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CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA -CONCYT-
SECRETARIA NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA -SENACYT- FONDO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGIA -FONACYT-
CENTRO DE ESTUDIOS EN SALUD, UNIVERSIDAD DEL VALLE DE GUATEMALA
INFORME FINAL
ESTUDIO DE LOS POSIBLES VECTORES DEL VIRUS DEL OESTE DEL NILO EN UN FOCO DE TRANSMISION UBICADO EN IZABAL, GUATEMALA
PROYECTO FODECYT No. 03-2007
MARIA EUGENIA MORALES-BETOULLE, Ph.D. Investigadora Principal
GUATEMALA, MARZO 2011
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iii
AGRADECIMIENTOS
La realización de este trabajo, ha sido posible gracias al apoyo financiero dentro del
Fondo Nacional de Ciencia y Tecnología, -FONACYT-, otorgado por La Secretaría
Nacional de Ciencia y Tecnología -SENACYT- y al Consejo Nacional de Ciencia y
Tecnología -CONCYT-.
iv
OTROS AGRADECIMIENTOS
Como contraparte de este proyecto se contó con el apoyo financiero del CDC a través
del Acuerdo Cooperativo con la Universidad del Valle de Guatemala número
U50/CCU021236-01 y 3U51 GH000011-02.
INFORME ELABORADO POR:
Dra. María Eugenia Morales Investigadora Principal
Licda. María Luisa Müller Investigadora Asociada
Licda. Silvia Sosa Investigadora Asociada
Licda. María Reneé López Investigadora Asociada
Licda. Lourdes Monzón Investigadora Asociada
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TABLA DE CONTENIDOS
RESUMEN
ABSTRACT
PARTE I
I.1 INTRODUCCIÓN
I.2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
I.2.1 Antecedentes en Guatemala
I.2.2 Justificación
I.3 OBJETIVOS E HIPOTESIS
I.3.1 Objetivo general
I.3.2 Objetivos específicos
I.3.3 Hipótesis
I.4 METODOLOGIA
I.4.1 Localización del “Foco de Transmisión”
1.4.1.1 Sitios de muestreo
1.4.1.2 Fechas de colecta
I.4.2 Colecta, identificación y procesamiento de zancudos de los géneros
Culex y Aedes
I.4.2.1 Colecta de zancudos adultos
I.4.2.2 Identificación de los zancudos y pruebas moleculares
I.4.3 Monitoreo de la transmisión del Virus del Oeste del Nilo dentro del
sitio de estudio
I.4.3.1 Utilización y muestreo de gallinas centinela
I.4.3.2 Pruebas serológicas en el laboratorio
I.4.4 Recopilación y análisis de datos
I.4.4.1 Bases de datos
I.4.4.2 Análisis de datos
pág. 1
1
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PARTE II
MARCO TEÓRICO
II.1 Flavivirus
II.2 Características moleculares del VON
II.2.1 Estructura del virión y del genoma
II.2.2 Replicación
II.3 Ciclo de transmisión del VON
II.4 Patogénesis, transmisión y prevención
II.4.1 Patogénesis
II.4.2 Transmisión y prevención
II.5 Vectores
II.6 Epidemiología del VON
II.7 Vigilancia epidemiológica
PARTE III
III.1 Resultados
III.2 Discusión de resultados
PARTE IV.
IV.1 Conclusiones
IV.2 Recomendaciones
IV.3 Referencias bibliográficas
IPARTE V
V.1 Informe financiero
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LISTA DE ILUSTRACIONES
1. Número de casos de Virus del Oeste del Nilo en los Estados Unidos en 2008 pág. 3
2. Sitios de estudio dentro de un Foco de Transmisión del VON en Izabal 9
3. Electromicrografía del VON 16
4. Estructura del genoma de los flavivirus 17
5. Replicación de los flavivirus 18
6. Ciclo de transmisión del Virus del Oeste del Nilo 19
7. Etapas requeridas para la infección por Virus del Oeste del Nilo y su transmisión
por un artrópodo
20
8. Hembra adulta de Culex quinquefasciatus 23
9. Hembra adulta de Aedes aegypti 24
10. Densidad mensual de zancudos colectados con trampas CDC de luz y Grávidas
en diferentes hábitats de agosto 2007 a julio 2008 en un Foco de Transmisión en
Puerto Barrios, Izabal
34
11 Densidad mensual de zancudos colectados con trampas BG-Sentinel en
diferentes hábitats de agosto 2008 a enero 2009 en un Foco de Transmisión en
Puerto Barrios, Izabal
34
12 Densidad mensual de las especies de zancudos más abundantes durante agosto
2007 a julio 2008 capturados con trampas CDC y Grávidas en un Foco de
Transmisión en Puerto Barrios, Izabal
36
13 Densidad total de zancudos e incidencia de seroconversiones a VON
detectadas en gallinas centinela de agosto 2007 a mayo 2008 en un Foco
de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal.
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viii
LISTA DE CUADROS
1. Zancudos hembra adultos colectados de agosto 2007 a julio 2008 con trampas
CDC y Grávidas en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal
pág. 29
2. Zancudos hembra adultos colectados de agosto 2008 a enero 2009 con trampas
BG-Sentinel en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal
30
3. Aislados virales y pools positivos a Flavivirus obtenidos a partir de zancudos
colectados entre agosto 2007 y enero 2009 en un Foco de Transmisión en Puerto
Barrios, Izabal
32
4. Incidencia de Virus del Oeste del Nilo en gallinas centinela en un Foco de
Transmisión, Puerto Barrios, Izabal, años 2007 a 2009
37
ANEXOS
1. Ficha de ejecución presupuestaria del proyecto 51
1
RESUMEN
En Guatemala se conoce poco sobre los virus transmitidos por zancudos vectores. Un
ejemplo de estos es el Virus del Oeste del Nilo (VON), detectado por primera vez en
Guatemala en 2003, por evidencias serológicas. Conociendo a los posibles vectores se puede
implementar estrategias de control adecuadas para estos agentes infecciosos. En este proyecto
se estudiaron zancudos del género Culex y Aedes, potenciales vectores del VON en Puerto
Barrios, Izabal. Para esto se realizaron colectas utilizando trampas CDC de luz, trampas
grávidas y trampas BG en 10 sitios diferentes. Los zancudos fueron identificados, agrupados en
un máximo de 50 individuos de misma especie, fecha, sitio de colecta y tipo de trampa. Se
analizó la abundancia y distribución temporal de los zancudos y la posible presencia de VON
en éstos por medio de análisis moleculares específicos (RT-PCR en tiempo real). También, se
monitoreó mensualmente la transmisión viral en gallinas centinela, con el fin de detectar en el
suero la aparición de anticuerpos a VON mediante la prueba de ELISA de bloqueo. Se obtuvo
tres aislados no identificados en Cx. taeniopus, un aislado de Alphavirus a partir de zancudos
Cx. sp y tres aislados de Flavivirus en Cx. quinquefasciatus, Cx. interrogator y Cx. sp.
respectivamente. No se encontraron zancudos infectados con VON. No obstante, en base a
los resultados obtenidos en gallinas centinela puede afirmarse que el VON se encuentra
circulando en la región de estudio. Los repuntes en las poblaciones de zancudos también
muestran relación con el aumento en las seroconversiones (paso de negativo a positivo al
virus). En base a resultados de estudios anteriores y las abundancias observadas, resultan de
interés las especies Cx. nigripalpus, Cx. mollis/inflictus, Cx. quinquefasciatus y Cx. taeniopus.
No obstante aún son necesarios más estudios para incriminar a cualquier especie como vector
del VON.
1
ABSTRACT
In Guatemala, little is known about viruses transmitted by mosquito vectors. One example is
West Nile Virus (WNV), detected for the first time in Guatemala in 2003. Once the potential
vectors for WNV are identified, appropriate control strategies for these infectious agents can be
implemented. This project focused on mosquitoes of the genus Culex and Aedes, potential
vectors of WNV in Puerto Barrios, Izabal. For this purpose, mosquito collections were made
using CDC light traps, gravid traps and BG traps in 10 collection sites. Mosquitoes were
identified and pooled in groups of up to 50 individuals of the same species, date, collection site
and trap type. We analyzed the abundance and temporal distribution of mosquitoes and the
possible presence of WNV in these through specific molecular analysis (Real time RT-PCR).
Also, monthly monitoring of viral transmission in sentinel chickens was conducted in order to
detect, using blocking ELISA, presence of antibodies against the virus in the chicken serums.
Three unidentified virus isolates were found in Cx. taeniopus, an Alphavirus was isolated from
Cx. sp. mosquitoes and three Flavivirus were isolated from Cx. quinquefasciatus, Cx.
interrogator and Cx. sp. None of the mosquito pools tested was found infected with WNV.
Nonetheless, results obtained in sentinel chickens show that the virus is circulating in the region
of study. Also, the population increments of mosquitoes are related to the increase in
seroconversion in chickens (change from negative to positive to WNV). Based on the results of
previous studies and their abundances the species Cx. nigripalpus, Cx. mollis/inflictus, Cx.
quinquefasciatus and Cx. taeniopus result interesting. However more studies are still needed to
incriminate any species as a vector of WNV.
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PARTE I
I.1. INTRODUCCIÓN
En el continente americano, se ha descrito la circulación de numerosos arbovirus
(virus transmitidos por artrópodos) pertenecientes a diferentes familias que pueden ser
responsables de zoonosis. Por ejemplo, en Brasil entre 1954 y 1998 se aisló en la amazonía
brasileña 187 arbovirus diferentes de los cuales 32 son patógenos para los humanos
(Vasconcelos, et al. 2001). Dentro de estos virus hay algunos que han circulado como
agentes patógenos para la población humana desde hace muchos años en la región y que
actualmente han aumentado su incidencia o distribución geográfica (virus re-emergentes)
y otros que circulan desde hace relativamente poco tiempo (virus emergentes). Un ejemplo
relevante, de virus emergente con implicaciones en salud humana y animal, es el Virus del
Oeste del Nilo (VON).
Descrito en el África en 1937, el VON llegó al continente americano en 1999
causando brotes de encefalitis en humanos y equinos en el estado de Nueva York en los
Estados Unidos (CDC 1999). Este virus es un Flavivirus, perteneciente a la familia
Flaviviridae, género Flavivirus, serogrupo del virus de la encefalitis Japonesa (Burke y
Monath 2001). En los años posteriores a 1999, el VON se difundió por todo Norte América,
llegando hasta el Caribe, México, Centro América y algunos sitios de Sur América como
Argentina, Colombia, Trinidad y Venezuela (Barrera et al. 2008, Bosch et al 2007, Komar
y Clark 2006; Matar et al. 2005).
En Estados Unidos, el CDC reportó 1356 casos humanos de VON en el año 2008
(Figura 1). De estos casos 687 (51%) provocaron síndromes neurológicos severos con
meningitis o encefalitis (CDC 2009). La disponibilidad de una vacuna para equinos redujo
el efecto en estos, aunque todavía miles se vieron afectados y aproximadamente el 40% de
los casos terminó con la muerte del animal. En cuanto a las aves, más de 198 especies se
han encontrado muertas e infectadas por el VON, y se cree que cientos de millones han
muerto por la infección (LaDeau et al 2007, Komar 2003). En suma, un virus emergente
3
como VON, en una región que reúne las condiciones ideales para su amplificación y
transmisión puede causar serios impactos.
Figura 1. Número de casos de Virus del Oeste del Nilo en los Estados Unidos en 2008.
Fuente: CDC 2009
En América latina, se ha descrito en los últimos años por métodos serológicos de
diagnóstico la presencia del virus del Oeste del Nilo en aves o caballos de México, de la
República Dominicana, Puerto Rico, Jamaica, Cuba, El Salvador, Colombia, y Guatemala
(Komar y Clark 2006; Morales-Betoulle et al. 2006). A pesar de tener amplia evidencia
serológica de la presencia de VON en América Latina hay que resaltar que existen pocos
aislados virales y no se ha descrito alguna asociación entre la circulación del Virus con
alguna sintomatología particular en animales. Un dato interesante, es que uno de los
aislados virales fue realizado a partir de un cuervo (Corvus corax) en el estado de Tabasco,
al Sur de México y a partir de un caballo de Nuevo León. Los autores sugieren que el
aislado de Tabasco podría haber sido introducido a México por las aves migratorias de la
península de Yucatán (Estrada-Franco et al. 2003; Blitvich et al. 2004). Mas recientemente
se han obtenido aislados virales de Puerto Rico (Barrera et al. 2008) y Guatemala (Morales-
Betoulle et al., datos en curso de publicación).
4
Si bien se ha descrito la presencia del Virus del Oeste del Nilo en América Latina,
poco se sabe aún del posible comportamiento y biología de este virus emergente en
regiones tropicales como Guatemala. En efecto, aún no se conoce con certeza cuales son
los posibles zancudos vectores. Para poder combatir a un agente infeccioso o transmitido
por vectores, como lo son los arbovirus, es necesario conocer los puntos clave que regulan
su ecología y transmisión. Nuestro proyecto pretende estudiar los posibles zancudos
vectores ya que estos son esenciales para que el virus se mantenga y transmita en los
reservorios naturales (aves). Son igualmente los zancudos vectores los responsables de que
un virus como VON se transmita a los hospederos incidentales, como los seres humanos,
que podrían verse afectados.
En base a estudios previos, definimos un sitio en Izabal al que denominamos “Foco
de Transmisión” en el cual tuvimos evidencia de transmisión activa del VON en aves. Es
en este sitio desarrollamos este proyecto de investigación con el fin de estudiar los posibles
vectores implicados en el ciclo de vida del VON en un ambiente tropical y diverso en
donde de hecho circulan otros virus.
I.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
I.2.1. Antecedentes en Guatemala
El VON ha sido causante de múltiples brotes de meningitis alrededor del mundo
(Kuno 1998). Fue aislado e identificado por primera vez en 1937 a partir de una persona
infectada en la región del Oeste del Nilo en Uganda. Desde 1937, había causado brotes
infrecuentes relacionados principalmente a fiebres. Sin embargo, la frecuencia y la
severidad en los síntomas aumentaron a mediados de los años 90. Hasta 1999, el virus se
encontraba únicamente en el hemisferio este, con una amplia distribución en África, Asia,
el Medio Oriente y Europa (Petersen 2002).
El primer brote causado por el VON en Estados Unidos fue en Nueva York, en
1999. En los años subsecuentes, el virus se expandió al este y norte, luego al sur y oeste del
5
país. El virus también continuó su expansión en el continente, llegando a Latino América y
El Caribe (Komar 2006).
En América latina, se ha descrito en los últimos años por métodos serológicos de
diagnóstico la presencia del virus del Oeste del Nilo en aves o caballos de México, la
Republica Dominicana, Jamaica, Cuba, El Salvador, Colombia, y Guatemala (Komar y
Clark 2006; Morales-Betoulle et al. 2006). A pesar de tener amplia evidencia serológica de
la presencia de VON en América Latina hay que resaltar que existen pocos aislados virales
y no se ha descrito alguna asociación entre la circulación del Virus con alguna
sintomatología particular en animales o humanos. Un dato interesante, es que uno de los
aislados virales fue realizado a partir de un cuervo (Corvus corax) en el estado de Tabasco,
al Sur de México y a partir de un caballo de Nuevo León. Los autores sugieren que el
aislado de Tabasco podría haber sido introducido a México por las aves migratorias de la
península de Yucatán (Estrada-Franco et al. 2003; Blitvich et al. 2004). En 2007 se aisló
VON en zancudos y gallinas centinelas de Puerto Rico (Barrera et al. 2008).
En Guatemala, desde el año 2003, se reportó evidencia de transmisión de Virus del
Oeste del Nilo (VON) al encontrarse caballos sanos seropositivos a este virus en varios
departamentos del país (Morales-Betoulle et al. 2006). En investigaciones posteriores,
realizadas entre 2004 y 2006, se encontraron caballos, ganado, perros y aves residentes
silvestres y domésticas seropositivas (Morales-Betoulle et al. 2007). En 2007 se identificó
un “Foco de Transmisión” (sitio con evidencia de transmisión activa de VON) en Puerto
Barrios, Izabal en donde se pretendía estudiar la ecología de este virus. Como parte de
estas investigaciones, se detectó la presencia del VON en muestras de zancudos de las
especies Culex quinquefasciatus y Cx. mollis/inflictus colectados durante ese año (Morales-
Betoulle et al. datos no publicados). No obstante, si bien se ha descrito la presencia del
VON en el país, aún no se conoce cuales son los posibles zancudos vectores. Este proyecto
pretende estudiar los posibles zancudos vectores ya que estos son esenciales para que el
virus se mantenga y se transmita en los reservorios naturales (aves) o se transmita a los
hospederos incidentales como los seres humanos que podrían verse afectados.
6
I.2.2. Justificación
Durante los últimos años se han descubierto nuevos virus asociados a síndromes
severos en los seres humanos. La aparición de enfermedades emergentes y re-emergentes se
ha situado como uno de los principales problemas de la salud pública, sin embargo unos de
las cosas mas importantes para su surgimiento es la carencia de recursos para su vigilancia
y prevención.
El VON, es una enfermedad emergente en Guatemala y se mantiene en la naturaleza
por un ciclo enzoótico que involucra a aves como hospederos amplificadores y a los
zancudos como los vectores (principalmente los zancudos del género Culex). Los equinos y
los humanos son hospederos incidentales. En humanos, las infecciones por VON se
presentan como una enfermedad febril autolimitada. En los casos de enfermedad
neurológica se puede presentar encefalitis o meningitis con mayor incidencia y mortalidad
por encefalitis.
Si bien se ha demostrado la circulación del VON en Puerto Barrios, Izabal, aún se
desconoce cuáles son los zancudos posibles vectores, la vigilancia epidemiológica de éstos
es de suma importancia. En este proyecto, se estudiaron zancudos del género Culex y
Aedes en Puerto Barrios. Se analizó la abundancia, distribución temporal de los zancudos y
se buscó evidencia de la presencia de ARN viral por métodos moleculares. Los resultados
servirán para definir especies de zancudos potenciales vectores del VON en la región. Este
es un primer paso para establecer especies que deben ser sujetas a estudios posteriores de
competencia vectorial así como para implementar estrategias de vigilancia y control
adecuadas que ayuden a reducir el riesgo a la salud humana.
7
I.3 OBJETIVOS E HIPOTESIS
I.3.1. Objetivo general
Identificar zancudos que sean posibles vectores del Virus del Oeste del Nilo en un
foco de transmisión localizado en un ecosistema tropical, Izabal, Guatemala.
I.3.2. Objetivos específicos
1. Colectar zancudos del género Culex con el fin de detectar la posible infección de éstos
con VON.
2. Colectar zancudos del género Aedes con el fin de detectar la posible infección de
éstos con VON.
3. Estudiar la variación de la densidad relativa de los géneros Culex y Aedes durante
diferentes épocas de transmisión de VON utilizando métodos estadísticos.
4. Monitorear la estacionalidad del VON por medio de estudios serológicos utilizando
gallinas centinela.
I.3.3. Hipótesis:
Hipótesis 1: Algunas especies de zancudos del género Culex activos en períodos
nocturnos son portadores de Virus del Oeste del Nilo dentro del foco de transmisión.
Hipótesis 2: Algunas especies de zancudos del género Aedes activos en períodos
diurnos son portadores de Virus del Oeste del Nilo dentro del foco de transmisión.
Hipótesis 3: Existe variación en la densidad relativa de zancudos previo al pico de
actividad en la transmisión del Virus del Oeste del Nilo dentro del foco de
transmisión.
8
I.4. METODOLOGÍA
I.4.1. Localización del “Foco de Transmisión”
Puerto Barrios se encuentra localizado en el departamento de Izabal en la costa del Caribe de
Guatemala a 0.67 metros SNM. Esta ubicado a una latitud de 15º44’06” y a una longitud de
88º36’17”. El clima es verdaderamente tropical, ya que durante casi todo el año la temperatura y el
promedio de humedad relativa permanecen altas y sin una estación seca bien definida (INE 2002),
lo que lo ubica en una zona de vida de Bosque Húmedo Subtropical.
I.4.1.1. Sitios de muestreo :
El presente estudio se realizó en una zona de 80 Km2 comprendida entre Puerto
Barrios y Machacas del Mar, Izabal en donde previamente nuestro equipo de investigación
demostró la circulación del Virus del Oeste del Nilo y en el cual ya se ha realizado estudios
preliminares (ver antecedentes). Se denomina a la zona de estudio “Foco de Transmisión”
por ser un sitio que presenta transmisión activa del VON. Como no se puede cubrir toda la
zona, se eligió 10 sitios al azar dentro del “Foco de Transmisión” que cumplieran con los
siguientes requisitos: ser de fácil acceso, contar poblaciones de humanos y otros
vertebrados, así como reunir condiciones mínimas de seguridad para el personal y equipo
utilizado. Seis de los sitios se clasificaron como “urbanos” y cuatro como “rurales” de
acuerdo a su macrohábitat.
Para localizar los sitios de muestreo se utilizó Sistemas de Posicionamiento Global
(GPS) con receptores con una precisión de ±10 metros. Esto proporciona la dispersión
geográfica de los sitios de muestreo (Figura 2).
9
I.4.1.2. Fechas de colecta:
Los muestreos se realizaron de forma mensual para un total de 12 colectas iniciando
en agosto 2007. Para este proyecto se planificaron y presupuestaron inicialmente 6 colectas
bimensuales de zancudos con varios tipos de trampas. Las colectas adicionales se llevaron a
cabo con fondos de contrapartida. A partir de agosto de 2008 se iniciaron colectas
mensuales durante seis meses utilizando trampas tipo BG-Sentinel. Desafortunadamente
esto no se pudo realizar antes por que las trampas no pudieron ser adquiridas por razones
administrativas (proceso Guatecompras en particular), que no permitieron tenerlas al inicio
del proyecto. Por su parte, las gallinas centinela fueron muestreadas mensualmente en los
mismos meses en que se realizaban las capturas de zancudos, con fondos del proyecto de
contrapartida.
Figura 2. Sitios de estudio dentro de un Foco de Transmisión del Virus del Oeste del Nilo
en Izabal.
Fuente: Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-
UVG (2006)
10
I.4.2. Colecta, identificación y procesamiento de zancudos de los géneros Culex y
Aedes
I.4.2.1. Colecta de zancudos adultos:
Para cada viaje de colecta, en cada uno de los 10 cuadrantes del estudio, se colocó
durante una noche dos tipos distintos de trampas:
• Una trampa de luz CDC modificada con cebo de CO2 (hielo seco).
• Una trampa grávida (con cebo de agua y estiércol).
Ambas trampas se utilizan para realizar colectas nocturnas de zancudos adultos del
género Culex, sin embargo, la trampa grávida está mayormente enfocada a hembras de Cx.
quinquefasciatus que buscan sitios de oviposición. Estas trampas fueron colocadas antes del
anochecer y colectadas al amanecer. Adicionalmente, al registrar una seroconversión a
VON en gallinas centinela (ver inciso C más adelante) se realizaron colectas suplementarias
colocando tantas trampas como fuera posible en el sitio en donde se dio la seroconversión
(estas colectas fueron denominadas “Blitz”). El objetivo de estas colectas extras era
aumentar la posibilidad de capturar zancudos infectados con VON.
Los zancudos recolectados se metieron en hieleras con hielo seco para matarlos.
Luego se colocaron en viales plásticos debidamente rotulados con el lugar, fecha y tipo de
trampa. Se colocaron únicamente 50 insectos por frasco para evitar que perdieran partes
corporales importantes para su posterior identificación y pruebas moleculares. Las muestras
fueron transportadas en hieleras con hielo seco al laboratorio de la UVG. Una vez en el
laboratorio los zancudos fueron conservados a -70º C hasta su posterior procesamiento.
Adicionalmente a las trampas CDC y grávida, en el presupuesto de este proyecto se
contempló la compra y colocación de trampas BG-Sentinel con cebo especial para el
zancudos del género Aedes. Debido a diversos factores, independientes de los
investigadores, la obtención de estas trampas fue retrasada hasta julio 2008. Con el fin de
cumplir con lo propuesto inicialmente, se procedió a solicitar una prórroga para realizar las
colectas con trampas BG a partir de agosto 2008, la cual fue otorgada. En cada viaje de
11
colecta se colocó una trampa en cada uno de los 10 cuadrantes del estudio. Las trampas BG
fueron colocadas al amanecer y colectadas antes del anochecer.
I.4.2.2. Identificación de los zancudos y pruebas moleculares:
Los zancudos se identificaron individualmente hasta especie con la ayuda de la
clave dicotómica para zancudos de Guatemala (Clark-Gil y Darsie 1983). La identificación
fue realizada utilizando un estereoscopio y sin romper la cadena fría por dos biólogas y una
técnica entomólogas previamente entrenadas para dicho trabajo en nuestro equipo.
Después de haber sido identificados, los zancudos se colocaron en grupos (“pools”)
de hasta 50 individuos en un vial plástico. Los pools se realizaron con zancudos de la
misma especie, lugar, fecha, tipo de trampa y sexo y se guardaron a -70 °C.
Posteriormente los pools fueron macerados, su ARN extraído y se analizaron por
medio de pruebas moleculares para detección del genoma viral. Brevemente: se realiza el
macerado en un medio especial que luego permite el cultivo en células para realizar
aislados virales, los macerados son divididos en dos alícuotas; el ARN se extrajo de una de
las alícuotas utilizando un kit de la casa comercial Qiagen especial para extracción viral
(QIAamp viral RNA mini kit); luego el genoma es convertido a ADNc y amplificado con
cebadores específicos por el método de RT-PCR. En el caso de las pruebas para Flavivirus
de haber amplificación, ésta es detectada por medio un gel de agarosa al 2%. Para
determinar si este Flavivirus corresponde a VON se utilizó una prueba de RT-PCR en
tiempo real (Lanciotti et al 2000).
Para la confirmación de los resultados obtenidos, aunque no forma parte de los
objetivos de este proyecto, con recursos de contrapartida se enviarán duplicados de las
muestras obtenidas a los laboratorios de los Doctores Nicholas Komar, Barbara Johnson y
Ann Powers de la División de Enfermedades Transmitidas por Vectores (DVBID por sus
siglas en inglés), Centros de Control y Prevención de Enfermedades de los Estados Unidos
(CDC) en Fort Collins, Colorado, que colaboran con este esfuerzo. En dichos laboratorios
12
realizan pruebas de confirmación y cuando es posible, cultivo celular para aislamiento
viral.
I.4.3. Monitoreo de la transmisión del Virus del Oeste del Nilo dentro del sitio de
estudio
I.4.3.1. Utilización y muestreo de gallinas centinela
La transmisión viral fue monitoreada utilizando gallinas centinela (aves jóvenes
macho o hembra de la especie Gallus gallus). Antes de ingresar al estudio, cada gallina
centinela fue muestreadas para confirmar que era negativa para VON mediante la prueba de
ELISA de bloqueo. Se consideró que hubo actividad viral cuando se observó
seroconversión (paso de negativo a positivo a VON) en estas mismas gallinas.
Se colocaron 5-10 gallinas centinela en los mismos sitios de muestreo de zancudos
(Figura 6). Las gallinas fueron marcadas con bandas metálicas con un número único de
identificación. Durante cada viaje, en cada uno de los sitios de muestreo se tomaron
muestras de sangre de estas aves a razón de 1.0 mL por individuo. La sangre fue extraída de
la vena radial con una jeringa de tuberculina y colocada en un tubo microtainer con gel
separador. El tubo fue colocado a temperatura ambiente y luego centrifugado con una
centrifuga de campo para la separación del suero. Los sueros fueron conservados en cadena
de frío hasta llevarlos al laboratorio.
Para cada lugar y fecha se anotaron los datos correspondientes (individuo, sitio,
fecha, etc.) en una boleta previamente diseñada. El personal de campo fue entrenado por la
investigadora principal para el manejo correcto del material biopeligroso según las normas
establecidas por el Centro de Estudios en Salud, UVG.
13
I.4.3.2. Pruebas serológicas en el laboratorio
Los sueros fueron analizados en el Centro de Estudios en Salud por medio de la
técnica de ELISA de bloqueo descrita por Blitvich et al. 2003. Las pruebas serológicas se
realizaron utilizando fondos de contrapartida como se planteó originalmente en la
propuesta. Aunque no forma parte de los objetivos de este proyecto, las muestras que
dieron una serología positiva con ELISA de bloqueo serán enviadas posteriormente con
recursos de contrapartida a los laboratorios del Dr. Nicholas Komar y de la Dra. Ann
Powers (DVBID/CDC) donde nuestros colaboradores verificarán los resultados por medio
de la prueba de neutralización, reducción de placas (PRNT por sus siglas en inglés).
I.4.4. Recopilación y análisis de datos
I.4.4.1. Bases de datos
Los datos recopilados durante la investigación han sido ingresados en bases de datos
diseñadas por uno de los investigadores asociados. Se utiliza el programa ACCESS para
reportar los datos colectados tanto para zancudos como para aves domésticas. El encargado
de esta actividad ha verificado y realizado una copia semanal de los datos ingresados en las
Bases de Datos.
