INFORME FINAL DE SERVICIO SOCIAL

NOMBRE :

TEL. PARTICULAR:

EDMUNDO SUAREB

397-15-69 8 559-32-18 I

MATRICULA: 85345375

CLAVE:

CARRERA: INGENIERIA BIOQUIMICA INDUSTRIAL

TRIMESTRE LECTIVO: 9 1-0

HORAS POR SEMANA: 20

LUGAR DONDE SE LLEVO A CABO: LAB. DE FITOQUIMICA UA"1 BIBLIOTECAS: UAM-I INSTITUTO DE QUIMICA - UNAM FACULTAD DE QUIMICA - UNAM

FECHA DE INICIO: 10 DE, SEPTIEMBRE DE 1990

FECHA DE TERMINACION: 4 DE OCTUBRE DE 1991

NOMBRE DE TUTOR INTERNO, PUESTO Y ADSCRIPCION: DR. FRANCISCO CRUZ SOSA PROF. TITULAR "A", TIEMPO COMPLETO DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGIA, UA"1

TITULO DEL PROYECTO: QUIMICA DE ALGAS MARINAS

(ChlOrOphytaS, PhaeOphytaS, Rhodophytas) " //

I

QUIMICA DE ALGA8 MUINAS

(Chlorophyta, Phaeophyta, Rhodophyta)

RESUMEN: i

Las algas marinas tienen ciertas caracterlsticas, como la diversidad de productos que pueden obtenerse de ellas, por las que se pueden considerar organismos aptos para el desarrollo de la biotecnolgla marina.

De modo muy general, las macroalgas se pueden definir como aquellas plantas productoras de clorofila y que son taloides, bsto es, no tienen ralces, tallos u hojas verdaderas. Estas comprenden tres familias: Chlorophyceae (algas verdes), Phaeophyceae (algas pardas o cafes) y Rhodophyceae (algas rojas).

Los principales tipos de compuestos encontrados en las algas son: ficocoloides (agar, carragenina, alqinato), terpenos, esteroles, carotenoides, compuestos fenblicos, nitrogenados y otros. De bstos, los mas usados son los ficocoloides, en industrias alimentarias,y de cosm6ticos principalmente; sin embargo, existen otros compuestos con potencial como fdrmacos y agroqulmicos. Ademas est6 su uso como fuente alterna de alimentos, tanto para consumo humano como para animales.

Investigacidn bibliogr6fica: consistente en la revisidn de los artlculos sobre algas marinas publicados en la revista @tPhytochemistrytt entre 1970 y 1990, ademas de su clasificacidn y la elaboraci6n de una base de datos con esta informacidn; y b) Investigacibn experimental: consistente en la obtencidn de extractos de diferentes polaridades de la especie de alga marina Hypnea sp. , y su posterior purificacih por medio de cromatograflas en columna y en capa fina para la obtencidn de esteroles; ademds se hizo un bioensayo de deteccidn de actividad antibacteriana de alguno de los extractos.

Se obtuvo una muestra de esteroles que por el Rf pueden ser una mezcla de colesterol y 22-dehidrocolesterol, lo cual concuerda con lo informado en la literatura recopilada en la la. parte del proyecto. Por otro lado, uno de los extractos obtenidos present6 actividad antibacteriana en contra de Bacillus subtillis, quedando para, un estudio posterior la identificacidn del compuesto responsable de esta actividad.

Este proyecto consistid de dos partes principales: a) ,

INTRODUCCION:

Las aguas ocednicas cubren aproximadamente el 71 Z de la superficie de la tierra y abarcan una amplia variedad de diversas comunidades bioldgicas. Los ocehos probablemente albergan mds de un milldn de especies de animales, algas, I bacterias y hongos. Durante siglos los humanos han dependido de las cosechas de ciertas especies de peces y algas como una fuente de alimento, o como una fuente confiable de materia prima para algunas industrias. (1)

El potencial de la biologla marina puede ser considerado en terminos del potencial genetic0 de los organismos marinos. Este potencial incluye a los productos metab6licos del organismo, por ejemplo, compuestos farmacol6gicamente activos, compuestos qulmicos Gnicos o diferentes, etc.(l)

Para poder sobrevivir y crecer en habitats sumamente competitivos, los organismos marinos deben competir por recursos limitados. Esto se manifiesta fisiol6gicamente en forma da metabolitos bioactivos, -los cuales son excelentes candidatos para muchas aplicaciones, como las industrias farmac6utica, agroqulmica y alimenticia, entre otras. La capitalizacidn del potencial de la biotecnologla marina debe aumentar considerablemente en el futuro. (1)

ALGAS. - Los nueve phyla que comprenden a las algas son todos

aquellos organismos productores de clorofila, los cuales son taloides, o sea que no tienen ralces, tallos u hojas verdaderas. Las plantas comprendidas en lo que comanmente 89 conoce como algas, son tan variadas que es dificil dar una definicidn precisa. (2)

Se definirdn aquS solamente los grupos de inter6s para este proyecto:

* Phylum Ch1orophyta.- Este phyllum comprende a las llamadas algas verdes, aunque su nombre, literalmente traducido, significa Gnicamente plantas verdes. Estd compuesto por un ntímero desconocido de especies, quizds tantas como 20,000 , y otras que estdn siendo descubiertas y nombradas continuamente. La diversidad de tamanos, formas y grados de complejidad es quizds mayor que en cualquier otro phylum. Viven tanto en agua salada como en agua dulce,

o

aunque las de mayor tamaAo son en su mayorla ocebnicas. La caractersstica mbs notoria de las clorofitas son sus pigmentos verdes - clorofilas - contenidos en los cloroplastos de sus c6lulas. Ademas de la clorofila-a, hay clorofila-b, 8-caroteno, g-caroteno, a-caroteno y varias xantofilas: luteha, zeaxantina, violoxantina, neoxantina, sifonesna, sifonaxantina, licopeno y \ astaxantina. Otra caractersstica de las clorofitas es que el almid6n es el principal producto de almacenamiento. Su pared celular est6 formada por 2 6 3 capas: una membrana interna compuesta de lamellas y capas externas mucilaginosas o de pectina. Las clorofitas exhiben tanta variaci6n en la reproducci6n como en su morfologSa. Muchas se reproducen s610 por divisi6n celular, mientras otras lo hacen por medio de esporas. (2)

* Phylum Phaeophyta.- Este phylum incluye a las plantas conocidas como algas pardas o cafes. La mayorSa de ellas son grandes talos parenquimatosos, con consistencia de piel o de hule. Las plantas pueden ser desde pocas pulgadas hasta varios pies de longitud. Comprenden cuando menos 240 generos, exclusivamente ocebnicos. Los pipentos de las algas pardas incluyen las clorofilas -a, -c, 8- y d- carotenos, flavoxantina, fucoxantina, luteha y violoxantina. Las phaeophytas tienen un peculiar tipo de almacenamiento de alimento, el cual es en forma de carbohidratos solubles como manitol, laminarina (hasta 35 % del peso seco), y en raras ocasiones, grasas o fucosano. Otra caractersstica de las algas pardas es el abundante mucSlago contenido en el talo o extruldo. Este mucIlago juega un importante papel en la adsorci6n de agua cuando estdn expuestas durante la marea baja. Su arquitectura es de filamentos ramificados uniaxiales, ya sean erectos o rastreros, epifsticos o endofsticos. Su modo de reproducci6n es sexual. (2)

* Phylum Rhodophyta.- Las algas rojas son las mas abundantes en nQmero de especies. y quizbs las mbs conspicuas de las algas marinas. Existen dos grupos principales: Bangioidae y Florideae. En su mayorSa son filamentosas ramificadas, o

frondas cartilaginosas, pudiendo ser uniaxiales o multiaxiales. Aunque estdn bien distribuldas en los oceanos, son mds abundantes en aguas tropicales y subtropicales, siendo la mayorla de ellas de litoral. Muchos generos de algas rojas son paraslticas o epiflticas. Los pigmentos de las Rhodophytas incluyen: clorofilas -a y -dl a- y 8- carotenos, lutelna y zeaxantina, violoxantina, flavoxantina, ficocianinas y ficoeritrinas. El principal producto de almacenamiento de alimento es un almid6n conocido como florideano, y tambien se encuentran otros como manoglicerato, trihalosa y sacarosa. La pared celular tiene 2 capas, una interna de celulosa y una externa de pectinas. Los hdbitos reproductivos de las rodofitas estdn entre las mas desconcertantes de sus caracterlsticas. En algunas formas primitivas el dnico proceso de multiplicaci6n es la divisi6n celular. Un metodo asexual algo m6s especializado es el que usa celulas especiales como esporangios. Tambih tienen reproduccidn sexual, en todos los casos oog6mica ( 2 ) -

Aunque el hombre ha recurrido al mar por alimento y materias primas a traves de toda su historia, es solo en tiempos relativamente recientes en que se la ha dado su real importancia ( 2 )

Los tres grupos de macroalgas pueaen proveer protelnas digeribles, vitaminas esenciales y minerales para consumo humano (1) En muchas regiones costeras las algas son usadas directamente para consumo humano ( 2 ) . Mds de 100 especies aparecen en la dieta de muchas culturas de Oriente ( 2 ) ; sin embargo, en las culturas de Occidente no tienen mucho uso en este sentido (1). Tambien se han utilizado para complementar dietas tanto de humanos como de animales (1).

Los polisac6ridos estructurales de las algas marinas (ficocoloides) son los productos de mayor demanda (1):

* Alginatos.9 Los alginatos son carbohidratos extraldos en forma de alginato de sodio a partir de algas pardas, por medio de dlcalis diluSdos ( 3 ) . El dcido alglnico es un dcido poliur6nico de residuos de dcido B-D-manur6nico ( 3 ) . Estos compuestos son encontrados en productos lacteos y de pastelerla, as1 como en pastas dentales y shampoos, tintes y pinturas ( 4 ) M6s del 60 % del alginato producido en el mundo es usado en la industria textil y

en la del papel (1) . Las mejores especies productoras son: Laminaria spp., Macrocystis spp. y Aseophyllum nodosum ( 2 ) .

* Agar.- Este mucllago es obtenido principalmente del alga roja Celidium ( 2 ) y otras especies. La mayor parte se produce en Jap6n y Corea del Sur ( 3 ) . El agar esta compuesto por substancias pectlnicas, de las que cerca del 60 S es un pollmero de la D-galactosa con &ido sulftirico ( 3 ) . Se usa principalmente como base para medios de cultivo, para base de laxantes, en pastelerla, odontologla, en la industria de la carne, como emulsificante, en cosm4ticos y otros usos (2) .

* Carragenha.- Es extralda de las algas rojas Chondrus crispus y Gigartina spp. principalmente; es un mucllago pectic0 ligeramente adhesivo, con 10 % de protelnas y materia inorganica (3). Puede encontrarse en una gran variedad de alimentos procesados y cosmeticos como bases (1).

Otras substancias de interes en la qulmica de las macroalgas son:

* Terpenos.- Han sido aislados a partir de algas, esponjas y otros organismos marinos; s6lo a partir de algas se han identificado m68 de 60 sesquiterpenos ( 5 ) . Estos pueden ser divididos en 18 tipos de esqueleto, por lo menos 2/3 de ellos nuevos para la qulmica (6). Los enlaces carbono- hal6geno son caracterlsticos de los terpenoides de algas ( 9 ) . Tlpicamente, los terpenos halogenados se encuentran en algas del genero Laurencia (7) . Como muchos componentes de aceites esenciales, pueden tener usos farmac&uticos, como saborizantes en alimentos y en la industria de cosm6ticos (3).

* Esteroides.- La bioshtesis de los esteroides est6 lntimamente relacionada con la de los terpenos superiores, particularmente los triterpenos; los organismos marinos contienen esteroles mucho mas diversos que los organismos terrestres (5). Los organismos marinos producen esteroles con una notable variedad de cadenas laterales, estructuras nucleares no-convencionales y patrones variados de hidroxilacih (8).

* Carotenoides.- Estos son encontrados en algas, bacterias, hongos, invertebrados y vertebrados ( S ) . Los carotenoides tienen un papel fotoprotector en las algas fotosintbticas y juegan un importante papel funcional en la reproduccidn de las algas pardas ( 9 , l O )

* Fendlicos. - I Son compuestos glicosldicoo que se encuentran en algas, bacterias, esponjas, anGlidos, equinodemos, etc. (S). Son mejor conocidos en algas pardas y rojas (11) . Se han descrito en algas mas de 220 fenblicos; se originan a partir de una gran variedad de vlas biosinteticas (S) . Su caracterlstica mas obvia es la abundante presencia de substituyentes halogenados, particularmente el bromo (S).

* Compuestos Nitrogenados.- Una gran variedad de compuestos nitrogenados han sido aislados de organismos marinos, desde los m8s simples, como la tetramina, hasta los muy complejos como la tetrodotoxina y la saxitoxina, poderosas neurotoxinas (12)* Otros compuestos, como el acid0 g-aminobutlrico (GABA) producido por las algas Lithothamnium y Li thoph y1 1 urn , tienen gran importancia en las interacciones bioldgicas con otros organismos (13).

* Compuestos de Biogenesis Mixta y Compuestos Varios.- Muchos compuestos son derivados de' la condensacidn de productos originados de diferentes vlas biosintBticas. Estos compuestos incluyen a los haloformos, acetileno@, compuestos azufrados, prostaglandinas y llpidos inusuales (5)

OBJETIVOS:

> Llevar a cabo una revisi6n bibliogrtifica sobre la qulmica de productos naturales de las macroalgas marinas, especlficamente sobre los artlculos publicados en la revista l1Phytochernistryl1, entre los afios de 1970 y 1990.

> Obtener extractos organicos de diferentes polaridades de la especie de alga marina Hypnea sp.

I

> Purificar los extractos organicos obtenidos, por medio de la cromatografla (cromatografla en columna y/o cromatografla en capa fina) .

PROGRAMA Y METODOLOGIA DE TRABAJO:

I - INVESTIGACION BIBLIOGRAFICA Esta se llev6 a cabo en: + Biblioteca U A ” 1 + Biblioteca Instituto de QuSmica-UNAM + Biblioteca Facultad de Qulmica-UNAM.

1.1. - Se llev6 a cabo una revisi6n exhausti ,va de la re1 rista @@Phytochemistry@@ I especializada en la qufmica de productos naturales de plantas, de los volQmenes desde 1970 hasta Septiembre de 1990, para obtener los artlculos sobre macroalgas marinas publicados en ese intervalo (ver Anexo I).

1 . 2 . - Se realizaron varias clasificaciones de los artlculos obtenidos de acuerdo a la informacien contenida en cada uno de Is artlculos sobre los siguientes criterios:

a) Familia de Algas: Chlorophyceae (verdes), Phaeophyceae (pardas) I 6 Rhodophyceae (rojas) . b) Ghero del alga. c) Tipo de Compuesto( s) Aislado( s) 6 Estudiado(s) :

Carbohidratos Terpenos o Terpenoides Fen6licos Compuestos Lipidicos Compuestos Proteicos ,Compuestos Nitrogenados (no-prot6icos) Compuestos Halogenados varios Esteroides o Esteroles Carotenoides Pigmentos Hidrocarburos Fitohormonas Vitaminas Ligninas

d) Actividad Biol6gica Detectada en los compuestos estudiados e)Posible Aplicaci6n Practica de algunos compuestos

Estas clasificaciones se introdujeron en una base de datos por medio del programa Microsoft WORKS , con el fin de que esta revisien bibliografica sea de mayor utilidad y su informaci6n sea mas accesible (consultar Anego 2).

I1 - INVESTIOACION EXPERIMENTAL Para esta investigaci6n se utiliz6 la especie de alga

Hypnea sp. (Rhodophyceae), la cual se colect6 en Junio del presente aAo en las costas de Tampico, Tamaulipas (Golfo de I

MBxico). El alga se sec6 al aire durante una semana; posteriormente se limpi6 y se sec6 en una estufa a 60‘C durante 24 hrs. ; finalmente se moli6 el tejido algal para su posterior extracci6n.

1.- EXTRACCION:

l. 1. - Por un lado, se llev6 a cabo una extraccidn ( 3 X 1000 ml. ) a partir de 53 g. del alga seca con una mezcla de hexano y diclorometano 1:1, a temperatura ambiente por 48 hrs.

1.1.1.- se juntaron estos extractos y se concentraron evaporando la mezcla de disolventes al vacXo por medio de un Rotavapor, obtenihdose un aceite amarillo. 1.1.2.- Saponificaci6n del extracto: para separar esteroles en la fracci6n insaponificable, se coloca al extracto en una soluci6n de KOH al 10 % en etanol 50 %, reflujando durante 3 hrs. . ( 14 ) . 1.1.3.- La fraccidn insaponificable conteniendo los esteroles (fracci6n orghica) se extrajo con hexano- diclorometano 1:l y se neutraliz6 con HC1 al 10 %, despub se le agregd sulfato se sodio anhidro para remover cualquier residuo acuoso. ~1.1.4.- Por dltimo, la fracci6n insaponificable se concentr6, evaporando el disolvente en un Rotavapor, obteniendose un residuo amarillo.

1.2.- Por otro lado se hicieron otras cuatro extracciones con diferentes disolventes cada una: hexano, diclorometano, acetato de etilo y metanol, con 10 a 12 g. de alga seca cada una, llev6ndolas a cabo en un Soxhlet durante 12 hrs. cada extracci6n.

1.2.1.- Estos extractos se concentraron por separado, por medio del Rotavapor, y los residuos obtenidos, sin purificar, se utilizaron para detectar la presencia de esteroles, y ademds, para llevar a cabo un bioensayo para detectar actividad antibacteriana (ver punto 3.)

2.- PURIFICACION:

2.1.- Para purificar el extracto de hexano-diclorometano se realiz6 primero una cromatografia s6lido-14quido en columna de vidrio (CC), utilizando como adsorbente SSlica Gel (Kieselgel 60 HF254 Merck) empacado en la columna con didrmetro de 2.8 cm, a una altura de 11 cm.; como eluyente o fase m6vil se utliz6 una mezcla de hexano-diclorometano( 1: 1 6 hexano puro (250 ml. ) segdn lo requiriera el extracto a separar.

2.1.1- Las diferentes fracciones obtenidas se concentraron, por separado, por medio del Rotavapor.

2.2.- A cada uno de los residuos obtenidos de las fracciones de la CC, as1 como a los residuos de los extractos de hexano, diclorometano, metano1 y acetato de etilo (l.2), se les aplic6 una cromatografxa en placa fina (TLC) , utilizando para ello cromatoplacas de silica gel 60 F254 (Merck) de 5 X 2.5 cm. 6 de 10 X 10 cm. (dependiendo del ntimero de muestras as$ como de su concentraci6n), y utilizando como eluyente mezclas de hexano-acetona 2: 1 6 3 : 1 segdn se requiriera por la polaridad de la muestra.

2.2.1 .- Las cromatoplacas se revelaron. por medio de una cilmara con yodo metillico (metodo no-permanente de revelado), 6 con una soluci6n de sulfato ceric0 can dcido sulftirico (m9todo de revelado permanente). Cada muestra se compar6 con una, muestra authtica de colesterol, para detectar asi la presencia de esteroles.

3.- BIOENSAYO:

3 1.- Primero se prepara un medio de cultivo de agar nutritivo disolviendo los siguientes componentes en agua destilada:

Caldo de soya tripticaseha (BIOXON) 30 g/L Agar bacteriol6gico 20 g/L

Ajustar el pH a 7.0

Ya preparado el medio, se en un autoclave. 3.2.- El medio ya esteril

esteriliza

izado se de, temperatura aproximada de 45'C Dara

a 120'C por 15 min.

ja enfriar hasta una L inocular con 0.25

m1./100 ml. ae una suspensi6n ie c6lulas con densidad dptica = 1 de la bacteria Bacillus subtilfs previamente preparada, manteniendo el medio ya inoculado con 1 agitaci6n constante y a 45'C, todo lo anterior en condiciones esteriles en una campana de flujo laminar. 3.3.- Posteriormente, en cajas Petri de 14 cm. de didmetro previamente esterilizadas en autoclave, se vacla la cantidad necesaria del medio ya inoculado para formar una capa de aproximadamente 5 mm. de espesor, y se deja que solidifique el agar, todo lo anterior en condiciones est6riles en una campana de flujo laminar. 3.4.- Ya solidificado el agar, se le hacen perforaciones circulares de 9 mm. de didmetro, utilizando para ello un "sacabocadosn previamente esterilizado; en estas perforaciones se colocan 0.06 ml. de la muestra; todo dsto se lleva a cabo en condiciones estdriles en una campana de flujo laminar. 3.5. - Despues se colocan las cajas Petri en una incubadora a una temperatura de 25'C durante 20-24 hrs. 3.6. = Pasado este persodo de incubacibn, se observan las placas para ver si se formaron halos de inhibicidn alrededor de las perforaciones (ver Anexo 3), y si los hay, se mide su didmetro con el fin de determinar si el extracto empleado tiene alguna actividad antibidtica. Como testigo se utili26 penicilina y una alxcuota de los solventes puros para determinar si alguno de Qstos no provoca alguna inhibici6n

RESULTADOS :

I - INVESTIGACION BIBILOGRAFICA 1.- La lista de los artlculos obtenidos de la revista I llPhytochemistryll sobre algas marinas puede verse en el Anexo I de este reporte.

2.- Las clasificaciones realizadas de los artlculos, asl. como la base de datos realizada con estas, pueden verse en el Anexo I1 de este reporte.

11 - INVESTIOACION EXPERIMENTAL 1.- EXTRACCION Y PURIFICACION DE ESTEROLES:

A partir del primer extracto con hexano-diclorometano 1:l separado por cromatografla en columna (CC), se obtuvieron cuatro fracciones a las cuales se les efectu6 una cromatograf€a en capa fina (TLC) : en la fracci6n 1 no se detectaron esteroles, solamente la posible presencia de pigmentos; las fracciones 2 y 3 tuvieron cromatogramas practicamente identicos por lo que se juntaron en una sola muestra (fraccibn 2), la cual p,or TLC rnostr6 posible presencia de esteroles; la fraccidn 4 mostr6 presencia de esteroles, pero tambien varias otras substancias no identificadas, por lo cual esta fracci6n se purificd por medio de otra CC. De esta dltima se obtuvieron cinco fracciones (4a, 4b, 4c, 4d, 4e), a las cuales se les efectud una TLC junto con la fracci6n 2 de la CC anterior

diclorometano, acetato de etilo y metanol; de acuerdo a los Rf's (Rf=(dist. recorrida por la muestra)/(dist. recorrisda por solvente)) de las muestras en el cromatograma, comparados con los del colesterol, (Rfs0.6436) se obtuvieron los siguientes resultados (ver fig. 1, Anexo 111): - Extracto hex6nico: S € mostr6 presencia de

esteroles, ademds de otras substancias mas polares no identificadas, Rfs0.61 - Extracto de diclorometano: .no mostr6 preBencia de esteroles, pero SI otras substancias coloridas, posiblemente pigmentos.

y los 4 extractos no-purificados de hexano,

- Extracto de acetato de etilo: no mostr6 presencia de esteroles, pero SS otras substancias no- identificadas. - Extracto de metanol: no mostr6 presencia de esteroles, solamente sales y s6lidos en suspensi6n. - Fracci6n 4a: SS mostr6 presencia de esteroles, 1 Rf10.64 - Fracci6n 4b: SS mostr6 presencia de esteroles, Rf=O. 63 - Fracci6n 4c: no mostr6 presencia de esteroles. - Fraccidn 4d: mostr6 posible presencia de esteroles, pero en poca cantidad, Rf10.62 - Fraccibn 48: mostr6 posible presencia de esteroles, pero en poca cantidad, Rf10.61 - Fraccidn 2: no mostrd presencia de esteroles aunque sf de substancias con polaridad parecida a la del colesterol.

Para confirmar la presencia de esteroles en las fracciones 4d y 4e, se juntaron y se purificaron por CC, obteniendose dos fracciones (4dl y 4d2) las cuales, por TLC, confirmaron la presencia de esteroles (ver fig. 2, Anexo 111).

Por Bltimo, todas las muestras que mostraron presencia de esteroles se juntaron y se purificaron una vez m8s por CC, obteniendose un extracto que por TLC mostr6 definitivamente la presencia de esteroles (ver fig. 3, Anexo 111). Por las caracterSsticas del cromatograma, asi como por lo reportado en la literatura (14 ,15) , posiblemente esta muestra contiene una mezcla de colesterol y 22-dehidrocolesterol.

2.- BIOENSRYO DE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA

Se prepararon cuatro cajas de Petri con 4 perforaciones cada una, distribusdas del siguiente modo: una perforaci6n para penicilina, una para el solvente respectivo pur, las dos restantes para el extracto correspondiente a cada solvente (ver fig. 4, Anexo 111).

Se midieron los halos de inhibici6n y los resultado@ fueron los siguientes:

MUESTRAS PLACA 1:

Hexano puro Extracto de hexano 1 Extracto de hexano 2 Penicilina

Diclorometano puro Extracto diclorometano Extracto diclorometano Penicilina A 3 t Acetato de etilo puro Extracto acet. etilo 1 Extracto acet. etilo 2 Penicilina

Metano1 puro Extracto metanol 1 Extracto metanol 2 Penicilina

PLACA 2:

PLACA 4:

O 0.6 0 . 6 0.95

O 1 O 2 O

0 . 9

O O O 0 . 9

O O. 15 O. 15 0 . 9

Se puede observar que ninguno de los solventes utilizados tiene, por SS mismo, alguna actividad antibacteriana.

De los extractos ensayados 8610 dos mostraron alguna actividad: el extracto hexdnico y el extracto metan6lico. El resultado del extracto metan6lico se descart6 pues el halo de inhibici6n es muy pequeflo y pudo ser provocado por las sales y/o loa s6lidos en suspensih de tejido algal que se encontraron en este extracto.

Sin embargo, como el extracto hexdnico produce halos de inhibici6n .de tamaflo mds considerable, y como substancias puramente orgdnicas debido a la baja polaridad del hexano, se consider6 que en este extracto SS existe algdn(os) compuesto(s) con actividad antibacteriana.

DISCUSIONES:

Para la investigaci6n bibliografica llevada a cabo en este proyecto, se plante6 como objetivo la revisidn de la revista llPhytochemistryll, por ser una publicacidn de I prestigio internacional especializada en la qulmica de productos naturales de plantas y que, por lo tanto, 88 ajusta a la naturaleza de este proyecto. Se decidi6 realizar una Base de Datos con las referencias obtenidas, para que las clasificaciones realizadas con estas sean de mayor utilidad y facilidad de consulta, tanto para este proyecto como para otros proyectos similares que puedan hacer uso de esta informaci6n.

En cuanto a la parte experimental de este proyecto, se decidi6 hacer una extracci6n y purificacidn de esteroles, y no de otro tipo de compuestos, pues aquellos son los mas encontrados y estudiados del genero Hypnea (16,14,15), ademas de su importancia filogengtica dentro de la familia Fthodophyceae (14).

Por otro lado, se decidid llevar a cabo un bioensayo de actividad antibacteriana con extractos de diferente polaridad, porque las algas marinas tienen un gran potencial como productores de compuestos con aplicaciones farmaceuticas ( 1 7 ) , adem6s de ser un buen ejercicio practico de la aplicaci6n de tecnicas microbiol6gicas al estudio de los productos naturales. Sin embargo, no se llev6 a cabo la identificacibn de el(1os) compuesto(s) responsable de la actividad antibacteriana, ya que constituirla un trabajo de varios meses utilizando tecnicas anallticas tales como la espectrometrla de masas, espectroscopla, resonancia magnetica nuclear, y otras, lo cual est& fuera del alcance de este proyecto. *

CONCLUSIONES:

De la revisi6n bibliografica llevada a cabo se puede} concluir que se obtuvo una considerable cantidad de informacibn sobre la qulmica de algas marinas, y que (Ista quede convenientemente clasificada y facilmente accesible por medio de la base de datos elaborada con esta informacibn.

Como conclusi6n de la qulmica de la especie de 'alga utilizada durante la realizaci6n de este proyecto (Hype8 sp.), se puede decir que los resultados de la extraccidn y la purificacidn de esteroles estdn de acuerdo con lo que se reporta en la literatura ( 5 , 9 ) y, por ende, son validos y representativos de esta especie de alga. TambiOn se puede concluir que esta especie de alga presenta una (o varias) substancia con cierta actividad antibacteriana que podrla ser de aplicacidn en la industria farmaceutica; (Ista Qltima queda para un estudio posterior en el cual se identifique este compuesto o grupo de compuestos y se determine su aplicacidn prictica real.

Finalmente, como conclusi6n general, se puede afirmar que se cumplieron de manera satisfactória los objetivos planteados al principio de este proyecto.

LITERATURA CITADA:

1 - Singleton F.L. 61 Kramer J.G., ( 1 9 8 8 ) . BIOTECHNOLOGY OF MARINE ALGAE. Gen. Eng. and Biotech. Monitor. Vol. 25.

2 - Precott G.W., (1984) THE ALGAE: A REVIEW. Otto Koeltz I Science Publishers, W . Germany. 2nd edition.

3 - Claus E.P. & Tyler V.E., (1965) FARMACOGNOSIA. Editorial "El Ateneot1, B. Aires, Argentina, 5a edicibn.

4 - Augier H., ( 1 9 7 8 ) . Bot. Mar. 21:175.

5 - Bakus G.J., et.al, ( 1 9 8 6 ) . CHEMICAL ECOLOGY OF MARINE ORGANISMS. J. of Chem. Ecol. 12:951 .

6 - Martin J.D. 61 Darias J., (1978) . ALGAL SESQUITERPENOIDS, in Marine Natural Products: Chemical and Biological Perspectives. Vol. 1 , pp: 125-173. Academic Press, New York.

7 - Fenical W., ( 1 9 7 5 ) . HALOGENATION IN THE RHODOPHYTA. J. of Phytol. 11:245-259.

8 - Schmitz F.J., ( 1 9 7 8 ) . UNCOMMON MARINE STEROIDS, in Marine Natural Products: Chemical and Bilogical Perspectives. Vol. 1 , pp: 241-297. Academic Press, New York:

9 - Burnett J.H. , ( 1 9 7 6 ) . FUNCTIONS OF CAROTENES OTHER THAN IN PHOTOSYNTHESIS, in Chemistry and Biochemistry of Plant Pigments, Vol. 4 , pp: 655-680. Academic Press, New York.

1 0 - Lee W.L. (ed. ) , (1977) . CAROTENOPROTEINS IN ANIMAL COLORATION. Wiley, New York.

11 = Higa T. , (1981) . PHENOLIC SUBSTANCES, in Marine Natural Products: Chemical and Bilogical Perspectives. Vol. 4 , pp: 93-145. Academic Press, New York.

12 - Chevolot L., ( 1 9 8 1 ) . GUANIDINE DERIVATIVES, in Marine Natural Products: Chemical and Biological Perspectives. Vol. 4 , pp: 54-91. Academic Press, New York.

13 = Morse A.N.C. & Morse D., ( 1 9 8 4 ) . RECRUITMENT AND METAMORPHOSIS OF Haliotis LARVAE INDUCED BY MOLECULES UNIQUELY AVAILABLE AT THE SURFACES OF CRUSTOSE RED ALGAE. J. of EXp. Mar. Bio l . Ecol. 75:191-215.

14 - Chardon-Loriaux I., et.al, (1976). STEROL PROFILES OF RED ALGAE. Phytochem. 15:723-725.

15 Fattorusso E., et.al, (1975). STEROLS OF SOME RED ALGAE. I Phytochem. 14:1579.

16 - Babu J.M., et.al, (1989). DIKETOSTEROID FROM MARINE RED ALGA Hypnea musciformis. Phytochem. 28:3237-3239,

17 - Collwell R.R., (1983). BIOTECkNOLoGY IN THE MARINE SCIENCE. Science . 222:19-24.

ANEXO I

REVISTA PHYTOCHEMISTRY (1970 0 1990)

QUIMICA DE ALGAS MARINAS.

Abdel-Fattah A.F. & H.H. Sary, (1987). Olyooprotoin8 from t Ulva lactuca. 26:1447-1448.

Abdel-Fattah A.F. & M. Edrees, (1973). Seasonal ohangos in tho oonstituents of Ulva lactuca. 12:481-485.

Abdel-Fattah A.F. & M.M. Hussein, (1970). Composition of 8OmO brown algae as influenced by seasonal variation. 9:721-724.

Abdel-Fattah A.F., et.al, (1973). Sargassan: a rulphatod hoteroplysaooharide from Sargassum linifolium. 12:1995-1998.

Abdel-Fattah A.F., et.al, (1978). Carbohydrate8 of the brown BO8Weed Dictyota dichotoma. 17:741-744.

Albrecht G. J. & H. Kauss , (1971) Purif iaation, orystallisation and properties of a B-(l-*3)qlUa8a phosphorylase from Ochromonas malhamensis. 10:,1293-1298.

Amico V., et.al, (1979) . Diotyonide, a new diterpene from tho brown alga Dilophus ligulatus. 18:1895-1897.

Amico V., et.al, (19 Amico V. , et. al, (1980) . A goranyl8aatone brown alga Cystoseira crinita. 19:2759-2760.

mico V . , et.al, (1981). 18-Hydroxy-3,7-dolabelladien. from the brown alga Dictyota dichotoma. 20:848-849.

mico V., et.al, (1981). A phlorogluoinol derivative from tho brown alga Zonaria tournefortii. 20:1451-1453.

Amico V., et.al, (1981). Novel aoyclia diterpenes from tho brown alga Cystoseira crinita. 20:1085-1088.

Amico V. , et.al, (1982). A novel aoylphlorogluoinol from tho brown alga Zonaria tournefortii. 21:739-741.

Amico V., et.al, ( 1 9 8 2 ) . A quinone-hydroquinone aouple from the brown alga Cystoseira stricta. 21:421-424.

Amico V., et.al, ( 1 9 8 4 ) . rive novel tetraprenylhydroquinola from the brown alga Cystoseira algeriensis. 23:2017-2020.

Amico V., et.al, ( 1 9 8 5 ) . Acyalia tetraprenyltoluquinola from Cystosefra sauvageuana and their possible role a8 biogonotia preaursors of oyolia Cystoseira metabolitoa. 266302668.

Amico V., et.al, ( 1 9 8 5 ) . Tetraprenyltoluquinola from tho I

brown alga Cystoseira jabukae. 24:1047-1050.

Amico V., &.al, ( 1 9 8 7 ) . Linear diterpenoid8 from Cystoseiru balearica. 26:2637-2639.

Amico V . , et.al, ( 1 9 8 7 ) . Prenylated O-methyltoluquinols from Cystoseira stricta. 26:1719-1722.

Amico V . , et.al, ( 1 9 8 7 ) . Tetraprenyltoluquinols from the brown alga Cystoseira stricta. 26:1715-1718.

Amico V., et.al, ( 1 9 8 8 ) . Inheritanoe of ahemiaal aonstituent8 in algae: tetraprenyltoluquinols of Cystoseira eleguns a C. algeriensis. 27r1069-1071.

mico V., et.al, ( 1 9 8 9 ) . Tetraprenyltoluquinois dOriVatiVe8 from the brown alga Cystoseira zosteroides. 28:215-219.

Andrew P.W., et.al, ( 1 9 8 1 ) . Comparative properti08 o f ferredoxins from a marine and freshwater apeaior of Porphyridium. 20:1293-1298.

Andrew P.W., et.al, ( 1 9 8 1 ) . Partial 8truature and proportiea of the fermdoxin from Rhodymenia palmata. 20:579-583.

Aparicio, et.al, ( 1 9 7 1 ) . Molybdenum and iron as aonatituenta of the ensymes o f the nitrate reducing system from Chlorella. 10:1487-1495.

Ara0 T. & M. Yamada, ( 1 9 8 9 ) . Positional distribution of fatty aaids in galaatolipids of algae. 28:805-810.

Ayal H.A. 6r B. Matsuhiru, (1986). Carrageonans from totrasporio and aystocarpio Chondrus canaliculatus. 25:1895- 1897.

Babu J.M., et.al, (1989) Difetosteroid from marino rod alga Hypnea musciformis. 28:3237-3239.

Banaigs B., et-al, (1983). A hydroxylated diterpenoid substituted quinol from the brown alga Cystoseira erlegans. 22:2865-2867. I

Banaigs B. , et.al, (1984). Lipids from tho brown alga Cystoseira barbata. 23:2951-2952.

Barrow K.D. 61 C.A. Temple, (1985). Biosynthenis of halogenated monoterpenes in Plocamium cartilagineum. 24:1697- 1704.

Bert M., et.al, (1989). Carrageenans from tetranporophytia and gametophytio stages of Cystoclonium purpureum. 28:71-72.

Bjornland T. & M. Aguilar-Martlnez, (1976). Carotenoid. in red algae. 15:291-296.

