Microbiologa de alimentosPractica 4Mtodo de cuenta total de mohos y levadurasObjetivoConocer las tcnicas ms comunes para la cuenta de mohos y levaduras en alimentos, se observaran adems las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas de los mohos que comnmente contaminan a los alimentos.

Material y equipo Auto clave Balanza granataria Utensilios estriles (cuchillos, pinzas, esptulas.) Pipetas bacteriolgicas estriles de 10 y 1ml. Frasco de vidrio de boca angosta con tapn de rosca con 90 ml. Tubos de 10 x 150 mm con tapn de rosca con 9 ml de solucin diluyente contador de colonias. Licuadora Incubadora con termostato. Varilla doblada en L Cajas Petri

Medios de cultivo y reactivos Solucin diluyente (NaCL 0.9%). Extracto de malta Extracto de levadura rafinosa Peptona agar papa dextrosa (PDA) Etanol Azul de metileno Acido tartrico Dextrosa

Procedimiento

1. Cuenta de mohos y levadurasPreparan las soluciones decimales .Sembrar 0.1 ml de cada disolucin, extendiendo sobre la superficie, con una varilla doblada en placas de agar papa destroxa (3) incubar las placas a 25 durante 2-5 das.Sacar las cajas de incubacin y contar las colonias caractersticas de mohos y levaduras. El desarrollo de Mohos es caracterstico por su aspecto aterciopelado, que algunas veces invade todo la caja. Las colonias de levaduras se diferencian de las colonias bacterianas por su forma oval, elptica o alargada.Contar el nmero de colonias de mohos y levaduras y multiplicarlo por el inverso de la dilucin. Reportar el nmero de mohos y levaduras por gramos de muestras.

2.- Observaciones de las caractersticas de mohos.

Utilizando un bistur se acordar el al agar alrededor de cada una de las colonias caractersticas de mohos y se separara el agar con la colonia, procurando no daarla.Se colocan los fragmentos de agar separados en pota-objetos limpios.se observara la morfologa del micelio areo con un microscopio en diseccin.Transferir parte del microscopio a otro portaobjeto y observar las estructuras con un microscopio ptico. Dibujar las estructuras observadas y compararlas con las reportadas en la bibliografa para identificar mohos.

3. Observacin de las caractersticas de levaduras.Preparar frotis de las colonias de levaduras, teidas con azul de metileno al 0.5%(un minuto con la solucin y lavar con agua destilada). Observar al microscopio su morfologa.De colonias cuya morfologa sea levaduras grandes, ovalo aislados, o apiculares aisladas se sembraran en los siguientes medios:a) En tubos de 16x150 mm con medio wickerham adicionando con dextrosa, con tapn de rosca y campana Durham.b) En tubos de 16x150mm con medio Wickerham adicionando con rafinosa, tapn de rosca y campana Durham.De las colonias cuya morfologa sea de levaduras ovales, pequeas, agrupadas en micelio ramificado de levaduras apiculares, aisladas de siembra de tubo de 25x250 mm con 10 ml de caldo de extracto de malta estril.Los tubos inoculados se incuban a 25-30 C durante 2 a 8 das.En los tubos de 16x150 mm se observara al final del periodo posible aparicin de turbidez en el medio y de gas en la campana de Durham, como indicio de una fermentacin alcohlica.En tubos de 25x250 mm se observara una posible formacin de pelcula superficial en medio, como indicio de desarrollo de levaduras aerobias. Formadoras de micelio.

Grfica n 1. Promedio del pH e la Taperiba

Grfica n 1. Promedio del grados Brix de la TaperibaComment by SONY VAIO: