UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALAFACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIALABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc.Alumna: Pardo Leiva Yasmani CarlosCurso: Quinto Año Paralelo: “B”

Fecha de Elaboración de la Práctica: martes, 17 de Junio del 2014 Fecha de Presentación de la Práctica: martes, 24 de Junio del 2014Grupo N°: 3

PRÁCTICA N° 3

Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR METANOL

Animal de Experimentación: Cobayo.

Vía de Administración: Vía Intraperitonial.

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

1. Observar la reacción que presenta el cobayo ante la Intoxicación por Metanol puro.

2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el Metanol.

3. Conocer mediante pruebas de identificación la presencia de Metanol.

MATERIALES

Jeringuilla de 10cc Probeta Cronómetro Equipo de disección Bisturí Vaso de precipitación Erlenmeyer Equipo de destilación. Tubos de ensayo Pipetas Bata de Laboratorio Guantes de látex Mascarilla Gorro Zapatone

PROCEDIMIENTO

1. Tener todos los materiales listos en la mesa de trabajo.2. La bioseguridad: colocarse la mascarilla, bata de laboratorio, gorro, zapatones y los guantes.

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SUSTANCIAS

Metanol Puro. Lámina de Cobre Solución de Ácido tartárico. NaOH 0.1 N Permanganato de potasio al 1% Ácido sulfúrico puro Ácido oxálico Fushina bisulfatada Cloruro de fenilhidracina al 4% Nitroprusiato de sodio al 2.5 % Ácido clorhídrico Cloruro de fenil hidracina Ferricianuro de potasio al 5%, Ácido cromotrópico..

3. Disponer y medir la sustancia que se va a administrar (Metanol). 4. Administrar 10ml de Metanol puro por vía intraperitoneal.5. Colocar el cobayo en la panema.6. Observar las manifestaciones que se presentan y en qué tiempo muere.7. Amarramos al cobayo en la tabla de disección. 8. Procedemos rasurarle toda la parte abdominal donde se hará el corte.9. Con la ayuda del bisturí procedemos abrir al cobayo.10. Observamos los cambios que presentan sus órganos.11. Procedemos a colocar los fluidos y las vísceras (picadas lo más finas posibles) en el recipiente

adecuado (Vaso de precipitación). 12. A las vísceras ya picadas le añadimos 25ml de ácido tartárico. Esto lo llevamos a un balón.13. Procedemos a destilar.14. El residuo de la destilación (muestra) que obtuvimos por arrastre de vapor, se practican las

diferentes reacciones de reconocimiento.

Reacciones y Conducta Post-Administración

Tiempo de muerte: 1 minuto 20 segundos (7:52 – 7:53)

Síntomas: Picazón, Convulsión, Secreción Ocular, Presencia de Orina.

7.52 Se inyectó la dosis al cobayo. Le presenta picazón.

7:53 Cae al suelo presentando convulsión, y a los 20 segundos Muere.

GRAFICOS

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Administrando la sustancia toxica por vía Intraperitonial

Colocamos el cobayoEn la panema y observamos

sus manifestaciones

Rasurando al cobayo.

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN LA MUESTRA

Reconocimiento en Medios Biológicos

Reacción de SchiffReacción Positivo no característico coloración violeta en la capa superficial.

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Disección del cobayo Colocando las vísceras y fluidos (picadas lo más finas posibles)

Acidificando con ácido tartárico.

Destilamos colocando con 50 perlas de vidrio

Realizando las reacciones en el destilado que obtuvimos.

Armamos el equipo de destilación.

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10 11

Reacción de RiminiReacción Positivo Característico Coloración azul intenso

Reacción con la fenil hidracina.

Reacción Positivo no característico Coloración roja

Reacción de Marquis.

Reacción Positivo Característico Coloración violeta.

Reacción con

ácido Cromotrópico.

Reacción Reacción Negativa No se produjo Coloración roja.

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Reacción de Hehner Reacción Reacción Negativa No se produjo Coloración violeta

OBSERVACIONES

Pude observar que al administrar Metanol puro por vía intraperitoneal al cobayo, éste presentó picazón, convulsiones, se orinó, se observó además secreción ocular y por ultimo presentó necropsia de la mayor parte de las vísceras al momento de abrirlo.

Observar con que sustancia se va a trabajar, ya que por su toxicidad se debe usar guantes y mascarilla.

CONCLUSIONES

Al final de esta práctica la reacción que presenta el cobayo ante la intoxicación con metanol puro, aprendimos como el metanol en una sustancia que puede provocar grandes daños en los organismos vivos, observamos lo que provoca internamente el metanol y los signos que presento el cobayo cuando a este se le administro la sustancia, cabe mencionar que la dosis depende del peso del ser vivo en este caso del cobayo.

RECOMENDACIONES

Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Realizar las reacciones de identificación en la Sorbona. No pipetear las sustancias con la boca. Preparar correctamente las sustancias a la concentración que se requiere. Tener mucho cuidado con el líquido y vísceras ya que contienen concentraciones del metanol.

CUESTIONARIO

¿Cuáles son las aplicaciones y usos del metanol?

El metanol tiene una gran variedad de aplicaciones industriales. Su uso más frecuente como materia prima para la producción de metil-butil-éter, que es un aditivo para la gasolina. Se emplea en la fabricación de formaldehído, ácido acético, cloro metanos, metacrilato de metilo, metilaminas, dimetil tereftalato, o como solvente o anticongelante en pinturas en aerosol, pinturas de pared, limpiadores para carburadores y compuestos para limpiar parabrisas de automóviles.

El metanol también se emplea como anticongelante en vehículos, solvente de tintas, tintes, resinas, adhesivos, biocombustibles y aspartame. El metanol puede ser también añadido al etanol para hacer que éste no sea apto para el consumo humano (el metanol es altamente tóxico) y para vehículos de modelismo con motores de combustión interna.

El metanol es un sustituto potencial del petróleo. Se puede usar directamente como combustible reemplazando la gasolina en las mezclas gasolina-diesel. El metanol tiene mayor potencial de uso respecto a otros combustibles convencionales debido a que con esta sustancia se forma menor cantidad de ozono, menores emisiones de contaminantes.

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¿Cuáles son los síntomas más comunes por intoxicación con metanol?

Los síntomas pueden abarcar: Pulmones y vías respiratorias

o dificultad respiratoriao paro respiratorio

Ojoso ceguerao visión borrosao dilatación de las pupilas

Corazón y vasos sanguíneoso convulsioneso presión arterial baja

Sistema nervioso:

o comportamiento agitadoo comao mareo

o dolor de cabezao crisis epiléptica

Piel y uñaso uñas y labios azulados

Estómago e intestinos

o dolor abdominal (fuerte)o diarreao problemas con la función

hepática

o náuseaso pancreatitiso vómito

Otros: fatiga, calambres en las piernas, debilidad

¿Cuál es la Dosis Letal del Metanol? 

Ingerir elevadas cantidades de metanol puede causar dolor de cabeza, mareo, náusea, vómitos y muerte (de 20 a 25 g se tiene una dosis mortal). Tomar más de medio litro o más puede causar ceguera o pérdida de la visión, ya que puede dañar seriamente el nervio óptico. Una exposición crónica puede ser causa de daños al hígado o de cirrosis. La dosis letal de metanol para los humanos varía entre 0,3 gramos y 1 gramo por kilogramo de masa corpórea. 

BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA

Toxicidad por metanol y su efecto sobre las vías visualesDisponible en: vitae.ucv.ve/pdfs/VITAE_3373.pdf

Metanol 4.19Disponible en: www.minambiente.gov.co/documentos/Guia19.pdf

RevisadoDía Mes Año

Machala, 24 de Junio del 2014

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Yasmani Pardo Leiva Bioq. Carlos García. Mg. Sc. Estudiante Catedrático

GLOSARIO

Anión gap: El anión gap es la diferencia entre los aniones plasmáticos que habitualmente no se

miden (proteínas, sulfatos, fosfatos y ácidos orgánicos como lactato y piruvato) y cationes

plasmáticos que habitualmente no se miden (K+, Ca2+, Mg2+). El anion gap normal es entre 8 - 12

mEq/l.

Cetoacidosi Diabética: La cetoacidosis diabética (CAD) hace referencia a una descompensación de

la diabetes mellitus que, junto con el estado hiperosmolar y la hipoglucemia - secundaria al

tratamiento, son las tres principales complicaciones agudas de la diabetes mellitus. A diferencia de las

complicaciones crónicas, esta complicación se desarrolla en cuestión de horas y pone en peligro la

vida del paciente, por lo que se considera una urgencia médica.

Metanol: También conocido como alcohol de madera o alcohol metílico (o raramente alcohol de

quemar), es el alcohol más sencillo. Su fórmula química es C H 3OH (CH4O).