Bjornland T., et.al, (1984). Configurational studio. on red algae oarotenoids. 23:1711-1715.

Blackman A. J. 61 D.J. Mathews, (1982). Halogenatod phloroglucinols from Rhabdonia verticillata. 21:2141-2142.

Blackman A.J., et.al, (1988). A phenol from the brown alga Perithalia caudata. 27:3686-3687.

Blunden G., et,al, (1983) B-staahydrine, a novel betaino from Griffithsia flosculosa. 22:293.

Blunden G . , et.al, (1988). Alfa-Alaninebetaine from Cladophora speoies. 27:277.

Blunt J.W., et.al, (1984). Sesquiterpenes from the marino rod alga Laurencia distichophylla. 23:1951-1954.

Boyer G. L. & S . S . Dougherty, (1988) Identif ioation of abscicic acid in the seaweed Ascophyllum nodosum. 27:1521- 1522

Brennan M.R., et.al, (1987). Chamigrane metabolites from a Jamaioan variety of Laurencia obtusa. 26:1053-1057.

, ....I" " ." -. ". . .

Brush P. & E. Percival, (1972) Glyoolipids prosent in oight gonora of the Chlorophyoeae. 11:1847-1849.

Caf ieri F, et.al, (1982) . (le) -1,l-dihydro-l- hydroxybromosphaerol, a minor bromoditerpone from tho rod alga Sphaerococcus coronopifolius. 21:2412-2413.

Cafieri F. , et.al, (1983) Three diterpenes from tho rod alga Sphaerococcus coronopifolius. 22:1824-1825. Cafieri F., et.al, (1987). Diterpenes from the rod alga t Sphaerococcus coronopifolius. 26:471-473.

Cafieri F., et.al, (1988). Sphaeropyrane, a ditorpono from tho marino red alga Sphaerococcus coronopifolius. 2736210623.

Capon R . J . , et.al, (1981) Isoprenoid dihydroquinones from a brown alga Cystophora ap. 20:2598-2600.

Capon R.J., et.al, (1983). Metabolite8 of the green alga., Caulerpa apeoiea. 22:1465-1467.

Cardellina J.H. C R . E . Moore, (1978). Sphingosine dorivativos from red algae of the Ceramiales. 17:554-555.

Carlberg G . E . , et.al, (1978). Carbohydrates of tho 88awoed8 a Desmarsestia ligulata and D. firma. 17:1289-1293.

Carte B.K., et.al, (1989) . Rawsonol, an, inhibitor o f HMG-CoA reduotaso from the tropiaal green alga Avrafnvillea rawsoni. 28:2917-2919.

Chang M., et.al, (1989) . Regular and irregular sesquiterpone8 aontaining a halogenatod hydropyran from Laurencfa caespitosa. 28:1417-1424.

Chantraine J.M., et.al, (1973). Phenols bromes d'uno alguo rouge, Halopytis incurvus:acides carboxilique8. 12:1793-1796.

Chardon-Loriaux I., et.al, (1976) . Sterol profilos of red algae. 15:723-725.

Chevolot-Magueur A.M., et.al, (1976). Compos08 bromos do Rythiphloea tinctoria (Rhodophyaeae). 15:767-771.

Chudek J.A., et.al, (1984). Altritol in the brown alga Himanthalia elongata. 23:1081-1082.

Cockerill B.M., et.al, (1978) Vanadium in tho brown seaweed Desmarestia firma. 17:2129.

Combaut G , t L. Piovetti, (1983) A novel aoyolio diterpono from the brown alga Bifurcaria bifurcata. 22:1787-1789.

Combaut G. 61 P. Saenger, (1984) Sterols of the Amansiae (Rhodomelaoeaer Rhodophyta). 23:781-782.

Combaut G . , et.al, (1978) . Composes halogenea d'une 8lgue

Asparagopsis armata. 17:1661-1663. f row@# , Falkenbergia rufolanosa, tetrasporophyte 6'

Combaut G . , et.al, (1978). Phenols bromea des algues rougosr oyalotribromoveratrylene, noveau derivo obtenu au oows do l'extraotion de Halopytis pinnastroides. 17:1791-1792.

Combaut G . , et.al, (1981). Seasonal chemiaal evolution of tho alga Cystoseira elegans. 20:2036-2037.

Combaut G . , et.al, (1981). The ocurrence OQ C-28 sterols in red algae. 20:1748.

Combaut G . , et.al, (1985). Polysaooharide of tho red alga Rissoella verruculosa. 24:1597-1599.

Court G . J . & I . E . P . Taylor, (1979). Isolation and partial oharaaterization of a proteoglycan from the rrd alga Laurencia spectabilis. 18:411-414.

Crews P. (ir S . J . Selorer, (1986). ' I Comp8rison of tho seaquiterpenes from the seaweed Laurencia pacif ica and its epiphyte Erythrocystis saccata. 25:1847-1852.

Crews P., et.al, (1984). Bioaotive monoterpenes from rod seaweeds. 23:1449-1451.

Croft J . A . SI M.E.H. Howden, (1970). Chlorophyll-a from Sargassum flavicans - Isolation and struoture. 9:901-902 De Lestang-Bremond G., et.al, (1987). Lambda-oarrageenan in the gametophytes of Chondrus crispus. 26:1705-1707.

De Napoli L. et.al, (1982) . sterol aomposition o f somo Mediterranean green algae. 21:1993-1994.

De Napoli L., et.al, (1982). Three squalene derivatives from Caulerpa prolifera. 21:782-784.

De Rosa S . , et.al, (1986). Hydroazulenoid diterpenos from the brown alga Dictyota dichotoma var. implexa. 25:2179-2181.

De Rosa S . , et.al, (1988). Terpenes from the red alga Sphaerococcus coronopifolius of the North Adriatio Sea. 27:1875-1878.

De Silva S.M., et.al, (1982). Antibaoterial aotivity of extraat8 from the brown seaweed Stoechospermum marginaturn. 21:944-945.

Dembitsky V.M. 6I O .A . Rozentsvet, (1989). Diaaylglyaeryl trimethylhomoserine8 and phospholipid. of aome green marino macrrophytes. 28:3341-3343.

DeNanteuil G. 61 P. Mastagli, (1981). A bromophenol ia the red algae Halopytis incurvus. 20:1750-1751.

Deslandes E., et.al, (1988). Evidenoe for kappa oarrageenan in Halarachnion ligulatum. 27:278-279.

Doshi Y . A . , et.al, (1988). Sebdenia polydactyla - a novel sourue of carrageenan, 27:1854-1855.

Dubinsky 2 . 61 S. Aaronson, (1979) . Iaorease of lipid yields Zrom some algae by aoid extraation. 18:51-52.

i

Duperon R., et.al, (1983). Ocurrenae of steryl glyooside8 and aoylated steryl glycosides in some marine algae. 22:535-538.

Farooqui A.H.A., et.al, (1990). Cytokinin8 from marine organisms. 29:2061-2063.

Fattorusso E., et.al, (1975) Sterols of some red algae. 14:1579-1582.

Faulkner D. J., (1976) . 3-beta-bromo-8-e~iaaparrpi oxide, the major metabolite of Laurencia obtusa. 15:1993-1994.

Faulkner D.J., et.al, (1977) Diterpene. from Dfctyota dichotoma. 16:991-993.

Fenical W . & O.J. McConnell, (1976). Simple antibiotio8 from tho red seaweed Dasya pedicillata var. stanfordiana. 15:435-

Fenical W . , (1976) Chemiual variation in a new bromoohamigrane derivative from the red seaweed Laurencia pacifica. 15:511-512.

436.

Fenical W . , et.al, (1972). Zonareno, a 8esquiterpene from the brown seaweed Dictyopteris zonarioides. 11:1161-1163.

Ferezou J.P., &.al, (1974). Sur le sterol a 26 atom08 de oarbona de l'algue rouge Rhodymenia palmata. 13:593-598.

Finch P., et.al, (1986). Carbohydrates of the Aatarotio brown 8eaWOed Ascoseira mirabilis. 25:443-448.

Findlay J.A. 6 A.D. Patil, (1985). Sterol and other oonstituents of the brown alga D e s m a r e s t i a a c u l e a t a . 24:366- 367 . Findlay J . A . & A . D . Patil, (1986). Antibaatorial oonstituent8 of the red alga Cystoclonium purpureum. 25:548-550.

Francisco C., et.al, (1978). Eleganolone noveau oetol diterpenique lineaire de la Pheophyaee C y s t o s e i r a e l e g u n s . 17:1003-1005.

Frederick J . F . , (1980) The bee. and Q types of l84-alf8-D- gluaant ~,~-a1fa-~-gluoan-6-gluoosyltransferase irooymem in algae. 19:539-542.

Fujimura T., et.al, (1990). Long-chain aldehyde produation in thalli oulture of the marine green alga U l v a p e r t u s a . 29:745- 747 .

I

Fukuzawa A . , et.al, (1986). Eodysone-like metabolites, 14alfa-hydroxypinnasterols, from the red alga L a u r e n c i a p i n n a t a . 25:1305-1307.

Fukuzawa A . , et.al, (1990) A sesquiterpene aloohol from the red alga L a u r e n c i a n f p p o n i c a . 29:2337-2339.

G . Combaut, et.al, (1985). Sterols of the Senegalese brown alga P a d i n a V f C k e r S f a e . 24:618-619.

Geigert J., et.al, (1984). Halonium ion-iaduoed biOrynthe8i8 of ohlorinated marine metabolites. 23:28?-290.

Gerwick W . & W . Fenical, (1982). Phenolio lipid8 from related marine algae of the order Dictyotales. 21:633-637.

Gerwick W . H . , (1984) 2 - C h l O r 0 - 1 , 6 ( S ~ ) , 8 - t ~ i b r o m o - 3 - ( 8 ) (2)- ochtodenet a metabolite o f the tropiaal red seaweed Ochtodes SeCUndir&3mea. 23:1323-1324.

Gerwick W . H . , et.al, (1985). Chemioal variation in the tropiaal seaweed Stypopodium zonale (Diatyotaoeae) . 24 : 1279- 1283.

Gonzalez A . G . , et.al, (1978). Two new polyhalogenated monoterpenes from the red alga PZocamium c a r t i l a g i n e u m . 17:947-948.

Gordon Young E., (1970). A COmpari8On.Of the soluble proteins in various speaies of algae by diso eleotrophoreri8 in polyaarylamide gels. 9:2167-2164.

Grosse-Damhues J. & K.W. Glombitza, (1984). ISOfuhalolr, 8 t m e of ghlorotannia from the brown alga Cho&&? f i l u m , 23 :2639-2642.

Grosse-Damhues J., et.al, ( 1 9 8 3 ) . An oight-ring phlorotannin from the brown alga Himanthalia elongata. 22:2043-2046.

Guven K.C., et.al, ( 1 9 7 0 ) . Hordenine from the alga Phyllophora nervosa. 9:1893.

Haugan J . A . & S . Liaaen-Jensen, ( 1 9 8 9 ) . Improved irolation proaedure for fucoxanthin. 28:2797-2798.

Henriquez P., et.al, ( 1 9 7 2 ) . Cholesterol in Iridaea i laminarioides and Gracilaria verrucosa. 11:1171.

Higgs M.D. 61 D.J. Faulkner, (1982) . A diterpon8 from Laurencia obtusa. 21:789-791.

Hori K., et.al, ( 1 9 8 7 ) . A mitogenia agglutinin from tho X86 alga Carpopeltis flabellata. 26:1335-1338.

Hori K., et.al, ( 1 9 8 8 ) . Mitogenio and antinooplario isoagglutinins from the red alga Solieria robusta. 27:2063- 2067

Howard B.M. & W . Fenical, (1979) Ouadalupol and epiguadalupol, rearranged sesquiterpene alOOh018 from Laurencia snyderiae var. guadalupensis. 18:1224-1225.

Howard B.M. & W . Fenical, (1980) . Isoaonnoindiol, a brominated diterpenoid from Laurencia snyderiae var. guadalupensis. 19:2774-2776.

Hussein M.M., et.al, ( 1 9 8 0 ) . Some struatural foaturaa of a now sulphated heteroployaaoaharide from Padfna pavonfa. 19:2133-2135.

Hussein M.M., et.al, ( 1 9 8 0 ) . Sulphated heteroploy8aooharidor from Padina pavonia. 19:2131-2132.

Ikekawa N., et.al, ( 1 9 7 2 ) . Two new sterols from Fucus evanescens.. 11:2317-2318.

Impellizzeri G., et.al, ( 1 9 7 5 ) . Aminoaaids and low-mo8loular weight aarbohydrates of some marine red algae, 14:1549-1557.

Imre S . , et.al, ( 1 9 8 1 ) . Obtusenol, a sesquiterpene from Laurencia obtusa. 20:833-834.

Inoue K., et.al, ( 1 9 8 4 ) . Aminoacid sequenao of a ferredoxin from Rhodymenia palmata, a red alga in the Bloridophyaoao, 23:773-776.

Izac R., et.al, ( 1 9 8 2 ) . Sulfur and N-methylformamfde from the marino red alga Erythrophyllum delesserioides. 21:229.

Jamieson G.R. & E.H. Reid, (1972). The oomponent fatty aaida of some marine algal lipids. 11:1423-1432.

Jamieson G.R. & E.H. Reid, (1976) . The sugar oomponont8 of tho galaotosyl diglyoeridea from green planta. 15:135-136.

Jiang Z . D . & W . H . Gerwick, (1990). Galaotolipida from tho tomperate red marine alga Gracilariopsis lemaneiformis. 29:1433-1440.

Johns R.B., et.al, (1979). Fatty aaid aomposition of ton matine algae from Australian waters, 18:799-802.

K. Glombitza, et.al, (1985). Phlorotannins with dibonrodioxin struotural elements from the brown alga Eisenia arborea.

1

24:543-551.

Kabore S . A . , &.al, (1983). Sterols of the red alga Rissoella verruculosa. 22:1239-1240.

Kajiwara T., et.al, (1988) Ensymatia formation of unaaturated long ahain fatty aaid aldehydes in Ulva pertusa. 27:1643-1645.

Kajiwara T., et. al, (1989) . Speaifioity of the ensymo ay8tom produoing long ohain aldehydes in the green alga Ulva pertusa. 28:407-409.

Kajiwara T., et.al, (1989). Volatile aonatituents from marine brown alga of Japanese Dictyopteris. 28:636-639.

Kajiwara T., et.al, (1990). Volatile aompounda and long-ahain aldehydes formation in aonohooelis - filameata of a rod alga Porphyra tenera. 29:2193-2195.

Kakisawa H . , et.al, (1988). An allelopathio fatty a d d from the brown alga Cladosiphon okamuranus. 27:731-735.

Kelecom A . . & V . L . Teixeira, (1988) Diterpenes from tha marine brown alga Dictyota cervicornis. 27:2907-2909.

Kennedy D.J., et.al, (1988). Chamigrane metabolitos from Laurencia obtusa and L. scoparia. 27:1761-1766.

Kirkup M.P. & R.E. Moore, (1983). Identity of rranadaol with 8-orenulal, a diterpene from the brown alga Dictyota crenulata. 22:2527-2529.

Kirkup M.P. & R . E . Moore, (1983). Two minor diterpenes related to diotyodial A from the brown alga Dictyota crenulata. 22:2539-2541.

Kirst G . O . , (1980). Low molecular weight oarbohydrates and ion8 in Rhodophyceaer quantitative measurement of florido8ide and digeneasi.de. 19:1107-1110.

Knights B.A.,(1970). Sterols in Ascophyllum nodosum. g:go3- 905

Koch M., et.al, (1981). Polyhydroxyphenyl others from B i f u r c a r i a b i f u r c a t a . 20:1373-1379.

Koch M. , et.al, (1984) . BrOmin8ted phlorotol8 8nd nonhalogenated phlorotannins from the brown alga Cystophora congesta. 23:2633-2637.

Koch M.,et.al, (1980). Phlorotannins of Phaeophyaea Laminaria ochroleuca. 19:1821-1823.

Kojima M., et.al, (1990). Two diglyaosyldiaoylglyoerol isomers in plant leavea, ferns, mosses and seaweeds. 29:1161- 1163.

Kremer B.P., (1973). Isolation of mannitol from Desmarestfa virides. 12:609-610.

Kremer B.P. , (1976). Mannitol in the Rhodophyoeae - a reappraisal. 15:1135-1138.

Kurata K. 61 T Amiya, (1980). Bis(2,3,6-tribromo-4,5= dihydroxybensyl) ether from the red alga Symphyoc2adfa l a t i u s c u l a . 19:141-142.

Laycock M.V., et.al, (1979). D-Homoaysteia acrid from Palmaria palmata. 18:1220.

Lee R.F. A.R. Loeblich 111, (1971). Distribution of hydrooarboa and its relationship to 22r6 fatty aoid in algae. 10:593-602.

M.L. Bittner, et.al, (1985). A rearranged ohamigrane derivative and its potential biogenetia preaursor from a new species of the marine red algal genus Laurencia (Rhodomelaaeae). 24:987-989.

Mahendran M., et.al, (1979). A revised struoture for oaulerpicin from Caulerpa racemosa. 18:1885-1886.

Mairh O.P., et.al, (1989). Sea8onal variation, bioaaoumulation and prevention of loss of iodine in 8OaWOOd8. 3307-3310.

"I. ... _"..

Manley S.L . & D.J. Chapman, (1980). Metabolism of 4- hydroxybensaldehyde, 3-bromo-4-hydroxybonsal~ehy~e and bromide by aell-free fraotions of the marine red alga Odontbalia floccosa. 19:1453-1457.

Martin J.D., et.al, (1989) . Metabolites from Laurencia obtusa. 28:3365-3367.

Matulewicz M.C. & A . S . Cereso, (1987). Alkali-8OlublO polysaaaharides from Cbaetangium fastigiatumt struature of a xylan. 26:1033-1035.

Matulewicz M.C. & A.S. Cerezo, (1980). Methylation analymis of aarrageenans from the seaweed Iridaea undulosa. 19: 2639-

i

2641.

Matulewicz M.C., et.al, (1989). Carrageenan system8 from tetrasporia and oystooarpic stages of Gigartina skottsbergii. 28:2937-2941.

McConnell O.J. & W . Fenical, (1980). Halogen ahemistry of the rod alga Bonnemaisonnia. 19:233-247.

McConnell O.J., et-al, (1982). DiaStereOiSOm~Z8 of ayalocymopol and cyalooymopol monoethyl ether from Cymopolia barbata. 21:2139-2141.

Metayard B.T. & D. Boulter, (1974). The aminoaoid sequonao of aytoahrome a from Enteromorpha intestinalis. 13:2777-2782.

