laboratorio de ciencia básica iii cromatografia grupo 2

7/23/2019 Laboratorio de Ciencia Bsica III Cromatografia Grupo 2

1/22

Laboratorio de Ciencia Bsica III

Cromatografa: Separacin yExtraccin de pigmentos

Vegetales.


2/22

Cromatografa Mtodo de separacin de una mezcla de dos o ms compuestos

entre dos fases inmisci!les: una fase m"il# $ue transporta las

sustancias $ue se separan y $ue progresa en accin con la otra#

denominada fase estacionaria $ue sir"e como adsor!ente del

eluyente. %e forma general# consiste en pasar una fase m"il a

tra"s de una fase estacionaria fi&a slida# donde dic'o mo"imiento#

estar determinado por las afinidades polares de los pigmentos con

el eleyente(fase m"il) y el adsor!ente (fase estacionaria).


3/22

Cromatografas dependiendo la naturalezade las fases involucradas

Cromatografa l$uida.

*a fase m"il es un disol"ente o mezcla de disol"entes y la fase estacionaria

un slido $ue interact+a con las sustancias $ue se desea separar

(cromatografa l$uido,slido)# o !ien un l$uido inmisci!le con la fase

m"il# depositado en la superficie de un slido (cromatografa l$uido,

l$uido). Esta forma de cromatografa puede realizarse con diferentes

arreglos experimentales: en columna# en capa delgada o en papel.


4/22

Cromatografas dependiendo la naturalezade las fases involucradas

Cromatografa de -ases

En este caso la fase m"il es un gas inerte ('elio o nitrgeno) y la fase

estacionaria es un slido (cromatografa gas,slido) o un l$uido

sostenido/ por un slido inerte (cromatografa gas,l$uido). Este tipo de

cromatografa siempre es en columna# ya $ue es la +nica manera de $ue la

fase m"il gaseosa se mantenga fluyendo# confinada dentro del sistema.


5/22

Cromatografa en Capa Fina *a cromatografa en capa fina se !asa en la preparacin de una capa#

uniforme# de un adsor!ente mantenido so!re una placa de "idrio u otro

soporte. *os re$uisitos esenciales son# pues# un adsor!ente# placas de

"idrio# un dispositi"o $ue mantenga las placas durante la extensin# otro

para aplicar la capa de adsor!ente# y una cmara en la $ue se desarrollen las

placas cu!iertas. Es preciso tam!in poder guardar con facilidad las placas

preparadas y una estufa para acti"arlas


6/22

Cromatografa en Capa Fina Ventajas:

*a cromatografa en capa fina presenta una

serie de "enta&as frente a otros mtodos

cromatogrficos (en columna# en papel# enfase gaseosa) ya $ue el material $ue precisa

es ms simple. El tiempo $ue se necesita

para conseguir las separaciones es muc'o

menor y la separacin es generalmente

me&or. 0ueden usarse re"eladores

corrosi"os# $ue so!re papel destruiran el

cromatograma. El mtodo es simple y los

resultados son fcilmente reproduci!les# lo

$ue 'ace $ue sea un mtodo adecuado para

fines analticos.


7/22

Cromatografa en Capa Fina 1sos de la CC2

*a CC2 es usada frecuentemente a ni"el industrial para prue!as preliminares

a la cromatografa en columna# ya $ue en sta tcnica podemos identificar

los compuestos una "ez separados. *a C.C.2. se realiza con material muy

!sico# a comparacin de la C.C.# aparte de ser rpida# econmica y semuestra me&or la separacin.


8/22

Cromatografa en Capa Fina Concepto de 3f

*a relacin de las distancias

recorridas por el compuesto

y por el disol"ente# desde el

punto de origen del

cromatograma# se conoce

como Rf# el cual posee un

"alor constante para cada

compuesto en condiciones

determinadas.


9/22

Cromatografa en Capa Fina

3e"eladores

*a mayor parte de las placas de cromatografa lle"an un indicador fluorescente $ue

permite la "isualizacin de los compuestos acti"os a la luz ultra"ioleta El indicador

a!sor!e la luz 1V y emite luz "isi!le. *a presencia de un compuesto acti"o en el 1V

e"ita $ue el indicador a!sor!a la luz en la zona en la $ue se encuentra el producto#

y el resultado es la "isualizacin de una manc'a en la placa $ue indica la presencia

de un compuesto. En el caso de compuestos $ue no a!sor!en luz 1V# la

"isualizacin (o re"elado) del cromatograma re$uiere utilizar un agente re"elador.

Este tiene $ue reaccionar con los productos adsor!idos proporcionando

compuestos coloreados.


10/22

Cromatografa en Columna Concepto

*a CC es una "ariedad de la cromatografa en la $ue la fase m"il es l$uida y

pasa a tra"s de la fase estacionaria# slida# l$uida# $ue esta retenida en un

recinto cilndrico. Esta modalidad consiste en 'acer pasar mediante

gra"edad la fase l$uida so!re el slido retenido en la columna. Esta

"ariante de la cromatografa se realiza# normalmente# despus de las

prue!as con CC2 para compro!ar $ue disol"entes se utilizan en la

separacin del pigmento.


11/22

Cromatografa en Columna *os compuestos $ue se encuentran disueltos en la fase m"il# poco a poco saldrn de la columna

cromatogrfica# y se recogen en fracciones. *as fracciones menos polares# $ue son por lo general

las $ue se retienen poco o nada en el a!sor!ente# sern las primeras en salir de la columna. En

cam!io# las sustancias ms polares# $uedan retenidas por ms tiempo en el a!sor!ente# y a

menudo es necesario el uso de diferentes disol"entes con la finalidad de incrementar su polaridad

para $ue sean arrastradas por estos.

El eluato es la sustancia $ue se separa o sale de la columna despues de cada extraccion. este

metodo es de separacion y ademas es cualitati"o y cuantitati"o.


12/22

Cromatografa en Columna


13/22

Cromatografa en Columna 4plicaciones

5. Separaciones de componentes de plantas medicinales.

6. Separacin de componentes de una sntesis orgnica.

7. separacin de colorantes.

8. separacin e identificacin de 'ioscina y de morfina.

9. separacin de acido acetico# alco'ol cetilico y metil,etil cetona.

. separacin e identificacin de los compuestos intermedios de una sntesis

orgnica# por e&emplo en la sntesis del naftaleno# identificacin de acido

ftalico# an'idrido ftalico# !enceno.

;. En la produccin sinttica de acetaminofen# identificacin de la imina de la


14/22

Cromatografa en capa fina 0ara la cromatografa en capa fina se utiliz los siguientes materiales y

reacti"os:

Materiales Reactivos

0orta o!&etos -el Slice

2rascos =exano

0apel filtro 4cetona

Capilares 0asto

Estufa

-radilla


15/22

Cromatografa en capa fina El past se macer en un mortero donde posteriormente se le a>adi una

mezcla de disol"entes# dic'a mezcla se realiz a !ase de metanol y

cloroformo. *a mezcla se coloc en un frasco am!ar y se de& reposar por 5

da.


16/22

Cromatografa en capa fina 4ntes de realizar la C.C.2. se prepar las cromatoplacas con el gel slice y

posteriormente se colocaron en el 'orno a 5??@C por 7? min para acti"arlas# es

decir para eliminar la 'umedad $ue tenga.

Con ayuda de un encendedor# se $uema y se rompe el capilar en dos partes de

forma $ue la punta $uede fina y es con sta parte del capilar con la $ue se coloc

la muestra en la cromatoplaca a 5 cm. 4prox. %e la !ase de la cromatoplaca.

En un frasco se coloc papel filtro en las paredes internas# posteriormente se

a>adi unos mililitros de eluyente en el frasco# ste procedimiento se realiza

para facilitar la separacin al colocar la cromatoplaca en el frasco (cmara de

elusin).


17/22

Cromatografa en capa fina 3esultados


18/22

Cromatografa en columna: Pasto 0ara la cromatografa en columna# se utilizaron los siguientes reacti"os y

materiales (ta!la 5):

Materiales Reactivos

Soporte 1ni"ersal =exano C=58

0inzas de do!le presin 4cetona C=7(CA)C=7

Bureta de 69ml -el slice (preparado)u!os de ensayo 0igmento (pasto)

Em!udo

4lgodn

4rena


19/22

Cromatografa en columna: Pasto El e$uipo se mont y se coloc un

poco de algodn a manera de

taponar salida de la columna. *a

arena se coloc en una pe$ue>a

capa de 5 cm. 4prox. para

despus colocar el gel slice 'asta

a!arcar D partes de la columna yse coloc# nue"amente# 5 cm

aprox. de arena. En la ultima

parte del llenado se coloc la

muestra (de 7 a 9 ml).


20/22

Cromatografa en columna: Pasto *a separacin comenz al a>adir el

disol"ente menos polar# =exano en

ste caso. El disol"ente se a>adi'asta completar la separacin del

primer pigmento.


21/22

Cromatografa en columna: Pasto 1na "ez terminada la

separacin del compuesto

menos polar (pigmento

amarillo)# se a>adi el

disol"ente ms polar# es decir#

el acetona y de esa forma se

inici la separacin del

pigmento "erde.


22/22

Cromatografa en columna: Pasto 3esultados:

Pigmento Amarillo

u!o 7 5mL

u!o 8 mL

u!o 9 55mL

u!o mL

Pigmento Verde

u!o 7.9ml ClorofilaF

u!o G 6.9mL ClorofilaH

u!o 5? 8.;mL ClorofilaH

laboratorio de ciencia básica iii cromatografia grupo 2

Documents