Identificación y medición de la Identificación y medición de la respuesta inmunerespuesta inmune

PRUEBAS SECUNDARIAS

§ SOLUBLE

§ PARTICULADO

§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO

PRECIPITACIÓN

AGLUTINACIÓN

FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

La prueba a realizar depende de las

características del Ag

Comparación precipitación - aglutinación

Antígeno SOLUBLE

Antígeno PARTICULADO

Y

YYY

Y

YFormación de “retículo” “Amontonamiento”

Y

YY Y

PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN

Anticuerpo

PRECIPITACIÓN

Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en

contacto con su anticuerpo específico, forma

complejos inmunes que al encontrarse en

proporciones óptimas se insolubilizan dando una

reacción de precipitación

Ag/mg

Precipitación

Y YY YY

Y

Y

Y Y

Y Y

Y

Exceso de ACProporciones

óptimas

Exceso de Ag

YYAC ESPECÍFICO

Ag SOLUBLE

MEDIO

PROPORCIÓN

Y

Y Y

Y

YY Y

Y

Y

Y Y

Y

YY Y

Y

RETÍCULO SOLUBLE

MEDIO

LÍQUIDO SÓLIDO

• DIFUSIÓN DOBLE

• INMUNOELECTROFORESIS (IEF)

• INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)

• CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

Test de Ascoli - Valente

CARBUNCLO

DIFUSIÓN DOBLE

Fundamento: empleando el medio adecuado (agar

gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag

como Ac (difusión “doble”), de modo que al

encontrarse en proporciones óptimas,

interaccionen, produciendo una banda de

precipitado visible

Inmunodifusión en Gel de Agar

Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

Test de Coggins para AIE

Placa de Petri

1. Agar gel 126

75

43

2.Sacabocados

3. Suero problema

1 3 54. Suero testigo (+) (reactivo)

2 4 6 5. Antígeno específico (reactivo)

7

126

75

43

267

4

267

4

6.Cámara húmeda 48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN

A

C B

A. NEGATIVO

B. POSITIVO

C. Débilmente POSITIVO

D. NEGATIVO

E. Fuertemente POSITIVO

F. POSITIVO

G. POSITIVO

H. Banda INESPECÍFICA

I. Banda INESPECÍFICA

267

4D

F E

G

I H

APLICACIONES EN VETERINARIA

§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

§ PIROPLASMOSIS EQUINA

§ LEUCOSIS BOVINA

§ BRUCELOSIS OVINA

§ BRUCELOSIS CANINA

AGLUTINACIÓN

Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo:

bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su

anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une

por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión

agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con

respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de

tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión

de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de

dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la

aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de

sueros muy positivos.

FENÓMENO DE ZONA O PROZONA

AGLUTINACIÓN

AGLUTINACIÓN PASIVA

COAGLUTINACIÓN

HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

AGLUTI

NACI

ÓN

Antígeno particulado (reactivo)

+YYYY Y

Suero problema

Proporción

Medio

YY

Y

YYAGLUTINACIÓN

AGLUTINACIÓN

En PLACA En TUBO

BrucellaSalmonella Micoplasma

BPA

Brucella

SAT+2-ME PAL

Aglutinación en placa: BPA

1. Suero problema 2. Antígeno específico (reactivo)

Aglutinoscopio + placa de vidrio

Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado

3. Mezclar

8 MINUTOS

LECTURA E INTERPRETACIÓN

Con GRUMOS Sin GRUMOS

AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME

SAT (Seroaglutinación en Tubo)

Ig M Ig G

2- ME (2- Mercaptoetanol)

Se realizan en simultáneo

En TUBO: SAT + 2- ME

SUERO BPA (+)

1. Suero problema

Título

SAT

2-ME

37ºC-48 hs

2. Solución fisiológica fenicada (SFF)

2. Solución 2-ME

3. Antígeno

60 MINUTOS

1/25 1/50 1/100 1/200

LECTURA e INTERPRETACIÓN

37ºC-48 hs

POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA

Aglutinación en tubo: PAL

PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE

Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra

un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno

particulado coloreado, ambos se unirán, formando un

complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y

asciende con la nata

1. Leche problema

2. Antígeno (reactivo)

37ºC-1 hora

LECTURA e INTERPRETACIÓN

+ ++ +++ ++++

PAL

APLICACIONES EN R. A.

BRUCELOSIS BOVINA

PAL - ELISA IVIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA

FC DEFINITORIA

SAT + 2-ME – FPA ELISA C

COMPLEMENTARIAS

BPA – ELISA ITAMIZ

Prueba

v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN

v IN VIVO PROTECCIÓN

PRUEBAS TERCIARIAS

NEUTRALIZACIÓN

Fundamento: estimación de la capacidad de una

anticuerpo de neutralizar la actividad biológica

de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

PROTECCIÓN

Fundamento: forma de análisis de neutralización

que se realiza totalmente in vivo para determinar

la capacidad protectora de un anticuerpo

específico frente a su antígeno

RESPUESTA INMUNE CELULAR

v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS

v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T

v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B

v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS