guias lab. bioquimica profesor domingo

Universidad de Pamplona - Ciudad Universitaria - Pamplona (Norte de Santander - Colombia)

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La Academia al servicio de la Vida

LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 1 PREPARACION DE SOLUCIONES DOCENTE: DOMINGO CAMPO

OBJETIVOS

Adquirir destreza en la preparacin de soluciones de cidos, bases y sales.

Familiarizar al estudiante con el uso de la probeta, la pipeta, la bureta y el baln aforado.

FUNDAMENTOS TEORICOS Existen diversas formas de expresar la concentracin de una solucin:

Porcentaje en peso: expresa los gramos de soluto contenidos en 100 g de solucin. por ejemplo, una solucin de NaCl al 5 % en peso contiene 5 g de NaCl y 95 g de agua por cada 100 g de solucin.

% en peso = g soluto / g solucin x100

Molaridad: se define como el nmero de moles de soluto por litro de solucin.

M= N moles de soluto/ litros de solucin

Un litro de solucin acuosa de NaCl 1 M se puede preparar adicionando un (1) mol de NaCl (58.5 g) a un baln aforado de un litro y agregar agua hasta la marca.

Normalidad: se define como el nmero de equivalentes gramo de soluto por litro de solucin.

N= N Eq- g soluto/ litros de solucin

Para preparar un litro de solucin de H2SO4 1N se debe agregar un equivalente- gramo de H2SO4 (49 g) a un baln aforado de un litro y adicionar agua hasta la marca.




Dilucin: con mucha frecuencia en el laboratorio se requiere preparar una solucin diluida a partir de otra solucin de mayor concentracin. Para diluir una solucin se debe agregar ms solvente. El nmero de moles de soluto permanece constante antes y despus de la disolucin.

Vc x Cc = Vd x Cd

Vc= volumen de la solucin concentrada Mc= molaridad de la solucin concentrada Vd= volumen de la solucin diluida Md=molaridad de la solucin diluida MATERIALES Y REACTIVOS

Vasos de 50 mL

Dos balones aforados de 100 mL

Vasos de 150 mL

Dos balones aforados de 250 mL

Vaso de 250 mL

Vidrio de reloj

Esptula

Embudo de vidrio

Balanza

Cinco rtulos

Probeta de 100 mL

NaCl comercial

Agitador de vidrio

NaOH en lentejas

3 frascos de 150 mL

H2SO4 concentrado

2 frascos de 300 mL

Frasco lavador

Pipeta graduada de 10 mL PROCEDIMIENTO Parte I. preparacin de 100 g de solucin de NaCl al 10 % en peso: pese un vaso de precipitados de 150 mL con una precisin de 0.01 g.




Registre su peso y si retirarlo de la balanza agregue pequeas porciones de NaCl hasta que el nuevo peso exceda al anterior en 10 g. Mida 90 cc de agua destilada en una probeta (suponga que la densidad del agua es 1 g/mL) y cuidando no perder una sola gota agrguelos al vaso que contiene el NaCl. Agite suavemente con una varilla de vidrio hasta que se disuelva toda la sal. Seguidamente transfiera la solucin con ayuda de un embudo a un frasco, tpelo y rotlelo, indicando la concentracin, la fecha y su nombre. Parte II. Preparacin de 100 mL de solucin 2.0 M de NaCl: pese 11.69 g de NaCl siguiendo las instrucciones de la parte I. retire de la balanza el vaso que contiene la sal, agregue entre 35 y 40 mL de agua destilada, agite con cuidado hasta disolver toda la sal. Transfiera esta solucin con la ayuda de un embudo a un baln aforado de 100 mL. Enjuague varias veces las paredes del vaso utilizando un frasco lavador y agregue las aguas del lavado al baln aforado. Seguidamente afore hasta la marca. Tape el baln, agite y transfiera su contenido a un frasco previamente rotulado. Parte III. Preparacin de 100 mL de solucin 0.02 M de NaCl: mediante clculos determine el volumen que debe tomarse de la solucin 2M para preparar esta solucin, mdalo en una pipeta y depostelo en un baln aforado de 100 mL, afore a la marca con agua destilada, agite, transfiera su contenido a un frasco, tpelo y rotule como en el caso anterior. Parte IV. Preparacin de 100 mL de solucin 0.1 M de NaOH: siga las instrucciones de la parte III y prepare por dilucin esta solucin a partir de una solucin de NaOH 1M. Rotule y guarde la solucin para la prctica siguiente. Parte V. preparacin de 100 mL de solucin 0.1 N de HCl: mediante clculos determine que volumen de acido del 35% de pureza en peso y densidad 1.13 g/mL debe tomarse para preparar 100 mL de solucin 0.2 N. mida este volumen en una probeta y transfiralo a un baln aforado de 100 mL (el baln deber contener unos 50 mL de agua para evitar que salpique), adicione agua destilada hasta la marca. Envase la solucin en un frasco con tapa, rotlela y gurdela para la siguiente prctica. RESULTADOS

1. Muestre todos los clculos que se requieren para preparar cada una de las soluciones anteriores.




2. cuales serian las posibles fuentes de error al preparar las anteriores soluciones?

PREGUNTAS Y EJERCICIOS

1. por qu deben guardarse en recipientes tapados las soluciones de concentracin conocida?

2. cuntos gramos de NaOH se requieren parar preparar 250 mL de solucin 0.2 M?

3. Explique cada uno de los pasos requeridos para preparar: (a) 500 mL de solucin 0.2 M de HCl a partir de HCl concentrado (36% en peso de HCl y densidad 1.18 g/mL). (b) 2 L de NaOH 0.3 M a partir de NaOH del 99.5 % de pureza en peso.

4. a qu volumen final deben diluirse 50 mL de NaOH 6M para obtener una solucin 1M de NaOH . explique.

REFERENCIAS

1. BRICEO,Carlos Omar y RODRIGUEZ, Lilia. Qumica. 1 ed., Bogot: Editorial educativa,1993.p.409-415.

2. GARZON, Guillermo, Fundamentos de qumica general. 2 ed., Bogota: McGraw-Hill, 1989. P. 419-422.

3. RUSSELL, J. y LARENA, A. Qumica. 1 ed., Mxico: Prentice-Hall hispanoamericana, 1989. P. 317-330.




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 2 DETERMINACIN DE ACIDEZ DE LA LECHE DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVOS:

Determinar la acidez total de la leche utilizando una valoracin cido-base.

Determinar el contenido en cido lctico y buscar criterios que indiquen si la leche se encuentra en condiciones adecuadas

FUNDAMENTO La leche, por acuerdo internacional, se define como el producto del ordeo regular y completo de vaca sana, bien alimentada y no fatigada y desprovisto de calostro este ltimo corresponde a la primera leche que produce la vaca que ha tenido un hijo. Se compone de 87% de agua, siendo lo restante grasa, protenas (casena y lactoalbmina), sacarosa, sales minerales como fosfatos, sulfatos, y cloruros. Es de reaccin ligeramente alcalina y al mismo tiempo cida, por la presencia de fosfatos y de dixido de carbono. La grasa forma en la leche pequesimos glbulos, visibles slo al microscopio, ms ligeros que el liquido y por eso asciende por el reposo, originando la crema o nata. El aspecto blanco opaco tan caracterstico de la leche se debe a la suspensin de la grasa en forma de estos glbulos finsimos. Normalmente constituye desde el 3,5 hasta el 6,0% de la leche, variando entre razas de vacas y el tipo de alimentacin. La casena es la protena ms importante de leche se encuentra formando una mezcla heterognea. Tiene la propiedad de coagularse en presencia de cidos, originando la masa principal del queso. La concentracin en la leche vara de 3,0 a 4,0%. Existe una estrecha relacin entre la cantidad de grasa y la cantidad de protena en la leche cuanto mayor es la cantidad de grasa, mayor es la cantidad de casena. La lactosa corresponde al glcido de la leche (C12H22O11), se encuentra en disolucin y fermenta con facilidad, dando origen principalmente al cido lctico, que como cido que es provoca la coagulacin de la leche. Si se deja la leche en contacto con el aire y la temperatura adecuada, se corta, lo que se debe al desarrollo de bacterias lcticas como el bacilus lactici y el streptococus lactici, que transforman la lactosa en 2 carbohidratos, la glucosa y galactosa, y posteriormente stos en cido lctico. A pesar de que es un azcar, la lactosa no se percibe por el sabor dulce. La concentracin de lactosa en la leche es relativamente constante y promedia alrededor de 5,0% (4,8%-5,2%). A diferencia de la concentracin de grasa en la leche, la




concentracin de lactosa es similar en todas las razas lecheras y no puede alterarse fcilmente con prcticas de alimentacin. La acidez total de la leche determina su calidad, ya que la leche de consumo humano suele tener un pH comprendido entre 6,4 y 6,7. Sales minerales y Vitaminas la parte ms importante de las sales minerales lo constituyen, fosfatos, sulfatos, cloruros. La leche es una fuente excelente para la mayora de los minerales requeridos para el crecimiento del lactante. La digestibilidad del calcio y fsforo es generalmente alta, en parte debido a que se encuentran en asociacin con la casena de la leche. Como resultado, la leche es la mejor fuente de calcio para el crecimiento del esqueleto del lactante y el mantenimiento de la integridad de los huesos en el adulto. MATERIAL:

3 Matraces Erlenmeyer.

Pipeta graduada de 10 mL.

Bureta graduada de 25 mL.

Soporte Universal.

Pinzas Para Bureta Doble.

REACTIVOS:

Hidrxido de sodio 0.1 M

Fenolftalena al 1%

Agua destilada

Muestra de Leche Fresca o Procesada (tres tipos como mnimo).

PROCEDIMIENTO

Se depositan 10 ml en un matraz erlenmeyer de 125 ml

Se aaden tres gotas de fenolftaleina como indicador.

Se titula la muestra con solucin 0.1 M de NaOH.

Se determina el volumen en mL de NaOH requeridos en la titilacin. El color rosado deber permanecer por 15 seg.

Repetir todo una vez mas.




CALCULOS

Determinar la concentracin del cido lctico que contiene cada una de las dos muestras de leche valoradas. La concentracin final ser la media de los dos valores calculados anteriormente.

Buscar la frmula semidesarrollada del cido lctico, y con ella determinar los gramos de cido lctico que contienen 100 cm3 de la leche analizada.

Buscar el contenido en cido lctico que debe tener una leche de consumo, as como el valor habitual de su densidad. Compara con el valor obtenido experimentalmente.

REFERENCIAS Del Valle, M. Anglica. Mediciones y mtodos de separacin en el laboratorio qumico. Ed. Pontificia Universidad Catlica de Chile. 1996




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 3 DETERMINACIN DEL pH Y PREPARACIN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVO: Aprender el uso correcto del pH metro y preparar soluciones con diferentes valores de pH. FUNDAMENTO: El pH de una solucin acuosa se define como el logaritmo negativo de la concentracin molar de hidrogeniones (H3O+). La determinacin de pH es muy importante, ya que influencia de manera directa en la carga de la molcula y en su actividad biolgica. El producto inico del agua es la base de la escala del pH propuesta por Srensen (:kW=[ H+][-OH ] = 10-14 pH = -log [ H+]). La escala de pH permite expresar la concentracin de iones hidronio (protn hidratado) comprendida entre 1M y 1X10-14M, extremos que corresponden a pH 0 y 14, la neutralidad es igual a pH 7.0. La manera mas conveniente y exacta de determinar el pH es usando un electrodo de vidrio. Este electrodo depende del intercambio de iones en las capas hidratadas formadas sobre la superficie del electrodo de vidrio. Generalmente se utiliza vidrio compuesto de aproximadamente 22% de Na2O, 6% de CaO y 72% de SiO2. Este vidrio muestra una especificidad hacia los iones hidrgeno hasta un pH de cerca de 9; a valores mayores de pH, la membrana se vuelve sensible a iones sodio y otros iones alcalinos. Esto se evita empleando membranas construidas con vidrio en que el sodio se reemplaza por litio. El electrodo de vidrio debe mantenerse en agua destilada o en solucin de KCl saturada para evitar el crecimiento de microorganismos. En el electrodo de vidrio est presente un electrodo de referencia interno de plata/cloruro de plata (Ag/AgCl) rodeado por un electrolito de HCl 0.1M. Este electrodo de referencia interno produce un potencial estacionario. El electrodo de vidrio acta como una batera cuyo voltaje depende la actividad del H+ de la solucin en que est sumergida. En el pHmetro, el electrodo de vidrio y el electrodo de referencia de calomel, estn diseados para que a pH 7 d un potencial cero. Antes de medirse el pH de una solucin desconocida el pHmetro se estandariza con soluciones amortiguadoras de pH conocidos. El voltaje depende de la temperatura, por lo que los potencimetros tienen un control de ajuste para la temperatura de la solucin. Los electrodos de vidrio son frgiles y caros, por lo tanto deben manejarse con cuidado. Si se mide el pH de soluciones de protenas, se puede formar una capa delgada en el electrodo; puede




removerse sumergiendo en HCl 0.1N, y despus limpiando con detergente diludo y enjuagando con agua. Por otro lado, las soluciones amortiguadoras (buffers o soluciones tampn), son aquellas capaces de mantener el pH dentro de un rango de variacin mnima. Estn formadas generalmente por un cido dbil y su base conjugada cuando se trabaja a pHs por debajo de 7. En el caso de pHs alcalinos se usa una base dbil con su cido conjugado respectivo. La eficiencia de una solucin reguladora est regida por dos factores: (a) La concentracin total del regulador (suma de las concentraciones del cido dbil y de la sal). Cuanto ms concentrado sea un regulador, ms tolerante ser a la adicin de cidos o bases fuerte. (b) Por la relacin existente entre la base conjugada y el cido. Cuando esta relacin es igual a 1, la solucin reguladora tiene su mxima eficiencia. Este valor se alcanza cuando el pH del regulador es igual al pKa de cido. La E=ecuacin de Henderson y Hasselbalch, es muy til para la preparacin de las soluciones amortiguadoras. (pH = pKa + log [sal]/ [cido]). El pH ms adecuado para que una solucin amortiguadora funcione eficientemente, es cuando se encuentra en un rango de pH igual a su pKa +1 MATERIALES Potencimetro, pipetas pasteur, probetas de 200 ml, vaso de precipitados de 250 ml, piseta con agua, agitador magnticas, esptula. Muestras para determinar pH: leche, jugo, etc.(suministrado por los estudiantes) REACTIVOS KCl saturado; Solucin estndar pH 4, pH 7 y pH 10; Solucin de cido brico 0.1 M; Solucin de NaOH 10M, HCl concentrado, cido actico, acetato de sodio, EDTA, KH2PO4, K2HPO4. MTODOS Uso del pH metro y medicin del pH El electrodo del pHmetro siempre debe estar sumergido en una solucin de KCl o agua destilada. Enjuagar el electrodo con agua destilada y secar (Fig.1A). Ajustar el pHmetro primero a pH 7, despus a 4 y finalmente a 10 con soluciones reguladoras comerciales. Entre cada pH enjuagar con agua destilada (Fig.2B). Determinar el pH de varias muestras como leche, jugos, refrescos, etc,




FIGURA 1. Representacin esquemtica de un pH-metro. Preparacin de diferentes soluciones

Preparar 50 mL de una solucin reguladora de acetato de sodio 50 mM, pH 5. Para realizar esto, primero debes calcular cuantos gramos de acetato de sodio se necesitan, disolverlos en menos de 50 ml de agua destilada (por ejemplo 30mL) y ajustar el pH a 5 con cido actico. Usar la formula M= (n/V) = (mPM)/V (M= molaridad, m=masa en gr, P.M.= peso molecular y V= volumen en litros) para hacerlos clculos.

Preparar 50 mL de una solucin reguladora de fosfatos (de potasio) 100 mM, pH 6. El H3PO4 tiene tres constantes de ionizacin y por lo tanto tres valores de pKa. Se toman las especies inicas que tengan un valor de pKa mas cercano a pH 6 (H2PO4-1 HPO4-2)

Usaremos la siguiente tabla para preparar la solucin amortiguadora Tabla 1. Preparacin de solucin reguladora de fosfato a pHs entre 5.8 y 6.2

Hasta aqu se han preparado 10 ml de una solucin 1M, utilizar frmula C1V1=C2V2 (C=concentracin, V=Volumen) para preparar 50mL a 100 mM




Preparar 50 ml de EDTA 0.5 M pH 8 Calcular cuntos gramos de EDTA necesitas, poner en 30 ml, comenzar a disolver con agitador magntico y tratar de ajustar el pH cercano a 8 (el EDTA comenzar a disolverse) y adicionar poco a poco ms agua. Ajustar a pH 8 y aforar a 50 ml. Cuestionario 1. Porque el pH del potencimetro se ajusta primero a pH 7 y no a 4 o 10? 2. Porque el electrodo se tiene que mantener en una solucin de KCl saturado? En caso de no contar en el laboratorio con KCl, Que otros compuestos pueden usarse? 3. Si quisieras preparar un buffer de fosfatos de potasio pH 11, que sales seleccionaras? 4. El buffer de acetato de sodio que preparaste est a un pH que se puede considerar adecuado para servir como solucin reguladora? .Explica tu respuesta. 5. En la preparacin del acetato de sodio, cual es el cido y cual la base conjugada. REFERENCIAS Wilson, K., and Walker, J. 2000. Principles and Techniques of practical Biochemistry. Fifth edition. Cambridge University Press. Robert, JF., and White B.J. 1990. Biochemical techniques theory and practice. 1st edition. Waveland Press, Inc. USA. Douglas A. Skoog and Donald M. West.1971.Principles of Instrumental Analysis. Holt, Rinehart and Winston, Inc. Rodney F. Boyer.1986. Modern Experimental Biochemistry. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. Sambrook, J., E.F. Fritsch and T. Maniatis. 1989. Molecular cloning. A laboratory Manual. Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 4 PROPIEDADES INICAS DE LOS AMINOCIDOS DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVO: Demostrar las propiedades cido-base de los aminocidos. FUNDAMENTO: Todos los aminocidos son anfolitos los cuales contienen al menos un grupo funcional acdico (carboxilo) y uno bsico (a-amino). Algunos aminocidos contienen otros grupos que se ionizan fcilmente: grupos amino, carboxilo, phidroxifenilo, sulfihidrilo, guanidino e imidazol. El carcter inico de los polipptidos y las protenas es en gran parte debido a estos grupos adicionales ionizables debido a que los grupo alfa-amino y carboxilo de los aminocidos participan en los enlaces peptdicos. En esta prctica se estudia la reaccin de aminocidos cuando se adiciona un cido o una base y se observa el cambio de pH. Adems, despus de cada adicin de cido o base durante una titulacin, los resultados se pueden predecir por el uso de la ecuacin general de Henderson-Hasselbalch. MATERIALES Y REACTIVOS Muestras de aminocidos en polvo, NaOH 1N, HCl 1N, amortiguadores estndar. Balanza analtica, pH metro, barra y agitador magntico, bureta, pinzas para bureta, soporte, esptula, 8 vasos de precipitados de 100 ml, embudo. PROCEDIMIENTO Titulacin de aminocidos desconocidos. Pesar cerca de 400 mg de muestra y disolverla en 20 ml de H2O en un vaso de precipitado. Introducir una barra magntica y colocarlo en una placa de agitacin, as como el electrodo para medir pH. Titular la muestra disuelta desconocida con HCl 1N, registrando las lecturas de la bureta y el pH a intervalos frecuentes hasta que la solucin alcance un pH de 1.0. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulacin. Titular otros 20 ml de agua (blanco) con HCl 1N, gota a gota en las primeras 10 gotas y de dos en dos gotas las siguientes 10 gotas. Finalmente de cuatro en cuatro gotas hasta que la solucin alcance pH de 1.0 Registrar el pH y el volumen del cido despus de cada adicin. Disolver otra muestra (otra vez aproximadamente 400 mg en 20 ml de agua) y titular la muestra con




NaOH 1N de la misma manera que para la titulacin con cido hasta que el pH de la solucin llegue a12. Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulacin. Tambin titular a 20 ml de agua (blanco) con NaOH 1N hasta pH 12.0 de manera similar que el primer blanco. REPORTE Hacer una tabla de resultados para cada titulacin:

Muestra con NaOH, Agua con NaOH, Muestra con HCl, Agua con HCl.

Dibujar la curva de titulacin verdadera siguiendo el siguiente procedimiento: Para determinar la curva de titulacin verdadera de cualquier sustancia, se debe medir cunto cido o base se consume al titular el solvente (agua) en cada pH y entonces restar esta cantidad de la cantidad total de cido o base consumida para alcanzar ese pH:

Titulacin del lado cido. Construccin de la grfica El siguiente ejemplo con el lado cido de la titulacin de un aminocido ilustra uno de varios de los mtodos disponibles para corregir por dilucin. Para la muestra y el blanco de agua, graficar el volumen del cido adicionado contra el pH alcanzado (Fig. 1). De la grfica o de los datos originales, preparar una tabla como la Tabla 1. Restar el volumen del cido requerido para llevar el blanco de agua a cualquier pH del volumen del cido requerido para llevar la muestra al mismo pH. La diferencia representa la cantidad de cido consumida en la titulacin de la muestra solamente. Usando los datos de su tabla, graficar el pH contra el nmero de equivalentes de cido necesario para titular la muestra del aminocido a cualquier pH (ver Fig. 2). Titulacin del lado bsico. Para corregir por dilucin el lado bsico de la curva se puede aplicar un mtodo similar. Preparar una curva de titulacin completa y corregida para el aminocido titulado.




El nmero de equivalentes de cido o base consumidos al pasar a travs de la inflexin de una curva, como en la Fig. 2, representa la cantidad de cido requerida para titular un grupo ionizable en la cantidad del aminocido que se ha ensayado. El punto final de la titulacin se debe reconocer como el punto en que se eleva (o cae) drsticamente el pH con la adicin del titulante. Este punto generalmente se determina con ms precisin de la curva de titulacin del aminocido con la base. Cuestionario 1. Usando la ecuacin de Henderson Hasselbalch, calcular el pKa de cada grupo ionizable titulado. 2. Coincide con el pKa reportado en los libros? 3. Cmo se podra confirmar la identidad del aminocido?




4. Dibujar la curva que se esperara en la titulacin del cido asprtico y la que se esperara en la titulacin de la lisina, sealando las especies predominantes en cada regin. REFERENCIA Clark, J.M and R. L. Switzer. 1977. Experimental Biochemistry. W.H. Freeman and Company




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 5 DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA CASENA DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVO: Determinar el punto isoelctrico de la casena. FUNDAMENTO: La casena representa el 80% de las protenas presentes en la leche y el 2,7% en composicin de la leche lquida, hay varios tipos de casena que son s1, ; estas protenas precipitan del lquido cuando esta toma un pH cido de 4,6. El pH en el que precipitan las protenas se denomina punto isoelctrico (pI), ya que se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas presentando una carga neta de 0 y la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada ya que la partculas se agregan. Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos, y as cada protena tendr un pI diferente.

BSQUEDA DE INFORMACIN: - Consulte la importancia industrial de la casena - Cul es el pI de la casena? - Consulte el valor del punto isoelctrico de tres protenas de inters. MATERIALES Y REACTIVOS Materiales por grupo: - Nueve tubos de ensayo - Dos vasos de precipitados de 50ml - Una gradilla para tubos de ensayo - Un erlenemyer de 250ml

- Un erlenmeyer de 150ml - probeta de 50ml - Dos pipetas graduadas de 5,0ml - Dos pipeta graduada de 1,0 ml - Dos pipetas graduadas de 10,0ml




- Dos vasos de precipitado de 50ml - Agitador de vidrio - Embudo de vidrio mediano - Vidrio de reloj - Papel de filtro flujo rpido - Dos goteros de plstico - Agua destilada - cido actico 0,01N - cido actico 0,1N

- cido actico 1,0N - NaOH 1N - ter etlico - Etanol al 70% - Potencimetro - Leche entera corriente ( *) - Papel indicador universal - Rollo de toallas absorbentes ( *) (*)proporcionado por el estudiante

PROCEDIMIENTO: A. Aislamiento de la casena: Caliente en un vaso de precipitados 150ml de agua destilada a 38C, aada 50ml de leche y luego gota a gota y con agitacin, adicione cido actico 2M hasta que observe que se forma un precipitado (la leche se corta). Deje sedimentar, decante y filtre sobre papel de filtro rpido, luego lave el precipitado con 20ml de etanol en el mismo filtro y seque el precipitado colocando varias toallas de papel absorbente. Coloque el precipitado en un vaso de precipitados pequeo previamente pesado, vuelva a pesar el vaso con el precipitado y luego adicione 5ml/g de ter etlico, filtre nuevamente. Deseche el sobrenadante y queda un precipitado blanco de fcil manipulacin. B. Preparacin de la casena: Coloque 250 mg de casena en un erlenmeyer de 150ml, agregue 20ml de agua destilada y 5 ml de NaOH 1N; agite hasta lograr una solucin total de la casena. Una vez disuelta la casena, adicione 5 ml de cido actico 1N y diluya con agua destilada hasta 50ml y mezcle bien. La solucin debe ser clara y limpia y si no es as, debe volver a filtrar. C. pI de la casena: En nueve tubos de ensayo limpio y seco adicione exactamente los volmenes de los reactivos segn la siguiente tabla:




Confirme el valor de pH resultante de cada tubo con un potencimetro o con papel indicador universal. Luego agregue a cada tubo 1ml de la solucin de casena, agite inmediatamente el contenido del tubo y djelo reposar durante 20 minutos. Usando una escala cualitativa de cruces (0 a 5 cruces), registre el grado de turbidez de cada tubo, el mayor grado de turbidez, significa que hay un mayor contenido de precipitado y ser el valor de pH ms cercano al punto isoelctrico de la protena. PARA EL DESARROLLO DEL INFORME - Discuta los datos obtenidos e indique cual es el pI de la casena - Representa las formas inicas y calcule el valor del pI para algunos aminocidos y algunos pptidos que le indique el profesor. REFERENCIA Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico.




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 6 ENSAYOS PARA PROTENAS DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVO:

FUNDAMENTO:




REACTIVOS

ANALISIS CUALITATIVOS Para aminocidos




Consulta

NOTA: LOS ESTUDIANTES DEBEN LLEVAR GUANTES, TAPABOCAS, TOALLAS ABSORBENTES, 3 HUEVOS, FOSFOROS Y UN PEDAZO DE TELA.




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 7 FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVOS: Estudiar algunas de las condiciones que afectan la actividad enzimtica de alfa-amilasa. BUSQUEDA DE INFORMACIN - Que es la a-amilasa y que reaccin cataliza - Aplicacin industrial de la a-amilasa - Fundamento de las reacciones de Lugol y Fehling. MATERIALES Y REACTIVOS -30 tubos de ensayo - Gradilla - 4 pipetas graduadas de 5ml - 2 pipetas graduadas de 10ml - Un termmetro - Un erlenmeyer de 250ml - Una placa de calentamiento - Un aro con nuez - Tres vaso de precipitados de 250ml - Una pinza para tubos de ensayo

- Dos baos de mara (35 y 50C) - Reactivo de Lugol (250ml) - Reactivo de Fehling A (350ml) - Reactivo de Fehling B (350ml) - Acido clorhdrico 1N (200ml) - Hidroxido de sodio 1N (200ml) - Buffer fosfatos pH 5.0 (200ml) - Buffer fosfato pH 7,2 (200ml) - Solucin de a-amilasa comercial 5000 unidades SKB 0,6 g/100ml y diluir 1/100 (500ml) - Solucin de almidn al 1% ( 2,0 litros) - Agua destilada

PROCEDIMIENTO

1. Efecto de la temperatura:

Coloque en 4 tubos de ensayo 10ml de solucin de almidn, 2ml de solucin del buffer pH 7,2 e incbelos a temperaturas diferentes segn lo indicado en la tabla 1. A cada uno de ellos coloque 2ml de la solucin de a-amilasa agite y tome 1ml de mezcla de reaccin cada minuto y distribyalos en 2 tubos de ensayo (0,5ml en cada uno). Un tubo de ensayo contiene 1ml de reactivo de Lugol y el segundo tubo de ensayo contiene 1 ml de reactivo de Fehling. Anote si la reaccin en cada tubo de ensayo es positiva o negativa. Utilice un blanco de reactivos en cada caso.




2. Efecto del pH

Coloque en 4 tubos de ensayo 10ml de la solucin de almidn e incbelo a temperatura de 35C, a cada tubo adicione 2ml de las soluciones de diferente pH y luego 2 ml de la solucin de a-amilasa. Agite y tome un mililitro de mezcla de reaccin y distribyalos en dos tubos de ensayo (0,5ml cada uno). Un tubo de ensayo contiene 1ml de reactivo de Lugol y en otro tubo de ensayo contiene 1ml del reactivo de Fehling. Anote si la reaccin en cada tubo de ensayo es positiva o negativa, utilice un blanco de reactivos en cada caso.




3. Efecto del tiempo

Coloque en un erlenmeyer de 250ml, 25ml de solucin de almidn, 10ml de la solucin buffer pH 7,2 e incbelo a 35C por 3minutos, luego adicione 2ml de la solucin de enzima y agite. Tome 1ml de mezcla de reaccin segn el tiempo especificado y distribyalos en dos tubos de ensayo (0,5ml cada uno); un tubo contiene 1ml de Lugol y el otro tubo 1ml de Fehling. Anote si la reaccin en cada tubo es positiva o negativa y anote el tiempo en que se agota el almidn.

PARA EL INFORME

- Datos y observaciones debidamente tabuladas - Identificar bajo qu condiciones de temperatura y pH, la enzima tiene su mejor actividad (mayor velocidad de reaccin) - Identificar en que tiempo termina la enzima de degradar el almidn en el procedimiento 3 REFERENCIAS - Bohinski, R.C. Bioqumica. ADDISON-WESLEY IBEROAMERICANA, S.A., Wilmington, 1991. - Plummer, D.T. Bioqumica prctica. Mxico, Mc Graw Hill Latinoamericana, 1981




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 8 RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIN DE CARBOHIDRATOS DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVOS:

Reconocer los carbohidratos por medio de reacciones coloreadas

de carcter cualitativo.

Diferenciar Hexosas de pentosas

Diferenciar e identificar azucares reductores y no reductores

Diferenciar monosacridos, disacridos y polisacaridos

Diferenciar aldosas de cetosa FUNDAMENTO: Los carbohidratos tambin llamados azcares, osas o sacridos, son polihidrxialdehidos o polihidroxicetonas o compuestos polimricos que por hidrlisis producen polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas. Segn el nmero de unidades de azcares sencillos que posean se clasifican en: MONOSACRIDOS o azcares sencillos, que a su vez pueden ser ALDOSAS cuando contienen el grupo aldehdo o CETOSAS cuando contienen el grupo cetona. Los monosacridos naturales pertenecen a la serie D de los azcares y pueden tener entre tres y hasta siete tomos de carbono. DISACRIDOS que estn formados por dos monosacridos unidos entre s por enlaces glucosdicos. OLIGOSACRIDOS que tienen entre tres y diez monosacridos unidos tambin por enlaces glucosdicos. POLISACRIDOS que son polmeros naturales con varios miles de unidades de azcar sencillo ligadas entre s. De acuerdo con lo anterior, adems de reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacrido tipo aldosa o cetosa, si es fcilmente oxidable o no, es decir si es un




AZCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco tomos de carbono (pentosa) o de seis tomos de carbono (hexosa), si es disacrido o polisacrido. Una secuencia que permite hacer el reconocimiento y diferenciacin de carbohidratos se esquematiza en la FIGURA 1. Ensayo de Molisch: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se hidrolizan con cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con -naftol formando un color prpura violeta. Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de carbohidratos reductores, al igual que el reactivo de Felhing, el de Benedict contiene ion cprico en medio alcalino que se reduce hasta xido cuproso en presencia de azcares con el hidroxilo hemiacetlico libre. Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce hasta xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los disacridos. Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por la formacin de una coloracin azlvioleta intensa y el glicgeno y las dextrinas por formacin de coloracin roja. Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en la conversin de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensacin con resorcinol formando as complejos coloreados . Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual forma complejos de coloracin slo con las pentosas. De otro lado una propiedad importante que permite identificar los carbohidratos, y determinar el grado de pureza de los mismos, particularmente monosacrios es la rotacin ptica ocasionada por la presencia de centros asimtricos o quirales en la estructura molecular, los cuales desvan el plano de luz polarizada. Esta propiedad no es exclusiva de los carbohidratos pues la presentan todas aquellas sustancias denominadas ptimamente activas, por tener en su estructura centros quirales.




Para la medicin de la rotacin ptica los factores importantes a tener en cuenta son: La longitud de onda de luz polarizada, la cantidad de material ptimamente activo, y la naturaleza del solvente cuando se usa. Los cambios en la temperatura ocasionan solo pequeas variaciones en las medidas de la rotacin. TEMAS DE CONSULTA Elabore el preinforme con las siguientes indicaciones:

Frmulas estructurales en proyeccin de FISHER y de HAWORTH

de la glucosa, galactosa, fructosa, ribosa.

Frmula estructural en proyeccin de HAWORTH de la sacarosa.

Breve descripcin de los polisacridos: almidn y glicgeno.

Reacciones de oxidacin de monosacridos reductores, ilustradas

con la estructura en proyeccin de FISHER de la glucosa.

Funciones e importancia biolgica de los carbohidratos.

Fundamentos de polarimetra que debe incluir: diferenciacin entre

luz monocromatica y luz polarizada. Funcionamiento y partes del

polarmetro.

Extraccin y refinamiento del azcar de caa (sacarosa).

Aplicaciones industriales de la celulosa.

