nuevos desarrollos agilent en técéc cas spect oscóp casnicas … · 2015-07-28 · es unes un...
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Agilent TechnologiesAgilent TechnologiesThe measure of confidence
Nuevos Desarrollos Agilent en Técnicas Espectroscópicas éc cas spect oscóp cas
para la Industria Farmacéutica
Madrid, 25 de Octubre de 2011
Cristalografía RX
RMN/RMI
Microscopía FTIR
FluorescenciaCromatografía Preparativa
Caracterización estructural
C
Preparativa
ifica
ción
ació
n /Q
C
FTIRCromatografía FLASH
Pur
i
Iden
tific
a
GPC
Análisis elemental UV-Vis
ICP-MS ICP-OES
GPC
Huelva, 16 de Julio de 2010Page 2
Las técnicas de ICP-MS e ICP-OES son el nuevo Standard en el Análisis de Metales en MaterialesF é tiFarmacéuticos.
Page 3USP WebinarDec. 08, 2010
Análisis de metales traza en el sector farmaceutico
Las trazas de impurezas inorgánicas pueden disminuir la estabilidad y acortar la vida de los fármacos, además de suponer un riesgotoxicológico por si mismastoxicológico por si mismas.
El origen de las impurezas inorgánicas puede venir de:
– Catalizadores– Materias primas (plantas, proteínas animales, rDNA, etc.)– Excipientes (estabilizadores fillers binders agentes liberadores colores– Excipientes (estabilizadores, fillers, binders, agentes liberadores, colores,
recubrimientos, etc) – Equipos de producción como reactores, conductos, filtros, etc.
La U.S. Food and Drug Administration (FDA) y la British Pharmacopeia (BP) advierten fuertemente que estos problemas de contaminación(BP) advierten fuertemente que estos problemas de contaminacióndeben ser completamente investigados de forma periodica.
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El método tradicional de análisis de metales es la USP<231>USP<231>La USP<231> es un test límite para metales pesados en las muestras
Es un ensayo cualitativo (o como máximo semicuantitativo) que indica elEs un ensayo cualitativo (o como máximo semicuantitativo) que indica el contenido de impurezas metálicas a través de precipitados de sulfuroscoloreados
• Los elementos para los que el método puede emplearse son; Ag, As, Bi, Cd, Cu Hg, Mo Pb, Sb y Sn.
- Método con más de cien años (circa 1905)- Método colorimétrico
- Ignición y calcinado de la muestra a 600°C (800°C EP)(800°C, EP)
- Ajuste de pH- Adición de H2S, tioacetamida- Se compara con un patrón de 0.001% (10 p p (
ppm) de Pb- Comparación visual (subjetiva) del color de
los sulfuros metálicos
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USP<231> El paso de calcinación lleva a bajasrecuperacionesLa tabla muestra la pobre recuperación de algunos elementos debido a la alta temperatura de calcinación (600ºC) En algunos casos la pérdida es
recuperaciones
alta temperatura de calcinación (600 C). En algunos casos la pérdida escasi total Ej Hg y Sb. Esto puede mejorarse con digestiones ácidas.
Pharmacopeial Forum Stimuli Vol 34(6) [Nov Dec 2008]Pharmacopeial Forum Stimuli Vol. 34(6) [Nov.–Dec. 2008]
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Cambios propuestos para la USP<231>
USP<231>USP<231> Al mismo tiempo la USP está desarrollandoUSP<231>USP<231> USP está desarrollandoun nuevo test parasuplementos dieteticos
USP<232> USP<233>USP<232> USP<233> USP<2232>USP<2232>USP<232> USP<233>USP<232> USP<233>Límite de impurezas Prodecimiento de análisis
elementales elemental
USP<2232>USP<2232>Contaminación elemental en suplementos dietéticos
ICP MSICP-MSICP-OESOtras técnicas tras validación
October 25, 2011Page 7
Límite de impurezas USP 232Además requieren especiación cuando losAdemás requieren especiación cuando los valores límite de As y Hg se sobrepasan
La USP<233> indica el procedimiento de preparación del ensayo.
La norma especifica que el ensayo ha de hacerse por ICP-OES o ICP-MShacerse por ICP OES o ICP MS
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USP 233 Disolución de la muestra
•Disolución acuosa directa- Simple solubilización en matriz acuosa
• Disolución directa en medio orgánico.- Simple solubilización en matriz orgánica
•Digestión en viales cerrados- Se recomienda la adición de 0.5% HCl para
estabilizarel Hg
- Deshidratar y predigerir 0.5 g de muestra en 5 mL de ácido fuerte- Dejar reposar soltando un poco la tapa- Añadir 10 mL ode ácido fuerte y digerir en MW.
• Directo (desolvatado)- Empleado en métodos alternativos a ICP-OES / ICP-MS
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Procedimiento Analítico: ICP-MS y ICP-OES• La calibración debería estar equiparada en ácidos• La calibración debería estar equiparada en ácidos
- Blanco, 0.5J, y 2J• Lavar con ácido diluído• Comprobar la deriva instrumental con el patrón 2J antes y p p ydespues de los análisis.
