María Beltrán Fabián01 - 4781111-2137

MICROSPORIDIOS

MICROSPORIDIOSIS

Los microsporidios, protoz.unicel. Primit eucariotes, responsb infec. emergentes. *El trofozoíto es plamodio multinucleado c/ movimiento. Son parásitos del hombre animales verteb, invert., peces hasta insectos.*Conocidos por Kudo desde 1919, 1200 spp y 143 géneros, de éllos 223 son de peces, 8 de anfibios, 4 reptiles, 1 de insectos y annélidos.

MicrosporidiosMicrosporidios

*Son protozoos intracelulares obligados, los microsporidios se encuentran entre los organismos eucariotas más pequeños. Generan esporas unicelulares de 1,0 a 4,5 μm

*En la década de 1980 se reconoció como agentes etiológicos de diarrea en VIH-Sida y posteriormente en trasplantados renales así como en personas inmunocompetentes (diarrea del viajero).

*Se consideran eucariotas primitivos debido a que adolecen de mitocondrias, peroxisomas, membrana de Golgi y otros orgánulos típicos de los microorganismos eucariotas*Las esporas presentan dos formas de vida en su ciclo biológico: la espora y el meronte, el que representa la fase vegetativa del parásito  *La espora es fase infectante, sus membranas particulares, la exospora proteínica y la endospora quitinosa y electrolúcida la hacen resistente a los factores ambientales.

Esporontes: los procesos de esporogonía se inician tan pronto como los merontes se rodean de una capa superficial amorfa.

MICROSPORIDIOS

Espora: Esporociste con 2 estructuras como valvas, el cuerpo citoplasmático contiene el esporoplasma con 1 vacuola y 2 núcleos y un tubo polar ex exospora en endospora

Fp base filamento polar c citoplasma cp cápsula polar fp filamento polar N núcléo Vp vacuola posterior P plasmodio

Pt = tubo polar, ex = exosporaEn = endospora, pv = vacuola post.

A = disco ancho del filam.polar

MICROSPORIDIOSEnterocytozoon bieneusi 0.8-1.4 µmEncephalitozoon intestinalis = Septata intestinalis, E.hellem, E.cuniculi Nosema corneum = Vitaforma corneum Infección ocularN.ocularum, N.connoriMicrosporidium: M.ceylonensis, M.africanumPleistophora, TrachipleistophoraBrachiola vesicularumMicrogemma (peces)

CARACTERISTICAS•Parásito intracelular obligado, son grandesoportunistas, responsables en pacientes c/ infección de diarrea crónica.•Eucariote primitivo, posee ARN ribosomal tipo bacteriano se multiplica por fisión binaria o división múltiple•Durante la fase proliferativa las células son amorfos, redondeados o alargados con un filamento polar, el número de vueltas varia por especie, E.bieneusi 5, E.cuniculi 5-7 y Pleistophora 9-12.

•Carecen de membranas la mitocondria y el aparato de golgi

•Producen pérdidas económicas para la industria y la pesquería

CICLO BIOLOGICOProtozoario unicelular, el ciclo consiste en una multiplicación proliferativa formando esporas en la célula del huésped. Las esporas tienen doble pared, la externa es de proteína y la interna es quitina

a. Fase infectiva, la espora-- estimulación-> inoculación de espora infectante a través del filamento polar (esporoplasma en la célula)b. Fase proliferación vegetativa, merogonia (esquizogonia) multiplicación intracelular del parásito.c. Fase esporogonia intracelular, esporas infectantes, la vía principal de contaminación fecal-oral, es posible por inhalación, así como las infecciones oculares.esporoplasma--trofozoíto--esquizogonia--merozoítos--gametogonia

CICLO Enterocytozoon bieneusi

Enterozytozoon bieneusi1.- Ingestión de esporas x contaminación2.- Son resistentes al pH gástrico3.- Invasión del enterocito inoculando ergastoplasma a partir del túbulo polar4.- Multiplicación asexual o esporogónica formación final de esporasA) Las esporas pueden infectar otros enterocitosB) Las esporas pueden liberarse en heces oC) Pueden ingresar por vías respiratorias

1. Espora infectante sobrevive en el ambiente2. Esporas proyectan el filamento polar, infectan al huésped3. Infección ocurre por inoculación esporoplasma x tubo4. Hay multiplicación– merogonia5. Continua la esporogonia, el desarrollo en forma directa al

contactoa. forma vacuola parasitofora b. Enterocyt y Enceph

OBTENCION DE LOS ESPOROZOITOSOBTENCION DE LOS ESPOROZOITOS:

SOLUCION

Tripsina 0.25% Tripsina 0.25% Tauricolato sodio 0.75% Tauricol.sodio 0.75%

Cisteína-HCl 0.20 mM

Los ooquistes son incubados a 37°C por 2 hs

Vac.parasitofora espora madura

Los

Microscopía Electrónica, las esporas maduras 9-12 nm, las endosporas 40-53 nm una membrana plástica y un poroplasto, el filamento de 6-8 vueltas.

PATOGENICIDAD

*Causan diarrea crónica, E.bieneusi y Encephalitozoon spp* Pérdida de peso, anorexia, semejante a Cryptosporidium, en promedio 3 evacuaciones líquidas por día x 4 semanas.*Afecta tubo digestivo, pulmones, conjuntivitis.*Enterocytozoon bieneusi ocurre en 15-35% de pacientes infectados con diarrea crónica, y en pacientes con VIH e inmunocompetentes

*E.hellen y E.cuniculi: sinusitis, nefritis, hepatitis, keratoconjuntivitis y peritonitis

*Causa infección diseminada, incluye el tracto gastrointestinal produciendo lesiones en todo el intestino delgado.

*En los pacientes de profunda depresión linfocitos CD4 < 50 mm3

*Localización extraintestinal, urinaria, sinusitis bronco-pulmonar sinusitis ocular

*Pueden infectar hígado, riñon, músculo y cerebro

a. Síntomas semejantes a Criptosporidiosis

b. Sindrorme febril 75.0%

c. Otros síntomas generales:

Anorexia 71.4%

Astenia 88.2%

Pérdida de peso 86.3%

d. En pacientes con VIH en diarrea severa, hay invasión del páncreas, conducto biliar, tracto respiratorio.

DIAGNOSTICO

*Coloración Gram-Cromotrope Gram y Giemsa*El núcleo tiene posición media. La vacuola posterior ocupa la región basal, las esporas están en contacto con el citoplasma del huésped.

*Biología molecular 2 pares de primers oligouncleótidos de la región de la subunidad eb RNA (VI, EB 45O y VI, SI 500) E. intestinalis.

Analisis de genoma. El clonamiento y caracterización de las diferencias entre el pequeño 3 gen conocidos de cepa E.cuniculi “cepa ratón” “cepa conejo” y “cepa perro”.

E.bieneusi

OBTENCION DE LOS ESPOROZOITOS:

SOLUCIONTripsina 0.25% Tripsina 0.25% Tauricolato de sodio 0.75% Tauricol.sodio 0.75%

Cisteína en HCl 0.20 mM

Los ooquistes son incubados a 37°C por 2 hs

NO OLVIDAR LAS MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

a

PRUEBAS INMUNOLOGICASPOR IFI BIOLOGIA MOLECULAR

*PCR, usando DNA extraído de las heces con 2 sistemas de E.bieneusi y E.cuniculi.Biologia molecular 2 pares de primers oligonucleótidos de la región de la subunidad eb RNA (VI y EB 45O) Y (VI SI 500) E. intestinalis

Analisis de genoma. El clonamiento y caracterización de las diferencias entre el pequeño gen de 3 de cepa conocidas E.cuniculi “cepa ratón” “cepa conejo” y “cepa perro”

COLORACION MICROSPORIDIOS GRAM:

Coloración gram: 1.0 gr Cristal violeta o violeta de genciana

100 mL de agua destiladaYodo 1 gr

2 gr Ioduro de potasio IK300 mL de agua

Procedimiento: Mezclar IK en agua, añadir el Yodo TRICHROME GOMORI:

6.0 gr Colorante chromotrope0.15 gr Verde brillante o azul de anilina 0.50.7 gr Acido fosfotungstico3.0 Acido acético glacial100 mL Agua destilada

Procedimiento: Disolver en ácido acético, dejar 30’ a t°C, añadir agua destilada 100 mL, tamponar

HCl1 mL pH 2.5.

COLORACION ZIEHL NEELSEN MOD. Para coccidios:

FUCSINA FENICADA4g Fucsina 8 gr Fenol20 mL Alcohol 95%1 mL Tween 80 o tergitol80 mL Agua destilada

Procedimiento: Disolver la fucsina con alcohol, adicionar el fenol

adicionar agua destilada

COLORANTE DE CONTRASTE1 gr Verde malaquita o azul de

metileno100 mL Agua destilada

Encephalitozoon

E.cuniculi A , E.hellen B

E. intestinalis C, Vitaforma sp D

Enterocytozoon bieneusi

Encephalitozoon hellem

PRESERVACION Y O FIJACION DE MATERIAL

1. AFA

Acetato de sodio 15 gAcido acético glacial 20 mLFormol 40 mLAgua 925 mL

2 Dicromato de potasio 2.5%

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