manual procedimientos lab clinico

Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin

AUTORIDADES DEL MINISTERIO DE SALUD

DR. JOS GUILLERMO MAZA BRIZUELA MINISTRO DE SALUD DR. JOS ERNESTO NAVARRO MARN VICEMINISTRO DE SALUD DR. HUMBERTO ALCIDES URBINA DIRECTOR GENERAL DE SALUD DR. JOS ROBERTO RIVAS AMAYA DIRECTOR DE REGULACIN DR. MARIO VICENTE SERPAS MONTOYA DIRECTOR DE VIGILANCIA DE LA SALUD DRA. ENA GARCA DIRECTORA DE PLANIFICACIN. LIC. JUDITH ZARATE DE LPEZ DIRECTORA ADMINISTRATIVA LIC. MARA GUADALUPE DE GUZMN JEFE LABORATORIO CENTRAL DR. MAX BLOCH



CRDITOSLic. Mara Guadalupe de Guzmn Lic. Patricia Lissette Mira Gmez Lic. Ana Vilma Guevara de Aguilar Lic. Blanca Sonia Velsquez de Prez Lic. Ana Telma Mndez de Pineda Lic. Ana Vilma de Vsquez Lic. Amada Gloria de Baires Lic. Zandra Jimnez de Fuentes Lic. Ana Patricia Amaya Jefe Laboratorio Central Dr. Max Bloch

Sub-Jefe, Laboratorio Central Dr. Max Bloch Jefe rea Clnica, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Coordinadora de Gestin de la Calidad, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Coordinadora rea Inmunohematologa, Laboratorio Central Dr. Max Bloch Coordinadora de Proyectos, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Jefe Seccin de Coprologa y Urianlisis, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Jefe Seccin de Bacteriologa, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Jefe Seccin de Qumica Cnica, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Jefe Seccin Malaria y Serologa e Inmunologa, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Profesional de Laboratorio Clnico, Laboratorio Central Dr. Max Bloch. Supervisora de Laboratorios de la Regin Central de Salud. Supervisora de Laboratorios de la Regin Metropolitana de Salud. Supervisor de Laboratorios de la Regin Occidental de Salud. Supervisora de Laboratorios de la Regin Paracentral de Salud.

Lic. Marmin Ruth Carrillo de Sosa

Lic. Jssica Carolina de Rivera Lic. Lisette Esmeralda Ruiz Lic. Ana Mara de Mendoza Lic. Jorge Julio Mndez Len Lic. Herminia Vsquez de Lpez


Lic. Lorena Anglica Villacorta Lic. Mara Victoria Martnez Lic. Mercedes Arely Ramos Tec. Ana Mara Chachagua Lic. Elia Luz Estrada Profesionales de Laboratorio Clnico y Laboratoristas COORDINACIN Lic. Blanca Sonia Velsquez de Prez ASESORA TCNICA Dra. Carla Mara Schnenberg DIAGRAMACIN Y DISEO Julio Adalberto Castillo

Supervisora de Laboratorios de la Regin Oriental de Salud. Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud Daz del Pinal, Regin Central de Salud. Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud Lourdes Coln, Regin Central de Salud. Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud El Refugio, Regin Occidental de Salud. Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud Cara Sucia, Regin Occidental de Salud. Unidades de Salud del primer nivel de atencin.

Coordinadora de Gestin de la Calidad, Laboratorio Central Dr. Max Bloch.

Colaborador Tcnico, Direccin de Regulacin del MSPAS.

Coordinador Centro de Cmputo, Laboratorio Central Dr. Max Bloch.


Red de Laboratorios Clnicos de Regin Occidental: SIBASI Santa Ana Tc. Marta Isabel Morn Lic. Jos Elas Morales Lic. Ena Elizabeth Alfaro de Ochoa Tc.Luis Alberto Hernndez Tc .Luisa Beatriz Castro Santamara Tc. Oscar Oswaldo Aviles Lic. Alma Carpio de Rivas Lic .Emma Victoria Campos Lic. Erika Barrera de Sigenza Lic. Regina Elizabeth Callejas Tc. Carmen Isabel de Portillo Tc. Juan Carlos Linares Ibarra Lic. Claudia M. Lipe Vizcarra Lic. Elia Luz Estrada Chamul Tc .Ana Maria Chachagua Lic. Jos Roberto Salazar Lic .Sandra Elizabeth Gutirrez Lic. Digna Esperanza Escobar Tc .Carlos Alberto Carpio Brizuela Lic. Xiomara Marleny Turcios Luna Lic .Norma lvarez de lvarez Tc .Silvia Guadalupe Ramrez Lic. Guadalupe de Garca Lic. Nuria del Carmen Morales Lic. Irma Velsquez de Aguirre U/S Candelaria Frontera U/S Casa del Nio U/S Coatepeque U/S El Congo U/S El Palmar U/S Santa Brbara U./S. San Rafael U/S Toms Pineda U.S Texistepeque SIBASI Ahuachapn U/S Ahuachapn U/S Apaneca U/S Ataco U/S Atiquizaya U/S Cara Sucia U/S El Refugio U/S Guaymango U/S Las Chinamas U/S La Hachadura U/S. Tacuba SIBASI Sonsonate U/S Acajutla U/S Armenia U/S Izalco U/S Sonzacate U/S San Julin U/S Juayua

Financiado por: Agencia Espaola de Cooperacin Internacional ASISTENCIA TECNICA AGENCIA ESPAOLA DE COOPERACION INTERNACIONAL Dra. Margarita Valencia Aruz Ing. Javier Espejo



PRESENTACIN

l Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social a travs de la Direccin de Vigilancia de la Salud y a iniciativa del Laboratorio Central Dr. Max Bloch, ha elaborado el presente manual que contiene los procedimientos tcnicos que deben realizarse en los Laboratorios Clnicos del Primer Nivel de Atencin de este Ministerio.

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Estedocumentosehadesarrolladoconlafinalidaddecontarconuninstrumentoquecontenga la secuencia de los pasos necesarios, que aseguren la correcta ejecucin de todos los procedimientos tcnicos de cada uno de los Laboratorios, y de esta manera contribuir al ordenamiento y estandarizacin de los mismos.

Por lo anterior, este Despacho Ministerial pone a disposicin de todos los profesionales involucrados en los procesos descritos, el presente documento denominado: Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin.

Los contenidos de esta publicacin deben incorporarse en las actividades diarias de los LaboratoriosClnicosdelosestablecimientosdelPrimerNiveldeAtencin,afindegarantizarla emisinderesultadosconfiables,comparablesyoportunos,quecolaborenamejorarlacondicin de salud de la poblacin.

Dr. Jos Guillermo Maza Brizuela. Ministro de Salud.


NDICE 1. INTRODUCCIN 2.0 OBJETIVOS....................................................................................................................... 1 2.1. OBJETIVO GENERAL ............................................................................................... 1 2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS ...................................................................................... 1 3. BIOSEGURIDAD ................................................................................................................. 2 4. CONTROL DE CALIDAD .................................................................................................... 4 4.1. CONTROL DE CALIDAD EN COPROLOGA ............................................................ 5 4.2. CONTROL DE CALIDAD EN URIANLISIS .............................................................. 5 4.3. CONTROL DE CALIDAD EN QUMICA CLNICA ...................................................... 6 4.4. CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA .......................................................... 6 4.5. CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOLOGA ........................................................... 6 4.6. CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGA ....................................................... 7 5. COPROLOGA..................................................................................................................... 8 5.1. EXAMEN FSICO DE HECES ................................................................................... 9 5.2. EXAMEN MICROSCPICO DE HECES .................................................................... 11 5.3. PRUEBA DE AZUL DE METILENO ............................................................................ 14 5.4. COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARA LA INVESTIGACIN ` DE COCCIDIOS ................................................................................................................ 17 6. URIANLISIS ...................................................................................................................... 20 6.1. TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA .................................................... 21 6.2. EXAMEN FSICO DE ORINA ..................................................................................... 22 6.3. EXAMEN QUMICO DE ORINA ................................................................................. 24 6.4. EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO ...................................... 27 7. QUMICA CLNICA ............................................................................................................. 30 7.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE QUMICA CLNICA ............................................................................................................................ 31 7.2. GLUCOSA SANGUNEA ............................................................................................ 34 7.3. COLESTEROL ........................................................................................................... 37 7.4. TRIGLICRIDOS ....................................................................................................... 40 7.5. CIDO RICO ........................................................................................................... 43 8. HEMATOLOGA .................................................................................................................. 46 8.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXMENES HEMATOLGICOS .............................................................................................................. 47 8.2. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES HEMATOLGICOS ............................................................................................................ 49


8.3. PREPARACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEOS ........................................ 8.4. EXAMEN MICROSCPICO DEL FROTIS SANGUNEO PARA FRMULA DIFERENCIAL ................................................................................................................... 8.5. FROTIS DE SANGRE PERIFRICA .......................................................................... 8.6. HEMATOCRITO ......................................................................................................... 8.7. HEMOGLOBINA ......................................................................................................... 8.8. RECUENTO DE LEUCOCITOS ................................................................................. 8.9. RECUENTO DE PLAQUETAS (Mtodo directo en cmara) ..................................... 8.10. ESTIMADO DEL NMERO DE PLAQUETAS .......................................................... 8.11. RECUENTO DE RETICULOCITOS .......................................................................... 8.12. VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIN .......................................................... 8.13. TIEMPO DE SANGRAMIENTO ................................................................................ 8.14. TIEMPO DE COAGULACIN ................................................................................... 8.15. CONCENTRADO DE STROUT ................................................................................ 8.16. GOTA GRUESA ........................................................................................................ 9. INMUNOLOGA ................................................................................................................... 9.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE INMUNOLOGA ................................................................................................................. 9.2. PRUEBA RPIDA DE REAGINA (Mtodo RPR) ....................................................... 9.3. DETECCIN DE ANTICUERPOS DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (Prueba rpida) ................................................................................................. 9.4. ANTGENOS FEBRILES............................................................................................. 9.5. TIPEO SANGUNEO ..................................................................................................

