MODULO IV: APLICAR LAS TÉCNICAS PARA EL DIAGNÓSTICO BACTERIOLÒGICO - INMUNOHEMATOLÓGICO

SUBMODULO: REALIZAR BIOMETRIA HEMÁTICA

Propósito : Procesar una muestra de sangre, con la finalidad de interpretar sus alteraciones hematológicas, aplicando la bioseguridad y ética en el laboratorio clínico.

Sangre y sus Componentes

Minerales, VitaminasLípidos, Carbohidratos – 3%

S 4.5 – 5

ltrs

H2O-90%

Agranulocitos

Monocitos

Linfocitos

Agranulocitos

Neutrófilos

Eosinófilos

Basófilos

Líquida

55%

Sólida

45%

• + O2

• -- CO2

• -- O2

• + CO2

Venosa

Arterial

Mto. pH

Mto. Vol, Interticial

Regulación TérmicaRegulación Hormonal

Nutritiva

FoRmes

Respiratoria

Excretora

Defensiva

Hemostática

Proteínas 7%

Respiratoria

Defensiva

Vol. Intersticial

pH

NutritivaExcretora

Órganos Hematopoyéticos

OHOHHigado

+ importante vida adulta

+ importante vida intrauterina, 95% Cel. Sang. (1er mes)

Produce Linfocitos T

Produce Linfocitos B

Produce Linfocitos T y B

Hematopoyésis y Procesos Productivos

Hematopoyésis

Eritropoyésis

Leucopoyésis

Megacariopoyésis

Agranulopoyésis

Granulopoyésis

Monopoyésis

Linfopoyesis

PLASMA

• Componente de la fracción líquida de la sangre, de color ambarino transparente, ccompuesto de agua, sales minerales y adicionado con anticoagulants naturales , así como de Proteínas, que en condiciones normales supone no menos del 55% del volumen total de la sangre en donde nadan las cèlulas sanguìneas.

• Al retirarsele el fibrinógeno, se le conoce como suero sanguíneo.

90 %

3 %

7 % Albúmina- mantiene agua del plasma equilibrada. Globulinas- Igs. Defienden en infecc. Produce órg. linf. Fac. Coag.-evitar Hemorragias y formar coàgulo.

Sust. Reguladoras-enzimas, hormonas. Prod. Desecho-Ac. Úrico, urea, creat., bilir.

Hematíes, Globulos Rojos, Eritrocitos

Elementos formes o figurados

Forman la fracción sólida de la sangre formada por tres tipos diferentes de cél. y debido a su peso específico o densidad (1.09), van suspendidas en el plasma (1.03).

Tienen forma definida: Globulos rojos, blancos y plaquetas.

Por su peso (1.09), se separan por gravitación.

Representan el 45% de la sangre total y se conocen como hematocrito

FASES

DE

MADURACION

DEL

GR

Proeritroblasto (Rubriblasto)

Eritroblasto Basófilo (Prorrubricito)

Eritroblasto Ortocromático (Metarrubricito)

Eritritroblasto Policromatófilo (Rubricito)

Eritrocito (Hematíe)

Eritrocito Difusamente Basófilo (Eritrocito Policromatófilo)

Proeritroblasto Eritroblasto Basófilo Eritroblasto Policromátofilo

Pronormoblasto ó Rubriblasto

Normoblasto Basofílico ó Prorrubricito

Normoblasto Policromátofilo ó Rubricito

EritroblastoOrtocromático

ReticulocitoEritrocito

Normoblasto Ortocromático ó Metarrubricito Hematìe

PROERITROBLASTO Pronormoblasto ó Rubriblasto. (Etapa I.) El pronormoblasto es el precursor más joven reconocido del eritrocito. Su diámetro varía de 12 a 19 micras. El núcleo, que es redondo y llena casi toda la célula, contiene fibras de cromatina y varios nucléolos. El citoplasma no granuloso se tiñe de azul.

Proeritroblasto

ERITROBLASTO BASÓFILO

Normoblasto Basofílico ó Prorrubricito (Etapa II): Es una célula menor que la anterior y tiene un núcleo con la misma forma. La cromatina está condensada en gránulos gruesos. No hay núcleos visibles.

Eritroblasto Basófilo

Eritroblasto Policromátofilo

ERITROBLASTO ORTOCROMÁTICO O ACIDOFILO Normoblasto Ortocromático ó Metarrubricito (Etapa IV.) Alcanza la etapa ortocromática cuando el citoplasma contiene toda su dotación de hemoglobina. La cromatina nuclear se condensa más y más; el núcleo disminuye y desaparece. Durante esta etapa, la cantidad de hemoglobina de la célula alcanza la de la madurez.

Eritroblasto Ortocromático

ERITROBLASTO POLICROMATÓFILONormoblasto Policromatófilo o Rubricito (Etapa III)Esta etapa cubre desde que se empieza a reconocer la Hb en el citoplasma, hasta la total desaparición de la basofilia. El Núcleo se hace mas pequeño y la cromatina nuclear se condensa. Hay una notable producción de Hb.

RETICULOCITOS Células jóvenes no nucleadas de la serie eritrocítica, que pueden reconocerse solamente activas contienen mitocondrias y polirribosomas. Normalmente los reticulocitos constituyen menos del 1 % de los eritrocitos circulantes, de 25 000 a 50 000 por mm3.

ERITROCITOS O HEMATIES Son enucleados, tienen un diámetro de 7 a 8 micras y un grosor de 1 micra en su porción central delgada y 2 micras en el borde, pareciendo una dona con su orificio central cubierto con una membrana. Se mueven solamente con la corriente sanguínea y son inmóviles por si mismos. El eritrocito maduro circulante tiene una vida de 100 a 120 días.

Reticulocito

Eritrocito

o Más abundantes = 99%

7 a

1 μ de grosor al centro

2 μ de grosor borde

o Color amarillo-rojizo

2 μ de grosor borde

• Etapa embrionaria forman solo Hígado y Bazo

• Después de nacer en MOR huesos largos planos de costilla y esternón.

• Maduros se liberan a Circ. Per. y al morir son destruidos por el SRE transformando la Hb en bilirrubina, eliminada por el hígado a travès de la bilis.

• Tiempo de vida: 120 días

• Ciclo de eritroblasto a eritrocito 80 horas• Son acidófilos y basófilos

CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES

• Formado por: H2O en un 62% Hb en un 28% Lípidos 7%

Proteínas, azúcares, sales, enzimas en un 3%

Dan color a la sangre Respiración Celular

Cantidades Hombres adultos: de 4.5 a 5 millones x mm3

Mujer adulta: de 4 a 4.5 millones x mm3

Con 4 Ferroporfirinas idénticas

TIPOS

Atendiendo a las cadenas globínicas que poseen. Los principales son:

• Hemoglobina A (Hb A): 2 cadenas α y 2 β. Mayoritaria en el adulto, forma, el 97% de la Hb total.

• Hemoglobina A2 (Hb A2): 2 cadenas α y 2 δ. En adulto, forma, 2,5% de la Hb total.

• Hemoglobina Fetal (Hb F): 2 cadenas α y 2 γ. La más abundante del 4º mes del embarazo hasta los 6 meses de edad, en pequeño %, se encuentra en sangre adulto.

• Hemoglobina Portland: Consta de 2 cadenas δ y 2 γ.

• Hemoglobina Gower I (Hb G I): Consta de 2 cadenas δ y 2 ε.

• Hemoglobina Gower II (Hb G II): 2 cadenas α y 2 ε. Junto con las Hbs Portland y G I, son las mayoritarias en el embrión.

Leucocitos

Son las formas celulares sanguíneas más grandes y las únicas con núcleo.

Se forman en MO y Sistema Linfático Son menos numerosos que los glóbulos rojos y

más grandes que ellos por su tipo. Incoloros con núcleo porque carecen de HB. Tienen una vida muy corta de aproximadamente

24 horas.

Función defensiva por su poder fagocítico y por acarrear Ac.

Metabólicamente son los más activos y en infecc. aumentan en numero.

Son destruidos por el SRE. Miden 8-15 μ de dm. En niños duplica la cantidad. En adultos van de 5,000 a 10,000 x mm3

Granulocitos

Agranulocitos

A: NEUTRÓFILO B: EOSINÓFILO C: BASÓFILO D: LINFOCITO E: MONOCITO F: MONOCITO

LINFOCITOS

Cel esféricas con citoplsma transparente sin gránulos, mononucl.T. Linfàtico hay linfoblastos grandes y pocos en sangre.Miden de 6-20 μ de dm. Son monucleados. Los grandes de 11-20 μ de dm., núcleo redondo u oval que ocupa 90% de la cel.Los pequeños de 6-10 μ de dm, en sangre perif., son la mayoría.Funcionan en las defensas inmunológicas del cuerpo, junto con sus derivados plasmáticos Ac.

LINFOCITOS

T o LT se producen en Timo y Gang. Linf. –Intervienen en la Inmunidad adquirida de tipo celular, son del 50-70% .B o LB producen en Bazo, MO y Gang. Linf. Son del 14-26% e intervienen en la inmunidad adquirida de tipo humoral.Cel NK (Natural Killer) participan en inmunidad adquirida natural o innata.Fabrican parte de las Globulinas β y γ del plasma.Tiñen colorante Wright, cromatina azul obscuro, paracromatina en estrias color azul claro, zona perinucleada sin teñir.% en sangre de 21 – 30, 20 – 25% (Circ en sangre) Linfocitosis,Linfocitopenia o LinfopeniaAfectan en: Linfocitosis, mononucleosis y hepatitis infecciosa, diferentes Leucemias, Brucelosis , Tifoidea, Tosferina.

MONOCITOS

Función:•Forman parte del Sist. Mononuclear Fagocitario, puede producir Interferòn.

Características:•Más grande sangre normal•Miden de 10 a 20-30μ de dm.•Núcleo grande redondeado u ovalado parcialmente lobulado, forma arriñonada con hendidura ó herradura, tiñe color azul-violeta

Se tiñe con Tinción de Wright Citoplasma abundante con zona perinuclear clara de color azul

grisáceo. Con gránulos finos entre rojo y púrpura y a veces azurófilos (x

hidrolasas acidas), con vacuólas blanquecinas. % en sangre 4 – 8. Intervienen en procesos de inflamación, fagocitosis y

presentación de Ag. Ppal función defensa contra bacterias, hongos, virus y cuerpos

extraños. Fuera de circulación se convierten en macrófagos, Por lo su

morfologá y función acorde estado madurción y ubicación en endotelio y cavidades el cuerpo

Monocitosis,Monocitopenia Hay alteraciones en: Brucelosis, Leucemias , Tuberculosis.

GRANULOCITOS

NEUTRÓFILOS

Son la mayoría de leucocitos y afines a colorantes neutros.

Núcleo en con 2 a 4 lóbulos unidos por filamentos , con forma de E, Z, S.

Miden 12 μ de dm., más pequeños monocitos y eosinófilos y más grandes que los basófilos.

Contienen lisosina y fagocitina.

Se tiñen con diferentes colores intensamente. Gránulos azurófilos. Forman parte del Sist. Macrofágico en procesos

infecciosos. Hay dos tipos: Segmentados: lóbulos separados por filamentos y núcleo con bloques de cromatina y espacios de paracromatina. Entre 60 – 70%. Banda: de material nuclear más gruesa filamento y núcleo forma de U y grosor uniforme. Entre 3 – 5 % Neutrofilia,Neutropenia Alteraciones en: Convulsiones, Hemólisis, Hemorragias,

Tuberculosis, Policitemia Vera

Función:•Alta fagocitosis complejo Ag –Ac, reduce inflamación alergias.

Características:•Miden 10-12 μ de dm, se tiñen de eosina x afinidad colorantes ácidos.•Núcleo bilobulado conectado, rojo pálido•Gránulos específicos de peroxidasa color rojo brillante, citocinas, neurotoxinas, heparina e histamina más grandes que neutrófilos y gránulos pequeños de arisulfatasa en Eos. Maduros.

• Citoplasma incoloro• % en sangre 2 – 4.• Eosinofilia,Eosinopenia• Alterados en: Anemia perniciosa, Tuberculosis, PV, Tumores de

ovario, mèdula ósea y cavidad serosa.

BASÓFILOSFunción:•Contienen Heparina e Histamina (medidor quim modula inflmación), Sust. de reacc. lenta en Alergias , Vasodilatación y contracciòn duradera y en Reacc. de Hipersensibilidad.• Intev. Homeostasis tejidos.