Construya las tablas de identificacin y diferenciacin de azucares

(Ver tabla 1)

Tabla N1: Identificacin de monosacridos

Compuesto Formula Reactivo Observaciones Rxn Qumica

MATERIALES Y

REACTIVOS

16 tubos de ensayo Una pipeta graduada de 1 ml Una pipeta graduada de 5 m Un vaso de precipitados de 500ml Una varilla de vidrio

Una gradilla para tubos de ensayo Una pinza metlica para tubo de ensayo Soporte, aro con nuez, malla y mechero. Una esptula Perlas de vidrio Alfa-naftol al 10%




cido clorhdrico concentrado cido sulfrico concentrado Reactivo de Fehling A Reactivo de Felhing B Reactivo de Tollens Reactivo de Seliwanoff Reactivo de Bial Lugol Soluciones acuosas al 1% de: almidn, glicgeno, sacarosa,

maltosa, glucosa, galactosa, fructosa, ribosa, arabinosa. Solucin de glucosa al 10%. Solucin de sacarosa al 10%. Solucin fructosa al 10%. Solucin de sacarosa al 10% en cido clorhdrico 0.5M

PROCEDIMIENTO

Realice los ensayos que se describen a continuacin, en tubos de ensayo LIMPIOS Y SECOS, con las soluciones patrn de los carbohidratos que se indican en cada caso y la muestra problema. Ensayo de Molisch: Soluciones patrn de carbohidratos: ARABINOSA, GLUCOSA, FRUCTOSA, SACAROSA Y ALMIDN. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin del carbohidrato y agregue 0.2 mL de -naftol al 10%, mezcle bien y luego adicione CUIDADOSAMENTE POR LAS PAREDES DEL TUBO, 1 mL de cido sulfrico concentrado, la formacin de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para carbohidratos. Ensayo de Lugo: Soluciones patrn de carbohidratos: ALMIDN Y GLICGENO. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 0.2 ml de Lugol, mezcle y observe la formacin de los colores rojo para glicgeno, azul-violeta para almidn como pruebas positivas. Ensayo de Benedict: Soluciones patrn de carbohidratos: GLUCOSA, MALTOSA Y SACAROSA. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 0.1 ml del reactivo de Benedict, caliente al bao mara. La




formacin de un precipitado amarillo o rojizo, es prueba positiva para carbohidratos reductores. Ensayo de Barfoed: Soluciones patrn de carbohidratos: GLUCOSA, MALTOSA Y SACAROSA. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin del carbohidrato y agregue 2 ml del reactivo de Barfoed, caliente en bao mara a ebullicin. La formacin de un precipitado rojo entre 5 y 7 minutos, es prueba positiva para MONOSACRIDOS REDUCTORES. Si el precipitado se forma entre 10 y 12 minutos, la prueba es positiva para DISACRIDOS REDUCTORES. Ensayo de Seliwanoff: Soluciones patrn de carbohidratos: FRUCTUOSA Y GLUCOSA. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 2 ml del reactivo de Seliwanoff, caliente en bao mara a ebullicin por dos minutos. La formacin de una coloracin roja es prueba positiva para cetosas. Ensayo de Bial: Soluciones patrn de carbohidratos: RIBOSA, ARABINOSA Y GLUCOSA. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 3 ml del reactivo de Bial, caliente en bao mara a ebullicin y observe. La formacin de una coloracin verdosa es prueba positiva para pentosas. Muestra problema El profesor le asignar una muestra problema para identificar y clasificar. En un papel escriba el nmero de la muestra problema, las reacciones que utiliz y los resultados que obtuvo, diga si el problema corresponde a: un monosacrido, un disacridos, un polisacrido, un pentosa, una hexosa una cetosa una aldosa o una combinacin de alguno de ellos y entrguelo antes de terminar el laboratorio. Use las indicaciones de la Figura 1 para realizar las pruebas.

PARA EL INFORME

Elabore tablas con los resultados de los ensayos realizados.




Anlisis de los resultados obtenidos en cada ensayo para la muestra problema, comparando con los resultados obtenidos para las soluciones patrn de carbohidrato correspondiente. Con base en el anlisis, caracterizar la sustancia problema; si es polisacrido, disacrido, monosacrido. En caso de ser disacrido o monosacrido si es o no reductor. Si se trata de un monosacrido indicar si es aldopentosa, cetopentosa, aldohexosa o cetohexosa. Describa el anlisis y las reacciones que sigui para identificar la muestra problema, si ya conoce el nombre del compuesto problema discuta los resultaos reportados.

REFERENCIAS

Hart H., Craine L. y Hart. D. Qumica Orgnica. McGraw Hill. Novena

edicin. Espaa. 1997.

McMurry, J. Qumica Orgnica. Quinta edicin, Thomson editores, Mxico,

2001

The Merck Index: an encyclopedia of chemical. Drugs and Biologicals.

Budavari S. Guide for safety in the Chemical Laboratory.

Carey Francis A. Qumica Orgnica Mc Graw Hill , Tercera Edicin .

Espaa. 2000




LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N 9 RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS DOCENTE: DOMINGO CAMPO OBJETIVOS:

Identifique algunos lpidos mediante el uso de algunas

propiedades de los lpidos.

Reconozca a los lpidos mediante sus propiedades fisicoqumicas

Identifique cualitativamente a los lpidos mediante tincin con

Sudan II.

Elabore un jabn mediante la reaccin de saponificacin de una

grasa.

Obtenga colesterol a partir de tejido nervioso.