52 55 58 61 63 66 69 72 74 76 78 80 82 84 85 86 89 93 96 99

9.6. DETERMINACIN DE VARIANTE Du ....................................................................... 102 9.7. PRUEBA DE EMBARAZO ......................................................................................... 105 10. MICROBIOLOGA BSICA ............................................................................................... 10.1. PREPARACIN DE UN EXTENDIDO DE MUESTRA ............................................. 10.2. EXAMEN MICROSCPICO (Coloracin de Gram) ................................................. 10.3. DIRECTO AL FRESCO DE SECRECIN VAGINAL ................................................ 108 109 111 114

10.4. DIRECTO DE SECRECIN VAGINAL COLOREADO CON GRAM ........................ 116 10.5. DIRECTO DE SECRECIN URETRAL COLOREADO CON GRAM ....................... 118 10.6. DIRECTO PARA CIDO ALCOHOL RESISTENTE (Tuberculosis) .......................... 120 11. REVISIN Y ACTUALIZACIN ......................................................................................... 121 12. GLOSARIO DE TRMINOS ............................................................................................. 122 13. ABREVIATURAS ............................................................................................................... 126 14. ANEXOS ............................................................................................................................ 127 15. BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................. 145


1. INTRODUCCIN

os laboratorios clnicos representan un apoyo primordial para el rea mdica, ya que a travs de los anlisis realizados en ellos se pueden diagnosticar diferentes patologas y establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar al paciente. Es por eso, que conscientes delagranimportanciayconlafinalidaddealcanzaruntrabajodecalidad,esindispensablecontar con un manual que presente de manera formal y sistemtica los procedimientos de la Red de Laboratorios de los establecimientos del Primer Nivel de Atencin en Salud.

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El siguiente manual se ha elaborado de forma sencilla y prctica para que su contenido sea de fcil aplicacin por el personal que desarrolla estas actividades diarias. Su contenido esta dividido en ocho apartados: en el primero estn contenidos los aspectos ms importantes de bioseguridad en el Laboratorio; en el segundo se describe el control de calidad que debe llevarse en los diferentes anlisis; y en los seis apartados siguientes se detallan los procedimientos que se realizan en las diferentes reas, en el siguiente orden: Coprologa, Urianlisis, Qumica Clnica, Hematologa, Inmunologa y Microbiologa bsica.

Se espera que este manual sea una gua efectiva y til para lograr la estandarizacin de los procedimientos y calidad de los resultados obtenidos en los Laboratorios Clnicos del Ministerio de Salud.


2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL- Proporcionar a la Red de Laboratorios clnicos del Ministerio de Salud, un instrumento que facilite el desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos tcnicos que se realizan en los laboratorios del Primer Nivel de Atencin.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS- Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos de laboratorio uniformemente, de manera que se eviten desviaciones en su desarrollo.

- Ordenar todos los procedimientos tcnicos de los Laboratorios Clnicos del Primer Nivel de Atencin, en un solo documento apropiado para responder a las necesidades de este nivel.

- Contribuir a la aplicacin de las medidas de bioseguridad y controles de calidad que deben cumplirse, cuando se desarrolle un procedimiento tcnico.

- Contar con un instrumento que sirva de gua para la evaluacin y monitoreo de las actividades de laboratorio.

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3. BIOSEGURIDAD

l elemento ms importante de la bioseguridad es el cumplimiento estricto de las prcticas y tcnicas de laboratorio estndar, pues ninguna medida, ni siquiera un excelente equipo sustituyen el orden y cuidado con el que deben ejecutarse los procedimientos.

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Todas las personas que trabajan en un laboratorio deben conocer los riesgos potenciales a los que se exponen y ser versados en las prcticas y tcnicas requeridas para manipular materiales infecciosos en forma segura.

Cuando ocurre un accidente es fundamental que se haga un anlisis de sus causas y se adopten medidas correctivas para evitar su repeticin.

Los accidentes biolgicos se producen generalmente por: - Aerosoles. - Inoculacin accidental. - Derrames y salpicaduras: - Salpicaduras en cara y ojos. - Derrames en la recepcin de muestras. - Heridas causadas por objetos punzantes o cortantes. -Salpicadurasenlasuperficiedetrabajoyfueradelazonadetrabajo.

Es de primordial importancia que todos los profesionales de Laboratorio conozcan: - Los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio. - La metodologa de trabajo del laboratorio. - El equipamiento del laboratorio. - Las medidas a tomar en caso de emergencia. - Los lineamientos y procedimientos contenidos en el Manual de Bioseguridad de los

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Laboratorios Clnicos edicin actualizada, al cual deben referirse. La importancia de respetar y hacer cumplir todo lo anterior.

El Jefe de Laboratorio es responsable de velar por el cumplimiento de las normas y reglamentos que aseguren la proteccin del personal; pero todo el personal es responsable no slo de su propia seguridad sino tambin la de sus compaeros de trabajo y el medio ambiente.

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4. CONTROL DE CALIDAD

l Control de calidad del laboratorio implica todo un conjunto de medidas encaminadas alograrunaadecuadaconfiabilidaddelosresultadosdelaboratorioytienecomo propsito garantizar que los resultados obtenidos sean acordes al estado de salud del paciente. El control de calidad es, por tanto, el mtodo mediante el cual se mide la calidad real, compararla con los estndares y actuar sobre la diferencia. Tiene dos objetivos fundamentales: mantener bajo control el proceso y eliminar las causas de errores.

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La calidad se obtiene y se mejora a lo largo de todo el proceso por lo que el control de calidad debe ejercerse en las tres fases del proceso: la fase pre-analtica, analtica y post-analtica.

La mayora de las tcnicas analticas cuantitativas implican diversas operaciones que estn sujetas a cierto grado de imprecisin y cierta posibilidad de error. El objetivo del control de calidad radica enasegurarquelosproductosfinales,esdecirlosvaloresanalticosquesonproducidosporun laboratorio clnico, sean suficientemente fiables y adecuados a la finalidad que persiguen. Este objetivo se cumple a medida que todo el personal del laboratorio sea consciente de las causas de las imprecisiones analticas y de las tcnicas disponibles para su deteccin, correccin y control.

Entre las principales variables que pueden evitar imprecisiones podemos citar: - Forma adecuada de obtencin de las muestras. - Calidad y estabilidad de los reactivos analticos. - Preparacin y capacitacin del personal tcnico. - Limpieza, mantenimiento y uso adecuado de las pipetas automticas. - Manuales para el usuario y mantenimiento de los equipos a utilizar. - Transferencia de los resultados sin prdidas, ni alteraciones, para la elaboracin de los informes.

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A continuacin se detallan aspectos principales de control de calidad en las diferentes reas:

4.1 CONTROL DE CALIDAD EN COPROLOGA- El tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y la observacin microscpica debe ser no mayor de tres horas para observar formas activas. - Tener especial cuidado en la utilizacin de frascos adecuados y limpios. - Efectuar el control de calidad del lugol y solucin salina 0.85% en el Laboratorio Central. - Todos los laboratorios deben enviar al Laboratorio Central para control de calidad el 10% de lminas de azul de metileno (PAM) realizadas. - Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad externo que le enve el Nivel Central.

4.2 CONTROL DE CALIDAD EN URIANLISIS- Correlacionar de lo observado en el examen qumico y microscpico de los siguientes Sparmetros: a)Nitritos positivos con bacterias presentes en el sedimento. b)Leucocitos por L con leucocitos presentes en el sedimento.

- Correlacionar la presencia de leucocitos con la presencia de bacterias observadas en el sedimento urinario.

- El tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y el procesamiento de la misma debe ser idealmente no mayor de dos horas.

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4.3 CONTROL DE CALIDAD EN QUMICA CLNICA- Llevar un registro diario del control de temperatura de las refrigeradoras y baos de Mara. - Calibrar el espectrofotmetro cada vez que se cambie la fuente de luz y al menos cada mes. - Registrar diariamente todas las lecturas de estndares y sueros controles internos los cuales sern procesados en cada corrida. - La separacin del suero del paquete globular no debe ser mayor de dos horas despus de obtenida la muestra. Una vez separados los sueros se deben refrigerar si no se procesan inmediatamente. - Observar diariamente los reactivos en busca de turbidez o cambio de color. En caso de deterioro se recomienda no utilizar. - Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad externo que le enve el Nivel Central cada ao.

4.4 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA- Investigar los resultados de hemoglobina cuando que no se correlacionen con el valor del hematocrito. - Determinar los tiempos de coloracin de los frotis con colorante Wright, siempre que se cambie el lote de colorante. - Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad externo de hematologa que les enve el Nivel Central cada ao.

4.5 CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOLOGA- Seguir rigurosamente las instrucciones del fabricante para la preparacin de los reactivos. - Dejar que las muestras y reactivos lleguen a temperatura ambiente antes de iniciar los procedimientos. - Evitar la combinacin de reactivos de diferentes Set. - Llevar un registro diario del control de temperatura de las refrigeradoras y baos de Mara. - Procesar los controles de las casas comerciales y el control interno en cada tiraje de muestras. Elaborar un protocolo de trabajo por cada tiraje de muestras.

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Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad externo de inmunologa que les enve el Nivel Central cada ao.

4.6 CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGAEn la toma de muestra se deben controlar los siguientes aspectos: - Tomar la muestra del sitio representativo del proceso infeccioso. - Evitar la contaminacin de la muestra. - Coleccionar el volumen adecuado de la muestra y en el frasco apropiado. En la coloracin se deben controlar los siguientes aspectos: - El control de calidad de los colorantes se debe realizar con cada nuevo lote (control de calidad ejercido por el Laboratorio Central). - Tener especial cuidado con el alcohol acetona, pues de este depende que la coloracin sea excesiva o dbil. - Controlar la no contaminacin de colorantes como la safranina o fucsina bsica, los cuales se pueden contaminar fcilmente. Controlarlafijacindelapreparacinpueselexcesodecalorproducedaoenlaparedcelularde las bacterias que pueden afectar, la retencin de los colorantes.