I.4.4.2. Análisis de datos
Se realizó un análisis de los datos para evaluar los siguientes aspectos:
• Si existe una estacionalidad en la transmisión a través del análisis de la
incidencia mensual del VON en gallinas centinela dentro del foco de
transmisión durante el periodo de estudio
• Si existe relación entre la densidad relativa de zancudos y la época de
transmisión.
14
La incidencia mensual del VON en gallinas se calculó de la siguiente forma:
Incidencia = (No. seroconversiones/semanas gallina (sumatoria del número de semanas de
exposición de las gallinas en estudio durante el mes respectivo))*1000
La densidad relativa de los zancudos se expresa como zancudos trampa/noche, es
decir cuantos zancudos de cada especie se colectaron en una trampa en una noche, en cada
sitio de colecta. Debido a que no se encontraron zancudos positivos al VON, no se se
calculó la tasa mínima de infección (MIR). MIR= número de pools positivos/ número total
de zancudos procesados*1000.
15
PARTE II
MARCO TEORICO
II.1 Flavivirus
La familia Flaviviridae es una familia de virus de ARN de hebra positiva. Esta
familia consiste de tres géneros, los Pestivirus, Hepacivirus y flavivirus. El género
Flavivirus contienen la mayor parte de las especies pertenecientes a la familia Flaviviridae
(Lindenbach & Rice 2001). Según la clasificación internacional más reciente el género
flavivirus incluye 53 especies de virus de las cuales 27 son transmitidas por zancudos, 12
por garrapatas y 14 son agentes zoonóticos sin vector conocido (VNC) (Gubler, Kuno &
Markoff 2007). Además de esta clasificación, es conocido que existen otros flavivirus de
insectos, que forman un grupo separado genéticamente y que están presentes en varias
regiones geográficas (Morales-Betoulle et al. 2008). De manera general, los flavivirus están
asociados a altos niveles de morbilidad y mortalidad en hospederos vertebrados alrededor
del mundo. Veintidós (65%) de los virus transmitidos por zancudos, 13 (76%) transmitidos
por garrapatas y 5 (23%) virus de VNC pueden causar enfermedad en humanos (Cuadro 1)
(Gubler, Kuno & Markoff 2007).
Usualmente los miembros del género flavivirus han sido clasificados por medio
de ensayos serológicos (neutralización). En base a la reactividad cruzada resultante de estos
ensayos, se ha agrupados a los flavivirus en ocho complejos antigénicos (Calisher et al.
1989). Dos de estos grupos lo conforman los flavivirus transmitidos por zancudos, cada uno
de estos grupos se distingue por la sintomatología clínica que provocan en humanos y por
su ecología. Los flavivirus que causan encefalitis, se encuentran en el serogrupo de
Encefalitis Japonesa e incluyen al Virus de encefalitis japonesa (VEJ), Virus del Oeste del
Nilo (VON), Virus de encefalitis del valle de Murray (VEVM), Virus de la encefalitis de
Saint Louis (VESL) y al Virus Kunjin (Kuno et al. 1998; Calisher et al. 1989). Todos estos
virus son zoonóticos, sus hospederos vertebrados naturales son aves y sus principales
vectores son zancudos del género Culex. El otro grupo incluye virus vicerotrópicos que
pueden causar fiebres hemorrágicas como el Virus de la fiebre amarilla (VFA) y el Virus
16
dengue (DEN). Estos virus tienen un ciclo silvestre que involucra primates inferiores como
hospederos vertebrados y zancudos del género Aedes como vectores principales (Gubler et
al. 2007; Hoshino et al. 2007).
II.2 Características moleculares del VON
II.2.1 Estructura del virión y del genoma
Los viriones del VON tienen ∼ 50 nm de diámetro, son esféricos y envueltos.
La nucleocápside tiene un diámetro de 25 nm y está compuesta de múltiples copias de la
proteína C (Brinton 2002) (Figura 3).
Figura 3. Electromicrografía del Virus del Oeste del Nilo.
Fuente: CDC y Universidad de Iowa en
http://www.lib.uiowa.edu/hardin/md/cdc/flavivirus.html
Es un virus de ARN de simple hebra en sentido positivo. El genoma (Figura 3)
tiene una longitud de 11,029 nucleótidos y contiene un solo marco abierto de lectura de
10,301 nucleótidos (Brinton 2002). Codifica para 10 proteínas funcionales, 3 estructurales
y 7 no estructurales (Petersen 2001). Durante la traducción, varias enzimas (proteasas)
17
cortan el polipéptido generado varias proteínas funcionales. Algunas de estas proteasas son
proveídas por las células del hospedero (Brinton 2002).
Dentro de las proteínas estructurales se encuentran la proteína de la cápside (C), de
membrana (M) y de envoltura (E). La proteína M es sintetizada como una proteína
precursora (prM). La proteína prM es procesada a pr + M durante la maduración del virus
por una convertasa (furina). Las proteínas no estructurales son NS1, NS2a, NS2b, NS3,
NS4a, NS4b y NS5, que incluyen proteasas, polimerasas, etc. (Petersen 2001).
Figura 4. Estructura del genoma de los flavivirus.
Fuente: modificado de Keen (1999)
II.2.2. Replicación
La replicación del VON se lleva a cabo en el citoplasma y dura 20-30 horas (Keen
1999). El genoma (ARN) es muy similar al ARN mensajero (ARNm) excepto por la
ausencia del extremo poli-adenilado (poli-A). Por esta razón, el virus es capaz de utilizar la
maquinaria celular para la síntesis de las proteínas estructurales, y no estructurales (Zanotto
1996).
La unión y entrada (Figura 5.1 y 5.2) se realiza por medio de una interacción de las
proteínas E con receptores celulares. La endocitosis puede ser mediada por un receptor o se
puede realizarse por medio de la fusión directa de la envoltura viral a la membrana
plasmática (Brinton 2002). Estos receptores celulares aun no se conocen, pero deben de
estar ampliamente distribuidos en el cuerpo en los sitios de infección por VON (Keen
18
1999). Luego de la entrada a la célula, hay una acidificación de las vesículas pre-
lisosómicas, lo que permite la fusión con la membrana. La nucleocápside se libera al
citoplasma por medio de un cambio en la conformación de la proteína E y posteriormente
se realiza el desensamblaje del virión (Fig. 5.3 y 5.4). El ribosoma celular es crucial para la
replicación del VON, ya que este traduce el ARN en una poliproteína (Fig. 5.5) (Brinton
2002). Una vez traducida la poliproteína, ésta es cortada por una serie de proteasas, tanto
virales como celulares, para generar polipéptidos. Uno de éstos polipéptidos, es una
polimerasa (proteína no estructural) encargada de sintetizar la hebra complementaria de
ARN en sentido negativo (Fig. 5.6). Esta hebra es utilizada como templado para la síntesis
del ARN genómico de la progenie (Zanotto 1996). Subsecuentemente, las partículas virales
son ensambladas en las vacuolas del citoplasma. Se sintetiza y acumula la envoltura y
ocurre la lisis celular o la exocitosis (Fig. 5.7 – 5.9) (Flint et al 2000, Knipe y Howley
2001).
Figura 5. Replicación de los flavivirus.
Fuente: modificado de Burke y Monath (2001).
19
II.3 Ciclo de transmisión del VON
El ciclo de transmisión del VON implica a un insecto vector, por lo general un
zancudos del género Culex, sin embargo zancudos de otros géneros como Ochlerotatus o
Aedes pueden también ser vectores del VON (Kilpatrick et al. 2005). Los reservorios
naturales de este virus son las aves por lo que el virus se mantienen y dispersa en la
naturaleza en un ciclo de transmisión ave-zancudo-ave. Sin embargo, también pueden ser
hospederos ocasionales los humanos y equinos como lo ilustra la Figura 6.
Figura 6. Ciclo de transmisión del Virus del Oeste del Nilo
Fuente: CDC (2005).
Además de los humanos y equinos, otros hospederos vertebrados del VON se han
descrito recientemente como hámsters, lobos, perros, monos, venados e incluso en reptiles
como los lagartos (Campbell et al. 2002; McLean et al. 2002; Miller et al. 2003, Ratterre et
al. 2003; Lichtensteiger 2003; Miller et al. 2005; Read et al. 2005; Jacobson et al. 2005;
ver revisión de Van der Meulen et al. 2005). Debido a su amplio espectro de vectores y
hospederos el VON es un virus con un alto potencial de expansión.
20
El VON es mantenido en la naturaleza en el ciclo enzootico. Los zancudos se
alimentan de aves virémicas (huéspedes amplificadores que normalmente son
asintomáticas), llegan a ser infectados y transmiten el virus a otro huéspedes amplificadores
(Berrocal et al. 2006). El período de tiempo desde que el zancudo es infectado, hasta que
las glándulas salivales se infectan y el virus puede ser transmitido se conoce como “periodo
de incubación extrínseco”. Este periodo dura de 8 a 14 días, dependiendo de la temperatura
ambiente y de la cepa de virus y zancudo (Gubler et al. 2007). Si las condiciones
apropiadas se dan (temperatura, especies de zancudos, densidad de población de zancudos,
huéspedes susceptibles) ocurrirá una epizootia en la población aviar que mantendrá el virus
en la naturaleza (Berrocal et al. 2006; Turrell et al 2001)
II.4 Patogénesis, transmisión y prevención
III.4.1 Patogénesis
Cerca del 80% de las personas infectadas con VON con asintomáticas y el 20%
tienen una enfermedad febril, sintoma mas común observado en los humanos. El período
de incubación es de 2 a 14 días, aunque en períodos de incubación muy largos puede surgir
una inmunosupresión, y de 2 a 6 días para los casos febriles. Clínicamente, la encefalitis
por VON es típica a las producidas por arbovirus (WHO 2007, Berrocal et al. 2006;
Mackenzie et al 2004, Petersen et al 2003).
Se caracteriza por fiebres, dolor de cabeza, dolor de espalda, mialgias que persisten
por tres días a varias semanas. Dolor de ojos, faringitis, nauseas, vómitos, diarreas, dolor
abdominal y fatiga prolongada también puede ocurrir. En la mitad de las personas puede
ocurrir sarpullido maculopapular que empieza en el tronco y se propaga a las extremidades
y a la cara (Petersen et al 2003).
Respecto a secuelas neurológicas, el riesgo está asociado con edad avanzada e
inmunosupresión, especialmente terapias inmunosupresoras y cánceres hematológicos. Hay
3 formas neurológicas: encefalitis, meningitis y parálisis flácida aguda. Uno de cada 150
infecciones resulta en meningitis o encefalitis. En los pacientes con encefalitis, se ve mal de
21
Parkinson, debilidad en los músculos y cambios en los niveles de conciencia (Mackenzie et
al 2004, Petersen et al 2003).
El síndrome de parálisis flácida consiste en una parálisis asimétrica sin dolor ni
perdida sensorial. Su evolución es rápida y ocurre generalmente en los jóvenes (Petersen et
al 2003).
En los Estados Unidos, personas de todas las edades son igualmente susceptibles a la
infección por VON, pero la incidencia de una enfermedad neuroinvasiva y la muerte
incrementa con la edad, especialmente entre los 60 a 89 años, y parece ser un poco
relacionados a los hombres (Hayes et al 2005).
Los datos de la vigilancia en los Estados Unidos indican que el riesgo incrementa en 1.5
por cada década (Mackenzie et al 2004). Para FON, la edad promedio es de 40 a 49 años,
para meningitis es de 40 años y para encefalitis es 50 a 70 años. Para FON el pico de edad
para la incidencia es de 40 a 49 años. No se ha explicado la relativa resistencia de los niños
(Petersen et al 2003).
III.4.2 Transmisión y prevención
Una de las características más importantes para la transmisión viral es su capacidad
de reproducirse en su vector, ya que sin ella no podrían ser transmitidos de un hospedero a
otro (Keen 1999). Las etapas para la transmisión biológica del VON en su vector se
resumen en la Figura 7: 1) Ingestión de sangre que contiene el virus; 2) Infección de las
células epiteliales en el mesenterón; 3) Escape del virus de las células del mesenterón; 4)
Infección de las glándulas salivares, y; 5) Secreción del virus en la saliva durante la
realimentación en un hospedero susceptible (Burke y Monath 2001).
22
Figura 7. Etapas requeridas para la infección por Virus del Oeste del Nilo y su transmisión
por un artrópodo.
Fuente: modificado de Burke y Monath (2001).
La clave para la prevención de la enfermedad humana y animal asociada al VON y
otros Flavivirus es la respuesta apropiada a la información proveída por la vigilancia. Una
vigilancia completa comprende: la vigilancia en aves/zancudos y en humanos (AMCA
2005).
También es importante enfocarse en los vectores, identificar sus criaderos y realizar
un control a través de la captura de larvas y zancudos adultos. Para ello se debe saber en
cada región geográfica cual es el vector principal y conocer su biología (AMCA 2005).
II.5 Vectores
De los mas de 70 virus que comprende el género Flavivirus, la mayoría son
transmitidos por artrópodos, principalmente zancudos o garrapatas. El 30% no poseen un
vector conocido. Estos incluyen a virus que se replican exclusivamente en artrópodos
(propagándose solamente en células de zancudos) y formando un sub-grupo filogenético
separado (Gaunt et al. 2001, Hoshino et al. 2007). Dentro de los flavivirus de vector
desconocido se encuentran diversos agentes zoonóticos transmitidos (generalmente entre
roedores y murciélagos) por un vector desconocido (Burke y Monath 2001).
23
El VON ha sido aislado de los zancudos del género Culex (Figura 8), Aedes
(Figura 9), Ochlerotatus, Anopheles y otros, en Asia, África y Estados Unidos (Brinton
2002). Sin embargo, los Culex son los más susceptibles a la infección por el VON.
Probablemente, los vectores primarios (que amplifican el virus dentro de las poblaciones de
aves) más importantes son Culex pipiens, Cx. restuans y Cx. quinquefasciatus. Sin
embargo, los vectores puente entre aves y mamíferos no están bien identificados (Petersen
2002).
Figura 8. Hembra adulta de Culex quinquefasciatus
Fuente: Walter Reed Biosystematics Unit (WRBU) http://wrbu.si.edu/
24
Figura 9. Hembra adulta de Aedes aegypti
Fuente: Walter Reed Biosystematics Unit (WRBU) http://wrbu.si.edu/
II.6 Epidemiología del VON
El Virus del Oeste del Nilo es el arbovirus mas distribuido en todo el mundo, se
encuentra en todos los continentes a excepción de la Antártica. Ha sido causante de
múltiples brotes de meningitis alrededor del mundo (Kuno et al. 1998). Fue aislado e
identificado por primera vez en 1937 a partir de una persona infectada en la región del
Oeste del Nilo en Uganda. Desde 1937, había causado brotes infrecuentes relacionados
principalmente a fiebres. Sin embargo, la frecuencia y la severidad en los síntomas
aumentaron a mediados de los años 90.Las epidemias documentadas antes de 1996
generalmente han sido casos en su mayoría de poblaciones rurales, con pocos casos de
enfermedad neurológica severa (Kramer et al 2008).
25
Los análisis filogenéticos de la secuencia de nucleótidos de un gran número de
genomas completos han demostrado la existencia de dos linajes genéticos principales del
VON (Berthet et al. 1997; Lanciotti et al. 2002). Sin embargo, recientemente Bondre y
colaboradores, tras la comparación de secuencias parciales y completas de aislados virales
de India, han propuesto la existencia de 5 linajes genéticos diferentes. El linaje 1
comprende aislados de varias partes de África, el Medio Oriente, Europa, Australia y el
Hemisferio Occidental y ha sido asociado a las mayores epidemias del virus. Los virus de
linaje 2 han sido aislados de África y Madagascar y son mantenidos principalmente en
ciclos enzooóticos. El linaje 3 está conformado por el aislado de Austria conocido como
virus de Rabensburg (Bakonyi et al. 2005). Los aislados de Rusia representan el linaje 4 y
13 aislados de India forman el quinto linaje (Bondre et al. 2007).
El linaje I está compuesto por diversos sublinajes con heterogeneidad considerable
en cuanto al carácter antigénico y secuencia de nucleótidos (Gubler et al. 2007; Berthet et
al. 1997, Lanciotti et al. 2002). Los datos de la secuencia de nucleótidos, sugieren que el
virus introducido a Nueva York pertenece al linaje I originario del Medio Oriente (Lanciotti
et al. 1999). Aunque no se sabe con exactitud como ha evolucionado el virus en el
continente americano, se han observado cambios genéticos en los virus aislados en 2003 en
Texas y México. Estudios recientes sugieren que estos cambios han tenido como resultado
una disminución en las propiedades neuroinvasivas del VON (Gubler et al. 2007). Según
Hayes y colaboradores, a medida que se extiende el rango geográfico de distribución de
VON y se obtienen mas aislados virales (y sus secuencias genéticas), se muestra que los
virus presentan modificaciones genéticas ligadas a distintos patrones de neuroinvasividad y
neurovirulencia (Hayes et al. 2005b).
La infección por Virus del Oeste del Nilo ha sido un problema que ha preocupado a
los Estados Unidos desde 1999 y fue una de las primeras epidemias reportadas en grandes
poblaciones urbanas (Kramer et al 2008, CDC 1999). En el primer brote que se dio en
Nueva York se reportaron 62 casos de encefalitis en humanos y 7 muertes (CDC 1999). En
el área mas intensa de transmisión de VON en ese año se infectaron 2.6% de los residentes,
siendo la mayoría de las infecciones asintomáticas (Hayes et al 2005).
26
La tasa de casos fatales por VON en los Estados Unidos se encuentra entre en el
rango de 4% a 18% en pacientes hospitalizados, y para los casos reportados al CDC entre el
2.7% al 14%. La tasa de letalidad para los casos de encefalitis es del 19% (Montana State
University 2006). Sin embargo, no hay datos accesibles de la incidencia de VON en la
mayoría de países del mundo, pero se reporta que en Norteamérica, Europa y el
Mediterráneo presenta una estacionalidad (de julio a octubre) (Hayes et al 2005).
Desde que el virus fue detectados en Nueva York de 1999 a Junio del 2008 se han
reportado 27, 618 casos al Centro de Control y Prevención de enfermedades (CDC); 11,069
de estos casos fueron clasificados como una enfermedad neuroinvasiva, 15,849 como fiebre
por VON y 700 como presentaciones clínicas inespecíficas.
En América Latina se ha reportado evidencia de circulación de VON (esencialmente
serológica) en caballos y aves de Guadalupe, México, El Salvador, Jamaica, República
Dominicana, Puerto Rico, islas Caimán, Cuba, Colombia, Trinidad y Argentina (Komar &
Clark 2006; Dupuis et al. 2005; Kramer et al. 2008). Aún así, se ha observado poca
evidencia de morbilidad y mortalidad en humanos y equinos. Una hipótesis establece que la
virulencia del VON se habría reducido en las regiones tropicales debido a la protección
cruzada provocada por la presencia de otros flavivirus que circulan en estas regiones
(Kramer et al. 2008).
Se sospecha que las aves migratorias son los principales huéspedes introductorios
del virus, pues los brotes en las regiones templadas ocurren en general durante el fin del
verano y principios del otoño, coincidiendo con la llegada de grandes grupos de aves
migratorias. Los brotes a menudo ocurren entre los seres humanos que habitan cerca de
zonas pantanosas, donde se establece contacto entre concentraciones de aves con gran
número de mosquitos, que a su vez son capaces de infectar a los humanos (Rappole et al,
2000). Además de las aves migratorias, los viajes internacionales de personas infectadas
hacia Nueva York y la importación de aves o de mosquitos son otras posibles fuentes de
introducción del virus del VON a Norteamérica (CDC 2001).
27
Aunque el VON produce viremias mas altas en las aves que otras encefalitis e
infectan mas a los zancudos, esto no parece tener un efecto en la incidencia de la
enfermedad (Montana State University 2006). Por lo que, los niveles de infección no son
suficientes para disminuir la frecuencia de las epidemias o para moderar la intensidad, y
además el riesgo de infectarse con VON varía considerablemente en tiempo y espacio
(Montana State University 2006; Hayes et al 2005).
II.7 Vigilancia entomológica
La vigilancia del VON se puede realizar a través de un sistema pasivo de vigilancia
(basado en el diagnóstico clínico de infección de VON en caballos) o por vigilancia activa
(desarrollo de una red epidemiológica específica para detectar VON y/o anticuerpos
dirigidos hacia el virus). Cada sistema de vigilancia tienen que adaptarse a las condiciones
epidemiológicas, climáticas y geográficas del área en estudio. La vigilancia puede
establecerse a cualquiera de los distintos niveles del ciclo de transmisión del virus del ON:
aves, caballos, zancudos, humanos (Dauphin et al., 2004). Los esfuerzos de vigilancia se
han enfocado principalmente en los zancudos, aves muertas y gallinas centinelas. Los pools
de zancudos infectados con VON son el indicador más preciso de casos humanos (Kramer
et al., 2008).
El objetivo principal de un sistema de vigilancia entomológica para prevención de
brotes de encefalitis tiene como propósito detectar tempranamente la circulación del virus
en los vectores locales, detectar aumento en las poblaciones vectoriales y tener un registro
de las especies vectores responsables de la transmisión (Méndez et al 2003).
Los datos de abundancia poblacional y tasa de infección viral permiten, evaluar el
riesgo de infección en humanos, identificar áreas geográficas de alto riego, identificar
hábitats larvarios, monitorear el impacto de las medidas de prevención y control y
establecer intervalos de tiempo entre una intervención de control y otra, así como la
intensidad de las mismas (Méndez et al 2003).
28
Entre las actividades entomológicas básicas de un programa de vigilancia esta la
identificación y mapeo de hábitat larvarios: permite tener un estimado de las poblaciones
vectoriales futuras; y a veces permite actuar directamente en su eliminación. Actualmente
el método más efectivo para prevenir casos humanos es reducir el riesgo de la interacción
entre vector / hospedero humano mediante el control vectorial. El control vectorial más
económico y efectivo es la reducción de poblaciones larvarias. Otra medida importante es
el monitoreo de las poblaciones de los zancudos adultos para con ello vigilar las
variaciones en la densidad poblacional (CDC 2001).
En un sistema de vigilancia, en ausencia de un brote, el objetivo es sobre todo
detectar a tiempo la presencia del virus en poblaciones vectores para decidir las medidas de
prevención más adecuadas.
29
PARTE III
III.1. RESULTADOS
Se identificaron un total de 43,353 zancudos hembra adultos. De éstos 40,978 se
colectaron en trampas CDC, 2,230 en trampas Grávidas y 145 en trampas BG-Sentinel.
Además de especies de Culex y Aedes se capturaron individuos pertenecientes a otros 7
géneros diferentes, para un total de al menos 35 especies. La mayor parte de capturas se
realizaron utilizando trampas CDC, con una razón de captura de casi 18 veces mayor que la
de la trampa grávida (Cuadro 1). Los resultados de las capturas utilizando trampas BG-
Sentinel se presentan y analizan aparte (Cuadro 2) debido a que fueron realizadas con un
esfuerzo de muestreo y en una época diferente a la de las trampas CDC y Grávidas. En
total se procesaron 2,343 pools de zancudos distribuidos de acuerdo a fecha, especie, tipo
de trampa y sitio de colecta.
Cuadro 1 (parte I). Zancudos hembra adultos colectados de agosto 2007 a julio 2008 con trampas CDC y Grávidas en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal.
No. Especie CDC Grávida Total Individuos1 Aedes aegypti 7 22 292 Ae. albopictus 21 14 353 Ae. angustivittatus 547 1 5484 Ae. euplocamus 1 0 15 Ae. scapularis 82 0 826 Ae. serratus 1 0 17 Ae. taeniorhynchus 78 0 788 Ae. sp.a 18 3 219 Aedomyia squamipennis 1 0 1
10 Anopheles albimanus 4 0 411 An. punctimacula 2 0 212 An. vestitipennis 1 0 113 Coquilletidia sp. 1,021 0 1,02114 Culex chidesteri 924 6 93015 Cx. complejo coronator 1,653 100 1,75316 Cx. corniger lactator 53 0 5317 Cx. declarator-mollis 33 1 3418 Cx. erraticus 136 4 14019 Cx. Mollis/inflictus 4,833 6 4,83920 Cx. inflictus 1,011 0 1,01121 Cx. interrogator 501 16 51722 Cx. (Melanoconion) sp. 304 15 31923 Cx. nigripalpus 12,104 82 12,18624 Cx. quinquefasciatus 1,796 1,740 3,536
30
Cuadro 1 (Parte II). Zancudos hembra adultos colectados de agosto 2007 a julio 2008 con trampas CDC y Grávidas en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal.
No. Especie CDC Grávida Total Individuos25 Cx. taeniopus 3,937 32 3,96926 Cx. theobaldi 593 2 59527 Cx. sp.a 10,857 154 11,01128 Deinocerites cancer 1 0 129 Mansonia dyari 109 0 10930 Ma. titillans 138 3 14131 Psorophora albipes 43 0 4332 Ps. confinnis 30 0 3033 Ps. Ferox 20 0 2034 Ps. howardii 1 0 135 Ps. varipes 68 1 6936 Ps. sp.a 12 0 1237 Uranotaenia lowii 16 23 3938 Ur. orthodoxa 18 4 2239 Ur. sp.a 3 1 4
Total 40,978 2,230 43,208aEspecímenes no identificados hasta especie debido a falta de caracteres importantes para la identificación. Podrían comprender varias especies. Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006). Cuadro 2. Zancudos hembra adultos colectados de agosto 2008 a enero 2009 con trampas BG-Sentinel en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal. No. Especie Total Individuos1 Aedes aegypti 16 2 Ae. albopictus 11 3 Ae. sp.a 24 4 Coquilletidia sp. 2 5 Culex. interrogator 2 6 Cx. taeniopus 1 7 Cx. quinquefasciatus 54 8 Cx. (Melanoconion) sp. 4 9 Cx. sp.a 31 Total 145 aEspecímenes no identificados hasta especie debido a falta de caracteres importantes para la identificación. Podrían comprender varias especies. Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006).
31
• Objetivo 1: Colectar zancudos del género Culex con el fin de detectar la posible
infección de éstos por el VON.
o Resultados:
En total se procesaron un total de 1,875 pools (40,984 individuos) de Culex
pertenecientes al menos a 13 especies diferentes. Todos los pools de zancudos
fueron analizados por métodos moleculares para detectar la presencia de VON.
Ninguno de estos se encontró positivo al virus. Debido a esto no se calculó la
tasa mínima de infección. Sin embargo, en estudios paralelos se obtuvieron de
estas muestras 3 aislados virales no identificados (negativos para VON) a partir
de un mismo número de pools de Cx. taeniopus y un asilado de Alphavirus
(Togaviridae) de un pool de Cx. sp. (Morales-Betoulle et al. datos no
publicados) (Cuadro 3). Los aislados virales se realizaron en los laboratorios de
Fort Collins y su identificación está pendiente. También se encontraron pools de
Cx. quinquefasciatus, Cx. interrogator y Cx. sp. positivos a Flavivirus
(negativos a VON). De especies de otros géneros, únicamente se encontraron
positivos pools de Coquillettidia nigricans/venezuelensis (Morales-Betoulle et
al. datos no publicados). Estos resultados se encuentran pendientes de
confirmación en CDC DVBID Fort Collins.
32
o Indicadores obtenidos:
Cuadro 3. Aislados virales y pools positivos a Flavivirus obtenidos a partir de zancudos colectados entre agosto 2007 y enero 2009 en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal. No. Especie Método colecta Resultado 1 Culex taeniopus trampa CDC de luz Negativo a VON, aislado sin identificar 2 Cx. sp.a trampa CDC de luz Negativo a VON, aislado de Alphavirus 3 Cx. sp.a BG-Sentinel Negativo a VON, positivo Flavivirus,
pendiente de identificación 4 Cx. quinquefasciatus BG-Sentinel Negativo a VON, positivo Flavivirus,
pendiente de identificación 5 Cx. interrogator BG-Sentinel Negativo a VON, positivo Flavivirus,
pendiente de identificación 6 Coquillettidia sp. BG-Sentinel Negativo a VON, positivo Flavivirus,
pendiente de identificación aEspecímenes no identificados hasta especie debido a falta de caracteres importantes para la identificación. Podrían comprender varias especies. Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006).
33
• Objetivo 2: Colectar zancudos del género Aedes con el fin de detectar la posible
infección de éstos por el VON.
o Resultados:
En total se procesaron un total de 208 pools (846 individuos) de Aedes
pertenecientes a 7 especies diferentes. Todos los pools fueron analizados por
métodos moleculares para detectar la presencia de VON. Ninguno se encontró
positivo al virus. Debido a esto no se calculó la tasa mínima de infección.. La
mayoría de especies de Aedes fue capturada en bajas densidades en todos los
tipos de trampas, siendo la más abundante Ae. angustivittatus.
• Objetivo 3: Estudiar la variación de la densidad relativa de los géneros Culex y Aedes
durante diferentes épocas de transmisión.
o Resultados:
Tomando en cuenta tanto las densidades de zancudos de los géneros Culex y
Aedes como el resto de especies registradas, se observaron mayores densidades
totales en los hábitats rurales en relación a los urbanos con una razón de 4 a 1
(Figura 10). Las mayores densidades de zancudos en 2007 se registraron
durante los meses de agosto y septiembre, para luego declinar
considerablemente a partir de octubre 2007. Durante 2008 las densidades
vuelven a aumentar en junio siguiendo un patrón similar al observado al año
anterior.
Debido a la poca efectividad de captura de las trampas BG-Sentinel, la
densidad de zancudos para el periodo de captura con estas trampas no
sobrepasan los 4 individuos (Figura 11). Debido a esto no se considera que
pueda estimarse una variación temporal de las especies capturadas en ellas con
suficiente confiabilidad. En términos generales, la captura de zancudos con estas
trampas fue mayor en los hábitats urbanos que en los rurales.
34
Figura 10. Densidad mensual de zancudos colectados con trampas CDC de luz y Grávidas en diferentes hábitats de agosto 2007 a julio 2008 en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal.
0
200
400
600
800
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Ag 07Sep
07Oct
07
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Mar 08
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May 08Jun 0
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Mes
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ncud
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RURAL URBANO
Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006). Figura 11. Densidad mensual de zancudos colectados con trampas BG-Sentinel en diferentes hábitats de agosto 2008 a enero 2009 en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal.
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
Ag 08Sep
08Oct
08
Nov 08
Dic 08
Ene 09
Mes
Den
sida
d tra
mpa
-noc
he d
e za
ncud
os
RURAL URBANO
Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006).
35
Las especies más capturadas fueron, en orden de abundancia, Cx.
nigripalpus, Cx. mollis/inflictus, Cx. taeniopus y Cx. quinquefasciatus (Cuadro
1). Conjuntamente estas especies representan el 57% de las capturas. La mitad
de la abundancia de Cx. quinquefasciatus proviene de las colectas realizadas en
trampas grávidas, para las cuales corresponde, por mucho a la especie
mayormente capturada. Los individuos adultos de la especie Cx. mollis no
pueden diferenciarse morfológicamente de algunos adultos de la especie Cx.
inflictus (solamente las larvas), estos individuos se reportaron como Cx.
mollis/inflictus por lo que los pools que los contienen probablemente tienen una
mezcla de ambas especies. Por otro lado, se identificaron como Culex. sp.,
Aedes. sp., y otros géneros como Uranotaenia sp. y Psorophora sp. a todos los
especimenes que perdieron caracteres indispensables para una clasificación más
profunda. De acuerdo a la fecha de muestreo y tipo de trampa, es muy probable
que estos pools contengan mezclas de diferentes especies de cada género.
Al analizar las densidades individuales de las especies más abundantes a lo
largo del estudio (Figura 12), puede observarse que en términos generales
siguen el mismo comportamiento que las densidades totales de zancudos, con
densidades altas en los meses de agosto y septiembre 2007, para caer en octubre
2007 y permanecer bajas hasta mayo 2008. Como excepción, Cx.
quinquefasciatus presentó bajas densidades en los últimos meses de 2007
muestreados, para aumentar a partir de marzo 2008 y llegar a su máximo en
mayo.
36
Figura 12. Densidad mensual de las especies de zancudos más abundantes durante agosto 2007 a julio 2008 capturados con trampas CDC y Grávidas en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal.
0
20
40
60
80
100
120
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160
180
200
Ag 07Sep
07Oct
07
Nov 07
Ene 08
Feb 08
Mar 08
Abr 08
May 08Jun 0
8Jul 0
8
Mes
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-noc
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os
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
30.00
35.00
Incidencia de VO
N en gallinas centinela
Incidencia Cx. nigripalpus Cx. taeniopusCx. mollis/inflictus Cx. quinquefasciatus
Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006).
• Objetivo 4: Monitorear la estacionalidad del VON por medio de estudios serológicos
utilizando gallinas centinela.
o Resultados:
Se han mantenido aproximadamente 90 gallinas centinelas repartidas entre
los 10 diferentes sitios de estudio, a las cuales cada mes se les tomó una muestra
se sangre para ser analizada en el laboratorio (Tabla 2). En el mes de agosto
2007 seroconvirtieron (pasaron de ser negativas a positivas a VON) 5 gallinas y
en octubre 1. Esto indica que el VON se encuentra circulando en la región. En el
resto de meses no se observaron seroconversiones.
Al comparar los patrones de densidad de zancudos con las seroconversiones
de centinelas puede observarse que en 2007 los meses de alta densidad de
zancudos coinciden con los meses en los que se detectaron seroconversiones de
gallinas centinela (Figura 13). Durante 2008 no se detectaron seroconversiones
que coincidieran con el aumento de las densidades a partir de junio 2008, sin
37
embargo, estudios posteriores muestran 1 seroconversión en agosto 2008
(Morales-Betoulle, et al. datos no publicados).
o Indicadores obtenidos:
Cuadro 4. Incidencia de Virus del Oeste del Nilo en gallinas centinela en un Foco de Transmisión, Puerto Barrios, Izabal, años 2007 a 2009.
Año Mes Total
individuosb Individuos
sero-convertidos
% Semanas-gallina
Incidencia *1000 semanas-
gallina 2007 Ago 48 5 10.42 158.29 31.59 Sep 104 0 0.00 232.29 0.00 Oct 59 1 1.69 264.00 3.79 Nov 56 0 0.00 172.71 0.00 2008 Ene 76 0 0.00 651.71 0.00 Feb 88 0 0.00 256.57 0.00 Mar 92 0 0.00 203.14 0.00 Abr 125 0 0.00 434.43 0.00 May 79 0 0.00 299.57 0.00 Jun 119 0 0.00 257.43 0.00 Jul 84 0 0.00 382.57 0.00
aFuente: Morales-Betoulle, et al. datos no publicados. No se detectaron seroconversiones previas a mayo durante 2007. bEl número total de gallinas centinela representa la cantidad de aves sin seroconversión previa.
Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006).
38
Figura 13. Densidad total de zancudos e incidencia de seroconversiones a VON detectadas en gallinas centinela de agosto 2007 a mayo 2008 en un Foco de Transmisión en Puerto Barrios, Izabal.
0
100
200
300
400
500
600
Ag 07Sep
07Oct
07
Nov 07
Ene 08
Feb 08
Mar 08
Abr 08
May 08Jun 0
8Jul 0
8
Mes
Den
sida
d tra
mpa
-noc
he d
e za
ncud
os
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
30.00
35.00Incidencia de V
ON
en gallinas centinelaDensidad trampa-noche Incidencia
mIncidencia por 1000 semanas-gallina Fuente: Fodecyt 03-2007 y Proyecto Monitoreo Virus del Oeste del Nilo, Acuerdo Cooperativo CDC/CES-UVG (2006).
III.2. DISCUSION DE RESULTADOS
• Objetivo 1: Colectar zancudos del género Culex con el fin de detectar la posible
infección de éstos por el VON.
Discusión de resultados:
Durante el presente estudio no se detectaron pools de zancudos positivos a
VON para ninguna de las especies. Sin embargo, las especies Cx. mollis/inflictus
y Cx. quinquefasciatus encontradas positivas a VON en los estudios anteriores
en Puerto Barrios fueron las más abundantes. De estas especies, Cx.
quinquefasciatus es la única reportada en la literatura como vector de VON.
El hecho de que se encuentre una especie positiva a VON, o se obtengan
aislados virales de ella no la incrimina necesariamente como el vector local del
39
virus. Para esto son necesarios ensayos de competencia vectorial (capacidad de
replicar y transmitir el virus) y estudios de la biología de cada especie
(principalmente hábitos alimenticios y abundancias) así como una mejor
comprensión del ciclo natural del VON en la región (Hayes et al. 2005). Estos
estudios deben de realizarse con las poblaciones locales, ya que es posible
encontrar variaciones regionales en las diferentes especies. Para la mayor parte
de especies, se ha estudiado muy poco o nada de su biología, incluyendo para
algunas de interés como Cx. mollis/inflictus y Cx. chidesteri.
Otras especies de Culex de interés registradas durante el estudio son Cx.
nigripalpus y Cx. erraticus, ambas han sido previamente reportadas positivas a
VON en Estados Unidos (CDC 2007). De éstas, solamente Cx. nigripalpus
presentó densidades significativas durante este estudio. Especies de otros
géneros como Deinocerites cancer y Mansonia titillans capturadas en el
presente estudio, aunque en bajas densidades, también han sido reportadas
positivas a VON en otras regiones (CDC 2007) por lo que también representan
especies de interés.
La obtención de los aislados virales a partir de pools de Cx. taeniopus
(negativos para VON), incluyendo un Alphavirus es de gran importancia para
conocer otros arbovirus que circulan en la región. Esta no es la primera vez en la
que se aíslan virus a partir de esta y otras especies de Culex. Recientemente se
aisló una nueva cepa de Culex Flavivirus, un virus de insectos, de Cx.
quinquefasciatus colectados durante 2006 en Izabal (Morales-Betoulle et al.
2008). En cuanto a virus de potencial importancia para la salud humana y
animal, en 2004 se aisló un Bunya del grupo C (Bunyavirus: Bunyaviridae) a
partir de zancudos Cx. taeniopus colectados por miembros de nuestro equipo en
Punta de Manabique, Izabal (Powers et al. datos no publicados). A finales de la
década de los 80, E. W. Cupp y colaboradores (1986) aislaron virus Nepuyo
(Bunyavirus) y virus de Encefalitis Equina Venezolana –EEV- (Alphavirus) de
Cx. taeniopus, así como virus de Encefalitis de San Luis –ESL- (Flavivirus) de
Cx. nigripalpus, todos colectados en la costa Pacífico de Guatemala. En base a
este último reporte, existe la posibilidad que el Alphavirus aislado durante este
40
estudio sea de EEV. Esta y el resto de identificaciones pendientes se realizarán
más adelante con fondos de contrapartida ya que, como se dijo anteriormente,
no se encontraban contemplados dentro del presupuesto u objetivos de este
proyecto.
