heladera.4. Alto costo.

6. PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS

MICROHEMATOCRITO

La sangre con ATC se deposita en un tubo capilar largo y se centrifuga empleando un cabezal para microhematocrito. A continuacin se mide el nivel de la columna de eritrocitos por medio de una escala especial.Se debe preferir este mtodo, es ms rpido que el de macroescala.

MATERIALES

Una centrfuga (elctrica) para microhematocrito, con cabezal plano para girar a alta velocidad. Una escala especial para medir los resultados (generalmente se suministra junto con la centrfuga). Tubos capilares de 75mm de longitud y de 1,5mm de dimetro interior. Plasticina

TCNICA

1. Poner el extremo marcado con un crculo rojo del tubo capilar en el tubo que contiene la sangre, sta entrar por capilaridad. Llenar aproximadamente del tubo.2. Tapar el extremo contrario del tubo con la plasticina a una profundidad de por lo menos 2mm dentro del tubo.3. Colocar el tubo capilar en las ranuras numeradas del cabezal de la centrifuga, el extremo del tubo que se ha tapado con plasticina deber apuntar hacia afuera, lejos del centro.4. Centrifugar a alta velocidad, entre 11000 y 13000 revoluciones/minuto durante4-5min (en ese momento se obtiene un volumen constante de eritrocitos).Al terminar la centrifugacin el tubo tendr en su interior tres capas:a) En la parte superior, una columna de plasmab) A la mitad, una capa sumamente delgada de glbulos blancosc) En la parte inferior y hasta el fondo, una columna de glbulos rojos

La determinacin de la fraccin de volumen de eritrocitos se hace precisamente al nivel del tope de la columna de glbulos rojos.Medir con la escala: Sostener el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos quede exactamente al mismo nivel de la lnea horizontal correspondiente a 0. Desplazar el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada con el nmero1 quede al nivel del tope de la columna de plasma. El tubo debe estar en posicin completamente horizontal.La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicar el hematocrito.

FROTIS

La extensin se prepara repartiendo uniformemente una gota pequea de sangre sobre un portaobjeto de manera que solo se deposite una capa de clulas.Despus de teirlas, las extensiones de sangre se usan para: Determinar las fracciones de nmero de los tipos leucociticos Para detectar anormalidades celulares Para detectar hemoparsitos

MATERIALES

2 Portaobjetos de vidrio limpio y desengrasado.Se deben lavar con una pieza de tela suave embebida en una mezcla de etanol y ter.

PREPARACIN DE LA EXTENSIN

1. Recoger una gota de sangre y depositarla ligeramente cerca de un extremo del portaobjetos.2. Sostener el portaobjetos con una mano y con la otra colocar el borde del otro portaobjetos frente a la gota de sangre.3. Desplazar el segundo portaobjetos hacia atrs hasta que toque la gota de sangre.4. Dejar que la gota de sangre se extienda por el borde del segundo portaobjetos.5. A continuacin, deslice el segundo portaobjetos hacia el extremo opuesto del primer portaobjetos que contiene la gota de sangre con un movimiento suave (se deber agotar toda la gota de sangre antes de llegar al extremo del primer portaobjetos).SECADO DE LA EXTENSIN:

Es esencial que la extensin se seque de manera adecuada para conservar la calidad, es especial el climas hmedos. Secar la extensin con rpidos movimientos de vaivn.

FIJACIN:

Si la extensin se ha preparado para determinar fracciones de nmero de los tipos de leucocitos se deber fijar con metanol, o directamente por medio de la tincin de May-Grunwald. Para la deteccin de parsitos se emplear luego la tincin de Giemsa sobre la extensin.

TINCIN DE MAY-GRUNWALD Y DE GIEMSA

MTODO:1. Fijar la extensin con metanol durante 2-3min.2. Preparar los colorantes: Diluir el colorante de May-Grunwald al 1 x 2 y mezclar suavemente: Usar volmenes iguales de colorante y agua amortiguada (por ejemplo 10 ml de colorante + 10ml de agua amortiguada). Diluir el colorante de Giemsa al 1 x 10 empleando un volumen del colorante y 9 volmenes de agua amortiguada (por ejemplo 2ml de colorante + 18ml de agua amortiguada). Mezclar con suavidad.

3. Cubrir el portaobjetos con el colorante diluido de May-Grunwald durante 5min.4. Escurrir suavemente con agua.5. Luego recubrir con el colorante diluido de Giemsa durante 10min6. Lavar el colorante con una corriente de agua suave.7. Depositar agua limpia sobre el portaobjetos y dejar durante 2-3min.8. Escurrir el agua y colocar el portaobjetos en una guardilla hasta que se seque.Determinacin de la formula leucocitaria:Se cuentan 100 leucocitos y se anota el nmero que se ha encontrado de cada tipo de ellos. La proporcin de cada tipo de leucocitos se expresa como fraccin decimal. La suma de todas las fracciones deber ser igual a 1. Luego se notifica la proporcin de cada tipo como porcentaje.

MATERIALES

Microscopio con objetivo x 100 de inmersin en aceite, tambin se puede usar un objetivo seco x 40 con cubreobjeto. Aceite para la inmersin. Extensin de sangre teida. Si es posible, un contador especial provisto de teclas para cada tipo de leucocito.

MTODO

Examen de la extensin. Empleando el objetivo x 100, de inmersin en aceite, verificar que los glbulos blancos se encuentren uniformemente distribuidos en la extensin.

Recuento de cada tipo de leucocito:1. Iniciar el recuento en la ltima porcin de la extensin, precisamente donde se observa que los eritrocitos comienzan a agruparse y sobreponerse.2. Examinar en forma de mosaico cerca de uno de los bordes tomando nota del tipo de leucocito que se observa.3. Contar hasta un total de 100 leucocitos.Concentracin del nmero de leucocitos:La concentracin de leucocitos es el nmero de ellos que se encuentra en un litro de sangre. Se expresa como el

PRACTICA: N 24TEMA: TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS PARA PUNCION VENOSA1.-OBJETIVOS: Definir y realizar los procedimientos necesarios para minimizar los errores en la toma de muestras. Definir y aplicar adecuadamente el procedimiento para la puncin venosa. Validar la enorme importancia para obtener una ptima muestra colectada Realizar la puncin venosa entre los alumnos y poner en prctica los conocimientos adquiridos.2.-FUNDAMENTO:La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del laboratorio clnico. Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes y desde el punto de vista de la muestra sangunea, la enorme importancia que conlleva una muestra apropiadamente colectada, la seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte, constituyen factores fundamentales en la evaluacin e informe de los exmenes a realizar.El personal que ha de realizar la coleccin de la muestra sangunea, debe tener presente el trato correcto del paciente, orientacin habilidad para realizar su trabajo.La presente practica pretende ser una gua para la correcta toma de muestra sangunea, tal que sta funcin sea estandarizada en sus aspectos tcnicos, estableciendo las pautas necesarias en bioseguridad y de aquellos factores que pueden afectar la calidad de la muestra.3.-MATERIALES:Para desinfectar la piel: Alcohol isoproplico al 70%. Algodn. Gasas.

