Practica de Laboratorio N 1

Practica de Laboratorio N 1OBJETIVOS: Determinar parmetros cinticos de una cepa de Aspergillus kawachi, creciendo en medio lquido. Establecer los perfiles de actividad amiloltica producida durante el cultivo. Relacionar los perfiles de actividad enzimtica que produce la cepa con la curva de crecimiento.

Datos de la prctica obtenidos a diferentes tiempos

M. de CultivoM.O.Hr. de cultivoTarapapel + platoP seco totalP seco muestraP seco (g/l)

Almidn (liq)A. kawachi01,1511,1530,0020,025

Almidn (liq)A. kawachi51,1491,1530,0040,050

Almidn (liq)A. kawachi201,1491,2060,0570,712

Almidn (liq)A. kawachi271,1471,2560,1091,363

Almidn (liq)A. kawachi441,1511,2960,1451,813

Almidn (liq)A. kawachi461,1421,2950,1531,913

Almidn (liq)A. kawachi521,1431,3030,162,000

CURVA DE CRECIMIENTOCon los datos de la tabla anterior podemos graficar la curva de crecimiento

Horas de cultivoP seco (g/l)ln X

00,025-3,68887945

50,050-2,99573227

200,712-0,33897537

271,3630,30932125

441,8130,59470711

461,9130,64841129

522,0000,69314718

Graficando solo la parte exponencial de la curva podemos obtener la velocidad especifica de crecimiento (), siendo este valor igual al de la pendiente en la ecuacin de regresin lineal. Adems podemos calcular el tiempo de generacin como: tg=Ln2/

Horas de cultivoln X

0-3,68887945

5-2,99573227

20-0,33897537

270,30932125

pte ()0,15461/hr

tg4,483hr

AZUCARES TOTALESCon los datos de las muestras patrn se construye la curva de calibracin para evaluar el contenido de azucares totales.

Curva de calibracin

Concentracin (ppm) Absorbancia

00,497

250,667

750,955

1001,045

1501,154

2001,369

Muestras

A partir de los datos obtenidos podemos calcular la variacin de las concentraciones de azcar total en el tiempo, con la ecuacin de regresin lineal.Debe hacerse un pasaje de unidad en las concentraciones, de ppm a g/l.

Horas de cultivoAbsorbanciaAz. Total (ppm)Az. Total (g/l)

01,9213229,053,23

52,7785269,525,27

203,8017705,247,71

271,6042474,292,47

440,937886,190,89

460,92845,710,85

La curva obtenida no es correcta, no debera haber aumentado (de 3,23g/l a 7,71g/l). Lo que pudo haber pasado es que en el medio el almidn no se lleg a disolver bien, por lo que debe de haberlo hecho con el tiempo, y por eso es el pico.

AZUCARES REDUCTORES (principalmente glucosa)Se realizan los mismos clculos que en el caso anterior.

Curva de calibracin

Concentracin (ppm) Absorbancia

0-0,008

100-0,001

2000,011

4000,042

5000,057

6000,064

7000,08

8000,095

9000,107

10000,123

MuestraDebe hacerse un pasaje de unidad en las concentraciones, de ppm a g/l.

Horas de cultivoAbsorbanciaAz. Reductor (ppm)Az. Reductor (g/l)

0-0,0034650,465

5-0,0072650,265

200,02418151,815

270,01513651,365

440,00910651,065

460,0069150,915

En el punto 1 y 2 hay un error de medicin, porque no es correcto que haya una disminucin, luego aumente y despus caiga de nuevo la concentracin. Lo que en realidad ocurre es que aumenta glucosa porque la enzima degrada el almidn, quedando solo glucosa, luego las clulas empiezan a consumir glucosa y por eso disminuye.

ACTIVIDAD ENZIMATICA: -amilasaIgual que anterior.

Curva de calibracin

Concentracin (ppm) Absorbancia

00,102

1000,13

2000,159

3000,213

4000,256

5000,263

6000,294

7000,339

8000,395

9000,423

Muestras

1 UE = 1 mmol Glu/minuto

Horas de cultivoAbsConc. (ppm)UE

00,154143,253,18

50,164168,253,74

200,7291580,7535,13

270,323565,7512,57

440,17183,254,07

460,181210,754,68

A la UE se lo divide en los 20 minutos que es el tiempo en que queda reaccionando, a una temperatura de 40C, para que se produzca la enzima.

RENDIMIENTOS OBTENIDOS:

Se tomaron como valores finales aquellos que correspondan a los 27 min, ya que es donde estn los valores de mximo.

Xf-Xi= 1,363g/l 0,025g/l = 1,338g/l

-(Sf-Si)= -(2,47g/l 3,23g/l) = 0,75g/l

Pf-Pi= 0,566g/l 0,14g/l = 0,42g/l

Entonces:

Yx/s = X/S= 1,77

Yp/s = P/S = 0,56

CONCLUSIONRealizando la prctica de un cultivo sumergido en un bioreactor discontinuo, pudimos obtener los parmetros cinticos, as como tambin los perfiles de crecimiento, consumo de sustrato y formacin de producto, efectuando todos los clculos pertinentes.Adems pudimos comprobar, comparando las graficas de crecimiento con la de actividad enzimtica, que la enzima -amilasa es un metabolito primario, ya que est asociado el crecimiento de la clula.

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