Características:•Son el 0.5% de GB y granulocitos SP, de color malva (rojo violáceo)• Núcleo ligeramente lobulado pálido•Miden 10 - 13 μ de dm•Menos movilidad y capacidad fagocít.•Lóbulos poco definidos, puentes cortos y anchos.•Gránulos grandes con poca afinidad al tono rojo violáceo y mayor al color azul (hematoxilina color básic-púrpura intenso).• Basofilia,Basopenia•Alterados en: Policitemias

Fragmentos citoplasmáticos pequeños, irregulares carentes de núcleo, derivados fragmentación de megacariocitos

x Trombopoyetina

Cèlulas Sanguíneas

BIOMETRIA O CITOMETRIA HEMÁTICA

Estudio de lab. para la medición del tamaño, número y madurez de las diferentes células sanguíneas en un volumen específico de sangre, y diagnosticar anomalías en la producción o destrucción de CS, como anemias, infecciones y otros trastornos de la sangre

Examen Usos

Recuento sanguíneo completo (su sigla en inglés es CBC), que incluye: Recuento de glóbulos blancos (su sigla en inglés es WBC). Recuento de glóbulos rojos (su sigla en inglés es RBC). Recuento de plaquetas. Volumen de glóbulos rojos en el

hematocrito (su sigla en inglés es HCT). Concentración de hemoglobina (HB, el pigmento transportador de oxígeno de los glóbulos rojos). Recuento sanguíneo diferencial.

Como ayuda para diagnosticar anemia y otros trastornos de la sangre: y determinados cánceres de la sangre; para monitorizar la pérdida de sangre y la infección; para monitorizar la respuesta de un paciente a la terapia contra el cáncer, como la quimioterapia y la radioterapia.

Recuento de plaquetas. Para diagnosticar y, o monitorizar la hemorragia y los trastornos de la coagulación.

Tiempo de protombina (su sigla en inglés es PT).

Para evaluar las hemorragias y los trastornos de la coagulación, y para monitorizar las terapias anticoagulantes.

Es una de las pruebas más solicitadas a los laboratorios dehematología.

El hemograma es utilizado como un procedimiento de screening,obteniéndose una visión general del estado de salud del paciente:• Ayuda para el diagnóstico de ciertas patologías.• Refleja la capacidad del organismo para reaccionar frente

a la enfermedad.• Sirve de indicador de los progresos del paciente en algunos

estados patológicos como la infección y la anemia.

Actualmente su realización está totalmente automatizada. Losavances tecnológicos han hecho posible conseguir unos equiposcapaces de crear unos resultados más precisos tanto desde unpunto de vista cualitativo como cuantitativo.

Los autoanalizadores ofrecen:• Parámetros hematológicos para la serie roja• Parámetros hematológicos para la serie blanca• Parámetros hematológicos para la serie plaquetar

¿QUE ES EL HEMOGRAMA?

¿COMO SE EXTRAE LA MUESTRA PARA EL HEMOGRAMA?

En algunos centros la extracción está centralizada en el laboratorio, pero enotros es la enfermera de planta la encargada de la extracción. La muestrautilizada para la realización del hemograma es sangre total anticogulada.

Es muy importante mezclar rápidamente la sangre con el anticoagulante paraevitar la formación de coágulos o microcoágulos que alteraríanconsiderablemente los resultados.

El anticoagulante de elección es el EDTA Tripotásico (anticoagulante sólido)por varias razones:

- No produce dilución de la sangre.- Respeta la morfología eritrocitaria y leucocitaria.- Asegura la conservación de las células durante 24 horas.- Inhibe la agregación de las plaquetas, facilitando el recuento de las

mismas

PARÁMETROS BHC

HemogramaBHC

FR

FB

Recuento EritrocitarioHematocrito - Hto.Hemoglobina – Hb.