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5. COPROLOGA

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5.1 EXAMEN FSICO DE HECES 5.1.1. PROPSITO:Por medio de la observacin macroscpica de la muestra de heces determinar el color la consistencia, presencia de mucus, sangre, restos alimenticios o parsitos en estado larvario. 5.1.2. MUESTRA REQUERIDA: 5 gramos de heces recin emitidas, instruir al paciente que colecte en el frasco la porcin de muestra que evidencia el dao intestinal (Mucus, sangre, parsitos). No son recomendables las muestras obtenidas con laxantes o enemas. 5.1.3. MATERIALES: - Frascos plsticos de boca ancha y tapn de rosca con capacidad para 2 onzas. - Aplicadores de madera. - Guantes descartables. - Marcador de vidrio. - Papel lente. 5.1.4. PROCEDIMIENTO: - Observar el color de la muestra. - Observar la consistencia de la muestra. - Utilizar un aplicador de madera para buscar la presencia de mucus en la muestra. - Observar la presencia de restos alimenticios en la muestra. - Anotar los hallazgos. 5.1.5. FUENTES DE ERROR: Ingesta de medicamentos y algunos alimentos con colorantes.

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- Frascos sucios. - Contaminacin de las heces con orina.

5.1.6. FORMA DE REPORTE:- COLOR: Caf, amarillo, verde, rojo, aclico (blanco), negro. - CONSISTENCIA: Dura, cbalos, blanda, pastosa y lquida. - PRESENCIA DE MUCUS: Negativo o Positivo. - RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.

Valores de referencia: - COLOR: Caf. - CONSISTENCIA: Pastosa a blanda. - PRESENCIA DE MUCUS: No debe observarse. - RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos.

5.1.7. RESPONSABLE:Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.

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5.2 EXAMEN MICROSCPICO DE HECES 5.2.1. PROPSITO:Analizar microscpicamente una muestra de heces en busca de la presencia de leucocitos, parsitos protozoarios y metazoarios en sus diferentes estadios.

5.2.2. MUESTRA REQUERIDA:5 gramos de heces recin emitidas. No son recomendables las muestras obtenidas con laxantes o enemas.

5.2.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Lminas porta objeto. - Laminillas cubre objeto. - Lpiz marcador de vidrio. - Aplicaciones de madera. - Guantes descartables. - Solucin salina 0.85%. - Solucin de Lugol para heces. (Anexo 1) - Papel lente.

5.2.4. EQUIPO:- Microscopio

5.2.5. PROCEDIMIENTO:-Identificarlalminaportaobjeto - Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de solucin salina al 0.85%. - Seleccionar la parte ms representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay presencia de estos).

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- Agregar con un aplicador 1 a 2 mg de material fecal seleccionada y emulsionar. - Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto, colocndola en ngulo de 45 sobreelbordedelapreparacinybajndoloconcuidadoafindequenoquedenburbujas entre el cubre y el porta objeto. - Colocar en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir el procedimiento anterior. - Observar en forma sistemtica al microscopio, con el objetivo 10x y luego con el 40x. - Reportar todo lo observado. (Anexo 2)

Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural y con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas.

5.2.6. FUENTES DE ERROR:- Desecacin de la preparacin. - Preparacin muy gruesa o delgada. - Intensidad de luz inadecuada. - Contaminacin de la muestra con orina. - Dejar transcurrir ms de 3 horas despus de la recoleccin para observar formas activas en la muestra. - Omitir la preparacin y observacin con lugol. - No examinar en forma sistemtica. - Muestra de heces escasa o seca en el frasco.

5.2.7. FORMA DE REPORTE:PARSITOS: Anotar el nombre del gnero y especie, as como su estado evolutivo. LEUCOCITOS: Reportar el nmero de leucocitos por campo. ERITROCITOS: Reportar el nmero de eritrocitos por campo. RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.

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LEVADURAS: Escasas, moderadas o abundantes. RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.

Valores de referencia: PARSITOS: No se deben observar. LEUCOCITOS: No se deben observar. ERITROCITOS: No se deben observar. RESTOS ALIMENTICIOS: de escasos a moderados. LEVADURAS: No se deben observar. RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.


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5.3 PRUEBA DE AZUL DE METILENO 5.3.1. PROPSITO:Es la bsqueda de leucocitos polimorfonucleares y mononucleares en una muestra lquida coloreada conazulmetilenoloquepermiteidentificarsisetratadeunprocesoviralobacteriano.

5.3.2. MUESTRA REQUERIDA:5gr. de heces frescas y lquidas, instruir al paciente sobre la forma de colectar la muestra.

5.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS- Lmina portaobjeto. - Aplicadores de madera. - Aceite de inmersin. -Papelfiltro. - Embudo. - Bandeja o soporte de coloracin. - Colorante de azul metileno 0.1%. - Guantes descartables. - Marcador de vidrio. - Papel toalla. - Fsforos. - Papel lente.

5.3.4. EQUIPO:- Contador diferencial de clulas.

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- Microscopio. - Mechero.

5.3.5. PROCEDIMIENTO- Filtrar el colorante antes de utilizar. -Identificarelportaobjetoautilizar. - Realizar el extendido de muestra en las dos terceras partes de la lmina. - Dejar secar a temperatura ambiente. - Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero tres veces en forma horizontal. - Cubrir la lmina con azul de metileno de 30 a 60 segundos. - Eliminar el azl de metileno tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo hacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en que no hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula. - Dejar secar a temperatura ambiente. - Observar al microscopio con objetivo de inmersin 100x. - Contar 100 clulas blancas o leucocitos diferenciando los polimorfonucleares de los mononucleares.

5.3.6. FUENTES DE ERROR:- Extendidos gruesos. - Fijacin con excesivo calor. - Lminas sucias o grasosas. - Arrastrar la prepracin con un lavado brusco

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5.3.7. FORMA DE REPORTE:Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el predominio del que tenga mayor porcentaje.

Polimorfonucleares Mononucleares

........... por ciento. .... por ciento.

Interpretacin: Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un proceso infeccioso de origen bacteriano. Predominio de Mononucleares se asume que el proceso infeccioso es de origen viral.


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5.4 COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARA LA INVESTIGACIN DE COCCIDIOS 5.4.1. PROPSITO:La bsqueda de los ooquistes de coccidios en una coloracinteidaconZielhNeelsenmodificada, la cual se basa en el comportamiento cido resistente de la cubierta de estos parsitos, que se tien de rojo, destacndose sobre un fondo azul.

5.4.2. MUESTRA REQUERIDA:5 gr de heces fecales o esputo.

5.4.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Lminas portaobjeto esmerilada. - Aplicadores de madera. - Fucsina fenicada. - Azl de metileno. -Papelfiltro. - Embudo. - Alcohol cido. - Papel toalla. - Marcador de vidrio. - Aceite de inmersin. - Fsforos. - Guantes descartables. - Papel lente.

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5.4.4. EQUIPO:- Mechero. - Microscopio.

5.4.5. PROCEDIMIENTO- Filtrar los colorantes antes de utilizar. -Identificarlalminaenelextremoesmerilado. - Hacer un extendido de materia fecal sobre un portaobjeto en las dos terceras partes de la lmina (No ejercer presin para hacer e extendido). - Dejar secar el extendido a temperatura ambiente. - Fijar con calor pasndolo rpidamente tres veces sobre la llama de un mechero en forma horizontal. - Cubrir la preparacin con Fucsina fenicada por 20 minutos. - Eliminar la fucsina tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo hacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en que no hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula. - Decolorar con alcohol cido por 2 minutos. - Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante. - Cubrir la preparacin con azul de metileno por 1 minuto. - Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante. - Dejar secar a temperatura ambiente. - Observar al microscopio toda la preparacin con el objetivo 40x en busca de estructuras semejantes a los ooquistes del coccidio. (Anexo 2) - Identificarconelobjetivodeinmersin100x.

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5.4.6. FUENTES DE ERROR:-Nofiltrarloscolorantes. - Realizar extendidos muy gruesos. -Nodejareltiemposuficienteparaelsecadodelextendido. -Omitirlafijacinoexcesivocaloralfijarlapreparacin. - Incumplir los tiempos de coloracin. -Cubrirlapreparacinconinsuficientefucsina.

5.4.7. FORMA DE REPORTE:En presencia de ooquistes: Reportar: Se observan ooquistes de Isospora belli o Criptosporidium sp. o Cyclospora cayetanensis, segn lo encontrado.

En ausencia de ooquistes en la preparacin: Reportar: No se observan ooquistes.


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6. URIANLISIS

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6.1 TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA 6.1.1. PROPSITO:Obtener una muestra de orina con el volumen y condiciones adecuadas para realizar un anlisis fsico, qumico y microscpico.

6.1.2. MUESTRA REQUERIDA:30 mL de orina de chorro intermedio, recomendable la primera miccin de la maana.

6.1.3. MATERIALES:Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL limpio y seco.

6.1.4. PROCEDIMIENTO:- Limpiar cuidadosamente los genitales. -Descartarelinicioyelfinaldelamiccin;recolectarlaorinadelaporcinintermedia.(En el caso de la mujer separar los labios genitales). - Destapar y depositar la muestra de orina en un frasco plstico, transparente, limpio, de boca ancha con tapn de rosca y capacidad de 30 a 40 mL. - Tapar el frasco inmediatamente.

