RESULTADOS

- Se observo bacterias de muestras de abono líquido orgánico, biofowling y agua

estancada.

- Utilizándose la técnica de tinción simple se observo bacterias muertas, levadura y

se distinguió sus asociaciones.

DISCUSIONES

Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisión binaria. La

mayoría son de vida libre, a excepción de algunas que son de vida intracelular obligada,

como Chlamydias y Rickettsias. Tienen los mecanismos productores de energía y el

material genético necesarios para su desarrollo y crecimiento. Las bacterias integran el

reino procariota (pro de primitivo y cariota de núcleo). (Pírez & Mota, 2006).

Hay técnicas que permiten observar los microorganismos en vivo. Según Granados y

Villaverde (1996) éstas son: Examen en fresco, que incluye examen en fresco entre

portaobjetos y cubreobjetos y examen en fresco sobre gota pendiente en porta excavado;

y tinción vital.

En la práctica de laboratorio se realizó un primer ejercicio en examen en fresco entre

portaobjetos y cubreobjetos.

Esta consiste en suspender el microorganismo objeto de estudio en agua destilada o

cualquier otro medio líquido transparente colocándolo en un portaobjetos a fin de poder

posteriormente, mediante microscopía, visualizar su morfología, disposición y motilidad.

(Granados y Villaverde, 1996).

Además, Granados y Villaverde (1996) agrega que en esta técnica se extenderá la

muestra en el portaobjetos con el fin de homogeneizar la mezcla colocando con cuidado

sobre la suspensión un cubreobjetos formando inicialmente un ángulo de 45° evitando

que se formen burbujas de aire (en nuestra muestra de agua estancada se formaron

pequeñas burbujas de aire) al caer el cubreobjetos sobre la suspensión.. Luego se

sellaran con parafina (vaselina) los bordes de los cubreobjetos para disminuir la

evaporación y evitar corrientes en la preparación.

En la microscopía óptica se toma en cuenta el factor contraste, porque sin un contraste

adecuado es difícil diferenciar una estructura del fondo que la rodea.

Es así que se usan coloraciones para incrementar el contraste entre el espécimen y el

fondo que lo rodea, pero desafortunadamente las coloraciones dificultan la observación de

los microorganismos vivos. (Atlas, 1990).

En la mayor parte de las técnicas de coloración se pone una suspensión de

microorganismos en un portaobjetos y se deja secar. A la preparación así obtenida se le

pasará rápidamente sobre una flama para que el calor fije las células que se encuentran

allí, esto es, las células se fijan al portaobjetos de tal manera que no pueden ser

arrastradas al lavar la preparación. Más adelante, se agrega colorante, se deja actuar por

algún tiempo, se enjuaga para quitar el exceso de colorante y se observa. (Atlas, 1990).

El segundo ejercicio realizado en la práctica de laboratorio fue de observación de

bacterias por la técnica de tinción simple.

En un procedimiento de coloración simple, se usa un solo reactivo colorante que no

intenta producir reacciones de coloración diferenciales para los distintos tipos de

microorganismos o estructuras. Las técnicas de coloración simple para microorganismos

son de utilidad cuando el colorante es fijado por las células y así los microorganismos

aparecen de color oscuro o coloreados sobre un fondo luminoso o claro, y son negativas

cuando los microorganismos no fijan el colorante, en cuyo caso el fondo es el que se tiñe

y los microorganismos aparecen brillantes sobre el fondo oscuro.

Estas dos técnicas dependen del hecho de que las bacterias y otros microorganismos

poseen carga negativa asociada a la capa externa de la célula, principalmente debido a

los grupos PO43- de la membrana celular. (Atlas, 1990).

En los procedimientos de coloración positiva un colorante ácido (catiónico), que tiene

cromóforo (porción colorida de la molécula de colorante) cargado positivamente, es

atraído hacia la cubierta externa de la célula cargada negativamente. Colorantes como el

azul de metileno (que fue el colorante utilizado en el ejercicio de laboratorio) tienen una

porción de la molécula de color azul, que es atraída a la superficie de la célula, dando

como resultado una tinción positiva del microorganismo. (Atlas, 1990).