Indices Eritrocitarios

Volumen Corpuscular Medio – VCMHemoglobina Corpuscular Media – HbCMConcentración Media de Hemoglobina Corpuscular - CHCM

Plaquetas

Recuento Leucocitario - RL

Recuento Diferencial de GB - RDGB

LinfocitosMonocitosNeutrófilosEosinófilosBasófilos

SERIE ROJA

HEMOGLOBINA- Adulto: a) mujeres: 12-14 g/100 mL.

b) hombres: 14-17 g/100 mL- R/N: 16-23 g/100 mL- 2 meses: 9-14 g/100 mL

HEMATOCRITO (=relación entre el volumen ocupado por loshematíes y el correspondiente a la sangre total )- Adulto: a) mujeres: 36-46%.

b) hombres: 42-52%- R/N: 50-62%- 1 año: 31-39%

HEMATIES- Adulto: a) mujeres: 3,5 – 5,0 millones/mm3

b) hombres: 4.0 – 5,5 millones/mm3

- R/N: 5,0 - 6,5 millones/mm3

INDICES ERITROCITARIOS

VCM (Volumen Corpuscular Medio)Da una idea del volumen medio de los hematíes. Nos permite saber si son:- Normocíticos: tamaño normal- Macrocíticos: tamaño grande- Microcíticos: tamaño pequeño

Fórmula: Hematocrito / Nº hematíes en millonesValores normales: 82-98 microlitros

MCHC (Concentración corpuscular media de hemoglobina)Expresa el promedio de la concentración hemoglobina del hematíe.Da la relación entre el peso de la Hgb y el volumen del hematíe.

Fórmula: Hgb / hematocritoValores normales: 32-36%

HCM (Hemoglobina corpuscular media)Informa sobre el contenido medio de Hgb de cada hematíe. Su resultado estará enrelación con el VCM y MCHC.

Fórmula: Hgb/ Nº hematíes en millones.Valores normales: 27-31 picogramos.

TABLA: Valores de referencia de hemoglobina, a diferentes edades (En gr %, gramos/100 ml de sangre).

EDAD SEXO MASCULINO SEXO FEMENINO Al nacer 14-22 14-22 1-2 años 10-12 10-12 2-4 años 12-15 12-15 5-7 años 12.5-15 12.5-15 8-15 años 13-15.5 12.5-15 16 años o más 13.5-17 12.5-15

LEUCOCITOS

Valores normales- Adulto: 5.000 – 10.000/µL- R/N: hasta 30.000/µL- 1ª semana: hasta 10.000/µl

LEUCOCITOSIS (= ↑ de los leucocitos)- infecciones bacterianas- apendicitis- leucemias- embarazo (forma fisiológica)

LEUCOPENIA (= ↓ de los leucocitos)- farmacológicas- infecciones víricas- aplasia idiopática- inmune y asociada a colagenosis- congénitas- radiación y tratamientos quimioterápicos

Tipos de Leucocitos % en Sangre Linfocitos 21 - 30 Monocitos 4 - 8

Neutrófilos segmentados Neutrófilos cayados

Neutrofilos juyveniles

60 – 70 3 – 5

0 - 1 Eosinófilos 2 - 4 Basófilos 0 - 1

Tipo de Célula % X 103/L

Leucocitos Totales 4 - 10

Neutrófilos 60 -65 2 -7

Eosinófilos 0 - 4 0 – 0.4

Basófilos < 10 1 -1

Monocitos 4 - 10 2 – 0.8

Linfocitos 20 - 25 1.5 -3.5

Rango de normalidad:- Neutrófilos: 60-70%- Linfocitos: 20-40%- Monocitos: <10%- Eosinófilos <5%- Basófilos <1-3%

Leucopenia < 4000/µL Neutropenia < 1500/µL Leve 1500-1000

Moderada 500-1000Grave < 500

LEUCOCITOSIS > 10.000/µL

FORMULA LEUCOCITARIA

Neutrófilos

Infecc. Bact., Autoinmune

Leucemia mieloide

Inflamación, Convulsiones

Hemólisis, Hemorragias

Policitemia Vera

Tuberculosis

Linfocitos

Infecc. viral

Mononucleosis Inf.

Leucemia linfática

Monocitos

Infecc. crónica

Recuperación m.o.

Leucemias

Brucelosis

Tuberculosis

Basófilos

Infecc. Virales

Policitemias

SMP

Eosinófilos

Infecc. parasitarias

Anemia Perniciosa, Alergia

Policitemia Vera, Leucemia

Vasculitis, Tuberculosis

Tumores en MO, Ovarios y

Cavidades serosas

Sd. hipereosinofílico