Para puncin de la vena Ligadura de goma de ltex (2-5 mm de dimetro por 35-40 cm. de largo). Tubos al vaco correctamente identificados. Soporte para tubos VACUTAINER Agujas desechables estriles Recipiente para desechos punzo cortantes Bolsas rojas para desechos biolgicos4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA: 1. Verificar que las etiquetas coincidan con la solicitud de las pruebas. 2. Se identifica al paciente comprobando su nombre completo y fecha de nacimiento. 3. Si se encuentra inconsciente, debe de verificarse su identidad a travs de una enfermera o un familiar. 4. No se debe extraer muestra alguna sin identificar adecuadamente al paciente. 5. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que el paciente no ha ingerido alimentos.6. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento. 7. Se debe colocar adecuadamente al paciente, segn se encuentre sentado o en decbito prono, para tener acceso fcil a la fosa ante cubital. 8. Se debe preparar todo el material, incluidos los tubos, la ligadura, los objetos para limpiar la piel, las jeringas; cuando sea necesario, la aguja estril y el dispositivo para fijarla. 9. Se selecciona la vena adecuada para la puncin las venas que resulten ms palpables. 10. Se limpia la zona de la puncin con una torunda humedecida con alcohol isoproplico al 70%. Se comienza en el punto de la puncin y se prosigue la limpieza hacia fuera siguiendo un movimiento espiral. 11. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin. No dejarlo ms de un minuto.12. Se fija la vena tanto por encima como por debajo del lugar de puncin, con ayuda de los dedos pulgar y medio o ndice y pulgar.

VENOPUNCION:a) Se penetra la piel con la aguja formando un ngulo de 15 con el brazo y con el bisel hacia arriba, se sigue la direccin de la vena;b) Se introduce la aguja con suavidad pero con rapidez para reducir las molestias. No hay que enterrar la aguja; c) si se utiliza una jeringa, se tira hacia atrs del mbolo, con tensin lenta y uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su interior; si se utiliza un tubo al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena se dirigir el tubo todo lo posible hacia delante apoyndose en el dispositivo de sujecin (de la misma forma en que se introduce el mbolo de una jeringa).d) Al mismo tiempo mantenga firmemente la aguja en su lugar. Una vez que se haya llenado el tubo, se retira cogindolo por su extremo y tirando suavemente de l. e) Se mezcla la sangre con el anticoagulante por inversin suave. Si la muestra ha sido extrada con jeringa se transferir la sangre a los tubos correspondientes despus de retirar la aguja.5.-DATOS /OBSERVACIONES:Es de suma importancia tener en cuenta ciertas condiciones para la toma de muestra de sangunea:1. Es necesario que la persona que va a tomar la muestra adopte actitud de confianza, auto seguridad y equilibrio. 2. Conocer y realizar los procedimientos necesarios para minimizar los errores en la toma de muestras. 3. Debe explicar brevemente al paciente las maniobras que va a realizar para obtener la mayor colaboracin posible.4. Debe tranquilizarse al paciente para disminuir el estado de estrs. 5. Revisar que todo el material est listo (tubos rotulados, torundas de algodn, alcohol, ligaduras, jeringa, gradilla, tapones). 6. El paciente y el operador deben estar en posicin confortable y en un sitio con buena iluminacin. 7. El paciente debe estar sentado en una silla y debe extender el brazo sobre el borde de una mesa, encima de una toalla desechable, para tener acceso fcil y cmodo 8. Evitar el uso de bancos altos sin respaldo. 9. Es necesario tener en cuenta el tipo de anlisis, el volumen de la muestra y la edad del paciente. 10. Para volmenes pequeos de muestra es recomendable utilizar el lbulo de la oreja, pues en caso de utilizar los dedos de la mano se corre el riesgo de infecciones por contaminacin en el trabajo de laboratorio. 11. Para un volumen mayor, el sitio ms adecuado es la vena que se encuentra en el pliegue anterior de la flexin del codo, se recomienda utilizar la vena mediana baslica o ceflica 12. En los pacientes obesos las venas que se observan azulosas son demasiado superficiales y pequeas y es mejor no utilizarlas. 13. Es conveniente que el paciente no mire mientras se est realizando la puncin radial superficial.6.-GRAFICOS:

7.-CONCLUSIONES Y DISCUSION: Para realizar una correcta toma de muestra sangunea se debe de tener muy en cuenta todos los procedimientos y tcnicas ya estudiadas para esta, logrando as minimizar errores. Una correcta puncin venosa nos asegura tener una buena muestra de calidad. Toda espcimen debe de ser tratado como una muestra de alto riesgo Es necesario aplicar las normas bioseguridad para evitar accidentes.8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS.

PRACTICA N25TEMA: FROTIS SANGUINEO1.-OBJETIVO Aprender la tcnica apropiada para realizar un extendido sanguneo que permita la visualizacin de los elementos de la sangre por medio de la microscopia ptica.2.-FUNDAMENTOLa realizacin del frotis sanguneo es de fundamental importancia en la interpretacin del hemograma.Un frotis es un mecanismo cientfico que consiste en el extendido de una gota de sangre en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla posteriormente.Es ms adecuado emplear sangre que an no ha estado en contacto con el anticoagulante, pues este podra alterar los resultados (algunos anticoagulantes tienden a deformar las clulas de la sangre).La fidelidad de la informacin obtenida de ellos, depende en gran parte de la calidad de las extensiones. Estas no deben ser demasiado gruesas porque las clulas se amontonaran y no podran ser reconocidas, ni diferenciarse, ni demasiado delgadas porque las clulas se deformaran, distorsionaran y destruiran. Por eso los frotis de sangre deben ser bien nivelados y para obtener buenos resultados es necesario que:PARTES DE UNA EXTENSIN:1.-CABEZA. 1. Es la zona inicial de la extensin. 1. Es la regin ms gruesa1. En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates forman aglomerados (pilas de monedas).