CONCLUSIONES

- En la observación de bacterias en forma directa; para las muestras del abono

líquido orgánico, biofowling y agua estancada se observaron colonias de bacterias

de diferentes formas desplazándose. Se distinguían formas de cocos y bacilos,

pero no claramente.

- En la observación de bacterias utilizándose la técnica de tinción simple se observo

cocos (en forma aislada, diplococos, estreptocos) y bacilos (aislados, diplobacilos

y estreptobacilos). También se observaron levaduras aisladas y en conjunto.

Todas las especies estaban quietas y de un color azul violeta. Se distinguían

claramente.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son las asociaciones más frecuentes en bacterias?

Según Burdon y Williams (1971) entre los cocos, y también con menor frecuencia

entre bacilos y espirilos, las células que crecen rápidamente tienden a ordenarse

en gurpos características. El aspecto de cada agrupamiento según se observa en

el microscopio, es una importante ayuda para reconocer las especies.

Tenemos:

- Diplococos: Cocos en parejas. Generalmente los lados adyacentes de los

organismos apareados son achatados.

- Estreptococos: Cocos en cadena.

- Estafilococos: Cocos en masas irregulares que semejan racimos de uvas. Se

dividen en más de un plano del espacio y permanecen fuertemente adheridos,

formando masas irregulares.

- Tétradas: Cocos en grupos de cuatro. Estos cocos se dividen en dos planos que

forman ángulo recto entre sí.

- Sarcinas: Cocos en bloques cúbicos.

- Grupos de bacilos y espirilos: El crecimiento característico de algunas especies de

bacilos es por parejas (diplobacilos). Otros pueden formar largas cadenas

(estreptobacilos). Algunos muestran una disposición muy sorprendente de células

paralelas; otros crecen en una masa entretejida y enmarañada. Los espirilos no se

agrupan en ninguna forma característica, sino que crecen en forma de cadenas

largas y ondulantes. A veces el espirilo no logra encadenarse y aparece el

filamento como una forma de ovillo retorcido.

2. ¿En qué rango de tamaño se definen las bacterias?

Según Granados y Villaverde (1996), el tamaño de las bacterias se mide en µm

(0.000001 m) y oscila entre 0.2 y 2 µm.

El tamaño de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 µm, pudiendo llegar en algunos

tipos a 10 µm. Solo son visibles entonces, al microscopio óptico o microscopio

electrónico. Para observarlas con el microscopio óptico se usa el objetivo de

inmersión (100X), sumergiendo esta lente en una gota de aceite (aceite de

inmersión) en el preparado a observar. A modo comparativo, una célula eucariota

mide más de 5 µm, mientras que un reo virus mide menos de 0.1 µm. (Pírez &

Mota, 2006).

BIBLIOGRAFÍA

ATLAS, R. 1990. Microbiología. Fundamentos y aplicaciones. Compañía

Editorial Continental, S.A de C.V. México D.F, México. Pp 55-62.

BURDON, W & WILLIAMS, R. 1971. Microbiología. Primera edición en

español. Publicaciones Cultural. México D.F, México. Pp 131-135.

GRANADOS, R & VILLAVERDE, C. 1996. Microbiología. Bacteriología.

Características y clasificación bacteriana. Virología. Características y

técnicas bioquímicas. Editorial Paraninfo. Madrid, España. Pp 9-10, 216-

220

PÍREZ, M & MOTA, M. 2006. Temas de Bacteriología y Virología médica.

Capítulo 2: Morfología y estructura bacteriana. Segunda edición corregida.

Universidad de la República. Facultad de Medicina. Departamento de

Bacteriología y Virología. Instituto de Higiene. Montevideo, Uruguay. Pp 23-

26.