6.1.5. FUENTES DE ERROR:- Limpieza de genitales inadecuada. - Frascos sucios. - Tiempo prolongado entre la recoleccin y la entrega en el laboratorio. -Nodescartedelinicioyfinaldelamiccin.

6.1.6. RESPONSABLE:Paciente con instrucciones previas proporcionadas por el personal de laboratorio.

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6.2 EXAMEN FSICO DE ORINA 6.2.1. PROPSITO:Por medio de la observacin directa de la muestra de orina determinar el color y el aspecto de sta, lo cual puede sugerir una patologa del tracto urinario u otras enfermedades que estn en diferente localizacin, pero que sus manifestaciones secundarias son a nivel del rin.

6.2.2. MUESTRA REQUERIDA:30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10 mL de orina en muestra de nios.

6.2.3. MATERIALES:- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL. - Bolsa peditrica recolectora de orina. - Papel toalla. - Marcador de vidrio. - Guantes descartables.

6.2.4. PROCEDIMIENTO:-Verificarqueelfrascoestbienidentificadoycompletamentetapado. - Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo. - Observar color y aspecto. - Anotar lo observado.

6.2.5. FUENTES DE ERROR:- Frascos sucios. - Toma de muestra inadecuada. - Muestras medicamentosas.

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Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacin (no mayor de 2 horas)

6.2.6. FORMA DE REPORTE:Valores de referencia: COLOR: Amarillo. ASPECTO: limpia.


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6.3 EXAMEN QUMICO DE ORINA 6.3.1. PROPSITO:Determinar las sustancias qumicas presentes en una muestra de orina, as como su densidad y pH, a travs de las zonas de reaccin presentes en una tira reactiva.

6.3.2 MUESTRA REQUERIDA:30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10mL de orina en muestra de nios.

6.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL. - Bolsa peditrica recolectora de orina. - Tubos cnicos con capacidad de 15 mL. - Gradilla para tubos. - Papel toalla. - Marcador de vidrio. - Guantes descartables. - Tiras reactivas para orina.

6.3.4. PROCEDIMIENTO:-Identificareltubocnico. - Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo. - Verter la orina en el tubo cnico. - Introducir la tira reactiva en la orina. - Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente. - Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura. - Anotar los resultados.

Los cambios de color que aparecen despus de dos ms minutos carecen de diagnstica.

importancia

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6.3.5. FUENTES DE ERROR:- Muestras medicamentosas. - Frascos y tubos mal lavados. - Tiras reactivas de mala calidad o vencidas. - Cortar las tiras reactivas. - Leer las tiras reactivas despus del tiempo indicado por el fabricante.

6.3.6. FORMA DE REPORTE:pH: de 5 a 9. DENSIDAD: de 1.000 a 1.030. LEUCOCITOS: 0 a 500 Leucocitos por l. NITRITOS: Positivo Negativo. PROTENA: 0 a 1000 mg por dL. GLUCOSA: 0 - 1000 mg por dL CUERPOS CETNICOS: de una cruz a tres cruces. UROBILINGENO: de 200 mg/dL.


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7.5 CIDO RICO MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA CIDO RICO ACLARANTES DE LPIDOS 7.5.1. PRINCIPIO:El cido rico se determina despus de la hidrlisis enzimtica de la uricasa, que en presencia de un indicador que desarrolla color rojo-violeta que es proporcional a la concentracin de cido rico presente en la muestra.

7.5.2. MUESTRA REQUERIDA:Suero (dentro de las 24 horas no ingerir embutidos, mariscos y carnes rojas).

7.5.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Pipetas automticas. - Puntas plsticas. - Tubos. - Gradilla para tubos. - Marcador para vidrio. - Reactivo enzimtico. - Estndar de cido rico (concentracin segn lo indica el fabricante). - Sueros controles comerciales. - Papel toalla. -Papelparafilm. - Guantes descartables.

7.5.4. EQUIPO:- Espectrofotmetro. - Bao de Mara. con termmetro. - Reloj marcador.

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- Centrfuga. - Refrigeradora con termmetro.

7.5.5. PROCEDIMIENTO- Llevar los reactivos a temperatura ambiente. - Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabri cante en el cual estar indicado la estabilidad del reactivo. - Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control normal.

AGUA DESTILADA ESTANDAR MUESTRA SUERO CONTROL REACTIVO

BLANCO 20 L ---------------------------1000 L

ESTANDAR ---------20 L ------------------1000 L

MUESTRA ------------------20 L ---------1000 L

CONTROL ---------------------------20 L 1000 L

En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades. - Mezclar e incubar de acuerdo a las indicaciones del fabricante. - Leer a la longitud de onda indicada por el fabricante generalmente de 500 a 546 nm y de acuerdo al equipo utilizado.

7.5.6. FUENTES DE ERROR- No llevar los reactivos a temperatura ambiente. - Pipetas mal calibradas. - Puntas en mal estado. - No leer en la longitud de onda recomendada. - Tubos sucios. - Agua destilada de mala calidad. - Reactivos vencidos o en mal estado. - Pipeteado inadecuado.

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7.5.7. FORMA DE REPORTELos valores de cido rico se reportan en mg/dL (Anexo 4).

Clculo:

Lectura de muestra Concentracin= Lectura del estndarSe puede calcular usando factor de calibracin:

X concentracin del estndar (mg/ dL)

Concentracin del estndar Factor de calibracin= cido rico en mg/dL= Lectura del estndar Factor de calibracin X Lectura de la muestra

La prueba es lineal hasta la concentracin de 20 mg/dL. Si la concentracin de cido rico en la muestra es superior a estos lmites, diluir la muestra 1+1 consolucinsalinafisiolgicayrepetirladeterminacin. Multiplicar el resultado por 2.

Valor de referencia: Hombre: Mujer: 3.4 7.0 mg/dL. 2.4 5.7 mg/dL.


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8. HEMATOLOGA

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8.1 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXMENES HEMATOLGICOS

8.1.1. PROPSITO:Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematolgicas.

8.1.2. MUESTRA REQUERIDA:Sangre capilar, Obtener 5 capilares heparinizados.

8.1.3. MATERIALES:- Torunda de algodn. - Alcohol etlico (70%). - Marcador de vidrio. - Capilares heparinizados. - Plastilina para sellar capilares con su respectiva base numerada. - Lancetas desechables. - Lminas esmeriladas. - Guantes descartables.

8.1.4. PROCEDIMIENTO:- Lavar, secar las manos y colocar los guantes. - Explicarle al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar. - Seleccionar el dedo anular de la mano a puncionar y dar masaje para mejorar la irrigacin sangunea. - Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70%. - Con lanceta desechable efectuar la puncin limpia y rpida de 2 a 3mm. de profundidad. - Eliminar la primera gota de sangre con un trozo de algodn seco. - Colocar el capilar de modo que penetre la sangre libremente.

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- Cuando se ha obtenido la cantidad de sangre adecuada se presiona el lugar de la puncin con un trozo de algodn humedecido con alcohol etlico al 70% hasta que cese el sangramiento. - Colocar los capilares verticalmente en la plastilina.

8.1.5. FUENTES DE ERROR:- Presin excesiva hace que salga lquido intersticial que puede diluir la muestra y acelerar la coagulacin. - Puncin inadecuada. - Puncionar con el dedo hmedo.


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8.2 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES HEMATOLGICOS 8.2.1. PROPSITO:Obtener sangre venosa para realizar pruebas hematolgicas.

8.2.2. MUESTRA REQUERIDA:De 2 a 3 mL de sangre venosa con anticoagulante para hematologa (se emplean de 1 mg de EDTA por mL de sangre).

8.2.3. MATERIALES:- Jeringa estril para extraer 3 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco. - Torundas de algodn. - Alcohol etlico (70%). - Marcador de vidrio. - Lminas esmeriladas. - Torniquete. - Tubos con anticoagulante 12 x 75 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin al vaco. - Gradilla. - Guantes decartables.

8.2.4. PROCEDIMIENTO:- Lavar, secar las manos y colocarse los guantes. -Identificareltuboylalminaadecuadamente. - Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar. - Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de sangradebecontarconsuficienteiluminacin.

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- Seleccionar la vena apropiada para la puncin. - Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70% de adentro hacia fuera. - Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas. - Proceder a puncionar la vena seleccionada. - Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar. - Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm. - Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en la jeringa hasta llenar con

la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado al vaco introducir el tubo Sen el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se atraviese el extremoinferiordelaaguja,paraquelasangrefluyahaciaeltuboporefectodelvaco. - Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja. - Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al pacientequepresionefirmementelatorunda durante 3 minutos con el brazo extendido. - Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la sangre por las paredes del mismo. - Mezclar la sangre invirtiendo los tubos suavemente varias veces. -Verificarnuevamentelaidentificacindelpaciente.

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8.2.5. FUENTES DE ERROR:- Mezcla inadecuada de la sangre. - Relacin inadecuada de sangre y anticoagulante. - Prolongada aplicacin del torniquete. - Extraccin violenta de la sangre, que puede provocar hemlisis. - Empleo de tubos mal lavados. - Dejar los tubos con muestras destapados (evaporacin del plasma, y contaminacin).


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8.3 PREPARACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEOS

8.3.1. PROPSITO:Obtencin de un frotis sanguneo coloreado para el reconocimiento de los elementos celulares de la sangre.

8.3.2. MUESTRA REQUERIDA:Sangre capilar o venosa recin extrada sin anticoagulante o sangre con anticoagulante EDTA.

8.3.3. MATERIAL Y REACTIVOS:- Portaobjeto de vidrio con extremo esmerilado. - Alcohol etlico al 70%. - Torunda de algodn. - Marcador de vidrio. - Bandeja o soporte para la coloracin. - Aceite de inmersin. - Reloj marcador. - Perilla de hule. - Papel toalla. - Guantes descartables. - Solucin de Wright. - Buffer pH 6.8.