Metayard B.T., et.al, (1975). Cytoahrome c S from Rbodymenia palmata and Porphyra umbilicalis and the aminaaid soquonoes of their N-terminal regions. 14:1493-1497.

Miralles J. , et. al, (1990) Cyalopentyl and w-S monounsaturated fatty aaids from tho rod algae o f tho Solieriaceae. 29:2161-2163.

Miyazawa M. , et.al, (1982) . Wax composition of Sargassum fulvellum. 41:1788-1791.

Mollion J., et.al, (1988). C-13 NMR study of heterogoneity in the oarrageenan system from Rissoella verruculosa. 27:2023- 2026.

Murphy M.J. & C.O. Heocha, (1973). Peroxidase aativity in the brown alga Laminaria digitata. 12:2645-2648.

Murphy M. J. C C.O. Heocha, (1973) . Peroxidase from the greon alga Enteromorpha linza. 12:61-65.

Murphy M.J. & C.O. Heocha, (1973). Peroxidase from the red alga Cystoclonium purpureum. 12:55-59.

Mynderse J.S. & D.J. Faulkner, (1978). Variations in the halogenatod monotorpene metabolito8 of Plocanrium c a r t i l a g i n e u m and P. violaceum. 17:237-240.

Napolitano G . E . , et.al, (1988). All-oi8-3,6,9,12,15- ootadoaapontaenoia add: a problem of resolution in tho OC analysis of marine fatty aaids. 27:1751-1755.

Newburger J.D., et.al, (1979). Sterols of Agurum cribosunrr dOSmO8tOrOl in a brown alga. 18:2042-2043.

Newton R. P. & J F. Pennock, (1971) . The intraaellulu distribution of toaopherols in plants. 10:2323-2328.

I

Nielsen P.G., et.al. (1982). Final struoture of aaulerpioin, a toxin mixture from the green alga Caulerpa rucemosu. 21:1643-1645.

Norte M., et,al, (1988). Graciosin and graoiosallene, two bromoether8 from Laurencia o b t u s a . 27:3537-3539.

Norte M., et.al, (1989). E-Dihydrorhodophytin, a C-lb aoetogenin from the red alga L a u r e n c i a p i n n u t i f i d a . 28:647- 649.

Ogawa T., et.al, (1990). Norophtalmio acrid and ophtalmia aaid from the brown alga U n d a r i a p i n n a t i f i d a . 29:303-304.

Ojika M., et.al, (1982). A halogenated ohamigrane epoxido and 8ix related halogen-oontaining sesquitqrpenes from tha rod alga Laurencia okamurai. 21:2410-2411.

Oztunc A . , et.al, (1989). Ent-13-epioonainndiol from the red alga Chondria tenuissima and its absolute oonfiguration. 28:3403-3404.

Palermo,J.A., et.al, (1984). Free sterols of the red alga G i g a r t i n a skottsbergii. 23:2688-2689.

Parekh R.G;, et.al, (1988). Polysaoaharide from Sarconema fil iforme, an Indian marine alga. 27:933-934.

Paul V.J. & W . Fenical, (1985). Diterpenoid metabolit8r from Paoifio marine algae of the order Caulerpales (chlorophyta). 24:2239-2243.

Paul V . J . , et.al, (1982). Udoteal, a linear dit8rpenoid feeding deterrent from the tropical green alga Udotea f l a b e l l u m . 21:468-469.

Paul V.J., et.al, (1988). Diterpenoid feeding deterrent8 from tho Paoifia greon alga Pseudochlorodesmis f u r c e l l a t a . 27:lOll-1014.

Pecci J. & E. Fujimori, (1970). The B-phyooorythrin oromophore. 9:637-640.

Pedersen M., (1978). Bromoohlorophenols and a brominatod diphonylmethane in red algae. 17:291-294.

Pedersen M. , et.al, (1974) Simple brominated phOnOl8 in rod alga.. 13:2273-2279.

Percival E. & B. Smestad, (1972). Photosinthetio studio8 on Ulva lactuca. 11: 1967-1972.

Percival E. & M. Young, (1971). Low moleoular woight aarbohydrates and water soluble polysaocharido metabolisod by tho Cladophorales. 10:807-812.

i

Percival E., et.al, (1981) . Chemistry of the polysaooharides of the brown seaweed Dictyopteris plagiogramma. 20:1579-1582.

Percival E., et.al, (1983). Carbohydrates of the brown seaweed Lessonia nigrescens. 22:1429-1432.

Pettitt T.R. & J.L. Harwood, (1989) Alterations in lipid metabolism oaused by illumination of the marine rod alga. Chondrus crispus and Polysiphonia lanosa. 28:3295-3300.

Pettitt T.R., et.al, (1989) Lipid metabolism i n tho rod marine algae Chondrus crispus and Polysiphonia lanosa as modified by temperature. 28:2053-205.8.

Pettitt T.R., et.al, (1989). Lipids of :the marine red alga. Chondrus crispus and Polysiphonia lanosa. 28:399-405.

Pickrnere S . E . , et.al, (1973) Composition of Qigartina carrageenan in relation to sporophyte and gamotophyto stag08 of the life oyole. 12:2441-2444.

Pokorny M. , et.al, (1970) . Comparative stubies of L- and O- methionine metabolism in lower and higher plants. 9:2175- 2188

Popov S . S . , et.al, (1985). Sterols from some Black Sea Ulvaoeae. 24:1987-1990.

Prasada Rao N.V.S.A.V., et.al, (1984). Carbohydrates of Padine tetrastromatica. 23:2531-2533.

Prasada Rao N.V.S.A.V., et.al, (1986). Struotural featuros of tho sulphated polysaooharide from a green soawo.4 Caulerpa taxifolia. 25:1645-1647.

Quillet M., et.al, (1985). Sorbitol and sorbitol phosphato in brown seaweeds. 24:67-69.

Quillet M . , et.al, (1985). Sorbitol, a preauraor of L- guluronia acid in alginia acid biosynthesis. 24:43-45.

Ragan M.A. 61 A . Jensen, (1979). Wideapread diatribution of aulphated polyphenols in brown algae. 1832610262.

Ragan M . A . & W . D . Jamieson , (1982) . Oligomeria phlorogluainols from Fucus vesicu~osus: phOtOpl8tO m88 sp8atrometric investigation. 21:2709-2711.

Rahman A . , et.al, (1988). Pinnata~ane, a bridged ayalia ether sesquiterpene from Laurencia pinnatifida. 27:3879-3880.

Ramshaw J . A . M . , et.al, (1974). Phylogenetia impliaationm of the aminoaaid sequence of cytochrome a from Enteromorpha intestinalis. 13:2783-2789.

Raub M . F . , et.al, (1987). The green algal pigment aaulerpin as a plant growth regulator. 26:619-620.

Ricketts T.R. , (1971). Identification Of xanthophylls X1 and x i s of the Prasinophyceae as siphonein and siphonaranthin. 10:161-164*

Ricketts T.R., (1971). The structures of siphon8in and siphonaxanthin from Codium fragile. 10:155-160.

Robertson K.J. C W . Fenical. (1977) . Pabhydiatyol-A epoxide, a new diterpene from the brown aeaweed Dictyota flabellata. 16:1071-1073.

RodrIguez K.R. t L.B. Liddle, (1977). Fucoidan in Padina sanctae-crucis spores. 16:132-133.

Rossi S . S . , et.al, (1978). Hydrocarbons of Macrocystis pyrifera blades. 17:1431-1432.

Rubinstein I. & L. J. Goad, (1974) . Sterols of the 8iphonou8 marine alga Codium fragile. 13:481-484.

Saenger P., &.al, (1976). Bromo-compounds of the red alga Lenormandia prolifera. 15:1957-1958.

Salem H . M . , et.al, (1971). Investigations on the alginia aaid of the Egyptian brown algal speaiea Cystoseira barbata.

* 10: 10954099

Schlenk D. & W.H. Gerwick, (1987). Dilophia add, a diterpenoid from the tropical brown seaweed Dilophus guineensis. 26:1081-1084.

Schwede J.G., et-al, (1987) Distribution of the pigment aaulerpin in spoaies of the green alga Caulerpa. 26:155-158.

Sciuto S . , et.al, (1978). Beta-L-aspartylglyaine from tho red alga Ceramium rubrum. 17:1659-1660.

Sciuto S . , et.al, (1979). N-methyl-L-aspartia aaid from the red alga Halopytis incurvus. 18:1058.

Sciuto S. , et.al, (1980) Aminoaaid pattorns at differont stages in the life aycle of Rhodomelaaeou8 algae. 19:2751- i 2754.

Sciuto S . , et. al, (1982) (0) - (S) -4-dimethylsulfonio-2- mothonybutyrate from tho rod alga Rythiphloea tinctoria. 21:227-228.

Sciuto S. I et.al, (1983) . The identifiaation of 4-hydroxy-N- methylproline in the red alga Chondria coerulescens - mpeotral information. 22:2311-2312.

Segawa M., et.al, (1990). A germacrane-type sosquiterpone from the brown alga Dictyopteris divaricata. 29:973-974.

Semmak L . , et.al, (1988). Acyolia diterpenes from Bifurcaria bifurcata. 27:2347-2349.

Shaw D.G. & J. N. Wiggs, (1979) . Hydrooarbon8 in Alarkan marina intertidal algae. 18:2025-2027.

Shizuri Y. & K . Yamada, (1985). Laurebiphenyl, 8 dimoria sesquiterpene of the cyclolaurane-typo from the rod alga Laurencia nidifica. 24:1385-1386.

Shizuri Y., et.al, (1982). Two new farnesylaaotono derivativos from the brown alga Sargassum micracanthum. 21:1808-1809.

Shizuri Y., et.al, (1984). Laurequinone, a oyalolaurane 8esquitorpono from the rod alga Laurencia nidifica. 23:2672- 2673 . Sims J.J. & J.A. Pettus Jr., (1976) . Isolation of fro. ais and tran8-phytol from the red alga Gracilaria andersoniana. 15:1076-1077.

Smith K.L. & J.L. Harwood, (1984). Lipids and lipid metabolism in the brown alga Fucus serratus. 23:2469-2473.

Smith K . L . , et.al, (1982) Phoapholipid metabolism in tho brown alga Fucus serratus. 21:569-573.

Smith L . L . / et.al, (1973) Sterols of the brown alga Sargassum fluitans. 12:2727-2732.

Stefanov K., et.al, (1988). Fatty aoid oomposition o f some algae of the Black Sea. 27:3495-3497.

Sun H.H,. & W. Fenical, (1979) . Diterpenoids of the brown seaweed Glossophora galapagensis. 18:340-341.

Sun H.H., et.al, (1983). Avrainvilleol, a brominated diphenylmethane derivative with feeding deterrent proporti08 from the tropical green alga Avrainvillea longícuulis.

Suzuki M. & E. Kuorosawa, (1985) A C-15 non-terpenoid from the red alga Laurencia okamurai. 24:1999-2002.

22:743-745. 1

Suzuki M., et.al, (1985). (58,7R,lOR)-selin-4-(14)-en-5alfa- 01, a sesquiterpene aloohol from the red alga Laurencia niponnica. 24:2011-2012.

Suzuki M., et.al, (1988). Venustanol, a brominated labdane diterpene from the red alga Laurencia venusta. 27:1209-1210.

Suzuki M., et.al, (1989). Structure revision of okamurallene and structure elucidation of further C-15 non-terpenoid bromoallens from Laurencia intricata. 28:2145-2148.

Takruri I . , et.al, (1986). N-Terminal aminoaaid sequenaer of flavodoxins from Chondrus crispus and Nostoc strain =c. 25:2113-2115.

Tay S . A . B . , et.al, (1985). Deteotion 'of oytOkiniA8 in a 8eaweed extraot. 24:2611-2614.

Tillekeratne L.M.V., et.al, (1984). 4,9-Diaoetoxyudotaal: a linear diterpene aldehyde from the green alga Halimedi8 opuntia. 23:1331-1333.

Tringali C . , et.al, (1984). Three further dolabellano diterpenoida from Dictyota spa 23:1681-1684.

Turvey J.R. & E.L. Williams, (1970). The struoture of some xylans from r,ed algae. 9:2383-2388.

Valdebenito H., et .al, (1982) . A compound with antimiorobial aotivity isolated from the red seaweed Laurencia chilensis. 21: 1456-1457.

Waaland J.R. (1975) . Differences in carragoenan in gamOtOphytO8 and tetrasporophytes of red algae. 14:1359-1362.

Wahidulla S . , et.al, (1987). Salfa.aholestane-3,6-diono from the red alga Acanthophora spicifera. 26:2864-2865.

Walton T . J . , et.al, (1970). The struaturo of siphonaxanthin. 9:2545-2552.

Watanabe K., et.al, (1989). A polyhalogonatod in80atioidal monoterpono from tho red alga Plocamium telfairiae. 28:77-78. I

Wha Son B., (1990). Glycolipids from Gracilaria vermcosu. 29:307-309.

White R.H. & L . P . Hager, (1978) Intricenyne and rolated halogenated aompounds from Laurencia intrincata. 17:939-942.

Whyte J.N.C. & B.A . Southcott, (1970). An extraation proaedure for planta: extracts from the rod alga RbOdOm€d8 l a r i x . 9:1159-1161.

Whyte J.N.C. & J.R. Englar, (1981). The agar aomponont of the red seaweed Gelidium purpurascens. 20:237-240.

Woolard F . X . , et.al, (1976). (-)-3-bromomethyl-3-ahloro-7- methyl-1,6-oatadiene from sri Lankan Cbondrococcus hornemanni. 15:1069-1070.

Woolard F.X., et.al, (1979). Halogenated aaetia and aarylia .aids from the red alga Asparagopsis taxiformis. 18:617-620.

Wright J . L . C . , (1980) struatural assignment of two henoiaoaahexaene isomers by C-13 m speatrosaopy. 1g:143- 144 . Yamamto M., (1972) Acid phosphatase in Enteromorpha. 11:2451-2453.

-"I I -- """-."""

ANEXO 11

BASE DE DATOS:

Se obtuvieron 256 artSculos de la revisi6n bibliogrifica de "Phytochemistry*@ (ver Anexo I), las cuales se introdujeron I en una base de datos por medio del programa Microsoft WORKS, el cual se escogi6 debido a su facilidad de manejo y disponibilidad, por lo que se ajusta a las necesidades de la informacidn recopilada.

En la Qltima pagina de este Anexo se presenta un l@Registro@@ seleccionado al azar de la base de datos. En este caso, un "registro@@ constituye una referencia de un artlculo; cada llregistrol@ se compone de diferentes @@Campos@@, que son las palabras impresas en el @@registro1@ con letras mayQsculas seguidas de dos puntos; para esta base de datos, cada corresponde a un criterio de cada una de las clasificaciones de los artkulos (FAMILIA, GENERO, COMPUESTO, TIPO, ACTIVIDAD BIOL. y APLICACION), ademas de otros datos esenciales de cada artlculo. As1 pues, cada @@registro1@ se va constituyendo al llenar el espacio correspondiente a los llcamposl@ con la informacien de cada artlculo, siendo esto posible ya que al editar todos los llcampos@l en la hoja de "registro", Bsta queda grabada en la memoria tal y como se editb,

Por otro lado, para consultar la base de datos, lo primero es entrar al programa WORKS, despues de lo cual se llama al archivo donde se encuentra la base de datos por ALGAS.WDB y entonces se presenta en pantalla la base de datos con todos los registros existentes; si se desea buscar algtin(os) artSculo(s) en particular, se debe ir al menQ y buscar la opcidn de l@Consultall, hecho lo cual aparece la hoja de Vegistro@* con todos los @1campost@ y sus correspondientes espacios en blanco; entonces se llena uno o varios campos (dependiendo de la especificidad de la consulta) con la informaci6n buscada, con lo cual el programa busca 108 l@registros@@ que concuerden con los' criterios de consulta y los pone en pantalla, ocultando los demas @*registros" (pero sin borrarlos del archivo) Ya realizada la consulta, se puede imprimir la información buscada; precisamente de esta manera se imprimid la iiltima pagina de este Anexo. si se desea mayor informacidn sobre la forma de utilizar este programa y consultar la base de datos, se puede ver el *@Tutorial1@ que incluye el programa WORKS.

. 1 .".,, "" .. -.-

De este modo, es posible tener acceso a la informacidn recopilada de manera facil, ordenada y sistem6tica. Tanbien es importante mencionar que esta base de datos permite introducir mas referencias de otros artlculos recopilados posteriormente, no s610 de la revista "Phytochemistry@*, inclusive no sdlo de algas marinas, siempre y cuandos sean} referentes a la qulmica de productos naturales.

BASE DE DATOS

FAMILIA: Rhodophyceae

co”): Terpenos

ALGAS MARINAS

GI&HISRO: Plocamium,(

TIPO: Monoterp

ACTIVIDAD BIOL: Biotoxica,Insecticida

APLICACION: Plaguicida

AUTOR 1: P. Crews vom REVISTA: Phytochemistry P.

TITULO: Bioactive monoterpenes from red seaweeds

londrococcus

no S

eso: 1984

$N: 23

GS: 1449-1451

."

" .

MEXO

FIG. 1. Cromatograma en placa de Sllica Gel de 10x10 cm. Sistema de elución: hexano-acetona 3 : l . Revelador: sulfato cérico. 1: colesterol; 2: extracto hexbnico; 3 : extracto de acetato de etilo; 4: extracto de diclorometano; 5: extracto metanólico; 6: fracción 4a; 7: fracción 4b; 8: fracción 4c; 9: fracción 4d; 10: fracción 4e; 11: fracci6n 2.

”””.. .“e.-”-

”

119853

FIG. 2. Cromatograma en placa de Silica gel de 5x10 cm. Sistema de eluci6n: hexano-acetona 3 : l . Revelador: sulfato CgriCO. 1: colesterol; 2: fraccidn 4dl; 3: fraccidn 4d2.

FIG. 3. Cromatograma en placa de Silica gel de 5x10 cm. Sist. de elucidn: hexano-acetona 3 : l . Revelador: yodo metdlico. 1: colesterol; 2:muestra final.

FIG. 4. Placas de bioensayo. 1: agar c/Bacillus subtillis; 2: perforaci6n; 3: halo de inhibición; P: penicilina; Hl; H2: extracto hex6nico; Ht: hexano puro Dl, D2: ext. diclorometano; Dt: diclorometano puro Al, A2: ext. acetato de etilo; At: acetato de etilo puro M1, M2: ext. metanólico; Mt: metano1 puro.