Identifique el colesterol mediante pruebas colorimtricas

cualitativas

FUNDAMENTO Los lpidos, son un grupo de compuestos qumicamente diversos, solubles en solventes orgnicos (como cloroformo, metanol o benceno), y casi insolubles en agua. La mayora de los organismos, los utilizan como reservorios de molculas fcilmente utilizables para producir energa (aceites y grasas). Los mamferos, los acumulamos como grasas, y los peces como ceras; en las plantas se almacenan en forma de aceites protectores con aromas y sabores caractersticos. Los fosfolpidos y esteroles constituyen alrededor de la mitad de la masa de las membranas biolgicas. Entre los lpidos tambin se encuentran cofactores de enzimas, acarreadores de electrones, pigmentos que absorben luz, agentes emulsificantes, algunas vitaminas y hormonas, mensajeros intracelulares y todos los componentes no protecos de las membranas celulares. Los lpidos, pueden ser separados fcilmente de otras biomolculas por extraccin con solventes orgnicos y pueden ser separados por tcnicas experimentales como la cromatografa de adsorcin, cromatografa de placa fina y cromatografa de fase reversa. La funcin biolgica ms importante de losa lpidos es la de formar a las membranas celulares, que en mayor o menor grado, contienen lpidos en su estructura. En ciertas membranas, la presencia de lpidos especficos permite realizar funciones especializadas, como en las clulas nerviosas de los mamferos. La mayora de las funciones de los lpidos, se deben a sus propiedades de autoagregacin , que permite tambin su interaccin con otras




biomolculas. De hecho, los lpidos casi nunca se encuentran en estado libre, generalmente estn unidos a otros compuestos como carbohidratos (formando glucolpidos) o a protenas (formando lipoprotenas). Estas importantes biomolculas se clasifican generalmente en: Lpidos saponificables y no saponificables. Adems de los anteriores, existen lpidos anfipticos en cuya molcula existe una regin polar opuesta a otra apolar. Estos lpidos forman las bicapas lipdicas de las membranas celulares y estabilizan las emulsiones (liquido disperso en un lquido). MATERIALES Y REACTIVOS 10 Tubos de ensayo Gradilla Varillas de vidrio Mechero parrilla Vasos de precipitados Pipetas Morteros de porcelana limpios y secos Esptula Placa de vidrio Embudos de vidrio Papel filtro

Solucin de NaOH al 20% Solucin de Sudn III Tinta china roja (*) ter, cloroformo o acetona Aceite de oliva (*) 20 gramos de Yeso (*) 50 g de sesos de animal desmenuzados (*) Cloroformo cido sulfrico concentrado cido actico Anhdrido actico

(*) PROPORCIONADO POR EL ESTUDIANTE OJO: TRAER GUANTES Y TAPABOCAS PROCEDIMIENTO SAPONIFICACIN Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la formacin de cidos grasos y glicerina. Tcnica:

a) Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al

20%.

. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.




. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado

TINCIN Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudn III. Tcnica: . Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite. . Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III. . Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja. . Agitar ambos tubos y dejar reposar . Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que aparecer teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el aceite no estar teido. SOLUBILIDAD Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sita sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el ter, cloroformo, acetona, benceno, etc. Tcnica: . Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo. . Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente orgnico, . Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.




. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad. AISLAMIENTO DE COLESTEROL DEL TEJIDO NERVIOSO

Tcnica: 3 gramos de cerebro desmenuzado se tritura cuidadosamente en un mortero con 6 g de yeso. La masa espesa obtenida se aplica con ayuda de una esptula sobre la capsula de porcelana en forma de capa fina y luego llevar a 40C en una mufla. La masa reseca se separa de la placa con un escarpelo en un mortero seco y se tritura convirtindola en polvo. El polvo se traslada a un tuvo de ensayo, se le vierten 6 ml de cloroformo, se agita cuidadosamente durante 5 ml y se filtra. El filtrado obtenido se utiliza para las reacciones coloreadas de reconocimiento del colesterol. REACCIONES COLOREADAS DEL COLESTEROL El principio del mtodo. Bajo la accin de los agentes deshidratantes el colesterol se transforma en un hidrocarburo con dobles enlaces conjugados: el colesterileno, que al interaccionar con el cido sulfrico y el anhdrido actico, da compuestos complejos intensamente coloreados. Reacciones semejantes son caractersticas tambin para otros esteroles. REACCIN CON EL ACIDO SULFRICO. Reaccin de Schiff: en un tuvo de ensayo seco se vierte 1 ml de extracto de colesterol en cloroformo y con cuidado, por la pared, se hace deslizar 1ml de cido sulfrico concentrado. En el contacto de los lquidos se observa la aparicin de un anillo de color rojo. Reaccin de Salkovsky: En un tubo de ensayo seco se vierte 1ml de extracto de colesterol en cloroformo y 1ml de cido sulfrico. Los lquidos se mezclan agitando el tubo de ensayo. Al separarse las capas, el extracto superior de cloroformo resulta coloreado de rojo y el inferior de un color rojo amarillento con fluorescencia verde. Si al extracto inferior del lquido se le aade 1ml de cido actico, aparece una coloracin roja rosada, mientras que la fluorescencia se mantiene. REACCIN CON ANHDRIDO ACTICO Y CIDO SULFRICO Reaccin de Liebermann-Burkhardt: En un tubo de ensayo se vierten 2 ml de extracto de colesterol en cloroformo, se aaden gota a gota 10 ml




de anhdrido actico, 2 gotas de cido sulfrico, y se mezcla todo cuidadosamente. El lquido adquiere primero una coloracin roja, luego una violeta, azul y, por ltimo, verde. PARA EL INFORME

Reportar los resultados de todos y cada uno de los ensayos obtenidos. Concluir en base a la experiencia adquirida en el laboratorio sobre el desarrollo de esta prctica si los objetivos se cumplieron. CUESTIONARIO

Qu son los jabones? Cmo se pueden obtener los jabones? Por qu en la saponificacin del aceite la glicerina aparece en la fase acuosa? Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas? Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica a qu se debe la diferencia entre ambos resultados. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo?, Y que ocurre con la de benceno y aceite? REFERENCIAS V. Chechetkin, V.I. Voronianski, G.G. Pokusay, Practicas de Bioqumica del ganado y aves de corral, Editorial Mir-Moscu, 1994, paginas 128-149. E. Vazquez-Contreras, Bioqumica y Biologoga Molecular en lnea. Instituto de Qumica-UNAM. http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/tipos%20lipidos.html.

guias lab. bioquimica profesor domingo

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