8.3.4. PROCEDIMIENTO:- Antes de utilizar los portaobjetos de vidrio, limpiarlos con alcohol y aclarar con agua. -Identificarlalminaadecuadamenteenelextremodelportaobjeto(parteesmerilada). - Colocar en el portaobjeto una pequea gota de sangre de 2 mm de dimetro a una distancia de 2 a 3 mm del extremo del portaobjeto y hacer rpidamente el extendido. (Anexo 6)

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- Para evitar la coagulacin; se puede utilizar sangre con EDTA. (Siempre conviene realizar cuando menos dos frotis). - Poner la lmina extensora a un ngulo de 45 del portaobjeto y moverla hacia atrs para que haga contacto con la gota, que debe extenderse rpidamente. - El extendido debe tener unos 30 mm. de largo. (Anexo 6). - Dejar secar a temperatura ambiente. - Colocar la preparacin de sangre, completamente seca, sobre un soporte. (no necesita fijacinpreviapueselmetanoldelWrightfijalapreparacin). - Cubrir todo el frotis con coloracin de Wright y dejarlo en reposo 3 minutos (o el tiempo necesario segn la maduracin del colorante). - Agregar una cantidad igual de buffer (pH 6.8) evitando derramar el Wright, mezclar con una perilla de hule con suavidad para asegurar una mezcla uniforme, aparecer una pelcula verde metlico, dejarlo en reposo por 5 minutos o el tiempo necesario segn la maduracin del Wright. - Lavar la lmina con agua de chorro hasta quitar el exceso de la mezcla. - Limpiar la parte posterior del portaobjeto con una torunda de algodn alcohol, para eliminar todos los restos de colorante. impregnada con

- Dejar secar la preparacin al aire colocando la lmina en posicin vertical en una rejilla para portaobjeto.

8.3.5. FUENTES DE ERROR:- Falta de mezclado de la sangre previo a la elaboracin del frotis -Irregularidadesenlasuperficiedelfrotisyespaciosenblanco. - Que el frotis se extienda hasta el borde de la lmina. - Extendidos gruesos o muy delgados. - Tiempos de coloracin inadecuados. - Mal lavado de la lmina. - Buffer con pH muy cido o alcalino. -FaltadefiltracindelcolorantedelWright. - Uso de portaobjetos con polvo, grasa o huellas dactilares.

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8.4 EXAMEN MICROSCPICO DEL FROTIS SANGUNEO PARA FRMULA DIFERENCIAL 8.4.1. PROPSITO:Establecer y evaluar las caractersticas morfolgicas de cada tipo de clulas y ver la frecuencia de las diferentes lneas leucocitarias.

8.4.2. MUESTRA REQUERIDA:Frotis de Sangre coloreado.

8.4.3. MATERIALES:- Frotis de sangre coloreado. - Aceite de inmersin. - Papel limpia lente. - Guantes descartables.

8.4.4. EQUIPO:- Microscopio con objetivo 40x y 100x. - Contmetro diferencial manual.

8.4.5. PROCEDIMIENTO:- La observacin inicia con el objetivo 40x para obtener un cuadro general del nmero de clulas, la distribucin de las mismas y la calidad de la tincin. - Seleccionar las reas a observar con objetivo de inmersin 100x buscando una distribucin homognea de las clulas. -Realizarelrecuentodiferencialidentificandolascaractersticasygradodedesarrollode las clulas; estos se reportan en porcentajes para lo cual tiene que contarse un mnimo de 100 leucocitos estos pueden convertirse en nmero de clulas por mm (nmero absoluto). - Observar en los eritrocitos: el tamao, la forma, la reaccin de coloracin, las inclusiones intracitoplasmticas y la presencia del ncleo (eritroblastos).

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8.4.6. FUENTES DE ERROR:- Observacin de los leucocitos en los extremos de la lmina. - Realizar el recuento diferencial con un objetivo que no sea el de inmersin. - Hacer la frmula diferencial en base de menos de 100 clulas blancas.

8.4.7. FORMA DE REPORTE:El recuento diferencial de leucocitos se reporta en trminos porcentuales segn las diferentes lneas observadas.

Valores de referencia:

LEUCOCITOS NEUTRFILOS SEGMENTADOS NEUTRFILOS EN BANDA LINFOCITOS EOSINFILOS BASFILOS MONOCITOS

NIOS (1-8 aos) 20 45 % 04% 40 60 % 15% 01% 28%

ADULTOS 60 70 % 26% 15 40 % 14% 01% 28%

Las cifras de Leucocitos tambin pueden expresarse en valores absolutos, aplicando la siguiente formula:

NMERO DE GB X C/U DE LA FORMULA DIFERENCIAL (N, L ,B, M, E) 100 %GB: N: L: B: M: E. Glbulos Blancos. Neutrfilos. Linfocitos. Basfilos. Monocitos. Eosinfilos.

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Esto nos dar como resultado el valor absoluto de leucocitos por milmetro cbico, donde la suma es igual al recuento del total de los leucocitos.


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8.5. FROTIS DE SANGRE PERIFRICA 8.5.1. PROPSITO:Observacin detallada de todos los elementos de la sangre, con el fin de evaluar la condicin hematolgica del paciente.

8.5.2. MUESTRA REQUERIDA:Frotis de sangre perifrica coloreado con Wright.

8.5.3. MATERIALES:- Aceite de inmersin. - Papel limpia lente.

8.5.4. EQUIPO:- Microscopio con objetivo 40x y 100x.

8.5.5. PROCEDIMIENTO:Cada tcnico debe aprender a observar todos los elementos del frotis mientras lleva a cabo el recuentodiferencial.Debeformarelhbitodeverificarlospuntossiguientes. ERITROCITOS: - Tamao: microcitosis, macrocitosis y normocitos. El grado de variacin en tamao se reduce al trmino de anisocitosis. - Forma: esferocitos, codocitos, eliptocitos, megalocitos, drepanocitos, acantocitos, equinocitos etc. El grado de variacin en forma se reduce al trmino de poiquilocitosis. - Concentracin de hemoglobina: Grado importante de hipocroma, e hipercroma aparente, observar el aumento aparente o evidente de la proporcin de glbulos rojos policromticos. - Otros hallazgos anormales:Lapolicromatofilia(basfiliadifusa),punteadobasfilo,anillo de Cabot, cuerpos de Howell-Joly, etritroblastos, las clulas parasitadas y la formacin de Rouleaux.

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LEUCOCITOS: - Observar la madurez de los leucocitos, el nmero promedio, anormalidades morfolgicas, signos de malignidad, la variante de leucocitos que predominan. - Comparar el recuento de leucocitos por milmetro cbico con lo observado en el frotis.

PLAQUETAS: - Observar si se encuentran en cantidades aproximadamente normales (de tres a ocho plaquetas por cien glbulos rojos). La disminucin de las plaquetas en un frotis puede deberse a la manera de realizarlo, pero su falta o su disminucin considerable, en un frotis bien hecho pueden hacer sospechar de trombocitopenia. Debe observarse si las plaquetas que se encuentran parecen normales o existen muchas formas gigantes (macroplaquetas) o notablemente pequeas. - Comparar el recuento de plaquetas por milmetro cbico con lo observado en el frotis.

8.5.6. FUENTES DE ERROR:- Observar los elementos celulares en la parte ms gruesa del frotis. - Coloracin defectuosa del frotis. - Observar el extendido con un objetivo diferente al de inmersin. - Equipo en mal estado. - Aceite de inmersin de mala calidad o en malas condiciones.

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8.5.7. FORMA DE REPORTE:LNEA ROJA: - Anisocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio). - Poiquilocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio). - Hipocromia: leve, moderada o severa. - Otros: reportar cualquier hallazgo anormal.

LNEA BLANCA: - Madurez de los leucocitos. - Variante de leucocitos que predomina. - Alteraciones encontradas en los leucocitos.

LNEA PLAQUETARIA: - Cantidad. - Tamao: macro o micro plaquetas.

Valores de referencia: Eritrocitos normocrmicos. Leucocitos maduros sin presencia de anormalidades. Plaquetas distribucin y tamao normal, comparar los observado en recuento con mm .


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8.6. HEMATOCRITO 8.6.1. PROPSITO:El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados en porcentaje del volumen de sangre como una fraccin del volumen de sangre, para determinar si un paciente presenta o no anemia.

8.6.2. MUESTRA REQUERIDA:Sangre venosa con EDTA o sangre capilar tomada directamente en tubos capilares heparinizados.

8.6.3. MATERIALES:- Tubos capilares heparinizados o no heparinizados. - Plastilina. - Lector de hematocrito.

8.6.4. EQUIPO:- Micro centrfuga para hematocrito con una fuerza de 10,000 - 13,000 rpm.

8.6.5. PROCEDIMIENTO:- Llenar el tubo de micro hematocrito mediante accin capilar, ya sea por una puncin que hacequelasangrefluyalibrementeoporsangrevenosabienmezclada.Lostuboscapilares deben estar llenos en dos terceras partes. - El extremo opuesto y exento de sangre se llena con plastilina para sellarlo. - Colocar el capilar sellado en una centrfuga para el micro hematocrito, con el extremo abierto hacia el centro de la microcentrfuga. - Centrifugar a velocidades de 10,000 a 13,000 rpm por 5 minutos. - Despus de centrifugado leer en la tabla para hematocrito haciendo coincidir el menisco delplasmaconelfinaldelamarcadelatablayelfondodelempacadodeeritrocitosque coincidan con el inicio de la marca de la tabla. - Leer siempre en la direccin de la numeracin ascendente cuantos mL de empacados de eritrocitos tiene la muestra.

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8.6.6. FUENTES DE ERROR:- Presencia del lquido intersticial si se obtiene de una puncin dactilar. - stasis prolongado en la toma de la muestra. - Exceso de anticoagulante. - Llenado incorrecto del tubo capilar. - Mezcla inadecuada de la sangre. - Incluir en la lectura la capa de leucocitos. - Lectura del hematocrito en posicin paralela. - Evaporacin del plasma durante la centrifugacin. - Dejar transcurrir el tiempo sin hacer la lectura. - Formacin de burbujas en el plasma. - Centrifugacin inadecuada. - Instrumento de lectura en malas condiciones o deteriorados.

8.6.7. FORMA DE REPORTE:Se reporta el volumen de eritrocitos empacados en porcentaje del volumen total.

Valores de referencia: Hombre: Mujer: Nios: Recin nacidos: 42%-51% 38%-42% 33%-38% Hasta 55%

RESPONSABLE:Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.

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8.7. HEMOGLOBINA MTODO DE LA CIANAMETAHEMOGLOBINA 8.7.1. PROPSITO:Evaluar la presencia y la severidad de la anemia. Este mtodo consiste en efectuar una dilucin exacta de sangre en una solucin que contiene ferrocianuro de potasio, que convierte la hemoglobina en cianametahemoglobina y se compara colorimetricamente con una solucin patrn de cianametahemoglobina de concentracin exacta y estable.

8.7.2. MUESTRA REQUERIDA:Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.

8.7.3. MATERIAL Y REACTIVO:- Cubetas estandarizadas de lectura. - Pipeta automtica de 20 L. - Tubos de 13 x 100 mm. - Gradilla para tubos. - Marcador de vidrio. - Puntas plsticas. -Papelparafilm. - Guantes descartables. - Pipeta serolgica. - Propipeta o bulbo de hule. - Reactivo de cianametahemoglobina. - Estndar de hemoglobina.

8.7.4. EQUIPO:- Espectrofotmetro. - Mezclador mecnico (opcional).

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Reloj marcador.

8.7.5. PROCEDIMIENTO:- Hacer una serie de tres tubos con el estndar de hemoglobina para calcular el factor de calibracin. - Colocar al primer tubo 5 mL de estndar puro. - Colocar al segundo tubo 2.5 mL de estndar puro. - Colocar al tercer tubo 1 mL de estndar puro. - Llevar al volumen de 5 mL con cianametahemoglobina el segundo y tercer tubo. - Mezclar y dejar reposar 10 minutos. - Leerlos en espectrofotmetro a 540 nm y anotar la densidad ptica de los tubos. - Obtener la concentracin de cada tubo en gramos por decilitros. - Dividir la concentracin de cada tubo entre la densidad ptica. - Sumar los 3 factores y sacar un promedio. - Este ser el factor de calibracin por el cual se multiplicarn las densidades pticas de las muestras. (Anexo 7) - La preparacin de la cianametahemoglobina estar sujeto a las indicaciones del fabricante del reactivo. - Medir exactamente 5 mL solucin de cianametahemoglobina en un tubo de 13x100 mm. - Con pipeta automtica colocar 20 microlitos de sangre. - Mezclar bien y dejar reposar por 10 minutos. - Transferir a la cubeta de lectura y leer en el espectrofotmetro a 540 nm.

8.7.6. FUENTES DE ERROR:- Toma inadecuada de muestra. - stasis prolongada que resulta de dejar un torniquete en el brazo. - Presencia de lquido insterticial que diluye la muestra de sangre. - Mezclar incorrectamente de la muestra. - Errores de pipeteado o dilucin.

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- Coagulacin de la muestra. - Sangre hiperlipmica (afecta el color) - Numero alto de glbulos blancos por mm. cbico. - Calibracin incorrecta. - Reactivo expuesto a la luz.

8.7.7. FORMA DE REPORTE:La hemoglobina se reporta en gr/dL. Calculo:

Lectura de muestra x Concentracin de stndar Lectura del estndarValores de referencia: Hombre: Mujer: Nios: Recin nacidos: 14.0-17.0 gr/dL 12.5-15.0 gr/dL 11.0-13.0 gr/dL Hasta 18 gr/dL


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8.8. RECUENTO DE LEUCOCITOS 8.8.1. PROPSITO:Evaluar la cantidad de clulas nucleadas que se encuentran en la muestra de sangre (leucocitos y eritroblastos).

8.8.2. MUESTRA REQUERIDA:2-3 mL de sangre venosa con EDTA o sangre capilar.

8.8.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Tubos de 12x75 mm. - Cmara de Neubauer. - Laminilla para cmara de Neubauer. - Pipeta automtica de 20 L. - Puntas plsticas. - Guantes descartables. - Gradillas para tubos. - Acido actico glacial al 3%.

8.8.4. EQUIPO:- Microscopio. - Contmetro manual. - Agitador.

8.8.5. PROCEDIMIENTO (Tcnica en tubo):- Colocar 0.4 mL de cido actico glacial al 3% en un tubo 12x75mm. - Mezclar perfectamente la sangre, y tomar exactamente 20 L con pipeta automtica. Y colocarla en el tubo que contiene el acido actico glacial al 3 % lo que hace una dilucin de la sangre 1:20.

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- Mezclar por un mnimo de 2 minutos. - Dispensar con pipeta automtica o con capilar la dilucin en el borde de la laminilla para cmara Neubauer. (Anexo 8) - Esperar 3 - 5 minutos Para que la clula se estabilicen. - Luego se procede a contar los glbulos blancos en el microscopio con el objetivo 10x y con poca luz en las dos reas primarias opuestas de la cmara, contar las clulas que aparecen. Cuando el trabajo no es excesivo se cuentan las cuatro reas primarias para tener un dato ms exacto. - En caso de una leucopenia de menos de 1,000 leucocito/mm, la dilucin se hace 1:10. - En caso de una leucocitosis de mas de 30,000 leucocito/mm, la dilucin se hace 1:200 con diluyente de leucocitos.

8.8.6. FUENTES DE ERROR:- Desintegracin de los leucocitos cuando se deja la muestra mucho tiempo sin procesar. - Pipeta mal calibradas. - Dilucin incorrecta. - Llenado incorrecto de la cmara. - Presencia de levaduras o suciedad en el liquido de dilucin. - Calculo errneo de las clulas contadas. - Usar cmara y laminilla sucios y hmedos. - Usar laminillas corrientes. - Puntas defectuosas. - Cmaras de mala calidad.

8.8.7. FORMA DE REPORTE:Reportar el nmero de leucocitos contados en las dos reas opuestas de la cmara y reportar por mm.

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Clculos: - Cuando la dilucin es 1:20 el numero de leucocitos contados en las dos reas primarias opuestas de la cmara se multiplica x 100 = N de leucocitos/mm, y se multiplicar por 50 si se cuentan 4 rea primarias. - Cuando la dilucin es 1:10 el factor por el cual se multiplican los leucocitos, ser 50 si se cuentan dos reas primarias opuestas y ser 25 si se cuentan 4 reas primarias. - Cuando la dilucin es 1:200 y se cuenta toda el rea central, el factor ser 2,000. Cuando en una frmula diferencial se obtienen ms de 10 eritroblastos por 100 clulas blancas contadas, se har la siguiente correccin, debido a que el lquido de dilucin de los leucocitos no destruye el ncleo de los eritroblastos y cuando se efecta el recuento se cuenta como si fueran leucocitos. Correccin

N de clulas contadas en cmara x 100 100 + % de eritroblastos encontrados

= N leucocitos verdaderos

Si en una formula diferencial salieron 80% de eritroblastos, en realidad se han contado 180 clulas nucleadas, luego de 180 clulas Nucleadas 80 son eritroblastos, en el nmero de leucocitos contados se obtendr una cantidad X de eritroblastos.

Valores de referencia: Adultos: Nios: Recin nacidos: 5,000-10,000 x mm 5,000-12,000 x mm 10,000-30,000 x mm


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8.9. RECUENTO DE PLAQUETAS (Mtodo directo en cmara) 8.9.1. PROPSITO:Evaluar la cantidad de plaquetas existentes en la sangre para lo cual se diluye una muestra de sangre con una sustancia con un lquido diluyente que hace a las plaquetas ms visibles.

8.9.2. MUESTRA REQUERIDA:Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.

8.9.3. MATERIAL Y REACTIVOS:- Tubos de vidrios 12x75mm. - Cmara Neubauer. - Laminilla para cmara de Neubauer. - Tubo capilar. -Papelfiltro. - Caja de Petri. - Pipeta automtica de 10 L. - Puntas plsticas. - Guantes descartables. - Gradilla para tubos. - Solucin de Gower.

8.9.4. EQUIPO:- Microscopio. - Contmetro manual. - Reloj marcador.

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8.9.5. PROCEDIMIENTO (tcnica en tubo):- Colocar 2 mL de reactivo de Gower en un tubo de 12 x75 mm. - Mezclar bien la muestra de sangre varias veces. - Colocar exactamente 10 L de sangre en el tubo que contiene el diluyente. - Mezclar por un mnimo de 3 minutos. - Dispensar con pipeta automtica o con capilar la dilucin en el borde de la laminilla de la cmara Neubauer. (Anexo 8) -Colocarlacmaraenunacajadepetrisobreundiscodelpapelfiltrohmedo,paraevitar la evaporacin, se tapa y se espera de 10 a 20 minutos para que se depositen bien las plaquetas. - Proceder al conteo de las plaquetas en el microscopio con el objetivo 40x y poca luz. - Contar toda el rea central. - Observar las plaquetas como pequeas partculas de gran refringencia. - Correlacionar el recuento de plaquetas obtenido en la cmara con las plaquetas que se observan en el frotis.

8.9.6. FUENTES DE ERROR:- Desintegracin de las plaquetas cuando se deja mucho tiempo la muestra sin procesar, y adherencia a las paredes del tubo de vidrio. - Tomar la muestra de sangre en rea con cianosis. - Pipetas mal calibradas. - Dilucin incorrecta. - Mal almacenamiento del lquido de dilucin el cual debe conservarse en refrigeracin. - Presencia de bacterias en el lquido de dilucin. -Faltadefiltracindeldiluyenteantesdesuuso. - Cmara y laminilla sucias o hmedas. - Uso de laminilla corriente. - No comparar el recuento directo con el indirecto.

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8.9.7. FORMA DE REPORTELas plaquetas contadas en la cmara se multiplican por el factor correspondiente y se reportan por mm de sangre. Clculo:

N de plaquetas contadas X 2,000 = N de plaquetas/mm

Valores de referencia: 150,000-450,000/mm


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8.10. ESTIMADO DEL NMERO DE PLAQUETAS (Mtodo indirecto) 8.10.1. PROPSITO:Evaluar el nmero de plaquetas presentes en la sangre, a travs de la observacin de un frotis coloreado,conelfindecompararconelconteodirecto.

8.10.2. MUESTRA REQUERIDA:Frotis de sangre coloreado con Wright.

8.10.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Papel limpia lentes. - Aceite de inmersin.

8.10.4. EQUIPO:- Contmetro. - Microscopio.

8.10.5. PROCEDIMIENTO:- Colocar la lmina coloreada en la platina del microscopio. - Observar con el objetivo 40x. - Colocar una gota de aceite de inmersin en la lmina coloreada. - Observar con el objetivo 100x. - Contar las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos deben contener aproximadamente 100 glbulos rojos).

8.10.6. FUENTES DE ERROR:- Hacer el conteo en los mrgenes del frotis. - Aceite de inmersin de mala calidad o contaminado.

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- No comparar el recuento indirecto con el directo.

8.10.7. FORMA DE REPORTE:Calcular el nmero de plaquetas de la siguiente forma:

Estimado de plaquetas mm =

No. Plaquetas observadas X No. Glbulos Rojos mm 1,000 Hematocrito + 5% del Hematcrito 100,000

No. Glbulos Rojos mm = 8.10.8. RESPONSABLE:

Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.

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8.11. RECUENTO DE RETICULOCITOS 8.11.1. PROPSITO:Evaluar el funcionamiento de la mdula sea ya que los reticulocitos son glbulos rojos jvenes que constituyen un ndice de la respuesta eritropoytica.

8.11.2. MUESTRA:Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.

8.11.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Tubos de 12 x 75 mm. - Capilares. - Lminas portaobjeto en buen estado. - Gradilla para tubos. - Guantes descartables. - Azul de cresil brillante.

8.11.4. EQUIPO:- Microscopio. - Bao de Mara o estufa a 37 C. - Contmetro manual.

8.11.5. PROCEDIMIENTO:- Verter un capilar lleno de azul cresil brillante y dos capilares llenos de sangre en un tubo 12x75 mm. - Mezclar bien e incubar a 37C o a temperatura ambiente durante 15 minutos. - Preparar frotis de la mezcla de la forma usual, dejar secar. - Leer al microscopio con objetivo de inmersin.

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Contar 10 campos en donde se observen 100 eritrocitos por campo, anotar los reticulocitos observados.

8.11.6. FUENTES DE ERROR:- No incubar los capilares a 37C. - Colorante con precipitados. - Observar en campos donde los eritrocitos no estn uniformemente distribuidos.

8.11.7. FORMA DE REPORTE:Se reportan los reticulocitos por cada 100 eritrocitos observados. Clculo:

% Reticulocitos =

Total de reticulocitos observados en 10 campos

10

Valores de referencia: Adultos: Recin nacidos: 0.5% - 1.5% 2.5% - 6.5%


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8.12. VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIN 8.12.1. PROPSITO:La velocidad de Eritrosedimentacin mide la velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos en el plasma.

8.12.2. MUESTRA REQUERIDA:3 mL de Sangre venosa con EDTA.

8.12.3. MATERIALES:- Agujas Wintrobe. - Tubos Wintrobe. - Soporte para tubos de sedimentacin. - Guantes descartables.

8.12.4. EQUIPO:- Reloj marcador.

8.12.5. PROCEDIMIENTO:- Mezclar la muestra de sangre. - Llenar un tubo de Wintrobe hasta la seal cero, introduciendo cuidadosamente la aguja de Wintrobe adaptada a una jeringa, conteniendo la sangre hasta el fondo del tubo, cuidar de que no formen burbujas. - Colocar en el soporte, en posicin perfectamente vertical durante 1 hora. - A la hora exacta leer de arriba hacia abajo el valor numrico en mm, midiendo la distancia que hay entre el punto ms bajo del menisco de la superficie y el lmite superior del sedimento de glbulos rojos; los mm, ledos corresponden a la velocidad de sedimentacin por hora.

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Toda eritrosedimentacin con hematocrito menor de 40%, se corregir usando la tabla de correccin de la manera siguiente: - Llevar valores de hematocrito y sedimentacin a la tabla de correccin. - Tome el punto dnde se interceptan ambos, este punto caer sobre una de las lneas curvas de dicha tabla, la que deber seguir hacia la derecha y abajo, hasta el punto de intercepcin con la lnea negra mas gruesa, que corresponde al valor de hematocrito de 40%. - Lea a la derecha de la tabla el valor de eritrosedimentacin corregida, este valor es el que se deber reportar.

8.12.6. FUENTES DE ERROR:- Dejar transcurrir ms de 2 horas entre la toma de la muestra y el montaje de la prueba. - Efectuar la prueba en temperaturas muy altas o muy bajas. - No leer a la hora exacta. - Presencia de cogulo en la sangre. - No realizar la debida correccin cuando es necesaria. - No hacer una buena mezcla de la muestra. - Que el tubo no este en posicin completamente vertical. - La presencia de burbujas al llenar el tubo.

8.12.7. FORMA DE REPORTE:Velocidad de eritrosedimentacin se expresa en milmetros por hora (mm/h). Valores de referencia: Mujeres: Hombres: Nios: Recin nacidos: 0-15 mm/h 0-7 mm/h 0-20 mm/h 0-2 mm/h


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8.13. TIEMPO DE SANGRAMIENTO 8.13.1. PROPSITO:Evaluar el funcionamiento y nmero de plaquetas as como la contractilidad capilar.

8.13.2. MUESTRA:Sangre capilar del dedo o del lbulo de la oreja.

8.13.3. MATERIALES:- Lanceta descartable estril. -Papelfiltro. - Torundas de algodn humedecidas con alcohol. - Guantes descartables.

8.13.4. EQUIPO:- Cronmetro.

8.13.5. PROCEDIMIENTO:- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes. - Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar. - Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin. - Puncionar el dedo ndice a modo que corte transversalmente la direccin de las huellas digitales, o el lbulo de la oreja. -Secarconelpapelfiltrocadamediominutohastaqueceseel sangramiento. - Realizar el secado en forma descendente o circular sin tocar la piel. - Anotar el tiempo desde que se punciona hasta que cesa el sangramiento y reportar.

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8.13.6. FUENTES DE ERROR:-Presionareldedoparaquefluyalasangre. -Rozarelpapelfiltroaldedo. - Puncin inadecuada. - No marcar el tiempo en el momento de la puncin. - Puncionar el rea seleccionada cuando an est hmeda.

8.13.7. FORMA DE REPORTE:Reportar el tiempo de sangrado en minutos y segundos. Valor de referencia: 1 - 4 minutos.


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8.14. TIEMPO DE COAGULACIN. MTODO DE LEE Y WHITE 8.14.1. PROPSITO:Evaluar en forma global el mecanismo intrnseco de la coagulacin.

8.14.2. MUESTRA:Sangre venosa.

8.14.3. MATERIALES:- Jeringas descartables. - Tubos 12x75mm. - Torundas de algodn. - Gradillas para tubos. - Alcohol etlico al 70%. - Torniquete. - Guantes descartables.

8.14.4. EQUIPO:- Bao de Mara a 37C. - Reloj marcador. - Termmetro.

8.14.5. PROCEDIMIENTOS:- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes. -Identificareltubodeacuerdoalasolicitud. - Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar. - Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin.

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- Obtener sangre venosa con una jeringa descartable y estril. - Poner en marcha el cronmetro en el momento en que la sangre penetre en la jeringa. - Verter cuidadosamente 1 CC de sangre en 3 tubos, mantenerlos en bao Mara a 37C. - Invertir cada medio minuto (sin agitar) los 3 tubos hasta que cada uno pueda invertirse sin que se vierta su contenido. - Tomar el tiempo de coagulacin de cada uno de los tubos y luego sacar un promedio de los tres.

8.14.6. FUENTES DE ERROR- Uso de material mal lavado. - No tomar el tiempo en el momento de la extraccin. - Temperatura del Bao de Mara inadecuada. - No cumplir con los intervalos de tiempo indicados en el procedimiento. - Invertir bruscamente el tubo.

8.14.7. FORMA DE REPORTE:El tiempo de coagulacin se reporta en minutos.

Valores de referencia: 5-10 minutos.


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8.15. CONCENTRADO DE STROUT 8.15.1. PROPSITO:Concentrar los parsitos por medio de la centrifugacin repetida de tal modo que permita observarlos microscpicamente.

8.15.2. MUESTRA REQUERIDA:5 10 mL de sangre venosa sin anticoagulante o sangre en tubos con anticoagulante. La sangre se obtendr posterior a los 6 das de la picadura de la chinche.

8.15.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Jeringas descartables. - Tubos de 13x100 mL. - Pipeta Pasteur. - Portaobjetos. - Cubreobjetos. - Torundas de algodn humedecidas con alcohol. - Aplicadores de madera. - Torniquete. - Guantes descartables. - Colorante Giemsa o Wright. - Buffers pH 6.8.

8.15.4. EQUIPO:- Centrfuga. - Microscopio. - Reloj marcador.

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8.15.5. PROCEDIMIENTO:- Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin. - Extraer 5 10 mL de sangre venosa. Dejar que la sangre se coagule y que el cogulo se retraiga espontneamente (si se toma sin anticoagulante); o centrifugar la sangre con anticoagulante. - Decantar el suero o plasma as obtenido a un tubo de centrfuga. - Centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos, para separa los glbulos rojos. - Centrifugar sobrenadante a 3000 rpm por 1 minuto. - Observar el sedimento entre porta y cubreobjeto con objetivo 10x y 40x, buscando formas mviles. - Siempre que una prueba resulte positiva hacer lmina (gota gruesa o frotis) coloreada por Giemsa o Wright para enviar a control de calidad al Laboratorio Central. - Es aconsejable examinar de 3 a 4 preparaciones para mayor sensibilidad del examen. - Si en la preparacin se obtiene un resultado negativo, repetir el examen por segunda vez, si esta resultara negativa nuevamente se realizar una tercera prueba, este muestreo se realizar con intervalos de 5 das.

8.15.6. FUENTES DE ERROR:- Centrifugacin inadecuada. - Extraccin inadecuada del sobrenadante. - Realizar la prueba en la fase crnica despus de los 30 das o antes de los 6 das posteriores a la picadura.

8.15.7. FORMA DE REPORTE:Se observa Trypanosoma cruzi cuando se observa presencia del parsito en la preparacin. No se observa Trypanosoma cruzi en la presente preparacin. Cuando en la preparacin no se observa ningn parsito.


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8.16. GOTA GRUESAEste procedimiento no se desarrolla en este manual, por existir a nivel nacional el Manual de Procedimientos Tcnicos para el Diagnstico Microscpico de la Malaria, Primera Edicin ao 2007, para realizar el procedimiento de gota gruesa se deber consultar lo contemplado en el mencionado manual.

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9. INMUNOLOGA

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9.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE INMUNOLOGA 9.1.1. PROPSITO:Obtener sangre venosa para realizar pruebas de inmunologa.

9.1.2. MUESTRA REQUERIDA:5 mL de sangre venosa sin anticoagulante.

9.1.3. MATERIALES:- Jeringa estril para extraer 5 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco. - Torundas de algodn. - Alcohol etlico (70%). - Marcador de vidrio. - Torniquete. - Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin al vaco. - Gradilla para tubos. - Guantes descartables.

9.1.4. PROCEDIMIENTO:- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes. -Identificareltubodeacuerdoalasolicitud. - Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar. - Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de sangradebecontarconsuficiente iluminacin. - Seleccionar la vena apropiada para la puncin. - Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol adentro hacia fuera. etlico al 70% de

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-Colocareltorniquetefirmementealrededordelbrazo,ypediralpacientequeabraycierre la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas. - Proceder a puncionar la vena seleccionada. - Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar. - Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm. - Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en la jeringa hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se atravieseelextremoinferiordelaaguja,paraquelasangrefluyahaciaeltuboporefecto del vaco. - Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja. - Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al pacientequepresionefirmementelatorundadurante3minutosconelbrazoextendido. - Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la sangre por las paredes del mismo. - Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente. - Centrifugar la muestra a 3000 rpm po 10 minutos. - Separar el suero del paquete globular. -Verificarnuevamentelaidentificacindelpaciente.

9.1.5. FUENTES DE ERROR- Prolongada aplicacin del torniquete. - Extraccin violenta de la sangre, que puede provocar hemlisis. - Empleo de tubos mal lavados. - Depositar la sangre en el tubo en forma violenta. - Dejar los tubos con muestras destapados.

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- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al realizar.

anlisis qumico a

- Separacin inadecuada del coagulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara). - Centrifugacin inadecuada de la muestra.


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9.2. PRUEBA RPIDA DE REAGINA (Mtodo RPR) 9.2.1. PROPSITO:Detectarycuantificaranticuerposreagnicosensuero,quecorrespondeaundiagnosticopresuntivo deSfilis,LapruebadeRPR,esunamodificacindelantgenoVDRL(pruebasnotreponmicas). El RPR es una prueba que contiene micropartculas de carbn para visualizar la reaccin antgeno anticuerpo.

9.2.2. MUESTRA REQUERIDA:5mL de sangre sin anticoagulante de preferencia tomada en ayunas (para obtener de 2 a 3 mL de suero).

9.2.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Tarjeta o lmina en crculos de 18 mm. - Dispensadores de 50 uL. - Tapadera plstica para formar cmara hmeda. - Frasco plstico con aguja calibrada para depositar 16uL. - Antgeno: Cardiolipina, Lecitina, Colesterol y partculas de carbn. - Agua destilada. - Papel toalla. - Aplicadores de madera. - Solucin salina 0.85%. - Puntas plsticas. - Marcador de vidrio. - Tubos 12x75 mm. - Gradilla para tubos. - Guantes descartables.

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9.2.4. EQUIPO:- Reloj marcador. - Rotador serolgico de 100 rpm. - Macrocentrfuga. - Micropipeta automtica regulable.

9.2.5. PROCEDIMIENTO:Prueba cualitativa: - Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos. - Separar los sueros del paquete globular. -Identificarlossuerosycrculosdelatarjetaolminadereaccin. - Depositar en cada crculo de la tarjeta lmina, 50 uL. de los sueros en estudio y controles positivo y negativo, manteniendo el dispensador verticalmente para que el volumen sea exacto. -Extenderelsuerosobrelasuperficiedelcrculoconelextremo opuesto del dispensador. - Homogenizar el antgeno y depositar una gota (equivalente a 16 uL) sobre el suero. - Colocar la tarjeta en el rotador serolgico y cubrirla con la cmara hmeda. - Rotar durante 8 minutos a 100 rpm. - Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.

Toda prueba cualitativa que presente aglutinacin se debe hacer prueba semicuantitativa.

Prueba semicuantitativa: - En cinco crculos poner con el dispensador una gota (50 L) de solucin salina 0.85 %, no extender. - Depositar con el dispensador en el primer crculo 50 L de suero, mezclar aspirando y expeliendo 3 a 6 veces, evitando la formacin de burbujas.

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- A partir de esta mezcla que constituye la dilucin 1:2 proseguir las diluciones seriadas, en base 2 mezclando y pasando sucesivamente de un crculo a otro 50 L; descartar los 50 L de la ltima dilucin. (Anexo 5)

De esta manera se obtienen las diluciones siguientes: Crculos Diluciones 1 1:2 2 1:4 3 1:8 4 1:16 5 1:32

-Extenderlasgotasporlasuperficiedelcrculo,utilizandoun mezclador e iniciando por la dilucin ms alta. - Colocar en cada crculo una gota (16 L) de antgeno bien homogenizado, no agitar violentamente. - Colocar las placas en un rotador y cubrirlas con la tapadera - Rotar durante 8 minutos a 100 rpm. - Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.

Toda prueba que de una reaccin de 1:32 se debe hacer la prueba cuantitativa.

Prueba cuantitativa: - En un tubo colocar 1.5 mL de solucin salina a 0.85 % y 0.1 mL de suero. (Esta constituye una dilucin 1:16) - A partir de la dilucin 1:16 hacer diluciones seriadas en base 2 mezclando y pasando sucesivamente de un crculo a otro 50 L. (Anexo 5)

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Descartar los 50 L de la ltima dilucin y se obtendrn las siguientes diluciones: Crculos Diluciones 6 1:32 7 1:64 8 1:128 9 1:256 10 1:512

9.2.6. FUENTES DE ERROR:- No mezclar el antgeno. - No leer inmediatamente la reaccin. - Rotador con velocidad inadecuada. - Aguja dispensadora de reactivo sucia o deteriorada. - No dispensar las gotas en forma vertical. - No utilizar cmara hmeda. - No utilizar los reactivos a temperatura ambiente. - Mala iluminacin para la lectura. - Diluciones inexactas. - Uso de reactivos vencidos o en malas condiciones. - Muestras hiperlipmicas. - Presencia de infeccin. (Anexo 9)

9.2.7. FORMA DE REPORTE:- Resultado No Reactivo: aspecto liso de la suspensin, la cual aparece sin agregados. - Resultado Reactivo dbil: Se observa reaccin en la prueba cualitativa y no aparecen agregados visibles en todas las diluciones semi cuantitativas. - Resultado Reactivo: agregados bien diferenciados en el centro y en crculo. la periferia del

- En las pruebas semicuantitativa y cuantitativa, si el resultado es Reactivo debe reportarse la ltima dilucin en la que se observa reaccin.


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9.3. DETECCIN DE ANTICUERPOS DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (Prueba rpida) 9.3.1. PROPSITO:DetectarinvitrolosanticuerposformadoseneltorrentesanguneoporelvirusdelaInmunodeficiencia Humana (VIH 1 y VIH 2).

9.3.2. MUESTRA REQUERIDA:Suero, plasma y sangre completa.

9.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS:- Tubos de ensayo 12 x 75 mm . - Tubos de ensayo 13 x 100 mm . - Gradilla para tubos. - Puntas plsticas. - Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transfer. - Aplicadores de madera. - Marcador de vidrio. - Guantes descartables. - Papel toalla. - Protocolo de trabajo. (Anexo 10) - Tiras reactivas sensibilizadas con antgeno VIH 1 y VIH 2.

9.3.4. EQUIPO:- Macrocentrfuga. - Pipeta automtica de volumen variable. - Reloj marcador.

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9.3.5. PROCEDIMIENTO:- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos. - Separar los sueros del paquete globular. - Llevar a temperatura ambiente las tiras reactivas a utilizar. - Preparar el protocolo de trabajo. - Cortar la lnea de puntos de la bolsa para retirar las tiras reactivas. - Retirar el plstico de proteccin de cada tira. -Identificarlastirasreactivasautilizar. - Dispensar 50 L de suero con una pipeta automtica sobre la superficie absorbente. (sealadaconunaflecha) - Esperar un mnimo de 15 minutos y un mximo de 60 minutos. - Leer el resultado. - Observar el rea de re

manual procedimientos lab clinico

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