2.-CUERPO.1. Es la zona media del frotis. 1. Su espesor es el apropiado. 1. En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de leucocitos. 1. Contiene la "zona ideal" de observacin, que corresponde a la porcin que limita con la cola. 3.-COLA.1. Es la zona final de la extensin. 1. Suele tener un aspecto redondeado. 1. Es la regin ms fina. 1. En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y adems. los hemates estn deformados y presentan una tonalidad uniforme. 1. En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes. 4.- BORDES.1. Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes. Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por estar deformadas o destruidas3.-MATERIALES Lanceta estril en caso de usar sangre capilar Jeringuilla en caso de usar muestra venosa Alcohol Algodn Placa portaobjeto

4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1. Rotular la placa con los cdigos respectivos2. Con los dedos ndice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta normal (porta soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa. Tambin puede apoyarse, simplemente, el porta soporte sobre el extremo del dedo corazn de la mano que lo sujeta. De esta forma, el porta soporte forma un ngulo con la mesa. 3. Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema, depositar una pequea gota de sta (de unos 5 micro litros) en la cara superior de ese porta, a no menos de 2 cm del extremo opuesto al que agarra la mano. 4. Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un poco por delante de la gota de sangre y formando un ngulo de 45 con el porta soporte. Es conveniente utilizar siempre el mismo porta extensor, para adaptarlo a esta funcin. 5. Desplazar suavemente hacia atrs el porta extensor, hasta que alcance la gota de sangre. 6. Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del porta extensor que toca el porta soporte. 7. Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta extensor hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una velocidad media. Este deslizamiento debe acabar, aproximadamente, a 1 cm del extremo final del porta soporte, con un movimiento de ascensin del porta extensor.8. Secar rpidamente la extensin, agitndola al aire, para que sus clulas no se distorsionen. 5.-DATOS/OBSERVACIONES:La forma correcta de extraer sangre capilar es la siguiente: Elegir el tercer o cuarto dedo de una de las manos. La sangre venosa tiene que haber sido extrada hace menos de 3 horas, ya que pasado este tiempo, se producen unos cambios apreciables en las clulas, que se manifiestan, al ser teidas stas, como alteraciones en su morfologa. Una vez extrada, la sangre venosa ha de ser anticoagulada con EDTA. Para realizar frotis sanguneos no debe utilizarse sangre anticoagulada con heparina, ya que sta agrega las clulas y produce un fondo azul en las extensiones de sangre teidas con el colorante de Wright. 6.-GRAFICOS

7.-CONCLUSIONES El estudio de las extensiones sanguneas es esencial para el anlisis morfolgico de las clulas hemticas y para la realizacin del recuento diferencial linfocitario (RDL).

Una buena tcnica nos permitir dar resultados de calidad.

8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS

PRACTICA: N 26TEMA: DETERMINAR EL VOLUMEN DE CELULAS ROJAS CONCENTRADAS POR MEDIO DEL HEMATOCRITO1.-OBJETIVOS: Entender los conceptos de hematocrito.

Conocer las tcnicas para la obtencin del hematocrito.

Realizar el hematocrito con la sangre del alumno.

Interpretar los valores normales de hematocrito.

2.-FUNDAMENTO: GENERALIDADESEl Hto mide el porcentaje de clulas sanguneas rojas en el volumen total de sangre. Se determina de forma rutinaria como parte del Hemograma completo.Los valores normales varan segn la edad y el sexo.Los valores indican los mismos estados patolgicos que las anomalas en el recuento de hemates y la concentracin.Para este tipo de examen se necesita muestra de sangre.El mdico puede ordenar este examen si el paciente tiene signos de: Anemia Deficiencia en la dieta Leucemia Otras afeccin mdica Se debe de tener en consideracin los factores que interfieren. Las alteraciones en el tamao de los hemates pueden modificar el valor del Hto. Un nmero extremadamente alto de leucocitos puede afectar los valores La hemodilucin y la deshidratacin pueden afectar los niveles. El embarazo suele reducir ligeramente los valores por la hemodilucin (Disminucin de la viscosidad de la sangre debido a una reduccin del nmero de corpsculos celulares y de la cantidad de protenas en la sangre. Se observa en la insuficiencia renal y cardaca a causa de un aumento en la retencin de agua, o en casos de hemorragia, donde se produce el paso de lquidos hacia el torrente sanguneo)La residencia a gran altura aumenta los valores Los valores pueden no ser fiables inmediatamente despus de una hemorragia Entre los frmacos capaces de disminuir los niveles se incluyen el cloranfenicol y la penicilina.Valores normales del hematocritoHOMBRES.42-52%MUJERES37-47%en embarazo menos 33%ANCIANOS.. los valores pueden disminuir ligeramenteNIOS..31-43%Los valores aumentadosse debe auna hemoconcentracin y a una policitemia, bien sea primaria o secundaria. Mientras que los valores disminuidos nos indican unaanemia, una hemodilucin o una hemorragia reciente .Los valores bajos de hematocrito pueden deberse a: Anemia Sangrado Destruccin de los glbulos rojos Leucemia Desnutricin Deficiencias nutricionales de hierro, folato, vitaminas B12 y B6 Sobre hidratacin Artritis reumatoideLos valores altos de hematocrito pueden deberse a: traumatismo Deshidratacin Eritrocitos Niveles bajos de oxgeno en la sangre (hipoxia) Fibrosis pulmonar3.-MATERIALES Alcohol isoproplico al 70%. Algodn. Ligadura de goma de ltex (2-5 mm de dimetro por 35-40 cm. de largo). Tubos al vaco correctamente identificados. Soporte para tubos VACUTAINER Agujas desechables estriles Recipiente para desechos punzo cortantes Bolsas rojas para desechos biolgicos Capilares Plastilina Centrifuga Regleta para leer hematocrito4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA:1. Procedemos a extraccin de sangre por va venosa. Con anti coagulante.

2. Llenamos un capilar a partir de la muestra obtenida

3. Antes de colocar el capilar en la centrifugadora deberemos taponar un extremo con plastilina para evitar que se pierda la muestra en el proceso de centrifugacin (15.000 rpm durante 10 minutos).

