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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
MICROBIOLOGÍA SANITARIA I
INFORME DE LABORATORIO Nº7
Título:
Numeración de coliformes totales y fecales por el método del
Número más probable (NMP) en muestras ambientales.
Numeración de enterobacterias.
Docente:
MSc. Martín Martínez Vila
Integrantes:
Vásquez Peña Julian Gustavo 20132141E
Flores Cárdenas Karen Kimberly 20123502I
2015
INFORME DE LABORATORIO Nº7 2015
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I. OBJETIVOS
Evidenciar presencia de coliformes en muestras ambientales.
Evidenciar el origen de fecales.
Evidenciar cuantitativamente órganos coliformes.
Manejar el método NMP y su correcta interpretación.
II. MARCO TEORICO
La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número
más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de
fermentar la lactosa con producción de
48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta determinación
consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa.
En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio
el cual permite la recuperación de los microorganismos dañados que se encuentren
presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como fuente de
carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo
lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de
aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde
brillante.
La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se
realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la
capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son
incubados a una temperatura de 44.5 ± 0.1°C por un periodo de 24 a 48 h.
Finalmente, la búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de
caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales
(Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las
pruebas bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas.
COLIFORNES FECALES:
Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo de coliformes. Estas
son definidas como bacilos gram- negativos, no esporulados que fermentan la lactosa
con producción de ácido y gas a 44.5°C ± 0.2°C dentro de las 24 ± 2 horas.
La mayor especie en el grupo de coliformes es ESCHERICHIA COLI.
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CALDO BILIS BRILLANTE: se utiliza para detectar presencia de coliformes Totales.
CALDO EC: Caldo ESCHERICHIA COLI, se utiliza para detectar presencia de coliformes
fecales.
III. MATERIALES Y EQUIPOS
Incubadora a 35 – 37oC.
Baño María 44.5 ± 0.2oC.
Asa de siembra
Pipetar bacteriológicas.
Medios de cultivo.
o Caldo Lauril sulfatado triptosa (LST) volumen de 10ml en tubos de 16 x
150mm conteniendo tubos fermentación (Durhem) invertidos 75 x
10mm.
o Clado EC.
o Agar Endo.
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Prueba presuntiva de microorganismos coliformes totales
1. A partir de la muestra de agua inocular 1mL en cada uno de los tubos con LST con
campana de Durham.
2. Incubar los medios a 35-37° C durante 24-48hrs.
3. Observar si hay formación de gas (desplazamiento del medio en la campana de
Durham), si no se observara tal producción, incubar 24 horas más.
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PRUEBA CONFIRMATIVA a) Sembrar en agar Endo por el método de estriado escoger 9 tubos del proceso
anterior.
b) Sembrar en caldo BRILA, inocular con asa de siembra 2 asadas
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Contar número de tubos positivos, por cada dilución y comparar con tabla
NMP
c) Coliformes fecales
Contar número de tubos positivos (gas + acidez turbidez) para cada dilución y
comprobar con la tabla de NMP
d) Del caldo EC sembrar con asa siembra en placas de agar ENDO.
Luego sembrar colonias verdes con brillo metálico en placas con agar nutritivo.
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V. RESULTADOS
PESCADO
DILUCION OBSERVACION
𝟏𝟎−𝟐 HAY MUCHAS COLONIAS
𝟏𝟎−𝟑 HAY CONTAMINANTE; 40 COLONIAS 40.𝟏𝟎−𝟑 UFC/g
𝟏𝟎−𝟒 5 COLONIAS
𝟏𝟎−𝟓 1 COLONIA
CARNE MOLIDA
DILUCION OBSERVACION
𝟏𝟎−𝟐
𝟏𝟎−𝟑
𝟏𝟎−𝟒 42 COLONIAS LAPTOSA (+) ROJITA
𝟏𝟎−𝟓 4 COLONIA ; 1 SUPERFICIAL COLIFORME LAPTOSA (+)
Las superficiales no se cuentan porque la muestra está bajo la capa de agar.
PRUEBA CONFIRMATIVA: PRUEBA POSITIVA (+). COLONIA ROJA, RODEADO DE COLOR
ROJO O CON BRILLO METALICO.
A
B
C
𝟏𝟎−𝟐
POCO BRILLO METALICO MÁS COLOR ROJO ; ALTO RELIEVE
POCO BRILLO METALICO (VERDE) MÁS COLOR ROJO ALTO RELIEVE
BRILLO METALICO VERDE CON POCO ROJO
𝟏𝟎−𝟑
BRILLO METALICO VERDE CIRCULAR PEQUEÑO
BRILLO METALICO VERDE CIRCULAR PEQUEÑO
BRILLO METALICO VERDECIRCULAR PEQUEÑO
𝟏𝟎−𝟒 BRILLO METALICO VERDE
BRILLO METALICO VERDE
BRILLO METALICO VERDE
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VI. CONCLUSIONES
Más contaminación hay en la carne molida que en el pescado.
Se observó presencia de coliformes totales en el agar ENDO
VII. RECOMENDACIONES
El número de colonias debe de estar en el rango de (20;200)
Esterilizar las pipetas para evitar contaminación.
Licuar bien los sólidos para no tener complicaciones al usar la pipeta.