• Objetivo 2: Colectar zancudos del género Aedes con el fin de detectar la posible
infección de éstos por el VON.
o Discusión de resultados:
Las especies Aedes aegypti, Ae. albopictus y Ae. taeniorhynchus registradas
en bajas densidades durante el presente estudio han sido previamente reportadas
positivas a VON en Estados Unidos (CDC 2007), por lo que representan
especies de interés. Todas fueron colectadas en bajas densidades, no obstante,
esto puede ser un reflejo de la efectividad de los métodos de muestreo para los
miembros de este género.
• Objetivo 3: Estudiar la variación de la densidad relativa de los géneros Culex y Aedes
durante diferentes épocas de transmisión.
o Discusión resultados:
De las especies encontradas positivas para VON, tanto Cx. mollis/inflictus
como Cx. quinquefasciatus fueron de las especies más abundantes. Sin embargo,
las altas densidades de Cx. quinquefasciatus también se deben a que es la
especie mayormente capturada con trampas grávidas. En general, los meses con
mayor abundancia total de zancudos fueron agosto y septiembre 2007. De
acuerdo a datos obtenidos en INSIVUMEH, estos meses fueron también de los
más lluviosos de 2007. El comportamiento de las densidades totales de zancudos
y por especie puede ser un punto de partida para el conocimiento del
comportamiento de sus poblaciones. A largo plazo, debe analizarse este tipo de
información por varios años, así como relacionarla con variables ambientales
que pudieran relacionarse o explicar las variaciones en las densidades.
41
• Objetivo 4: Monitorear la estacionalidad del VON por medio de estudios serológicos
utilizando gallinas centinela.
o Discusión de resultados:
Durante este estudio se detectaron seroconversiones de gallinas centinela
durante los meses de agosto y octubre 2007. Estas seroconversiones confirman
que el VON se encuentra circulando en la región de estudio. No obstante, deben
ser analizadas dentro de un contexto más amplio. En muestreos de gallinas
centinela realizados en el Foco de Transmisión durante 2007 en los meses
anteriores al inicio de este estudio (enero a julio), la investigadora principal y
colaboradores (Morales-Betoulle et al. 2009, datos no publicados) detectaron
seroconversiones durante mayo a julio (Tabla 2). Estas seroconversiones
alcanzaron su nivel máximo durante los meses de junio y julio (2.44% e
incidencia de 2.81/1000), lo que indica que lo observado en octubre es el
descenso de la transmisión de VON en 2007, cuyo pico fue en junio y julio. Este
patrón de transmisión no se observa durante el siguiente año (2008), donde hasta
julio aún no se detectaron seroconversiones. Esto indica ya sea un descenso
(hasta hacerlo no detectable por la intensidad de muestreo) o un retraso en la
temporada de transmisión de VON. Es importante notar que, debido a la falta de
monitoreo actual de casos febriles dirigido a WNV, no puede saberse si la
circulación del virus en esta región ha afectado solamente a gallinas o puede
tener alguna incidencia en humanos.
42
PARTE IV
IV.1. CONCLUSIONES
Objetivo 1: Colectar zancudos del género Culex con el fin de detectar la posible infección
de éstos con VON.
o En base a los resultados obtenidos, no es posible involucrar a las especies de
zancudos del género Culex analizadas como posibles vectores del VON debido
a que no se encontró ARN viral en éstas.
• Objetivo 2: Colectar zancudos del género Aedes con el fin de detectar la posible
infección de éstos con VON.
o En base a los resultados obtenidos, no es posible involucrar a las especies de
zancudos del género Aedes analizadas como posibles vectores del VON debido
a que no se encontró ARN viral en éstas.
• Objetivo 3: Estudiar la variación de la densidad relativa de los géneros Culex y Aedes
durante diferentes épocas de transmisión de VON utilizando métodos estadísticos.
o Las mayores densidades de zancudos se registraron entre agosto y septiembre en
ambos años estudiados (2007-2008). La variación en las densidades relativas de
zancudos es consistente con el repunte en las seroconversiones registradas en
aves centinela, lo cual apunta a estos meses como épocas de interés para la
vigilancia del VON.
o Las especies más capturadas fueron Cx. nigripalpus, Cx. mollis/inflictus, Cx.
quinquefasciatus y Cx. taeniopus. Todas estas especies, deben seguir siendo
vigiladas a pesar de haber sido negativas a VON debido a sus altas densidades y
43
que, con excepción Cx. mollis/inflictus, han sido encontradas portando arbovirus
en otras regiones.
• Objetivo 4: Monitorear la estacionalidad del VON por medio de estudios serológicos
utilizando gallinas centinela.
o En base a los resultados obtenidos de la vigilancia de VON en aves centinela
puede afirmarse que el virus se encuentra circulando en la región de estudio. No
se sabe si éste afecta solamente aves o puede tener alguna incidencia en
humanos.
44
IV.2. RECOMENDACIONES
• Objetivo 1 y 2: Colectar zancudos del género Culex y Aedes con el fin de detectar la
posible infección de éstos con VON.
o Continuar con la colecta y búsqueda de potenciales vectores de VON en Puerto
Barrios, dando énfasis en zancudos del genero Culex y Aedes, ya que se ha
demostrado que algunas especies son vectores competentes del virus en otras
regiones.
o Antes de iniciar acciones de control vectorial contra los zancudos adultos es
necesario estudiar la biología de los posibles vectores. No es aconsejable
empezar una campaña de control vectorial con adulticidas, aunque si se
recomienda a las autoridades de salud fortalecer las medidas rutinarias de
limpieza de criaderos y fomentar la protección personal contra las picaduras de
zancudos. En los programas de vigilancia de enfermedades transmitidas por
vectores (dengue y malaria) se podría implementar al mismo tiempo la
vigilancia de larvas de Culex y otras especies de Aedes diferentes de A. aegipty.
• Objetivo 3 y 4: Estudiar la variación de la densidad relativa de los géneros Culex y
Aedes durante diferentes épocas de transmisión de VON utilizando métodos
estadísticos. Monitorear la estacionalidad del VON por medio de estudios serológicos
utilizando gallinas centinela.
o Es necesario darle continuidad y profundizar la investigación de VON para
lograr una mejor comprensión de su ciclo natural en la región. Esto incluye la
vigilancia de las poblaciones de zancudos y el monitoreo de su transmisión
mediante aves centinelas.
o Como parte del estudio y monitoreo del VON, adicional a la vigilancia
entomológica y de gallinas centinelas, es necesario fortalecer en la región de
Puerto Barrios la vigilancia de casos febriles humanos con sintomatología
parecida a dengue y la de otros vertebrados.
45
IV.3. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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51
PARTE V
V.1. INFORME FINANCIERO
Del total de fondos aprobados (Q.344,775.11), quedaron Q. 152.47 (0.04%) sin ejecutar.
Tomando en cuenta los fondos para auditoría y gastos administrativos, el resto de fondos
(99.96%) fueron ejecutados (Anexo 1).
Anexo 1. Ficha de ejecución presupuestaria del proyecto
AD-R-0013
Nombre del Proyecto:
Numero del Proyecto: 003-2007 2a. Investigador Principal: Dra. María Eugenia Morales Betoulle PRÓRROGA AL 31/03/2009Monto Autorizado: Q344,775.11
1a. Fecha de Inicio y Finalización: 01/08/2007 al 31/07/2008 12 MESES
Menos (-) Mas (+)
1 Servicios No Personales122 Impresión, encuadernación y reproducción 765.00Q 765.00Q -Q 133 Viáticos en el interior 15,360.00Q 2,860.00Q 7,740.00Q 20,130.00Q 110.00Q
163Mantenimiento y reparación de equipomédico-quirúrgico y de laboratorio 9,400.00Q 9,400.00Q -Q
181 Estudios,investigacionesy proyectos de factibili 140,000.00Q 132,000.00Q 8,000.00Q 2 Materiales y Suministros
241 Papel de escritorio 741.92Q 741.92Q -Q 243 Productos de papel o cartón 121.90Q 121.90Q -Q 244 Productos de artes gráficas 691.65Q 1,090.00Q 398.35Q -Q 261 Elementos y compuestos químicos 57,683.56Q 12,664.44Q 1,842.68Q 44,841.67Q 2,020.13Q 262 Combustibles y Lubricantes 8,400.00Q 5,250.00Q 3,150.00Q -Q 267 Tintes, pinturas y colorantes 214.00Q 1,932.00Q 1,718.00Q -Q 291 Útiles de oficina 6,000.00Q 4,822.85Q 1,177.15Q -Q 295 Útiles menores, médico quirúrgicos y de labora 42,288.36Q 21,059.60Q 20,009.44Q 41,085.73Q 152.47Q 297 Útiles, accesorios y materiales eléctricos 9,566.00Q 9,566.00Q -Q
3 Propiedad, planta y equipo329 Otras maquinarias y equipos 34,300.00Q 13,153.60Q 47,453.60Q -Q
9 Asignaciones Globales(-) Gastos Administrativos (10%) 31,343.19Q 31,343.19Q -Q
TOTAL Q344,775.11 Q56,962.54 Q56,962.54 334,492.51Q 10,282.60Q
Monto Autorizado 344,775.11Q Disponibilidad: 10,282.60Q ( -) Ejecutado 334,492.51Q
Sub-total 10,282.60Q ( -) Apertura de Caja Chica
Total por Ejecutar 10,282.60Q
TRANSFERENCIA En Ejecuciòn
Ejecutado Pendiente de
Ejecutar
CATORCEAVA CONVOCATORIALINEA FODECYT
Estudio de los posibles vectores del Virus del Oeste del Nilo en un foco de transmisión ubicado enIzabal, Guatemala
PRÓRROGA AL 31/01/2009
Grupo Renglon Nombre del Gasto Asignacion Presupuestaria