Práctica 6: Identificación de proteínas.

CETis 62

Equipo 6

Integrantes:

Gutiérrez prieto Natali

López Villafaña Michel Vanessa

Macias Moreno Ana Isabel

Zavala Laguna Andrea

Zavala Quiroz Guadalupe Roberto

Laboratorio Clínico 6 “E”

OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la identificación por el reactivo BIURET.

MARCO TEORICO:

Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero.

El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas; c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.

La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2 tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más cómoda.

Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de los hidratos de carbono.

Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.

REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

MATERIAL

1 gradilla pescado, espinaca, levadura,

Tubos de ensaye

Albúmina, grenetina y caseína

REACTIVOS

NaOH al 10%Sulfato cúprico al 1% en gotero

PROCEDIMIENTO1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1%

hasta la aparición de un color rosa o violeta (máximo 10 gotas).

4. Reportar a que gota aparece el color.

RESULTADOS:

Solución proteica. Numero de gotas para que ocurriera el cambio de color.

Pescado 3

Levadura 5

Grenetina 4

Huevo 2

Leche 5

Espinaca 5

REACCION XANTOPROTEICA

MATERIAL REACTIVOS

Tubos de ensaye proteínas

Gradilla NaOH concentrado (gotero)

Baño maría HNO3 concentrado

PROCEDIMIENTO1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él

vire de color. Observar y reportar resultados.

RESULTADOS:

Solución proteica. Numero de gotas para que ocurriera el cambio de color.

Pescado 8

Levadura 8

Grenetina 9

Huevo 3

Leche 9

Espinaca 5

COAGULACION POR CALOR

MATERIAL REACTIVOS

16 Tubos de ensaye Acido acético al 1%

Gradilla Acetona

Baño maría Éter

Tetracloruro de carbono Butanol

Proteínas NaOH concentrado

PROCEDIMIENTO1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína.

2. Añadir 2 gotas de acido acético al 1% .3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente

manera: Tubo1= 1ml acetona Tubo2= 1ml de éterTubo3= 1ml de butanol

Tubo4= 1ml tolueno

4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.

5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH concentrado, y agitar.

RESULTADOS:

Proteína Éter Tolueno Butanolalbumina Formación del

coaguloFormación del coagulo

Formación del coagulo

Leche Disolución del coagulo

Disolución del coagulo

Pescado Disolución del coagulo

Formación del coagulo

Levadura Disolución del coagulo

Disolución del coagulo

Disolución del coagulo

Espinaca Formación del coagulo

Formación del coagulo

Disolución del coagulo

Grenetina Formación del coagulo

Formación del coagulo

OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE

MATERIAL REACTIVOS

2 vasos de precipitados de 250ml leche entera

1 probeta de 100ml HCl 0.2N

1 embudo acetona

2 papel filtro éter

PROCEDIMIENTO

1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado.2. Agregar 100ml de agua destilada.3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8.4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.6. Repetir este lavado 4 veces.

7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la proteína.

8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar y filtrar. Repetir 4 veces.

9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de

acetona, y filtrar.

10.Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el polvo 24 horas después.

RESULTADOS:

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?

Cambian notablemente sus características, y pueden cambiar de coloración, o precipitarse, o coagularse, o volverse solubles en agua, o insolubles, o volverse rígidas, o volverse blandas, entre otros cambios.

2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

Con el ácido clorhídrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene mayor pérdida de conformación nativa por ser éste un ácido fuerte y provocar cambios en sus propiedades.

3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

Podríamos realizar sobre esa sustancia la reacción de Biuret para detectar la presencia de proteínas

4. Que coloración da la reacción del Biuret?

Provoca una coloración violeta cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?

Sí, puesto que el reactivo reacciona con cualquier proteína ya sea líquida o sólida.

6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?

Será negativa porque si analizamos un solo aminoácido, no hay ningún enlace peptídico puesto que este   enlace se da entre dos aminoácidos, y la reacción de Biuret va a dar positivo cuando exista enlace peptídico (CO-NH) coordinándose con él el Cu en medio alcalino

7. Explica la reacción Xantoproteíca.

Esta reacción se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. Generalmente, se forma primero un precipitado blanco que cambia a amarillo al calentarlo. El color se empieza a tornarse anaranjado cuando la solución se vuelve básica. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y triptofano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del ácido pirámico o trinitrofenol). En esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en dichos aminoácidos. Las manchas amarillas en la piel se causan por el ácido nítrico son el resultado de una reacción xantoprotéica.