4. Una vez terminada la centrifugacin, podremos observar dos segmentos del capilar claramente diferenciados.

5. La parte superior, de un color amarillento, corresponde al plasma.

6. La parte inferior, de un color rojo oscuro, corresponde a las clulas sanguneas, entre ellas los hemates

7. Con la regla y se mide el total de los dos segmentos y el segmento correspondiente a los hemates.

5.-DATOS /OBSERVACIONES:Es necesario tener en cuenta lo siguiente:Antes del procedimiento se debe:Explicar el procedimiento al pacienteInformarle de que esta prueba no requiere ayunoDurante el procedimiento se debe:Recoger 5-7ml de sangre venosa en un tubo de tapn lila; solo se necesitan 0,5ml cuando se utilizan tubos capilares.Despus del procedimiento:Aplicar presin o un apsito a presin en el punto de puncin venosaEvaluar el lugar de puncin venosa por si hubiese hemorragia.Los valores aumentadosse debe auna hemoconcentracin y a una policitemia, bien sea primaria o secundaria. Mientras que los valores disminuidos indican unaanemia, una hemodilucin o una hemorragia reciente.

6.-GRAFICOS:

7.-CONCLUSIONES:Con esta prctica se pretende cumplir con lo propuesto que son: Conocer la tcnica para realizar un hematocrito Aprender a interpretar resultados en sus niveles

8.- PREGUNTAS Y RESPUESTAS:

PRACTICA N27TEMA: DETERMINACIN ESPECTROFOMTRICA DE HEMOGLOBINA EN UNA MUESTRA DE SANGRE1.-OBJETIVOS: Manejar correctamente pipetas automticas. Determinar la concentracin de hemoglobina en una muestra de sangre utilizando el mtodo espectrofomtrico2.-FUNDAMENTO/ GENERALIDADES:La hemoglobina es una protena conjugada contenida en el interior de los eritrocitos a razn de 300000000 molculas de hemoglobina por cada eritrocito en los humanos. Sirve como vehculo para el transporte de oxigeno de los pulmones, donde la tensin de O2 es elevada, hacia los tejidos, donde es baja. Una molcula de hemoglobina es un tetrmero que consta de dos pares de cadena de poli pptidos, dos sub unidades alfa y de beta que est enfrentada entre s en torno a una cavidad en el centro de la molcula. Cada subunidad contiene un grupo hemo (regin ligante de oxgeno, que contiene un tomo de hierro ferroso), por lo cual una molcula de hemoglobina puede unir 4molculas de oxgeno.La hemoglobina reducida es hemoglobina con hierro no asociado al oxgeno. Cuando cada grupo hem se asocia con una molcula de oxgeno, la hemoglobina toma la forma oxihemoglobina.Los valores normales son: Los recin nacidos: 17 a 22 g / dl Una (1) semana de edad: 15 a 20 g / dl Un (1) mes de edad: 11 a 15gm/dL Nios: 11 a 13 g / dl Adultoshombres: 14 a 18 g / dl Adultosmujeres: de 12 a 16 g / dl Los hombres despus de la edad media: 12,4 a 14,9 g / dL Las mujeres despus de la edad media: 11,7 a 13,8 g / Dl

3.-MATERIALES Tubos de ensayo Gradilla Alcohol rectificado Algodn Jeringas desechables Torniquete Pipeta automtica (20 ul) Pipetas graduadas de 5 a 10 ml Puntas amarillas adaptables para pipeta automtica Tubos de espectrofotmetro Espectrofotmetro spectronic 20 Reactivo Solucin de Drabkin: Bicarbonato de sodio 1gCianuro de potasio 0,05gFerrocianuro de potasio---0,2gH20 deshilada 1000 ml Esta solucin tiene un pH de 8,6. Debe ser de color amarillo y transparente y al medir su densidad ptica contra agua como blanco, esta debe ser cero La solucin debe guardarse en frasco oscuro y debe descartarse si esta turbia o decolorada. El reactivo es un poco toxico pero debe manejarse con cuidado Muestra de sangre total con anticoagulante (EDTA) Anticoagulante(EDTA)Patrn de hemoglobina4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1. Se toma con la pipeta automtica 20 ul de la sangre 2. Se diluye en ml dela solucin de Drabkin. 3. Se lee luego a diferentes longitudes de onda(400 a 600) y se grafica en papel milimetrado.4. Encender el espectrofotmetro-5. Colocar 5 ml de solucin de Drabkin en un tubo-Mezclar suavemente la mezcla de sangre (agitar el frasco 20 veces)-6. Con la pipeta automtica tomar 20 ul de la sangre, limpiando cuidadosamente la parte exterior de las puntas de las pipetas-7. Introducir la pipeta y mezclar la sangre con el reactivo de Drabkin contenido con el tubo-8. Mezclar bien y esperar 5 minutos9. Leer la absorbancia utilizado como blanco un tubo con solucin de Drabkin-para el clculo de los resultados

5.-DATOS/OBSERVACIONES:La hemoglobina se mide generalmente como parte del conteosanguneo completo (CSC)a partir de una muestra de sangre .Existen varios mtodos para medir la hemoglobina, la mayora de las cuales se llevan a cabo actualmente por las mquinas automatizadas diseadas para realizar varias pruebas de sangre.Dentro de la mquina, los glbulos rojos se descomponen para obtener la concentracin de hemoglobina en una solucin.La hemoglobina libre est expuesta a una sustancia qumica que contiene cianuro que se une firmemente con la molcula de hemoglobina para formarciano metahemoglobina.El nivel de hemoglobina se expresa como la cantidad de hemoglobina en gramos (g) por decilitro (dL) de sangre entera, un decilitro son 100 mililitros.6.-GRAFICOS:

7.-CONCLUSIONES Como conclusin de esta prctica podemos aclarar que el resultado depende de la edad, sexo del paciente y condiciones de cada individuo. Los niveles bajos de hemoglobina promedio no tienen mayor relacin significativa por s sola.8.-PREGUNTAS Y RESPUESTASPRACTICA N28TEMA: VELOCIDAD DE SEDIMENTACION 1.-OBJETIVOS: Comprender el concepto de VSG y su importancia clnica. Conocer los procesos en que la VSG se altera. Aprender a realizar una lectura de VSG a la 1 h

2.-FUNDAMENTO/ GENERALIDADESLa velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, as como en los procesos inactivos o estrictamente localesEste examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar sangre anticoagulada en un tubo en posicin vertical. Se lee macroscpicamente la columna de plasma al cabo de una hora de reposo.Un cambio de la VS no se debe especficamente a una enfermedad en particular.

La VSG en nios es inferior a 15 mm. En adultos varones menor de 14 mm. En mujeres adultas menor de 20 mm.

Un aumento de la VS puede deberse a muchas enfermedades como: Infecciones bacterianas Parasitosis Anemia Obesidad Hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia Enfermedades inflamatorias Hipergammaglobulinemia Insuficiencia renal o cardaca Algunos tipos de cncer Sndrome nefrtico

Una disminucin de la VS puede deberse a: Poliglobulia Crioglobulinemia Hiperleucocitosis Hiperviscosidad Anemia hemoltica Hemoglobinopatas3.-MATERIALES Tubos de WINTROBE Soporte para tubos de Wintrobe Sangre con anticoagulante Cnula

4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1. Extraemos una muestra de sangre venosa con contenido de citrato sdico en la 2. jeringa.

3. Depositamos la muestra en una pipeta de eritrosedimentacin (pipeta de 4. Wintrobe) y esta sobre un soporte.

5. Esperamos una hora y observamos los resultados

5.-DATOS/OBSERVACIONES La velocidad se determina midiendo a qu altura del tubo de ensayo se encuentren las clulas sanguneas al cabo de una y de dos horas. La VS se expresa en milmetros La VS aumenta de manera natural con el transcurso de los aos y durante el embarazo. Los estrgenos pueden provocar un aumento de la VS. Los medicamentos antiinflamatorios reducen la VS.

6.-GRAFICOS

7.-CONCLUSIONES 8.-PREGUNTAS Y RESPUESTA

PRACTICA N 29TEMA: RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS EN SANGRE Y DETERMINACION DE VALORES POR METODO REFERENCIAL.1.-OBJETIVOS: El alumno analizara junto con el docente la prctica correspondiente al recuento de leucocitos para su aplicacin

Contar en la cmara de neubaurer los leucocitos de la sangre en una persona para su valoracin clnica.2.-FUNDAMENTO/GENERALIDADES Los leucocitos tambin sean llamados glbulos blancos son un conjunto heterogneo de clulas sanguneas que son los efectores celulares de la respuesta inmunitaria, interviniendo as en la defensa del organismo contra sustancias extraas o agentes infecciosos (antgenos). Se originan en la mdula sea y en el linftico. Los glbulos blancos o leucocitos forman parte de los actores celulares del sistema inmunitario, y son clulas con capacidad migratoria que utilizan la sangre como vehculo para tener acceso a diferentes partes del cuerpo. Los leucocitos son los encargados de destruir los agentes infecciosos y las clulas infectadas, y tambin segregan sustancias protectoras como los anticuerpos, que combaten a las infecciones.El conteo normal de leucocitos est dentro de un rango de 4.500 y 11.500 clulas por mm de sangre, variable segn las condiciones fisiolgicas (embarazo, estrs, deporte, edad, etc.) y patolgicas (infeccin, cncer, inmunosupresin, aplasia, etc.). El recuento de leucocitos se realiza por el mtodo de referencia que es el recuento en cmara.El recuento diferencial automatizado de leucocitos tiene mayor precisin que el examen microscpico, permitiendo la evaluacin de cambios cualitativos y cuantitativos en los hemates, plaquetas y leucocitos de la sangre

Causas de aumento:Las leucocitosis pueden ser secundarias a un aumento tal como ocurre en las infecciones crnicas o en los sndromes mielo proliferativos, a la salida rpida de elementos jvenes de la medula sea (por estrs o infecciones agudas), o por disminucin de la migracin a los tejidos (lo que explica el falso efecto beneficioso de los corticoides)Causas de disminucin:Debido a la importancia relativa de la serie granulocitica sobre el total de leucocitos en sangre, el concepto de leucopenia es prcticamente equivalente al de granulocitopenia/ o plaquetopenia puede deberse a: Insuficiencia de la mdula sea (por ejemplo: debido a infeccin, tumor o cicatrizacin anormal). Enfermedades vasculares del colgeno (como ellupus eritematoso sistmico). Enfermedad del hgado o el bazo. Radioterapia o exposicin a la radiacin.

3.-MATERIALES Sangre total con anticoagulante Pipetas de glbulos blancos Cmara de neubauer Microscopio Liquido de turk(lquido para blancos) agitador4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1. Con la pipeta para blancos sealada hasta 11, se aspira sangre hasta la seal 0.5.2. Luego se aspira el lquido de dilucin hasta la seal 11 obteniendo as una dilucin de 1:203. Hacer rotar la pipeta durante varios minutos de forma horizontal4. Se hacen salir algunas gotas desechndolas 5. Se llena la cmara cuenta glbulos,6. Se espera unos 3 minutos, para dar tiempo a que sedimente n los glbulos 7. Se centra la luz y se enfoca de exactamente donde se va a realizar el estudio 8. Y se procede a leer5.-DATOS/OBSERVACIONESMuchos medicamentos afectan el recuento de leucocitos.Tanto los medicamentos recetados y de venta libre, incluidos los suplementos a base de hierbas quetambindeben tenerse en cuenta.Los valores normales tanto para el recuento de glbulos blancos y diferenciales estn relacionados con la edad.Las fuentes de error en el recuento manual glbulos son de gran parte debido a la variacin en la dilucin de la muestra y la distribucin de las clulas en la cmara, y el pequeo nmero de glbulos blancos que se cuentan.Con electrnicos recuentos de leucocitos y diferenciales, la interferencia puede ser causada por pequeos cogulos de fibrina, glbulos rojos nucleados, la agrupacin de plaquetas y glbulos rojos, no lisadas.Los glbulos blancos y glbulos rojos nucleados inmaduros pueden causar interferencia con el recuento diferencial automatizado. 6.-GRAFICOS:

En el anlisis hecho, los resultados de la cuenta de clulas quedaron as por casillaEl nmero de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 5 550/mm3, lo que indica un ndice normal, sin embargo apenas y supera el mnimo, pues el paciente era un hombre, de 41 aos

7.-CONCLUSIONES Los leucocitos son las clulas sanguneas que dentro del organismo participan desarrollando diferentes funciones como son: fagocitosis, defensa inmunolgica especfica o inespecfica. El recuento leucocitario representa el nmero de leucocitos en un litro de sangre completa. La cuantificacin o recuento de leucocitos es muy importante para el diagnstico de enfermedades.

8.- PREGUNTAS Y RESPUESTAS

PRACTICA N30TEMA: RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS 1.-OBJETIVOS: Aprender a diferenciar los leucocitos morfolgicamente Estudiar la clasificacin de los leucocitos Conocer los valore normales y relaciones de los valores anormales 2,-FUNDAMENTO: GENERALIDADESLa frmula leucocitaria o recuento diferencial leucocitario (RDL) consiste en la determinacin del porcentaje que representa cada uno de los tipos de leucocitos con respecto al total de ellos.

Los leucocitos consisten en dos subpoblaciones principales, las clulas mononucleares y las clulas granulocticas.Las clulas mononucleares incluyen linfocitos y monocitos.Los granulocitos incluyen neutrfilos (tambin llamados leucocitos polimorfonucleares o neutrfilos segmentados), eosinfilos y basfilos.Cada tipo de clula se describe a continuacin: Los neutrfilos son leucocitos normalmente los ms abundantes.Miden 12-16 micras de dimetro. Tienenmanchas en el ncleo oscuro de color prpura-azul, y se divide en varios lbulos (generalmente entre tres y cuatro) que consisten de cromatina densa.Un neutrfilo justo antes de la etapa final de maduracin tendr un ncleo segmentado en forma de una banda.Estos neutrfilos banda se pueden contar con los neutrfilos maduros o como una categora separada.Los neutrfilos son clulas fagocticas y facilitan la eliminacin debacteriasy antgenos revestidas de anticuerpo.Los grnulos neutrfilos son ricos en peroxidasa, y ayudan a la clula en la destruccin de bacterias y otras clulas ingeridas.

Los eosinfilos son 14-16 micras de dimetro y contienen un ncleo azul que est segmentada en dos lbulos.El citoplasma est lleno de grandes refrctiles grnulos de color rojo anaranjado.Los grnulos contienen peroxidasa, hidrolasas, y protenas bsicas que ayudan en la destruccin de las clulas fagocitadas.Los eosinfilos se aumentan en las reacciones alrgicas e infecciones parasitarias.

Los basfilos eosinfilos son de 14-16 micras de dimetro y tienen un ncleo azul bilobulado.El citoplasma de los basfilos de color azul oscuro-negro pueden oscurecer el ncleo.Estos contienen grandes cantidades de mucopolisacridos histamina, heparina y cido.Los basfilos ayudan a mediar la respuesta alrgica mediante la liberacin de histamina.

Los linfocitos son los segundos glbulos blancos ms abundantes.Pueden ser pequeos (7-9 micras de dimetro) o grandes (12 a 16 micras de dimetro).El ncleo es de color azul oscuro y es casi redondo o ligeramente indentado y la cromatina es agrupada y muy densa.El citoplasma es azul medio y agranular por lo general.Un linfocito ocasionalmente tiene unos pocos grnulos azurfilos en el citoplasma. Ellos son responsables de iniciar y regular larespuesta inmunemediante la produccin de anticuerpos y citocinas.

Los monocitos son los ms grandes de los leucocitos en medicin, miden de 14-20 micras de dimetro.Ellos tienen un ncleo grande azul de forma irregular y plegado con la cromatina, es el menos denso que los demsleucocitossanguneos.El citoplasma es de color gris-azul, y est lleno de polvo fino como grnulos de color lila.Los monocitos son clulas fagocticas con procesos antgenos y presentes en los linfocitos, ellos son un aporte requerido para la activacin de linfocitos

Valores normales

Grupo de leucocitosValor %Valor absoluto

Neutrfilos55 a 70 %2.500 a 8.000 mil/mm3

Linfocitos20 a 40 %1.000 a 4.000 mil/mm3

Monocitos2 a 8 %100 a 700 mil/mm3

Eosinfilos1 a 4 %50 a 500 mil/mm3

Basfilos0 a 1 %25 a 100 mil/mm3

Cuando en la medicin de leucocitos se ven clulas jvenes aparecen los neutrfilos en forma de ncleo en forma de bastn (cayados), y un aumento del porcentaje de los glbulos blancos polimorfo nucleares. Esto se denomina como "desviacin a la izquierda". Este trmino sugiere infecciones bacterianas agudas. La "desviacin a la derecha" se dice cuando el porcentaje de linfocitos y monocitos se encuentra aumentado con respecto al de el polimorfo nuclear (neutrfilos, eosinfilos y basfilos), se asocia en general a enfermedades vricas.La eosinoflia, que es el aumento del porcentaje o del nmero total de eosinfilos, sugiere un cuadro alrgico o una infeccin parasitaria

3.-MATERIALES Microscopio. Papel y lpiz o un registradorautomtico de clulas. Este ltimo consiste en un aparato que tiene unas teclas. Cada tecla representa a un tipo de leucocito y hace una anotacin cada vez que es presionada. Cuando el nmero de anotaciones llega a 100, suena una alarma. Aceite de inmersin Extensin de sangre teida

4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1. Preparar el microscopio para que tenga el condensador alto y el diafragma abierto.2. Enfocar la preparacin con el objetivo de 10x33. Comprobar que la preparacin es buena y elegir una zona en la que s no estn superpuestos y los leucocitos se encuentren uniformemente distribuidos4. Enfocar esa zona de lapreparacin con el objetivo de inmersin5. Observar esa zona de lapreparacin mientras se describe un recorrido en forma de S.

5.-DATOS/OBSERVACIONESEs importante tener muy en cuenta terminologa muy utilizados en la formula leucocitaria

TRMINOS CLAVE:Basfilos: Glbulo blanco con colores azul oscuro y negro, que libera histamina en reacciones alrgicas.Recuento diferencial: Prueba que determina el porcentaje de cada tipo de glbulos blancos o leucocitos en la sangre de una persona.EosinfilosGlbulo blanco con grandes grnulos de color rojo anaranjado que aumenta en respuesta a infecciones parasitarias y reacciones alrgicas.LinfocitosClulas mononucleares que es responsable de la inmunidad humoral (mediada por anticuerpos) y la inmunidad mediada por clulas.MonocitosClula mononuclear fagoctica de la sangre que elimina los desechos y microorganismos por fagocitosis y antgenos de procesos para el reconocimiento por los linfocitos inmunes.NeutrfilosGlbulos blancos normalmente comprendidos el 50-70% del total de los leucocitos.El citoplasma contiene grnulos primarios y secundarios.Los neutrfilos eliminan y matan a las bacterias mediante fagocitosis.FagocitosisProceso por el cual los leucocitos de la sangre digieren los desechos y microorganismos para eliminarlos de la sangre.

6.-GRAFICOS

7.-CONCLUSIONES Establecer que el porcentaje de leucocitos puede orientar al diagnstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, y otros procesos. El recuento de leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de hematimetra y recuento leucocitario completo.8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS

PRACTICA N 31TEMA: RECUENTO PLAQUETARIO EN SANGRE TOTAL1.-OBJETIVOS: Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milmetro cbico de sangre total Identificar morfolgicamente las plaquetas y apreciar su nmero por campo.

Correlacionar la prctica con la teora expuesta en clase.2.-FUNDAMENTO/GENERALIDADES:Las plaquetas o trombocitos son uno de los elementos que conforman nuestra sangre y juegan un papel muy importante en su proceso de coagulacin de all que la alteracin de sus niveles pueda tener consecuencias graves en nuestra salud .Los niveles normales de plaquetas en la sangre de una persona adulta oscilan entre las 150.000 y las 450.000 por milmetro cbico, cuando en un anlisis de sangre se muestran valores menores o superiores a esta media se debe acudir de inmediato a otro tipo de valoracin. Las plaquetas bajas pueden conducir a una hemorragia interna debido a que se ve afectado el proceso de coagulacin de la sangre mientras que si se encuentran demasiado altas puede ocurrir lo contrario, la formacin de cogulos que desencadenen una trombosis, un infarto. Enfermedades como el dengue, la anemia aplstica, la trombocitopenia, entre otras o tratamientos como la quimioterapia afectan el conteo de plaquetas reduciendo su presencia. Ante estos resultados debemos tomar las medidas pertinentes. Si un paciente cuenta con un alto conteo de plaquetas, y dependiendo tambin los valores de sus glbulos rojos y blancos, pudiera presentar los siguientes sntomas: Dolores de cabeza y pecho Fatiga y debilidad Mareos y vrtigo Cambios en la visin Hormigueo y entumecimiento en pies y manos Sangrado anormal tras una herida Sangrado nasal y en las encas Propensin a la formacin de hematomas Heces con sangre

4.-MATERIALES Sangre anticoagulada con EDTA Solucin de oxalato de amonio al 1% Pipeta para dilucin de hemates Cmara de de recuento de Neubauer Laminilla Caja de Petri con papel de filtro humedecido Agitador de pipetas Microscopio5.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1. El conteo de plaquetas se realiza en sangre anticuagulada con EDTA y diluida con oxalato de amonio al 1% mediante el uso de la pipeta 2. Mezcle cuidadosamente, por inversin por lo menos 10 veces, la sangre anticuagulada con el fin de obtener una muestra homognea3. Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente4. Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la solucin diluente5. Aspire el lquido diluente hasta la marca 101 exactamente6. Sujeta la pipeta entre los dedos ndice y pulgar, desprenda la boquilla y deje en reposo durante 3 minutos7. Agite durante 10 minutos8. Descarte hasta la mitad del bulbo con el fin de eliminar el lquido del capilar e inmediatamente llene la cmara9. Llene la cmara de Neubauer en ambos lados y coloque en ambiente hmedo por 10 minutos. El ambiente hmedo se logra cubriendo la cmara con una Caja de Petri que llevar adherido un disco de papel de filtro humedecido.10. Coloque la cmara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de la cmara. No debe haber agregados plaquetarios.11. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central.12. Disminuya la intensidad de la luz. As le ser ms fcil distinguir 13. Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeas, opacas, redondas o alargadas, medianamente retrctiles, y a veces con prolongaciones14. El nmero est determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan las lneas derecha e inferior.5.-DATOS/OBSERVACIONESLas plaquetas se cuentan ms fcilmente utilizando microscopio de contraste de fase, pero si el microscopio de luz se adeca correctamente y el conteo se hace con un estricto control de calidad el resultado ser igualmente confiable. Especial atencin debe tenerse con las soluciones diluentes.Estas no deben estar contaminadas, pues tanto las partculas como las bacterias pueden similares plaquetas. Los lquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes de su uso. La limpieza de la cmara de Neubauer y de las pipetas es importante en este procedimiento,Si se observan agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse. El uso de EDTA como anticoagulante ayuda a disminuir la agregacin plaquetaria. El rango de error para el recuento de plaquetas en el microscopio de luz es de 16 25%. No se debe informar el recuento de plaquetas sin confrontarlo con el extendido de sangre perifrica6.-GRAFICOS

7.-CONCLUSIONES El recuento de plaquetas es muy importante ya que con este estudio se puede diagnosticar o controlardiferentes enfermedades o para identificar la causa de un sangrado excesivo forma parte de una biometra hemtica o hemograma, una de lasanormalidades es cuando las plaquetas estn altas o bajas.

8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS

PRACTICA N32TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE COAGULACION1.-OBJETIVOS: Reconocer una muestra en correctas condiciones para la realizacin de tcnicas de coagulacin. Relacionar las tcnicas de proceso con una buena obtencin de muestra Observar resultado de exmenes de coagulacin

2.-FUNDAMENTO/GENERALIDADES:La prolongacin del tiempo de coagulacin puede obedecer a la disminucin:TromboplastinaProtrombinaDel fibringenoA la presencia de la sangre de algn anticoagulanteLa determinacin del tiempo de coagulacin trata de investigar el tiempo que tarda en coagular la sangre sola, en ausencia de elementos procedentes de tejidos que pudieran modificar la velocidad del proceso.Por esta razn, los procedimientos que utilizan la sangre venosa son ms exactos que aquellos que emplean la sangre capilar tomada de un dedo pues esta puede estar mezclada con lquidos tisulares.La coagulacin ser un tanto ms rpida mientras ms estrecho sea el tubo.Los valores normales con este mtodo varan de 2 a 8 minutos3.-MATERIALES Alcohol Algodn Jeringa Tubo Lamina Cronometro

4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1. Limpiamos bien el dedo y extraemos la sangre con una jeringa e inmediatamente procedemos a colocar la muestra en un tubo, o en una lmina ,2. A intervalos de medio minuto se atraviesa con una aguja en una de las gotas de sangre 3. Cuando la aguja arrastre filamentos de fibrina al retirar la gota se ha efectuado la coagulacin4. El intervalo de tiempo transcurrido entre la colocacin de la gota sobre el portaobjetos y la formacin de fibrina es el tiempo de coagulacin 5.-DATOS/OBSERVACIONESLa determinacin del tiempo de coagulacin debe hacerse a temperatura uniforme, puesto que el tiempo de coagulacin se prolonga cuando la temperatura baja y se acorta cuando esta sube.El tiempo de coagulacin vara segn el mtodo empleado 6.-GRAFICOS7.-CONCLUSIONES El tiempo de coagulacin sangunea es una prueba muy poco sensible y nunca se debe utilizar como prueba selectiva. Se usa a menudo para guiar a la teraputica heparinica, pero los resultados obtenidos son a menudo inseguros, por esto son preferibles pruebas como el tiempo de tromboplastina parcial activa.8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS:

PRACTICA N33TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE SANGRIA1.-OBJETIVOS: Reconocer la utilidad clnica de la medicin de sangrado Ejecutar correctamente la tcnica de tiempo de sangrado Conocer la tcnica para la medicin del tiempo de sangrado2. FUNDAMENTO/GENERALIDADES:Cuando existe una lesin vascular, por reflejo nervioso y espasmo muscular del vaso, sobreviene una contraccin del mismo, fenmeno que dura segundos y tiene como finalidad lograr la estasis de la circulacin y favorece la formacin del tapn plaquetario. En lesiones de capilares, esta vasoconstriccin, refleja es suficiente para permitir la adhesin plaquetaria y la detencin de la hemorragia.El tapn hemosttico plaquetario primario es una masa de plaquetas que se acumulan en el punto lesionado de la pared vascular, como resultado de su adherencia, al colgeno del tejido subendotelial que ha quedado expuesto (adhesin) y luego entre s (cohesin y agregacin). Los tapones primarios son inestables y fcilmente eliminados.Un tiempo de sangrado normal indica una retraccin normal de los capilares y la existencia de un nmero suficiente de plaquetas, el tiempo normal va de 1 a 3 minutos3.-MATERIALES muestra Lancetas estriles Torundas de algodn con alcohol (70%) Un Cronometro4.-DESARROLLO DE LA PRCTICA1.-En el brazo del paciente, ejercer una presin de 40mm de Hg. Que se deber mantener constante durante toda la prueba.2. Buscar en el antebrazo una zona vascular. 3. Hacer la asepsia con una torunda impregnada con alcohol, dejar secar.4. Con una lanceta estril y desechable, hacer una puncin de un solo golpe y sin hacer. Rasgaduras laterales, echar a andar el cronometro.

5. En el momento en que sale la gota de sangre, secar con el papel filtro sin tocar la piel. 6. Repetir esto cada 15 segundos hasta que el papel filtro no absorba sangre. 7. Anotar el tiempo.5.-DATOS/OBSERVACIONESAl realizar una puncin de tamao y profundidad estandarizados, la accin conjunta de los vasos y plaquetas detendr el sangrado en un corto tiempo, el cual es medido y comparado con el normal.Entre los frmacos que puede causar aumento del tiempo de sangra se incluyen anticoagulantes.6.-GRAFICOS

7.-CONCLUSIONES El tiempo de sangrado es una prueba de pantalla para los desrdenes cualitativos y cuantitativos de las plaquetas y para las enfermedades varias. Los mecanismos de coagulacin, aunque en los daos severos de estos, tambin suele resultar prolongado. El tiempo de sangrado anormal es evidente de defecto en la fase paquetera y/o en fase vascular.8.-PREGUNTAS Y RESPUESTAS

PRACTICA N34TEMA: TIEMPO DE PROTROMBINA1. OBJETIVOS: Describir y comprender el fundamento del mtodo Ejecutar correctamente la prueba y la calibracin. Identificar la utilidad clnica de la medicin del tiempo de protrombina.2. MARCO TEORICOLa protrombina es una protena estable del tipo de globulinas alfa que contiene unos 18 aminocidos. Su concentracin normal es la sangre es de aproximadamente de 20 Mg. Por 100 ml. En presencia de iones de calcio, se transforma en trombina por la accin enzimtica de las tromboplastinas extrnseca e intrnseca. Es producida por el hgado bajo la influencia de la vitamina liposoluble. La protrombina est relacionada con el factor VII, tambin producida por el hgado. La trombina se transforma en trombina en la etapa segunda de la coagulacin. El tiempo de protrombina es una etapa de Quick. Se trata de un tiempo de coagulacin obtenida el agregar el plasma en exceso de tromboplastina hitica y calcio. Mide los niveles de factor I Factor II y factor V, VII y X. Es decir que el nombre de esta prueba dara una idea equivocada, porque no solo el factor II el que se determina.Al plasma anticuagulado se le induce una coagulacin respondiendo el calcio que fue inactivado con el anticoagulante y agregando una tromboplastina completa para activar la va extrnseca. Se mide el tiempo transcurrido, desde la activacin hasta la formacin del cogulo, es decir, hasta la formacin de fibrina.Valores de referenciaPorcentaje de actividad 70 a 10% En segundos 12-15

3. MATERIALES Tubos de ensayo 10x75 Pipetas serolgica de 1.0 ml Gradilla para tubos de ensayo Pipeta Pasteur con bulbo Equipo para puncin sistema vacutainer Tubos al vaco con citrato de sodio al 3.8% Papel milimtrico Cronometro Bao mara de 37C CentrifugaREACTIVOS Tromboplastina clcica con ndice de sensibilidad internacional (ISI Solucin salina isotnica.4. DESARROLLO DE LA PRCTICA1. Antes de transcurridos 30m minutos de la extraccin, centrifugar la sangre a 750rpm, durante 5 minutos.2. Separa el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.3. En el tubo de ensayo poner 0.2ml. de la tromboplastina clcica3. Incubar por unos 2 minutos.4. Transcurrido ese tiempo con la tromboplastina agregar 0.1ml. De plasma problema echando a andar simultneamente, el cronometro.5. Al iniciarse el coagulo el cronometro de detendr. Anotar el tiempo, en segundos, en que esto ocurri. 6. Convertir el resultado en tiempo, en ndice normalizado internacional.7. Debido a que se calculara el porcentaje de actividad de protrombina en la muestra problema, comparada con un normal con actividad5. DATOS/OBSERVACIONESLos resultados de la prueba suelen proporcionarse en segundos Entre los factores que interfieren esta:La ingesta de alcoholDieta rica en grasas puede reducir los valoresLos frmacos que pueden aumentar los niveles son alcohol etlico, sulfamidas, anticoagulantes orales.6. GRAFICOS

7. CONCLUSIONES:Dado que el tiempo de protrombina mide la va intrnseca, es el mtodo ideal para el monitoreo de los anticoagulantes orales. La mayora, como antagonistas de la vitamina K, actan sobre esta va. por ello, es indispensable utilizar tromboplastina estandariza .8. PREGUNTAS Y RESPUESTAS

PRACTICA N35TEMA: DETERMINACION DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTI