memoria docente 2014-2015 - gva.esalcoy.san.gva.es/laboratorio/manual/documentos... · en esta...
TRANSCRIPT
1
MEMORIA DOCENTE 2016-2017
Sergio López Diéguez, residente de tercer año del Servicio de
Análisis Clínicos del Hospital Virgen de los Lirios de Alcoy,
Departamento nº 15 de la GVA.
ROTATORIO:
Junio / octubre: hematología y hemostasia.
Noviembre / diciembre: Banco de sangre.
Enero / mayo: Microbiología y Parasitología.
HEMATOLOGÍA
En esta sección del laboratorio se determinarán prueban los parámetros propios
del hemograma y hemostasia, así como la VSG, frotis de sangre periférica y
algunas pruebas especiales de autoinmunidad. El analizador empleado es el
Sysmex XN-2000, que tiene dos módulos que trabajan en cadena.
Este citómetro de flujo se va a encargar del hemograma, empleando para ello
muestras de sangre total anticoaguladas con EDTA potásico. Va a combinar dos
técnicas: citometría de flujo por semiconducción láser y técnicas, informando
del recuento y porcentaje de las diferentes células en sangre periférica. Los
parámetros que caracterizan el informe de hemograma son:
o Recuento de leucocitos.
Fórmula leucocitaria.
o Recuento de hematíes.
o Hemoglobina.
o Hematocrito.
o Hemoglobina corpuscular media.
o Concentración hemoglobina corpuscular media.
2
o Plaquetas.
o Volumen corpuscular medio.
o Recuento diferencial de leucocitos.
o Reticulocitos.
o Volumen plaquetario medio.
o Porcentaje plaquetas grandes.
o Plaquetocrito.
o Ancho distribución plaquetas.
o Ancho distribución hematíes.
o Eritroblastos.
o Granulocitos inmaduros.
Técnicas empleadas:
Citometría de flujo por semiconductor láser.
Esta técnica permite cuantificar células en suspensión, en base a su tamaño y
estructura interna. Para dicha caracterización, la muestra diluida atraviesa,
con un flujo constante, un capilar sobre el que incide una emisión láser
permitiendo que:
- La radiación dispersada frente a la célula en un ángulo próximo a 0º,
informe sobre el diámetro de la misma.
- La radiación dispersada frente a la célula en un ángulo próximo a 90º,
informe sobre la arquitectura celular interna (complejidad del núcleo).
- La recepción de fluorescencia emitida a partir del marcaje de
moléculas de superficie celular, informe sobre la identidad de determinadas
células que se caracterizan por presentarlas en su superficie. En este sentido,
el analizador es capaz de generar una alarma cuando haya sospecha de
linfocitos atípicos y/o blastos. El analizador está configurado para que cuando
detecte estos leucocitos realice una medición con sondas que permiten
diferenciar las células inmaduras en sangre periférica.
3
- Las señales recogidas en cada detector son amplificadas, digitalizadas
y enviadas a un analizador de datos que las procesa, y nos ofrece la
valoración de los parámetros reseñados a continuación.
Técnicas conductométricas.
Esta tecnología está basada en la ley de Ohm, por la que la diferencia de
potencial eléctrico entre dos puntos es directamente proporcional a la
corriente eléctrica que circula por ellos y a la resistencia del conductor entre
los mismos.
El esquema de medición, construido en base a ello, consta de un circuito con
dos electrodos. El primero se encuentra sumergido en una suspensión celular
(normalmente, la muestra diluida) en el interior de una cámara y el segundo
en otro departamento conectado con el anterior por una diminuta abertura. A
través de ella se hará fluir un caudal constante de muestra.
Sobre ambos electrodos se aplica una corriente eléctrica constante,
produciéndose variaciones en la diferencia de potencial únicamente por la
variación en la resistencia del medio conductor generada por el paso de las
distintas células por la abertura antes mencionada.
El valor del aumento de la diferencia de potencial será proporcional a una
serie de factores que permiten determinar cuáles y cuantos elementos
celulares por unidad de volumen existen en la muestra. Dichos factores son
principalmente, el volumen celular, la resistividad de la solución conductora, el
caudal de células que atraviesan la abertura y el contorno celular.