Recuperación ±20%
• Sin indicación de ISTD• Añadir estabilizador para Hg a las disoluciones diluídas•Consultar al fabricante para el uso adecuado del equipo
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Agilent 7700x ICP‐MS con Octopole Reaction System (ORS3) L t ió i Off i 3º generación
Entrada de gas de dilución del
Lentes iónicas Off‐axis Entrada del gas de celda
Detector simultáneo dual rápido (109
3 generación Octopole Reaction System (ORS3)
de dilución del kit HMI
Sistema de
p (intervalo dinámico lineal)
Sistema de introducción de muestra de bajo flujo
Cuadrupolo hiperbólico de lt f i
Cámara de nebulización refrigerada por
l
alta frecuencia (3MHz)
Peltier
Sistema de vacío de alto
Generador de RF de 27MHz de frecuencia variable
rendimiento
Interfase de extracción (alta transmisión, tolerancia a matriz)
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Introducción de muestra – HMI estándar en el 7700x
Introducción de muestra es:• Bajo flujo (tipicamente• Bajo flujo (tipicamente 0.15mL/min)
• Temperatura estabilizada (cámara del aerosol enfriada por Peltier)
Ahora kit HMI (High Matrix Introduction) como estándar en l d l d lel modelo 7700, permitiendo la configuración automática del plasma y mucha mayor p y ytolerancia a la matriz
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Interferencias poliatómicas en matrices complejasIsotope Principal Interfering Species (mixed matrix)p p g p ( )45Sc 13C16O2, 12C16O2H, 44CaH,
32S12CH, 32S13C, 33S12C
47Ti 31P16O, 46CaH, 35Cl12C, 32S14NH, 33S14N49Ti 31P18O, 48CaH, 35Cl14N, 37Cl12C, 32S16OH, 33S16O50Ti 34S16O, 32S18O, 35Cl14NH, 37Cl12CH51V 35Cl16O, 37Cl14N, 34S16OH
“Plasma‐based” – derivados de combinaciones de elementos presentes en el plasma y en el agua/nítrico de las 52Cr 36Ar16O, 40Ar12C, 35Cl16OH, 37Cl14NH, 34S18O
53Cr 36Ar16OH, 40Ar13C, 37Cl16O, 35Cl18O, 40Ar12CH54Fe 40Ar14N, 40Ca14N, 23Na31P55Mn 37Cl18O, 23Na32S, 23Na31PH56Fe 40Ar16O, 40Ca16O57F 40A 16OH 40C 16OH
el plasma y en el agua/nítrico de lasmuestras.
e.g. – ArO+, ArH+, Ar2+, CO2+
57Fe 40Ar16OH, 40Ca16OH58Ni 40Ar18O, 40Ca18O, 23Na35Cl59Co 40Ar18OH, 43Ca16O, 23Na35ClH60Ni 44Ca16O, 23Na37Cl61Ni 44Ca16OH, 38Ar23Na, 23Na37ClH63Cu 40Ar23Na 12C16O35Cl 12C14N37Cl 31P32S 31P16O2
“Matrix‐based” – provienen de la matriz de la muestra – en combinación con elementos
Cu Ar Na, C O Cl, C N Cl, P S, P O264Zn 32S16O2, 32S2, 36Ar12C16O, 38Ar12C14N, 48Ca16O65Cu 32S16O2H, 32S2H, 14N16O35Cl, 48Ca16OH66Zn 34S16O2, 32S34S, 33S2, 48Ca18O67Zn 32S34SH, 33S2H, 48Ca18OH, 14N16O37Cl, 16O2
35Cl68Zn 32S18O 34S
presentes en el plasma y en el agua.
e.g. – Derivados de S (S2+, SO2+),
68Zn 32S18O2, 34S269Ga 32S18O2H, 34S2H, 16O2
37Cl70Zn 34S18O2, 35Cl271Ga 34S18O2H, 35Cl2H, 40Ar31P72Ge 40Ar32S, 35Cl37Cl, 40Ar16O273 40 32 40 33 35 37 40 16
poliatómicos con Cl (ClO+, ArCl+), con P (PO2
+, ArP+), derivados de C (ArC+, C2+)
73Ge 40Ar32SH, 40Ar33S, 35Cl37ClH, 40Ar16O2H74Ge 40Ar34S, 37Cl275As 40Ar34SH, 40Ar 35Cl, 40Ca 35Cl, 37Cl2H77Se 40Ar 37Cl, 40Ca 37Cl78Se 40Ar 38Ar80 40 40 40 40 32 16 32 16
Pueden ser variables en intensidad (en función de la matriz de la muestra), impredecibles si la matriz de la muestra es desconocida. 80Se 40Ar2, 40Ca2, 40Ar40Ca, 32S2
16O, 32S16O3matriz de la muestra es desconocida.
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Principios del modo colisión con He y KED
ionespoliatómicos
Distribución de energías de analito
VoltajediscriminaciónElimina iones con baja energía(poliatómicos)
ionespoliatómicos
ionesanalito
e ion poliatómicointerferente con la misma masa
(poliatómicos)
ionesanalito
Energía Energy
La pérdida de energía en cada colisión con un átomo
A la entrada de la celda , analito y poliatómico tienenla misma energía.
A la salida de la celda, energías de los iones son distintas. Los poliatómicoscada colisión con un átomo
de He es la misma paraanalito y poliatómico, peropoliatómicos tienen mayor tamaño y sufren máscolisiones
La dispersión de energíasde ambos grupos de ioneses estrecha, debido al sistema ShieldTorch
distintas. Los poliatómicosson eliminados usando un voltaje de discriminación“escalón”.
CellEntrance
CellExit
colisiones.Iones analito tienensuficiente energía residual para superar el “escalón” de potencial; poliatómicos no (discriminación de enegías)(discriminación de enegías)*KED = Kinetic Energy Discrimination
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Blanco de ácidos e IPA en modo No Gas
C l d l t i di t i i i d i t f t
2E5cps
Color del espectro indica que matriz origina cada interferente
Matriz mezcla de ácidos (5% HNO 5% HCl 1% IPA 1% H SO )cps Matriz mezcla de ácidos (5% HNO3, 5% HCl, 1% IPA, 1% H2SO4)
Todos los picos en modo NoGas son debidos a interferencias poliatómicas
Múltiples poliatómicos afectan a casi todas las masas–Interferencias son matriz-dependientes
45 50 55 60 65 70 75 80MassM d N GModo No Gas
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Blanco de ácidos e IPA en modo He (Colisión)C l d l t i di t i i i d i t f t
2E5cps Matriz mezcla de ácidos (5% HNO3 5% HCl 1% IPA 1% H2SO4)
Color del espectro indica que matriz origina cada interferente
cps Matriz mezcla de ácidos (5% HNO3, 5% HCl, 1% IPA, 1% H2SO4)
TODAS las interferencias poliatómicas son eliminadas en modoHe (mismascondiciones de celda)
Y la sensibilidad?
Todas las interferencias poliatómicas son eliminadas en modo He
Y la sensibilidad?
45 50 55 60 65 70 75 80MassM d HModo He
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Mezcla de ácidos adicionada (10ppb) en modo He
B ibilid d “ tt ” i tó i f t t d l l t
2E5cps Adición de 10 ppbs en 5% HNO3 5% HCl 1% IPA 1% H2SO4
Buena sensibilidad y “pattern” isotópico perfecto para todos los elementos
cps Adición de 10 ppbs en 5% HNO3, 5% HCl, 1% IPA, 1% H2SO4
Alta sensibilidad para todos los isótopos de todos los elementos en modo He
45 50 55 60 65 70 75 80MassM d HModo He
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Cápsulas de gelatina
In‐sample spike levels Units Component Gel Capssa p e sp e e e slevels 0.5J J 1.5J
PPM As, Hg 0.75 1.5 2.25
Cd 0.25 0.5 0.75
Units Limit Gel Caps
75 As [He] µg/g 1.5 0.91111 Cd [NG] µg/g 0.5 0.011208 Pb [NG] µg/g 1 0.088
Pb 0.5 1 1.5
Cr‐V 5 10 15
Os‐Ir 1.25 2.5 3.75
[ ] µg/g
201 Hg [NG] µg/g 1.5 0.03952 Cr [He] µg/g 25 0.1363 Cu [He] µg/g 250 0.4355 Mn [He] µg/g 250 0 08
250X Dilutionlevels 0.5J J 1.5J
55 Mn [He] µg/g 250 0.0895 Mo [NG] µg/g 25 0.0360 Ni [He] µg/g 25 0.16105 Pd [NG] µg/g 10 0.012195 Pt [H ] / 10 0 000061
As, Hg 3 6 9
PPB Cd 1 2 3
Pb 2 4 6
195 Pt [He] µg/g 10 0.00006151 V [He] µg/g 25 0.095189 Os [NG] µg/g 10 0.064103 Rh [He] µg/g 0.000067
Cr‐V 20 40 60
Os‐Ir 5 10 1599 Ru [NG] µg/g 0193 Ir [NG] µg/g 0.017
J-Component Limit
Page 19USP WebinarDec. 08, 2010
7700x ICP-MS Calibrations for the “Big Four”
75As 111Cd
201Hg 208Pb
Page 20
Recuperación de las adiciones en Cápsulas de Gelatina a nivel 1.0 J
80
100
120
GelCap 1 0J
20
40
60% RecoveryGelCap 1.0J
GelCap 1.0J
GelCap 1.0J
GelCap 1.0J
G lC 1 0J0
Analyte
GelCap 1.0J
GelCap 1.0J
Analyte
100
120
20
40
60
80
% RecoveryGelCap 1.0J
GelCap 1.0J
GelCap 1.0J
GelCap 1 0J
0
20 GelCap 1.0J
GelCap 1.0J
GelCap 1.0J
Analyte
USP Webinar
Amoxicilina (API)Average (n=3)
µg/gµg/day
Limitµg/day
Pass/Fail
Arsenic 0.075 0.075 15 Pass
Mercury 0.009 0.009 15 Pass
Lead 0.031 0.031 10 Pass
Cadmium 0.002 0.002 5 Pass
Avg (n=3) µg/g µg/day Limit (µg/day) Pass/FailAvg (n=3) µg/g µg/day Limit (µg/day) Pass/Fail
Chromium 0.194 0.194 250 Pass
Copper 0.032 0.032 2500 Pass
Manganese 0.014 0.014 2500 Pass
Molybdenum 0.013 0.013 250 Pass
Nickel 0.059 0.059 250 Pass
Palladium 0.002 0.002 100 Pass
Platinum 0 009 0 009 100 PassPlatinum 0.009 0.009 100 Pass
Vanadium 0.019 0.019 250 Pass
Rhodium 0.019 0.019
Total NMT 100
Pass
Ruthenium 0.001 0.001 PassTotal NMT 100
Iridium 0.005 0.005 Pass
Osmium 0.007 0.007 Pass
Serving size/day-1gCourtesy of Samina Hussain Exova CACourtesy of Samina Hussain, Exova CA
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Arsenic Mercury Lead Cadmium Chromium Copper Manganese Molybdenum
Recuperaciones en Amoxicilina dopadaArsenic Mercury Lead Cadmium
Specification (J)(µg/g)
1.5 1.5 1 0.5
Avg. %Rec0 5J (n=3)
81RSD = 0 86
102RSD = 2 8
105RSD = 0 57
98RSD = 0 82
Chromium Copper Manganese Molybdenum
25“J” = 10
250“J” = 10
250“J” = 10
25“J” = 10
97RSD = 0 52
100RSD = 0 20
103RSD = 0 29
96RSD = 0 210.5J (n=3) RSD = 0.86 RSD = 2.8 RSD = 0.57 RSD = 0.82
Avg. %Rec1J (n=6)
86RSD = 2.4
102RSD = 0.83
105RSD = 0.27
99RSD = 1.7
Avg. %Rec 1 5J (n=3)
87RSD = 0 82
103RSD = 0 90
106RSD = 0 33
101RSD = 0 27
RSD = 0.52 RSD = 0.20 RSD = 0.29 RSD = 0.21
98RSD = 0.31
102RSD = 0.40
103RSD = 0.31
96RSD = 0.30
100RSD = 0 58
111RSD = 0 64
104RSD = 0 68
96RSD = 0 901.5J (n=3) RSD = 0.82 RSD = 0.90 RSD = 0.33 RSD = 0.27 RSD = 0.58 RSD = 0.64 RSD = 0.68 RSD = 0.90
Nickel Palladium Platinum Vanadium
Specification (J)(µg/g)
25“J” = 10
10 1025
“J” = 10
Rhodium Ruthenium Iridium Osmium
“J” = 2.5 “J” = 2.5 “J” = 2.5 “J” = 2.5
Avg. %Rec 0.5J (n=3)
99RSD = 0.40
99RSD = 0.20
100RSD = 1.4
93RSD = 0.43
Avg. %Rec 1J (n=6)
100RSD = 0.42
99RSD = 0.15
101RSD = 0.30
95RSD = 0.56
96RSD = 0.63
98RSD = 0.41
98RSD = 0.31
94RSD = 0.64
96RSD = 0.62
98RSD = 0.49
105RSD = 0.20
94RSD = 0.46
Avg. %Rec 1.5J (n=3)
102RSD = 0.51
105RSD = 0.19
102RSD = 0.32
95RSD = 0.54
102RSD = 0.22
98RSD = 0.38
106RSD = 0.47
95RSD = 0.30
Courtesy of Samina Hussain Exova CACourtesy of Samina Hussain, Exova CA
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Análisis de especiación de Organo-Metálicos
Además de su empleo “directo” en el análisis de metales el ICP-MS puede ser utilizado como detector específico de una amplia gama de p p p gtécnicas de separación cromatográfica
• Electroforesis Capilar (CE)• Field-flow Fractionation (FFF)• Cromatografía iónica (IC)• Cromatografía Líquida (HPLC)• Cromatografía Líquida (HPLC)• Cromatografía de gases (GC)
Especiación de impurezas de elementos metálicos.Estudio de metaloproteínas.Análisis de las vías metabólicas, transporte, interaciones y degradaciónde fármacos organometálicos.
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Análisis de impurezas por LC-ICP-MS en JM216
El LC-ICP-MS proporciona la sensibilidad y especificidad necesariospara analizar trazas de compuestos de Pt con el mayor rendimiento
JM216 La combinación de HPLC con ICP-MS
para analizar trazas de compuestos de Pt con el mayor rendimiento
JM216
permite la cuantificación de impurezas de Pt en el antitumoral JM216antitumoral JM216 hasta niveles de ng.
Junto con los picos de las
JM216impurezas se detectó el cis-amino-dicloro(ciclohexilamina) platino(II) a~165 ug/L (72 mg/g
Chromatogram for 2.29 mg/L of the main compound JM216 [Bis (acetato) amine-dichloro (cyclohexylamine) platinum (IV)], Agilent application P/N 5968-8185E
en el sólido).
Page 25
Peter Galettis, University of Auckland, New ZealandOctober 25, 2011Agilent Restricted
Agilent ICP-OESThe world's most productive high performance simultaneous ICP-OESThe world s most productive high performance simultaneous ICP-OES
• El análisis simultaneo de hasta 73 elementosquímicos en cualquiera de sus líneas dequímicos en cualquiera de sus líneas de emisión
• Con una linealidad que va desde niveles de ppb o sub-ppb hasta %.
• Con tolerancia a todo tipo de matrices acuosas orgánicas acidos y sólidosacuosas, orgánicas, acidos y sólidos disueltos.
• Con tiempos de análisis desde los 35 segundos a los 3 minutos por muestra paraun análisis elemental completo
• Con todos los sistemas necesarios para• Con todos los sistemas necesarios paraevitar las interferencias y asegurar la exactitud de los resultados
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AgilentAgilent 720720 ESES SIMSIMRobustez en las determinaciones
Red de Difracción
AgilentAgilent 720720--ES ES SIMSIM
Todos los componentes ó i fij h Antorcha
Prisma CaF2
ópticos son fijos, no hay componentes móviles.Elevada resolución (7pm)
Chip CCDEl sistema óptico está termostatizado a 35ºC +-0.1ºC para evitar derivas por0.1 C para evitar derivas por dilatación.
Detector sin sustancias
Policromador
orgánicas. Solo Silicio. Mantiene la sensibilidad de su respuesta durante toda la vida del equipo “Echelle”vida del equipo.Integración adaptativa Corrección simultanea del fondo
Gran Intervalo Dinamico Lineal en Axial
Interfase CCI Patentada
Interfaz de cono refrigerado
Apertura de la cola del plasma
FACT - Multicomponent Spectral FittingL lib í d i t f i d l ét d i f d l i ió• La librería de interferencias del método informa de la posición e intensidad de las posibles interferencias espectrales.
• El modelado FACT modelling puede desarrollarse antes o despues de los análisis. Mejora matemátocmente la resolución del equipo más allá de sus límites ópticos.
• El Ru 245.657 nm es típicamente la mejor línea para esta aplicación.Intensität
3000 Measured spectrumCalculated Cr
p j p p
2000
2500 Calculated Ru
1500 Cr 267.879Ru 267.876
700
1000
267.833 267.921267.860 267.880 267.900Wellenlänge (nm)
S: 1128 B: -1 SUV: -1268.773
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FACT - Multicomponent Spectral FittingEuropean Pharmacopeia 6 0European Pharmacopeia 6.02.2.57. Inductively coupled plasma-atomic emission spectrometryDescribe las ventajas del spectral fittingDescribe las ventajas del spectral fitting
Page 30USP WebinarDec. 08, 2010
Valores límite de impurezas
Element Component Adjusted for 50x Prep DilutionLimit (µg/g) Limit (µg/g)
J .5J J 1.5JAs 1.5 0.015 0.03 0.045
Cd 0.5 0.005 0.01 0.015
Pb 1 0.01 0.02 0.03
Hg 1.5 0.015 0.03 0.045
Cr 25 0.25 0.5 0.75Cr 25 0.25 0.5 0.75
Cu 250 2.5 5 7.5
Mn 250 2.5 5 7.5
Mo 25 0 25 0 5 0 75Mo 25 0.25 0.5 0.75
Ni 25 0.25 0.5 0.75
Pd 10 0.1 0.2 0.3
Pt 10 0.1 0.2 0.3
V 25 0.25 0.5 0.75
Os,Rh,Ru,Ir NTE 10 total 0.025 0.05 0.075
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Datos de recuperaciones
Page 32USP WebinarDec. 08, 2010
Repetitividad de las medidas de Amoxicilina
Element % RSDAs 3.73Cd 0.77Cr 0.69Cr 0.69Cu 0.48Hg 1.07Ir 0.43
Mn 0.44M 0 47Mo 0.47Ni 0.43Os 0.96Pb 2.15Pd 0.50Pt 0.40Rh 0.58Ru 0.34V 0.43
Page 33USP WebinarDec. 08, 2010
Sistemas Agilent-DUO
DOS Plataformas que combinan SIMULTANEAMENTE:ÓATOMIZACIÓN POR LLAMA
CORRECTOR DE FONDO POR DEUTERIOATOMIZACIÓN POR CÁMARA DE GRAFITOCORRECTOR DE FONDO POR EFECTO ZEEMAN
34
ICP-MS/OES/AA todas cumplen con la normativa21 CFR Part 11La solución Agilent es completa y asegura:• La seguridad de los datos• La seguridad de los datos
– Almacenamiento central seguro de los datos– Acceso de usuarios limitado a solo auttorizados
Soporte completo paratodos los requistos de
la 21 CFR Part 11
• Integridad de los datos– Almacenamiento automático y versionado
en un sistema cerrado
– Control completo de las versiones incluyendo los resultados de los informes originales
– Archivo integrado y almacenamiento a largo plazo en el sistema de g y g porganización integrado
• Trazabilidad de los datosAudit trail automatico independiente del usuario user independent– Audit trail automatico independiente del usuario user-independent
– Firma electrónica• Validacion (IQ/OQ) para todos los sistemas.a dac o ( Q/OQ) pa a todos os s ste as
Page 35USP WebinarDec. 08, 2010
Técnicas de identificación/QC
FTIRUV-Vis
Fluorescencia
Huelva, 16 de Julio de 2010Page 36
Algunas ventajas del Nuevo Cary 60
Figure 1. Ten superimposed wavelength scans of methylene blue (20 ppm) solution in water. As can be seen, the scans overlay perfectly confirming the accuracy of the Cary 60 UV-Vis and the absence of any photobleaching of the sample
Figure 2. Scanning kinetics using fiber optics in situ of methylene blue under the exposure of a high-intensity UV lamp (Oriell 500 W Hg(Xe) lamp) over a period of 20 minutes within the range 400 to 800 nm. Labels refect maximum absorbance wavelengths
Figure 3. Scans of 50 µl samples of DNA at 4 °C at two concentrations showing the characteristic absorbance peak at 260 nm. Note peak absorbance of 1.0 absorbance units for 50 µg/mL DNA versus peak absorbance of 0 5 b b it f 25 / L DNA d t ti dh t th B L b t L (A l)
Huelva, 16 de Julio de 2010Page 37
0.5 absorbance units for 25 µg/mL DNA, demonstrating adherence to the Beer–Lambert Law (A= εcl)
Accesorios para muestras líquidasFibras ópticas Intercambiadores
automáticos de cubetas
Test de disolución
Sippers
Tray cellSistemas de termostatizaciónpor peltier, y
it ió
Automuestreadores
agitación magnética
October 25, 2011Confidentiality Label
38
ANALISIS DE MUESTRAS EN DISOLUCIÓN: AGILENT 8453 DADAGILENT 8453 DAD
Características principales
Intervalo de trabajo: 190-1100 nmjTiempo de adquisición del espectro: 0.1 seg
SBW fijo de 1.0 nm
C l fCumple farmacopea.
Policromador: No partes móviles excepto el shutter.
Facil acceso al compartimento de pmuestras.
Intervalo fotométrico: 3.0 UA
Luz difusa:0 05% a 220 nm método ASTMLuz difusa:0.05% a 220 nm método ASTM
Ruido fotométrico: <0.0002 a 500nm y 0uA
Estabilidad fotométrica: < 0.001 a 500 nm
October 25, 2011Confidentiality Label
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! Pero en ocasiones esto no es suficiente!
A veces, en estudios cinéticos, los blancos no son estables a lo largo del tiempo.
En ocasiones las muestras son complejas y es conveniente restar la contribución de la matriz.
Cuando se requiere una mayor resolución en los espectros, o medir con absorbancias altas o muy bajas, o medir por derivadas.con absorbancias altas o muy bajas, o medir por derivadas.
O es necesario un control perfecto de la temperatura.
O las muestras son muy turbias, incluso sólidas y dispersan la luz.
Es necesario mayor productividad en control de calidad
ESPECTROSCOPÍA DE MUESTRAS LIQUIDAS O SOLIDAS: VARIAN CARY 100/300SOLIDAS: VARIAN CARY 100/300
Características principalesp pCary 100 Cary 300
Monocromador simple doble
Intervalo trab. 190-900 nm 190-900 nm
Veloc Barrido 3000nm/min 3000nm/min
Resolución límite < 0.24 nm < 0.24 nm
Luz difusa < 0.02% < 0.0005%
Interv fotometrico 3 8 uA 5 0 uAInterv fotometrico 3.8 uA 5.0 uA
Ruido fotométrico <0.0008 a 2 uA <0.0008 a 2 uA
- < 0.008 a 5uA
Estab. fotométrica <0.0003 uA <0.0003uA
October 25, 2011Confidentiality Label
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ESPECTROSCOPÍA DE MUESTRAS LIQUIDAS O SOLIDAS: VARIAN CARY 100/300
El SBW de el Cary 300es completamente variable
Rendijas variables
es completamente variableentre los 0.2 y 4 nm en pasos de 0.1nm
La misma muestra medida con SBW de 0.2, 2.0 y 4.0 nm.
Mínima luz difusa: Amplia linealidad fotométrica
Muestras de KMnO4 desde 10 mg/l a 450 mg/l
ESPECTROSCOPÍA DE MUESTRAS SOLIDAS O LIQUIDAS: VARIAN CARY 4000/5000/6000QU S C 000/5000/6000
Características principales
Cary 4000 Cary 5000 Cary 6000 Monocromador doble doble doble
Red de difracción 1200 l/mm a 250nm 1200 l/mm a 250nm 1200 l/mm a 250nm
300I/mm a 1192nm 600l/min a 1000 nm
D PMT PMT PbS f PMT A I G fDetectores PMT PMT y PbS smart ref PMT y AsInGa ref
Intervalo trab. 175-900 nm 175-3300 nm 175-1800 nm
Resolución < 0.048 nm < 0.048 nm <0.048nmResolución 0.048 nm 0.048 nm 0.048nm
Luz difusa UV < 0.00007% < 0.00007% <0.00007%
Luz difusa NIR <0.0002% a1420nm <0.00001 a 1420 nm
<0.00045 a 2365nm
Interv fotometrico >8 uA >8 uA >8uA
October 25, 2011Confidentiality Label
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L b t i d í t i í i bi í i á i i á i
CAMPOS DE APLICACION: AGILENT CARY 4000/5000/6000Laboratorios de síntesis química, bioquímica, orgánica, inorgánica, polímeros, catálisis, materiales.
Identificación de compuestos.Análisis de estructura.Química de coordinación.Isómeros.Catálisis heterogenea “in situ”
Laboratorios de síntesis de materiales cerámicos pinturas recubrimientosLaboratorios de síntesis de materiales cerámicos, pinturas, recubrimientosAnálisis de color. Coordenadas cromáticas
Laboratorios de óptica, telecomunicaciones, electrónica, nuevas energías, aeronáutica, materiales.
Reflectividad/absortividad de componentes ópticos, paneles solares, plásticos, semiconductores nanotubos de carbonosemiconductores, nanotubos de carbono.Recubrimientos y grosores.Cálculos de índices de refracción.
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Ventajas de Fluorescencia• Mayor Sensibilidad que UV/VIS (100-1000 veces)
• Mayor Selectividad.
• Solo el 10% de sustancias emiten fluorescencia• Espectros de Emisión y Excitación específicos.
•Dispersión Raleigh por los solutos de la muestra, que puede dar lugar a la aparición de picos fantasma, picos de segundo orden, etcp y p
• Separaciones de mezclas (Barridos sincrónicos).
• Información cualitativa del ambiente químico.
• PH.
etc
•Bandas de Raman del disolvente, que pueden confundirse con bandas de emisión del compuesto estudiado
• Polaridad local.• Viscosidad.• Temp
• Gran intervalo lineal
•Fotobleach. O destrucción del fluoroforo en el estado excitado
• Absorción: 3 órdenes• Emisión 6-7 órdenes
• Información multidimensional.
• 2 transiciones, doble información.
• Marcadores más seguros
• Sustituyen los marcadores radioactivos.y
• Técnica sencilla y económica
• Tanto los instrumentos como la operación es sencilla y económica.
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Aplicaciones de FRET o RT FRET
TR FRET
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Aplicaciones: Estudios de interacciones e hibridación de ácidos nucléicos o proteínas.
Caracteriación del proceso de hibridación por FRET de una proteínamarcada con un quencher (DABCYL) y una sonda de DNA marcada con
ácidos nucléicos o proteínas.
marcada con un quencher (DABCYL) y una sonda de DNA marcada con un compuesto fluorescente (5 y 6 carboxifluoresceína)
Cary Eclipse equipado con paquete biomelt (sistema multiceldas termostatizadocon peltier, controlador y sondas de temperatura. Software para el cálculo de temperaturas de melting (Tm) mediante el método de la derivada
I!NUEVO CARY 630!!: Flexibilidad en el MuestreoSolving problems through innovation…
Dialpath TumblIR630 Interfp 630 Interf
ATR diamanteReflectancia difusa Transmisión ATR diamanteReflectancia difusa Transmisión
INNOVADOR: Tecnología Revolutionaria para el Análisis de Muestras Líquidas con el “DialPath”Análisis de Muestras Líquidas con el DialPath
Paso óptico(μm) Interv. Conc. Tipico
30 100% - 0.1%50 50% - 500 ppm50 50% - 500 ppm100 20% - 100 ppm200 10 % - 50 ppm
AGILENT CARY 630 INNOVACION: Tecnología Superior en el Análisis de Sólidos con el ATR de Diamante de Agilent
Ser capaz de
el Análisis de Sólidos con el ATR de Diamante de Agilent
Mas de 2x veces el rendimiento de
energía que Menor ruido
conseguir espectrosde mejor calidad y más
rápidosO=
Lo quesignificag q
nuestroscompetidores
OAnalizar muestras queotros competidores no
pueden!
significa…
0 0030.003
0.002
0.001
0.000
Abso
rban
ce
Cary 630 Competidor A
3900 3800 3700 3600 3500 3400 3300 3200 3100 3000 2900 2800 2700 2600 2500
-0.001
-0.002
Wavenumber
A
Wavenumber
INTUITIVO: Visualización de los resultados, búsquedas y análisis cuantitativobúsquedas y análisis cuantitativo.
Los resultados de la búsqueda se muestran en la lista de Las concentraciones obtenidas se muestran en valorLos resultados de la búsqueda se muestran en la lista de espectros similares que se pueden superponer o mostrar
conjuntamente con el original
Las concentraciones obtenidas se muestran en valor numérico además de poder establecerse límites de
alarma para una interpretación más sencilla.
Línea de productos de FT-IR - Espectrómetros
Desarrollo de métodosInvestigación
Rutina con muestras
AGILENT 640-IRSistema “Mid-range”
complejas
AGILENT 660-IRSistema “Mid-range”
UP
Medidas en rutinaQA / QC
Investigación Desarrollo de métodosInvestigación fundamental y aplicada
A áli i d t l j
GRA
Análisis de muestras complejas
AGILENT 670-IRHi h E d
DABHigh End BLE Investigación básica
Análisis de muestras complejas
AGILENT 680-IR
Análisis de muestras complejas
High end Step-scan
Aplicaciones: Análisis de fármacos genéricosMid‐IR
0.05
0.04
Espectros superpuestos MIR de muestras de comprimidos de six cetirizineEn el estudio se empleó un comprimido de cada distribuidor
0.03
0.02
0.01
Absorba
nce
3200 2800 2400 2000 1600 1200 8003600
Wavenumber (cm‐1)
0.00
Near‐IR4386.60 55
Espectros superpuestos Near‐IR de seis comprimidos de six cetirizineEn el estudio se empleó un comprimido de cada distribuidor
6492.7 6269.1
5170.34775.3
0.55
0.45
0.35
0.25
bsorba
nce
0.15
0.05
Ab
11000 10000 9000 8000 7000 6000 5000 4000Wavenumber (cm‐1)Wavenumber (cm )
Aplicaciones: Análisis por PCA de los datos de Near-IR Near IRNear‐IR
6492 7 6269 1
5170.34775.3
4386.60.55
0.45
0.35ancia
6492.7 6269.10.35
0.25
0.15
0.05
Absorba
11000 10000 9000 8000 7000 6000 5000 4000Nº de onda (cm‐1)
CVS (D)
AB
C
Cada comprimido se corre portriplicado. Se analizaron 5 comprimidos distintos por
Rite Aid (E)
CVS (D) C
F
comprimidos distintos pordistribuidor de un total de 6 fabricantes.
A ‐ Tradaxine® (SBL Pharmaceutical)B ‐ Zyrtec® OTC (McNeal Consumer Health)C ‐ Zyrtec (Merck Medco—Pfizer)D ‐ Cetirizine (CVS—Dr. Reddy’s Lab)E ‐ Cetirizine (Rite Aid—Dr. Reddy’s Lab)
PCA d d d N IR
3 × 5 × 6 = 90 Espectros Near‐IR para el PCA clustering
( y )F ‐ Cetirizine (Walmart—Perrigo)
PCA de tres componentes de datos en Near‐IR
Línea de productos de FT-IR - MicroscopiosAGILENT 610 IR Mi AGILENT 620 IR MiAGILENT 610-IR Microscope
Detector individual & Dos detectores individuales
AGILENT 620-IR MicroscopeInfrared Imaging & detector
individual
A il t 610 IR A il t 620 IR55
Agilent 610-IRMid - High End
Desarrollo de métodosInvestigación Aplicada y fundamental
Agilent 620-IRHigh End
Desarrollo de métodosInvestigación aplicada y fundamentalg p y
Muestras complicadasg p y
Muestras difíciles de analizar
Inclusiones en guantes de látex
Alta concentración
1730/ 2920 cm-1 1165 cm-1
de estearatoen el defecto
Uniforme
1453 cm-1
distribución del poliisobutileno
Baja concentración de acrilinotriloy estireno en el defecto
3030 cm-1 1495 cm-12340 cm-1
PEO con 10% testosterona. 200,000 peso molecular, TCristalización = 50ºC
PEO 0 070 07 0 200 20 0 330 33 0 460 46 0 590 59 1 111 11 1 241 24
0.1 0.51468cm-1PEO
D O
0:070:07 0:200:20 0:330:33 0:460:46 0:590:59 1:111:11 1:241:24
no imageat t=00.0 0.9
2661cm-1
D2O
0.0 0.91662 cm-1TTN
1:371:37 1:501:50 2:022:02 2:282:28 2:412:41 2:542:54 3:063:062:152:15
En resumen
Agilent dispone a día de hoy de soluciones tanto para el análisis elemental, como para la caracterización general de muestras en los laboratorios farmacéuticos. Se trata de plataformas versátiles que permiten abordar una enorme cantidad de aplicaciones desde interfaces muy robustas y de alta productividad.
Con diseños basados en la innovación técnica, los bajos costes de mantenimiento y un manejo sencillo a la vez que
i d l j t i té iproporcionando las mejores prestaciones técnicas.
!! MUCHAS GRACIAS !!!! MUCHAS GRACIAS !!