Nefrolitiasis: Es la presencia de litos (piedras) en el riñón, y cuando éstos se encuentran en la vía

urinaria, se denomina al cuadro Urolitiasis, debe ser manejada por un equipo de médicos (Nefrólogos,

Urólogos, y eventualmente Endocrinólogos).

Nistagmus: Es un tipo de movimiento involuntario de los ojos. Usualmente es de lado a lado, pero a

veces es de arriba abajo o en forma circular (movimiento rotatorio incontrolable). El movimiento

varía entre lento y rápido y usualmente involucra ambos ojos. El nistagmus ocurre más

frecuentemente en la infancia, pero también puede adquirirse después en la vida. 

Vértigo: Es una sensación ilusoria o alucinatoria de movimiento de los objetos que nos rodean o de

nuestro propio cuerpo, por lo común, una sensación de giro. El vértigo suele deberse a un trastorno en

el sistema vestibular.

ANEXOS:

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METANOL

El metanol (CH3OH) es un líquido incoloro y volátil a temperatura ambiente. Por sí mismo es inofensivo, pero sus metabolitos son tóxicos.

Fuentes de exposición.

Tiene una amplia utilización industrial como disolvente, utilizándose en la fabricación de plásticos, material fotográfico, componentes de la gasolina, anticongelantes, líquido limpia cristales, líquido para fotocopias, limpiadores de hogar.

La intoxicación se produce generalmente por ingesta accidental o intencionada. También se han dado casos de intoxicación por adulteración de bebidas alcohólicas.

Toxicocinética.

Cuando se ingiere, se absorbe rápidamente a partir del tracto gastrointestinal, y los niveles en la sangre alcanzan su pico a los 30-60 minutos de la ingestión, dependiendo de la presencia o ausencia de comida. La intoxicación usualmente se caracteriza por un periodo de lactancia (40 minutos a 72 horas), durante el cual se observan síntomas. Esta fase se sigue de acidosis con anión gap elevado y de síntomas visuales.

El metabolismo del metanol comprende la formación de formaldehido por una oxidación catalizada a través del alcohol deshidrogenasa. El formaldehido es 33 veces más toxico que el metanol, pero es rápidamente convertido a ácido fórmico, que es 6 veces más toxico que el metanol. Los niveles de ácido fórmico se correlacionan con el grado de acidosis y la magnitud del anión gap. También la mortalidad y los síntomas visuales se correlacionan con el grado de acidosis.

Mecanismo de acción.

El metanol se absorbe por vía oral a través de la piel, y por vía respiratoria. Su volumen de distribución es de 0.6 L/Kg. Se distribuye en el agua corporal y es prácticamente insoluble en la

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grasa. El hígado lo metaboliza en su mayor parte a través del alcohol-deshidrogenasa, hacia formaldehido, que es rápidamente convertido a ácido fórmico por el aldehído-deshidrogenasa, el cual es finalmente oxidado a dióxido de carbono. El 3-5% se excreta por el pulmón y el 12% por vía renal. La vida media es de unas 12 horas, que puede reducirse a 2.5 mediante hemodiálisis. La eliminación sigue una cinética de primer orden a baja dosis y durante la hemodiálisis, mientras que sigue una cinética de orden cero a altas dosis.

Se piensa que el ácido fórmico es el responsable de la toxicidad ocular asociada a la intoxicación por metanol, por inhibición de la citocromo oxidasa en el nervio óptico. Tanto el ácido fórmico, como el ácido láctico, parecen ser los responsables de la acidosis metabólica y del descenso del bicarbonato.

El metanol afecta principalmente al SNC, produciendo deterioro del nivel de conciencia, convulsiones y coma. La dosis toxica es de 10 a 30ml, considerándose potencialmente letal una dosis de 60 a 240ml; los niveles plasmáticos tóxicos son superiores a 0.2g/l, y potencialmente mortales los que superan 1g/l.

Cuadro clínico.

La intoxicación por metanol habitualmente se produce por ingestión, pero también puede ocurrir por absorción cutánea y por inhalación. El inicio del cuadro puede ser precoz, o retrasarse hasta 24 horas, si se han ingerido también alimentos. Los principales signos y síntomas son:

a. Perdida de agudeza visual con edema de papila. Además, puede aparecer nistagmus (movimiento involuntario de los ojos. Usualmente es de lado a lado, pero a veces es de arriba abajo o en forma circular: es un movimiento rotario, incontrolable) y alteración de los reflejos pupilares. Asimismo, puede desarrollarse pérdida de visión y ceguera irreversible por atrofia del nervio óptico.

b. Taquipnea mediada por acidosis y parada respiratoria súbita.c. Síntomas digestivos como dolor abdominal, anorexia, náuseas y vómitos, acompañados, a

veces, de aumento de transaminasas y enzimas pancreáticos.d. Síntomas neurológicos que van desde la confusión hasta el coma profundo, convulsiones,

cefalea, vértigo, infarto de ganglios basales, etc.e. Alteraciones hemodinámicas como bradiarritmias, hipotensión, y depresión miocárdica.f. La acidosis metabólica es un hallazgo constante en todos los casos graves, y se debe

principalmente al ácido fórmico. También está aumentado el anión gap.

Diagnóstico.

El diagnóstico puede hacerse por la historia clínica a través del paciente o de los acompañantes. Sin una historia clínica de ingestión de metanol, el diagnóstico diferencial es amplio, e incluye cetoacidosis diabética, pancreatitis, nefrolitiasis, meningitis, hemorragia subaracnoidea, etc.

En estos pacientes, está indicado realizar al ingreso analítica de sangre y orina de rutina. Además, es importante obtener una gasometría arterial para determinar acidosis metabólica. El diagnóstico de certeza nos lo dará el nivel de metanol en sangre.

Tratamiento.

El tratamiento inicial de la intoxicación aguda por metanol es de soporte. Es prioritario asegurar la vía aérea y mantener una ventilación y circulación adecuadas. La recuperación del paciente parece estar directamente relacionada con el intervalo de tiempo transcurrido entre la ingestión del tóxico y el

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inicio del tratamiento. También depende del grado de acidosis, que a su vez, es también en parte, función del tiempo.

Para prevenir la absorción se hará lavado gástrico, a ser posible en las dos primeras horas o en las 4 primeras horas si la ingesta se acompañó de alimentos. El carbón activado y los catárticos son ineficaces. Puede realizarse infusión de etanol para bloquear la metabolización hepática del metanol por inhibición competitiva del alcohol deshidrogenasa, y forzar la eliminación del tóxico por rutas extra hepáticas. Para conseguir los niveles plasmáticos óptimos de etanol (entre 1 y 2 g/l), se administra un bolo vía intravenosa de 1.1 ml/Kg disuelto en 100 ml de suero glucosado al 5% a pasar en 15 minutos; a continuación 0.1 ml/Kg/h disueltos cada vez en 100ml de suero glucosado al 5%; si se trata de un alcohólico crónico, la dosis de mantenimiento es de 0.2 ml/Kg/h. La perfusión de etanol debe hacerse por vía central para evitar tromboflebitis. Deben controlarse periódicamente los niveles de etanol, y ajustar la dosis de perfusión.

Es necesario el aporte de volumen para la deshidratación y la inhibición de la hormona antidiurética, que se realiza con suero salino. Se administrara bicarbonato para corregir la acidosis. Se debe administrar ácido fólico que se aumenta la oxidación de ácido fórmico a dióxido de carbono y agua.

La diuresis forzada no es eficaz, pero con la hemodiálisis se consigue depurar tanto el metanol como el ácido fórmico y el formaldehido. Los criterios para indicar la diálisis serian cualquiera de los siguientes: metanol >0.5g/l, acidosis metabólica con pH <7.20, trastornos visuales o disminución de nivel de conciencia. Si se indica diálisis deben mantenerse durante varias horas, y no interrumpirse hasta que el metanol sea <0.2g/l. Para controlar las convulsiones se utiliza diazepan y fenitoína.

Reacciones de reconocimiento

Reconocimiento en medios biológicos

Las reacciones particulares para reconocer al metanol como tal, prácticamente no existe por lo ques es necesario en el respectivo aldehído, con tal propósito. Este se consigue mediante un sencillo método que consiste calentar al rojo una lámina de cobre (exenta de grasa y otras impurezas) e introducirla en el destilado, repitiéndose la operación hasta cuando la lámina comienza a desprender pequeñas partículas color gris en el destilado, lo cual nos indica que hemos conseguido el propósito de transformar el metanol en metanal.

En consecuencia, las reacciones que se practican son las mismas que se realizan para el reconocimiento de formaldehído, así:

1. Reacción de Schiff.- Se produce color violeta2. Reacción de Rimini.- Origina color azul intenso.3. Con la fenil hidracina.- Da color rojo grosella.4. Reacción de Marquis.- Se obtiene un color violeta.5. Con el ácido cromotrópico.- Da color rojo.6. Reacción de Hehner.- Se produce color violeta o color rojo violeta.

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