Los incrementos de potencial se amplifican y se envían a un circuito
discriminador, en el que se establecen dos valores discriminantes respecto al
volumen que presentan las células valoradas. Uno del orden de 25-30 fL para
los hematíes y otro entre 2-6 fL para las plaquetas.
4
PATOLOGÍAS RELACIONADAS CON EL HEMOGRAMA
La determinación del hemograma junto con la información que aporta la
bioquímica sérica, nos va a permitir diferenciar y diagnosticar las distintas
patologías.
- Anemias hipoproliferativas:
Anemia Ferropénica.
Anemia de enfermedades crónicas.
Anemia en relación con la IRC.
Anemia por lesión medular ósea.
Aplasia medular.
- Anemia megaloglástica.
- Anemias hemolíticas.
- Hereditarias.
Esferocitosis hereditaria.
Hemoglobinopatías.
Talasemias.
Adquiridas.
Inmunitarias.
Traumáticas.
Por acción tóxica sobre la membrana.
Hemoglobinuria paroxística nocturna.
- Poliglobulias.
- Leucemias Mieloide Crónica.
- Leucemia Linfática Crónica.
- Leucemia Mieloide Aguda.
- Aplasia medular.
- Trombocitopenias.
- Trombocitosis.
5
Cuando se observa, durante la validación, un hemograma con algún parámetro
alterado se revisa el historial del paciente y en caso de que proceda, se realiza
un frotis de sangre periférica. El frotis se realiza en un teñidor automático de la
marca Sysmex (SP 10), el cual se encarga de homogenizar la muestra, extender
la gota, realizar la tinción Giemsa y serografiar el porta con el número de
petición.
HEMOSTASIA
En este apartado de la sección se determinan parámetros que se basan en la
actividad biológica de las distintas proteínas que intervienen en los procesos de
coagulación.
Estas determinaciones calculan el tiempo que tarda, in vitro, en formarse el
coágulo de la muestra a analizar. Si la coagulación la desencadena el factor
tisular, se determina el tiempo de protrombina (PT, vía extrínseca de la
coagulación), mientras que si lo hace inducida por el factor de superficie se
determina el tiempo de tromboplastina parcial (APTT, vía intrínseca de la
coagulación). La misma base fisiológica permite el cálculo de la concentración
de fibrinógeno, partiendo de la activación del mismo.
El analizador empleado es el STA-compaq, de Stago. La detección del coágulo
es mecánica, basándose en la colocación de una bola metálica en el tubo de
reacción, la cual queda suspendida entre dos imanes e interrumpe un rayo
lumínico que enfoca a un detector. Al añadir el plasma muestra, el sistema se
pone en marcha y el tubo sufre un movimiento de vaivén. Mientras la muestra
es líquida la bola se mantiene entre los imanes interrumpiendo el paso del haz
de luz. Y cuando se coagula la muestra, la bola se mueve junto al tubo y
permite el paso del rayo, marcando el tiempo.
Las determinaciones son:
Tiempo de protombina (Índice QUICK / INR).
Tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT).
6
Fibrinógeno.
Anticoagulante lúdico (APTT con adición de fosfolípidos externos)
Proteína S.
Resistencia a la Proteína C activada.
El INR (índice estandarizado para evaluar el tiempo de protombina TP) se
solicita conjuntamente con el tiempo de tromboplastina parcial activada (ATTP)
para evaluar la capacidad de coagulación de la sangre, por las dos vías.
El TP evalúa la vía extrínseca y la común de la cascada de la coagulación,
mientras que el ATTP evalúa la vía común y la intrínseca. La utilización conjunta
de TP y TTP permite una evaluación integrada de todos los factores de la
coagulación.
El tiempo de trombina (TT) se determina por el coagulómetro de urgencias
(mismo modelo que en rutina).
Las pruebas anteriores pueden emplearse para realizar un cribado de trastornos
de la coagulación antes de intervenciones quirúrgicas, evaluando la posibilidad
y riesgo de sangrado.
INR y TP se utilizan para monitorizar la eficacia de tratamientos anticoagulantes
con acenocumarol (Sintrom®). Este medicamento tiene repercusiones sobre la
cascada de la coagulación y contribuye a inhibir la formación de coágulos.
Cada 10 días, aproximadamente, se determinan las pruebas especiales que
entrarían dentro del perfil de estudio de hipercoagulabilidad. Las muestras
(plasma de sangre con citrato) se alicuotan y se congelan día a día. Estas
pruebas son: anticoagulante lúdico, Proteína S antigénica libre, Proteína C
cromogénica y resistencia a la Proteína C activada.
Durante la rotación en esta sección elaboré una biblioteca de fotografías
realizadas al microscopio de diferentes casos de pacientes, así como de los
controles de calidad externos, recopilados durante años atrás.
7
BANCO DE SANGRE
En Banco de Sangre se realizan las pruebas necesarias para la determinación de
la inmunohematología y transfusión sanguínea en Hematología Clínica.
Las pruebas que se realizan en esta sección son las siguientes:
Grupo sanguíneo.
Grupo sérico.
Rh.
Grupo neonatal.
Fenotipo en caso de Rh negativo.
Cribado de grupos irregulares.
Cruce de bolsas.
Los hematíes humanos tienen antígenos en su superficie, siendo los principales
A y B. La herencia de dichos antígenos es autosómico codominante. La sangre
se clasifica en función de la presencia o ausencia de estos antígenos. Las
personas cuyos hematíes presentan antígenos A y no B se consideran del
grupo sanguíneo A; las que presentan antígenos B y no A son del grupo B; las
que tienen ambos son del grupo AB. Aquellas personas que no presenten
ninguno de los dos antígenos son del grupo sanguíneo 0.
Otro antígeno de superficie importante es el conocido como factor Rh. Si éste
está presente en los hematíes, la sangre es del tipo Rh+ mientras que no lo
está es Rh-. La herencia de este grupo antigénico es autosómico dominante.
El organismo produce de manera natural anticuerpos contra los antígenos A y B
que no están presentes en los propios hematíes, es decir, un individuo del
grupo A presentará anticuerpos contra los antígenos de superficie B y viceversa.
Estos anticuerpos son útiles para determinar el grupo AB0 de una persona y
son importantes para distinguir los tipos de sangre que se pueden transfundir
con seguridad.
El tipaje sanguíneo es especialmente importante durante el embarazo ya que la
madre y el feto pueden presentar fenotipos incompatibles. Si la madre es Rh-
8
pero el padre es Rh-, el feto puede ser Rh-positivo o negativo. En caso de que
el feto sea Rh-positivo, la madre puede desarrollar anticuerpos frente al
antígeno Rh. Estos anticuerpos pueden atravesar la placenta y destruir los
hematíes del bebé, causando una enfermedad hemolítica del feto y del recién
nacido. Para prevenir el desarrollo de anticuerpos Rh, las madres Rh-negativas
se tratan con una inyección de inmunoglobulina Rh durante el embarazo y
nuevamente después del parto en el caso de que el bebé sea Rh-positivo. La
inmunoglobulina Rh enmascara cualquier antígeno Rh del feto al que la madre
puede estar expuesta durante el embarazo y el parto, y se evita así que la
madre se sensibilice y desarrolle anticuerpos contra el antígeno Rh.
El tipaje sanguíneo también se utiliza para determinar el grupo sanguíneo de
las personas que quieren donar sangre. Las unidades de sangre obtenidas de
los donantes se tipifican y se etiquetan adecuadamente para que se puedan
utilizar en personas que requieren un grupo AB0 y un tipo Rh específicos.
Para la realización de las pruebas se utilizan tarjetas específicas. Daremos la
prueba como negativa cuando aparezca un botón en el pocillo de la prueba
correspondiente y daremos la prueba como positiva cuando aparezca una malla
de hematíes fijados a lo largo del pocillo de la tarjeta.
Las reacción que se produce en las tarjetas es una aglutinación debida a una
reacción inmunoquímica que produce la agregación de partículas o células
recubiertas de antígeno o anticuerpo. La reacción de la aglutinación se divide
en dos fases, la primera en la que se produce el contacto antígeno-anticuerpo
sobre la superficie de la partícula (o célula) empleada, y la segunda en la que
las partículas se agregan y se puede visualizar la aglutinación. Podría ocurrir
que se produjese la primera fase, pero no la segunda, ello se debería a la
presencia de anticuerpos incompletos (subaglutinantes o no aglutinantes) que
podrían generar falsos negativos. Ello puede solucionarse modificando las
condiciones de reacción.
Las reacciones de aglutinación pueden ser, además de cualitativas,
semicuantitativas. Lo cual se consigue empleando diluciones seriadas de
9
antisuero, valorándose como resultado la mayor dilución a la que se produce la
aglutinación. Dentro de los diversos tipos de aglutinación, relacionamos los
empleados en nuestro laboratorio:
Aglutinación directa:
La partícula inerte recubierta de antígeno, reacciona directamente con el
anticuerpo de la muestra, produciendo una reacción de aglutinación.
Pruebas de Coombs:
Permite demostrar la presencia de anticuerpos mediante el uso de un segundo
anticuerpo, que es una antiglobulina.
o Directo: se emplea la antiglobulina para la detección de
anticuerpos antieritrocitarios que ya se encuentran unidos in
vivo a la superficie de los hematíes.
o Indirecto: se emplea la antiglobulina para la detección de
anticuerpos antieritrocitarios no unidos in vivo a los hematíes.
Por ello se realiza en dos fases, en la primera se enfrentan los
anticuerpos frente a hematíes de antigenicidad conocida para
provocar su unión, y posteriormente se añade al antiglobulina
hemaglutinante.
Las tarjetas que se utilizan y el procedimiento en cada una de ellas es el
siguiente:
o Tarjeta de Grupo (Hemático) y Rh. El resultado nos indica el grupo
hemático y el Rh del paciente. Si el Rh fuese negativo deberemos
realizar una tarjeta de fenotipo y el Du. Procedimiento:
o Identificar la tarjeta con los datos del paciente (Nombre y
Apellidos).
o Realizar una dilución con 1mL de Diluyente y una gota de
sangre total (EDTA) del paciente. Homogeneizar bien.
o Dispensar en cada pocillo una gota de la dilución anterior.
o Centrifugar 10 minutos y leer.
10
o Tarjeta del grupo neonatal (Cordón). El resultado nos indica el grupo
hemático del recién nacido, Rh y Coombs directo. Procedimiento:
o Identificar la tarjeta con los datos del paciente (Nombre y
Apellidos).
o Realizar una dilución con 1mL de Diluyente 2 y media gota de
sangre total (EDTA) del paciente. Homogeneizar bien.
o Dispensar en cada pocillo 1 gota de la dilución anterior.
o Añadir a cada pocillo 1 gota de diluyente 1, a excepción del
pocillo de Coombs.
o Centrifugar 10 minutos y leer.
Si el Rh fuese negativo deberemos realizar una tarjeta de fenotipo y el Du.
o Tarjeta de fenotipo. Se realiza a gestantes y cuando el Rh es
negativo. El resultado nos indica el fenotipo del paciente.
Procedimiento:
o Identificar la tarjeta con los datos del paciente (Nombre y
Apellidos).
o Realizar una dilución con 1mL de Diluyente y una gota de
sangre total (EDTA) del paciente. Homogeneizar bien.
o Dispensar en cada pocillo una gota de la dilución anterior.
o Dejar reposar 10-15 minutos.
o Centrifugar 10 minutos y leer.
o Tarjeta medio Coombs (verde). En esta tarjeta se realiza el escrutinio
de Ac. irregulares, el cruce de bolsas y en el caso de que fuese
necesario el Du. Procedimiento para escrutinio de Ac. irregulares:
o Identificar la tarjeta con los datos del paciente (Nombre y
Apellidos).
o Se utilizan 4 pocillos de esta tarjeta (I, II, III, IV). Dispensar
en el pocillo correspondiente los pools de hematíes
comerciales I, II, III y IV junto con una gota del suero del
paciente.
11
o Incubar en el baño 15 minutos a 37ºC.
o Centrifugar 10 minutos y leer
Procedimiento para el cruce de bolsas:
o Identificar la tarjeta con los datos del paciente (Nombre y Apellidos).
o Utilizaremos un pocillo por cada bolsa que crucemos.
o Los pocillos se rotulan con los dos últimos números de la bolsa.
o Realizar una dilución por cada bolsa que se cruce con 1mL de Diluyente
+ una gota de sangre total (EDTA) de la bolsa correspondiente.
Homogeneizar bien.
o Dispensar en el pocillo correspondiente una gota de la dilución de la
bolsa que se cruce + 1 gota de suero del paciente.
o Incubar en el baño 15 minutos a 37ºC.
o Centrifugar 10 minutos y leer.
Procedimiento para realizar el Du: Se realiza cuando el Rh es negativo.
o Identificar la tarjeta con los datos del paciente (Nombre y Apellidos).
o Realizar una dilución con 1mL de Diluyente 2 y media gota de sangre
total (EDTA) del paciente. Homogeneizar bien.
o Dispensar en cada pocillo 1 gota de la dilución anterior + 1 gota de anti-
D.
o Incubar en el baño 15 minutos a 37ºC.
o Centrifugar 10 minutos y leer.
Las tres pruebas pretransfusionales que se realizan para garantizar la
compatibilidad son:
o Prueba cruzada: enfrentar in Vitro una muestra de los hematíes a
transfundir (bolsa) con el suero del paciente.
o Tipificación ABO/ Rh.
o Escrutinio de Ac. irregulares.
12
MICROBIOLOGÍA
Apartado de siembra de muestras.
En esta sección se siembran todas las muestras recogidas en el laboratorio de
microbiología con el fin de identificar posteriormente los microorganismos que
crecen en los diferentes medios de cultivo. Las muestras que se reciben en
microbiología son muy dispares, desde líquidos biológicos, biopsias
intraoperatorias, sangre, heces, úlceras, frotis vaginales, orina, aspirados
broncofaríngeos, etc.
Cada una de estas muestras está codificada informáticamente y se les asigna
una serie de medios de cultivo útiles para el aislamiento de los microorganismos
más frecuentes.
En esta sección se concilian las peticiones que no sean de respiratorios ni de
orinas. Al conciliar la petición se imprimen etiquetas para identificar las
diferentes placas y medios líquidos.
UROCULTIVOS
Las muestras se concilian en un ordenador diferente al de recepción de
muestras. Se deben conciliar en el mismo orden en el que pasan por el
citómetro de flujo (Sysmex UF-1000i). Este autoanalizador se utiliza para el
despistaje de bacteriuria. Utiliza tecnología láser combinada con colorantes
específicos de ácidos nucleicos (polimetina). Procesa las muestras en 2 cámaras
independientes (una para análisis de sedimento y otra para análisis de
bacterias) para una precisa detección y recuento.
Los puntos de corte establecidos para la revisión y cultivo de orinas son:
- LPMN 50u/microL
- Bacterias 150 u/microL
13
Las orinas que no alcanzan dichos valores se consideran negativas. Las que
resulten positivas se sembrarán en Chromagar Orientación, por recuento, con
asa desechable de 1 microlitro.
Lectura y valoración de los cultivos.
Aunque lo más frecuente es que las orinas representativas de infección urinaria
presenten un recuento igual o superior a 10⁵ ufc/mL (Bacteriuria significativa
según el criterio clásico de Kass) atendiendo a criterios modificados más
modernos (Sociedad Americana de Enfermedades Infecciosas) un cultivo se
considerará positivo cuando tenga un recuento igual o mayor de 10⁴ ufc/mL de
uno o dos gémenes.
Situaciones especiales:
En caso de orinas de nefrostomía, ureterostomía y punción suprapúbica,
cualquier recuento será considerado significativo.
Según criterio del microbiológico en determinadas circunstancias (pielonefritis)
pueden considerarse significativos recuentos iguales o superiores a 1000
ufc/mL.
Se considerarán urocultivos negativos aquellos que tras el periodo de
incubación muestren un crecimiento inferior a 10⁴ ufc/mL, salvo las situaciones
especiales.
Se conderarán urocultivos contaminados aquellos que muestren un crecimiento
igual o superior a 10⁴ ufc/mL de tres o más gérmenes.
A la hora de valorar las muestras muy cercanas al punto de corte se tendrá en
cuenta la información que aporta el citómetro en cuanto a leucocituria.
Identificación de los microorganismos y pruebas de sensibilidad
Según el crecimiento observado en el cultivo en Chromagar Orientación
distinguiremos:
14
o Colonias mucosas de coloración morada: E. coli a la que se le
realizará pruebas de sensibilidad a antibióticos mediante sistema
Vitek.
o Colonias mucosas azules: Enterobacter/Citrobacter/Klebsiella a
identificar mediante panel de Walkaway.
o Colonias mucosas naranjas: Proteus/Morganella a identificar
mediante panel de Walkaway.
o Colonias extendidas incoloras o amarillas: Pseudomona, a
identificar mediante panel de Walkaway.
o Colonias puntiformes azules turquesa: enterococos o streptococos
spp. A identificar mediante panel de Walkaway.
o Colonias secas blancas: staphylococos spp. A identificar mediante
panel de Walkaway.
o Colonias secas celeste: Streptococo agalactiae, se identificará
mediante Agar Granada (colonias naranjas), el antibiograma se
hará manual, en placa MH.
o Colonias secas moradas: Staphylococos saprofiticus. A identificar
mediante panel de Walkaway.
o Colonias secas grandes blancas: levaduras. Se realizará visión en
fresco para confirmar, pase a chromagar candida y panel sistema
Vitek para identificar y antifungigrama si procede (hospitalizados).
COPROCULTIVOS
En la sección de siembra de muestras se inocularán los siguientes medios de
cultivo: agar sangre, agar MacConkey, agar Salmonella-Shigella, agar Yersinia,
agar Campylobacter y caldo selenito. Del caldo selenito se hará un pase al día
siguiente a una placa de chromagar salmonella.
15
Junto con el coprocultivo se realiza también una inmunocromatografía para la
detección de virus gastrointestinales tales como Rotavirus, Astrovirus, Norovirus
y Adenovirus.
Identificación y pruebas de sensibilidad.
o Salmonella: las colonias de salmonella se reconocen en medio SS
por ser transparentes (no fermentadoras de lactosa) con el centro
negro (productoras de sulfhídrico), también las colonias de
Proteus spp. (comensal) presentan idénticas características, por lo
que habrá que utilizar una batería de pruebas bioquímicas para
identificar ambos géneros. Se pueden usar medios diferenciales
como UMI (urea-movilidad-indol) y TSI (triple azúcar hierro).
Gracias al pase del selenito a chromagar salmonella, se preferirá
tipar a la colonia de este medio, que es más selectivo. Las
colonias son color malva.
Si la colonia es bioquímicamente compatible con Salmonella y/o
aglutina con alguno de los antisueros específicos polivalentes Poly
A o Poly B se procederá a su identificación completa y pruebas de
sensibilidad.
o Shigella: en agar MacConkey son incoloras y transparentes
(lactosa negativas). Estas colonias serán sometidas a un proceso
de despistaje mediante una batería de pruebas bioquímicas (UMI,
TSI, ONPG). En general son cepas poco reactivas
bioquímicamente. Los aislamientos con características bioquímicas
compatibles deberán identificarse y realizarse las pruebas de
sensibilidad según los procedimientos estándares de laboratorio.
Cuando la identificación sea positiva, deberá hacerse aglutinación
en porta con antisueros específicos de los grupos A, B, C y D.
o E. coli: La caracterización microbiológica de las E. coli productoras
de diarrea resulta muy complicada debido a que esta cepa es un
16
componente abundante de la microflora normal del intestino
humano. El principal serotipo de E. coli enterohemorrágico, E. coli
O157 H7, es identificado mediante PCR.
o Campylobacter: las colonias son grisáceas, redondas, pequeñas
(pero no puntiformes) o aceitosas. La identificación microbiológica
de colonias sospechosas recae principalmente sobre su morfología
característica en la tinción de gran, el resultado positivo de la
prueba de oxidasa y la catalasa. A nivel de especie identificaremos
C. jejuni por ser hipurato positivo.
o Aeromonas y Plesiomonas: las aeromonas se buscan en el agar
Yersinia, a las colonias que fermenten el sorbitol (color rojo) se le
realiza pase a agar sangre y aquellas colonias que sean oxidasa
positiva en dicho medio se le realizará identificación y pruebas de
sensiblidad. Las Plesiomonas se caracterizan por no fermentar la
lactosa y ser productoras de oxidasa (se buscan en McConkey).
o Yersinia: aparecen con morfología en “ojo de buey” centro rojo
rodeado de una zona transparente, a estas colonias se les
realizará un test de ureasa y un reaislamiento en agar sangre.
Aquellas colonias con morfología compatible, ureasa positiva y
ONPG o lactosa negativas se les identificará y se les hará pruebas
de sensibilidad según procedimientos estándar del laboratorio. Se
dispone además de PCR para evidenciar su presencia en la
muestra de heces.
o Estudio de Clostridium Difficile: se le realiza un despistaje
mediante la detección de GDH, por cromatografía. Se realizará por
petición del médico solicitante y bajo el criterio del microbiológo.
Las muestras positivas para GDH pasarán a PCR para la detección
de la toxina de Clostridium difficile.
17
SISTEMA VITEK 2
El Vitek 2 compact es un sistema automatizado de identificación y pruebas de
sensibilidad basado en la colorimetría y que cuenta con un sistema avanzado
para la interpretación de las pruebas de sensibilidad. Cuenta con las siguientes
características:
o Valores de CMI, un estándar universal que permite la detección de la
concentración mínima en la que el antibiótico inhibe el crecimiento
bacteriano.
o Interpretación clínica para orientar hacia el tratamiento con mayor
éxito potencial.
o Resultados orientados hacia la detección de mecanismos de
resistencia incluyendo los fenotipos inusuales.
o Resultados de antibióticos deducidos para cumplir con requerimientos
clínicos específicos.
o Validación automática de resultados, mediante la constante
verificación de las pruebas de identificación y sensibilidad.
Tipos de tarjetas
o Tarjetas de identificación:
o Tarjetas para identificación de bacterias gram positivas.
o Tarjetas para identificación de bacterias gram negativas.
o Tarjetas ANC, para identificación de bacterias anaerobias y
corynebacterias.
o Tarjetas NHC, para identificación de Neisseria, Haemophilus y
otros microorganismos.
o Tarjetas para identificación de levaduras.
o Tarjetas para antibiograma:
o Tarjetas para antibiograma de estafilococos.
o Tarjetas para antibiograma de estreptococos.
18
o Tarjetas para antibiograma de orinas (gram negativos).
o Tarjetas para antifungigrama (levaduras).
SISTEMA WALK-AWAY
El sistema automático Walk-Away (Dade-Berhing) de identificación y
antibiograma en un instrumento donde se incuban los paneles inoculados con
suspensiones de las cepas aisladas a ensayar.
El sistema cuando ha transcurrido el tiempo estipulado, realiza una lectura de
los paneles que conduce a la identificación de la cepa (mediante una base de
datos) y a su antibiograma por microdilución (lectura de CMI).
En el caso de ser la cepa a ensayar un lento crecedor, el sistema reincuba 24
horas el panel en cuestión, manteniendo los datos iniciales de las CMIs, hasta
su posterior lectura e identificación final.
Este sistema es adecuado para la mayoría de bacterias no exigentes
(enterobacterias, no fermentadores, estafilococos, estreptococos de los grupos
A, B y D).
Este sistema, a diferencia de Vitek 2, es abierto, pudiendo interpretar el
crecimiento o viraje de color de los pocillos por el facultativo microbiólogo y
cambiar una posible lectura errónea del Walkaway.
Los componentes del sistema son:
o Paneles para los diferentes microorganismos y el procedimiento de
inoculación.
o Programa LabPro, que controla el aparato Walk-Away donde se
incuban y leen los paneles. También gestiona el almacenamiento y
procesamiento de los datos obtenidos, así como su transmisión al
sistema de gestión de microbiología Servolab.
o Sistema de gestión Servolab es el programa donde se envía la
información obtenida y donde los facultativos realizan el informe de
todos los volantes que emite el laboratorio.
19
SISTEMAS API
Los sistemas de identificación tipo API están basados en un conjunto de
pruebas, bioquímicas y enzimáticas, del que se obtiene un perfil numérico que
al ser introducido en una base de datos ofrece la identificación del
microorganismo, informando además del porcentaje de fiabilidad y de las
posibles pruebas atípicas o complementarias a la identificación. La lectura de
las galerías puede ser:
o Manual: la lectura se realiza en función del viraje colorimétrico de las
pruebas individuales, según un patrón establecido por el fabricante o
en función de la presencia o ausencia de turbidez debido al
crecimiento del microorganismo. Los resultados se interpretan como
positivos o negativos y se estable un perfil numérico.
o Automática: el aparato MiniApi posee un lector capaz de detectar el
crecimiento en los pocillos por turbidimetría. La lectura será
automática.
ACTIVIDAD ASISTENCIAL
Durante el rotatorio por las diferentes secciones he adquirido los conocimientos
necesarios para poder validar las diferentes pruebas y saber interpretar los
diferentes resultados que se derivan de las diversas patologías que podemos
encontrarnos. Así como saber orientar al clínico hacia un diagnóstico, añadiendo
pruebas que pueden ser de ayuda o poniendo comentarios que les haga más
fácil la interpretación de los resultados. En el caso de obtener resultados no
esperados en un análisis o que el resultado tenga especial importancia para el
paciente, he mantenido contacto con el clínico para informarle de dichos
resultados.
Por otro lado, en el rotatorio por todas las secciones, he sabido manejar cada
uno de los aparatos, solucionar problemas que pudieran surgir y calibrar y
controlar cada uno de ellos.
20
ACTIVIDAD DOCENTE
Programa de sesiones clínicas, octubre 2016 – junio 2017:
o Seguimiento en las alteraciones endocrinológicas en la gestación.
Diabetes gestacional. Dra Santo.
o Litiasis urinaria y laboratorio clínico. Sergio López, R3.
o Casos clínicos. R3, R4 y Dra Juliá.
o Actualización consenso autoinmunidad, Dr Marcos.
o Evaluación y seguimiento de la función renal pediátrica. Dr Ricart.
o Diagnóstico prenatal no invasivo. Dra Juliá.
o Diagnóstico y seguimiento del Lupus Eritematoso Sistémico. Dr
Gonzalvez.
o Casos clínicos. R3, R4 y Dra Juliá.
o EL laboratorio clínico en la toxicología clínica y monitorización de
fármacos. Dra Juliá.
o Aplicaciones de la genómica en el diagnóstico de enfermedades
hereditarias relacionadas con la muerte súbita. Dr Molina.
o Casos clínicos. R3, R4 y Dr Ricart.
o FGF23. Su implicación en la Enfermedad Renal Crónica. Sergio
López, R3.
o Casos clínicos. R3, R4 y Dra Santo.
o Síndromes hereditarios asociados a cáncer renal, Javier Gonzalvez, R4.
o Estrategias es el seguimiento del cáncer de mama. Dra Santo.
o Casos clínicos. R4, R3 y Dra Juliá.
o Valoración hormonal en pacientes sometidas a técnicas de reproducción
asistida. Dra Juliá.
o Manejo de las inmunodeficiencias primarias en el laboratorio diagnóstico.
Dra Vicedo.
o Casos clínicos. R4, R3 y Dra Santo.
o Marcadores tumorales en líquidos biológicos. Dr Ricart.
o Coprocultivos. Dra Chinchilla.
o Optimización de la demanda. Dra Santo.
21
o Casos clínicos. R4, R3 y Dra Juliá.
o Diagnóstico diferencial de las hemoglobinopatías. Javier Gonzalvez, R4.
o Aplicación de la gasometría en el laboratorio clínico. Sergio
López, R3.
o Casos clínicos. R4 y Dra Santo.
o Biomarcadores de nutrición. Dra Vicedo.
o Diagnóstico microbiológico de la mastitis infecciosa. Dra Fuentes.
o Casos clínicos. R4 y Dra Vicedo.
o Biomarcadores de remodelado óseo. Dr Ricart.
o Uso adecuado de las determinaciones en el laboratorio clínico. Dr Molina.
Actividades de formación continuada, AEFA 2016:
o Tema 1. Litiasis urinaria y laboratorio clínico.
o Tema 2. Utilidad de la hormona antimulleriana.
o Tema 3. Seguimiento de las alteraciones endocrinológicas en la
gestación.
o Tema 4. El laboratorio clínico en la toxicología clínica y monitorización de
fármacos.
o Tema 5. Uso de datos de programas de intercomparación.
o Tema 6. Fiebres hemorrágicas víricas.
o Tema 7. Aplicaciones de la genómica en el diagnóstico de enfermedades
hereditarias relacionadas con la muerte súbita.
o Tema 8. Nuevos parámetros de investigación del hemograma.
o Tema 9. Estrategias en el seguimiento del cáncer de mama.
Cursos y congresos.
o Congreso nacional del laboratorio clínico. Octubre 2016, Zaragoza.
o Sesión interdepartamental sobre el Pasado, presente y futuro del POCT.
o Curso online Actualización en el manejo de la enfermedad celíaca en el
laboratorio clínico, AEFA.
o Jornada científica AVELAC.