Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias Biolgicas

Departamento de Ciencias Biolgicas

GUIA DE TRABAJOS PRACTICOS

MICROBIOLOGIA GENERAL

BIOL 251

CARRERA: QUMICA Y FARMACIA

Valeska Herrera (coordinadora)

vale.herrera@uandresbello.edu

Rhonda Veas Rhondaveas@gmail.com

ANEXO DE PROGRAMA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLGICAS

1er Semestre 2015

1. Identificacin de la Asignatura

Curso : Microbiologa General

Cdigo : BIOL251

Tipo de Actividad : Prctico

Carrera : Qumica y Farmacia

NRC : 17060 (Seccin 1) 17064 (Seccin 2)

Horario : Seccin 1 y 2 Mircoles y Viernes, Mdulos 3 y 4 (10:20

12:00 h).

2. Profesores

Seccin 1 2: Mg. Valeska Herrera; vale.herrera@uandresbello.edu

Lic. Rhonda Veas; rhondaveas@gmail.com

3. Cronograma

Cronograma

Mircoles Mdulos 1-2

Viernes Mdulos 1-2 Seccin TEMA A TRATAR

18 de Marzo 1 TP0. Presentacin del Curso.

20 de Marzo 2 TP0. Presentacin del Curso.

25 de Marzo 27 de Marzo 1 TP1. Procedimientos Bsicos

08 de Abril 10 de Abril 2 TP1. Procedimientos Bsicos

15 de Abril 17 de Abril 1 TP2. Muestras Clnicas Gram Positivo y Flora Normal

22 de Abril 24 de Abril 2 TP2. Muestras Clnicas Gram Positivo y Flora Normal

06 de Mayo 08 de Mayo 1 TP3. Muestras Clnicas Gram Negativo y Antibiticos

13 de Mayo 15 de Mayo 2 TP3. Muestras Clnicas Gram Negativo y Antibiticos

27 de Mayo

Mircoles

03 de Junio Mircoles 1 TP4. Bacterias Anaerobias y Fastidiosas

29 de Mayo

Viernes

05 de Junio

Viernes 2 TP4. Bacterias Anaerobias y Fastidiosas

10 de Junio 1 TP5. Levaduras y Hongos Filamentosos

12 de Junio 2 TP5. Levaduras y Hongos Filamentosos

17 de Junio 1 TP6. Parasitologa

19 de Junio 2 TP6. Parasitologa.

01 de Julio 1-2 Control Recuperativo y revisin de controles e informes (Asistencia obligatoria)

Mircoles 08 de Julio

(mdulos 3 y 4) 1-2 EXAMEN

Fechas Pruebas y Revisiones:

Controles. Se realizarn controles de carcter acumulativo en todos los trabajos prcticos (TP 1-5). stos se realizarn en los primeros 10 minutos de cada trabajo prctico y se evaluarn tanto conocimientos tericos como prcticos descritos en la Gua del Trabajo Prctico del curso.

Control recuperativo : Mircoles 01 de Julio (todas las secciones) (Mdulos 3 y 4)

Contenidos (todos los tratados en el curso)

Examen : Mircoles 08 de Julio (todas las secciones) (Mdulos 3 y 4)

Contenidos (todos los tratados en el curso)

3. Requisitos de asistencia:

La asistencia a clases es de un 100%, por lo que cualquier inasistencia no justificada significa reprobacin directa.

Se considerar automticamente reprobado el alumno(a) que presente inasistencia a 4 sesiones de laboratorio, aun cuando stas hayan sido debidamente justificadas. Para mayor seguridad entregue siempre una copia del documento firmado y timbrado a su profesor.

Nota: La inasistencia a la primera sesin de un trabajo prctico imposibilita al alumno de realizar la actividad correspondiente al trabajo prctico completo

Los alumnos deben ser puntuales en el ingreso a las clases, a objeto de no interrumpir dichas actividades. En el caso de que lleguen atrasados ms de 30 minutos al trabajo prctico, no podr ingresar a la sala y quedar como ausente. Si el alumno llega atrasado cuando an el curso est rindiendo el control de entrada, ste tendr el tiempo que resta de los 10 minutos para responder la evaluacin. Si el alumno llega despus de terminado el control, ste ser evaluado con una nota 1.

4. Condiciones para aprobar el curso:

La nota de presentacin a examen se obtiene a partir de las siguientes ponderaciones: Promedio de controles un 70% y promedio Informes 30%.

La nota final del curso ser el resultado de la nota de presentacin a examen, ponderada en un 70%, ms la nota del examen ponderada en un 30%.

Para aprobar el curso la nota final debe ser igual o superior a 4,0.

No existir ningn tipo de interrogacin y/o trabajo para subir nota.

La nota final se expresa con un slo decimal. En este caso, cuando la centsima sea igual o mayor a 0,05 se aproximar a la dcima superior. Por su parte, si la centsima es igual o menor a 0,04 se mantiene el decimal. Esto de acuerdo al siguiente ejemplo:

Nota final : 3,95 se aproxima a 4,0

3,94 se mantiene en 3,9

Tanto las notas parciales de controles e informes como la nota final del curso es la obtenida segn los clculos realizados exclusivamente por la planilla de Intranet.

Los alumnos que sean sorprendidos en actividades irregulares (plagio, copiar, uso de torpedos, soplar, uso de celulares durante la evaluacin, etc.) en controles y/o informes sern evaluados con nota 1 en esa evaluacin. Particularmente se considerar como plagio la utilizacin de imgenes de otros grupos del curso, as como el uso de figuras desde Internet sin citar como bibliografa. La evaluacin mnima ser registrada tanto para el(los) grupo(s) que realice(n) el plagio y para el(los) grupo(s) que faciliten la informacin copiada.

Los alumnos que presenten bloqueos de tipo acadmico y/o financiero y no aparezcan en las listas oficiales tienen como plazo mximo para regularizar su situacin el da 27 de Marzo, de lo contrario no podrn hacer ingreso a la sala de clases.

5. Control Recuperativo y Justificaciones.

Este curso contempla la realizacin de un control recuperativo. Si el alumno falta justificadamente a un control, se le realizar un control recuperativo que incluye toda la materia del curso.

La justificacin de inasistencia se debe realizar en la Direccin de la Facultad de Qumica y Farmacia, adems de presentar una fotocopia validada del justificativo al profesor encargado del curso dentro de 7 das hbiles despus de presentado el justificativo. No se recibirn certificados mdicos.

6. Condiciones de eximicin. En cualquier caso debe regirse segn Reglamento del Alumno de Pregrado, Artculo 37.

Todo alumno cuya nota de presentacin sea igual o superior a 5,0 puede eximirse de rendir examen, siempre y cuando NO tenga notas inferiores a 4,0 en algn control, informe o seminario.

7. Eliminacin de nota:

El Departamento de Ciencias Biolgicas, ha decidido NO suscribir a la disposicin del inciso 4to del Artculo 36 del Reglamento del Alumno, que dice: los estudiantes podrn eliminar una nota parcial (solemne o control) y reemplazarla con la nota de su examen.

De manera que no se eliminar ningn tipo de nota, sea esta de solemnes o eventuales controles.

8. Modalidad de los controles e informes

El curso se evaluar mediante controles de verdadero y falso. Un profesor realizar y revisar el control correspondiente a la semana, para asegurar un criterio homogneo en cada revisin para todas las secciones. Por esto las consultas y dudas se le realizarn a este docente en la entrega de la evaluacin o en la revisin fijada a final de semestre.

Luego de cada trabajo prctico los alumnos debern entregar un informe de las actividades realizadas, los resultados obtenidos y la correspondiente discusin de estos, para esto los alumnos tendrn 2 das hbiles para realizar la entrega de ste en el Laboratorio de Microbiologa y Biotecnologa Oral (6to piso- R8, Echaurren 237). Los

informes consistirn en una forma pre-establecida que se debe completar con los datos solicitados segn corresponda en cada actividad prctica. Ud. deber guardar la colilla con los datos de la entrega. Se descontar 0,2 pts de la nota final por cada minuto de atraso en la entrega de los informes.

9. Horario de atencin de estudiantes

El horario de atencin a estudiantes deber ser agendada va correo electrnico con al menos 24h de anticipacin. El horario y lugar sern fijados por cada docente.

10. Comunicacin alumno-profesor

Toda informacin para las distintas secciones de cursos ser comunicada a travs del mdulo de avisos de Intranet. Ningn otro canal se considera oficial.

11. Otros.

El ingreso al laboratorio debe ser con delantal blanco y una credencial para solicitar el material de trabajo. Adems, cada alumno debe tener un candado para guardar sus pertenencias en los casilleros disponibles fuera de la sala, ya que est prohibido ingresar con bolsos, chaquetas y/o artculos que no sean utilizados durante el trabajo prctico.

Queda estrictamente prohibido el uso de celulares dentro de la sala para actividades irregulares (cualquiera a excepcin de cmara fotogrfica o cronmetro).

Queda estrictamente prohibido utilizar celulares y reproductores (grabadoras, mp3, mp4, etc.), durante los controles, as como en las revisiones de evaluaciones.

El alumno deber leer con anterioridad la Gua de introduccin al Laboratorio de Microbiologa BIO253 que ser subida a intranet para seguir las instrucciones necesarias para cada prctico.

12. Formas de citar las referencias en el informe:

En los informes la bibliografa debe ser escrita de forma correcta, segn su procedencia. Algunos ejemplo:

1. Artculos en revistas: Nombre Autores, Ao de publicacin, Nombre Revista, Volumen, Pginas.

Ej: Woese, C.R., 1987, Bacterial evolution, Microbiol. Rev., 51:221-271.

2. Libros: Nombre Autores, Nombre Libro, Ao de publicacin, Edicin, Editorial, Pginas.

Ej: Madigan M. T., Martinko J. M., Dunlap P. V. y Clark D. P., Brock. Biologa de los Microorganismos. 2009, 12 ed., Editorial Pearson Educacin, 125 135.

3. Electrnicas: Temas principal, tema especfico, fecha de cuando se utiliz, direccin electrnica.

Ej: Infecciones por Staphylococcus, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM), martes 4 de marzo 2014,

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/007261.htm

Las citas electrnicas deben provenir de sitios confiables como Universidades, Sociedades Cientficas, Sitios de revistas electrnicas, etc.

13. Bibliografa recomendada

1. Brock (1998) Biologa de los Microorganismos. Prentice Hall Iberia, Madrid.

2. Mims C. A., Playfair J. H. L., Roitt I. M., Wakelin D., Williams R. y Anderson R.M., Microbiologa Mdica, 1999, Editorial Harcourt-Brace

3. Brooks, Butel y Morse (1999). Microbiologa Mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg. Manual moderno 16 edicin.

4. Murray P., Rosenthal K y Pfaller M., Microbiologa Mdica, 2006, 6 ed., Editorial Elsevier.

5. Madigan M., Martinko J. y Parker J., 2004, Brock: Biologa de los Microorganismos, 10 ed., Editorial Pearson Educacin

6. Abbas A., Lichtman A. y Pillai H., Inmunologa celular y molecular, 2008, 6 ed. Editorial Elsevier Espaa

INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

1.1 BIOSEGURIDAD

Un laboratorio de microbiologa debe contar con la infraestructura necesaria para manipular un

microorganismo de acuerdo a su riesgo biolgico cumpliendo con los procedimientos del

nivel de bioseguridad correspondiente (niveles del 1 al 4).

Nivel de Bioseguridad 1

En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro mnimo para el personal del

laboratorio y para el ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y el trabajo se

realiza por lo regular en mesas estndar de laboratorio. En este nivel no se requiere equipo

especial ni tampoco un diseo especfico de las instalaciones. El personal de estos

laboratorios es generalmente supervisado por un cientfico con entrenamiento en

microbiologa.

Nivel de Bioseguridad 2

Es similar al nivel 1 y en l se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el

ambiente, pero difiere del nivel 1 en las siguientes caractersticas:

1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el manejo de agentes

patgenos

2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se est realizando algn trabajo

3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzocortantes contaminados

4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se

llevan a cabo en gabinetes de trabajo biolgico

Nivel de Bioseguridad 3

Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clnicos, de diagnstico, algunos

laboratorios universitarios y tambin de investigacin, en el cual se realiza trabajo con

agentes exticos o que pueden causar un dao serio y potencialmente mortal como

resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos (por ejemplo, el Carbunco).

El laboratorio cuenta con un diseo y con caractersticas especiales y todos los materiales son

manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin.

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Sin embargo, se reconoce que no todos los laboratorios llegan a cumplir con las normas

recomendadas para este nivel de bioseguridad. En estas circunstancias, es aceptable el

realizar las siguientes prcticas para poder seguir operando de una manera segura:

1. Ventilar el aire del laboratorio al exterior

2. La ventilacin del laboratorio se tiene que hacer con un flujo de aire direccional

controlado

3. El acceso al laboratorio est restringido

4. Seguir el estndar de prcticas microbiolgicas y equipamiento de seguridad

impuesto para el nivel de bioseguridad 2.

Nivel de Bioseguridad 4 Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biolgicos que representan un alto

riesgo individual de contagio y que adems son un riesgo para la vida. Los agentes nuevos que

tienen un cierto parecido con los antgenos de los agentes conocidos que operan en el nivel 4,

son confinados a este nivel hasta que se tiene suficiente informacin para confirmar que

pertenecen a este nivel o bien pasarlos al nivel adecuado.

El personal de estos laboratorios cuenta con entrenamiento especfico y extensivo en el

manejo de agentes infecciosos y cuentan con entrenamiento para trabajar en el ambiente

estril y controlado de los mismos.

Por lo regular los cientficos que trabajan aqu, utilizan trajes especiales que cubren la

totalidad de sus cuerpos y que adems tienen una leve sobrepresin para evitar que entren

partculas infecciosas al mismo si es que ste llega a desgarrarse.

Los laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los

agentes nocivos escapen al ambiente.

Nuestro trabajo en el laboratorio involucra microorganismos no patgenos, siendo nuestro nivel

de Bioseguridad de tipo 2. Es decir, se requiere de un espacio diseado especialmente para la

manipulacin del microorganismo y otros espacios para la preparacin del material estril y la

eliminacin o esterilizacin del material contaminado. Adems se deben seguir normas que

permitan una manipulacin libre de contaminacin para el microorganismo, el experimentador

y para el medio ambiente.

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1.2 MATERIALES PRESENTES EN UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGA Es esencial que posea: microscopios, refrigeradores, cmaras de cultivo, balanzas,

centrfugas y destiladores de agua. En muchas ocasiones las cmaras de cultivo y

refrigeradores se ubican en una sala especial, o bien algunos de estos equipos son de uso

comn para varios laboratorios.

MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO:

Sistema ptico o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del

objetivo.

o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de

sta.

o CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la

preparacin. o DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

o FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecnico o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el

brazo.

o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.

o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular o

binocular.

o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,

cambiar los objetivos.

o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y

micromtrico que consigue el enfoque correcto.

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Figura N1: Microscopio de luz.

1.2 OTROS MATERIALES UTILIZADOS SON:

a) De vidrio: placas de Petri, matraces Erlenmeyer, tubos de ensayo, pipetas Pasteur,

embudos, matraces aforados, pipetas graduadas, buretas, probetas, cristalizadores,

portaobjetos, cubreobjetos, desecadores, frascos (diferentes capacidades, transparentes o color

mbar), vasos de precipitado, frascos cuenta gotas, etc.

b) Otros: algodn, papel filtro, papel indicador de pH, papel de envolver, pinzas, bistures, asas

con hilos de platino, colorantes, reactivos diversos, etc.

Para realizar siembras y/o repiques, se utilizan asas con hilos de platino o de tungsteno. La

utilizacin de estos metales se debe a que son resistentes a la oxidacin y porque una vez

esterilizados a la llama, se enfran rpidamente sin riesgo de provocar la muerte de los

microorganismos con que se est trabajando. Adems, estos hilos son muy maleables

pudiendo ser transformados en un asa o en esptula, permitiendo repicar o resembrar desde un

medio lquido o slido. 6

Asa nquel-cromo

Matraz Erlenmeyer

Placa de Petri

Pipeta Pasteur

Placa de Petri con medio slido

INCUBADORA (Rango temperatura 5-100C, microprocesador regula la T +/- 0.5C.)

Control de la contaminacin en el laboratorio:

Dada la relevancia del diagnstico etiolgico que otorga el laboratorio, es de la mayor

importancia evitar la contaminacin de las muestras, ya sea desde el operador como desde

otras muestras procesadas sucesivamente (contaminacin cruzada). Para ello, es necesario

que el operador trabaje con tcnica asptica y que el material utilizado sea estril

1. Esterilizacin: Proceso que lleva a la eliminacin absoluta de microorganismos: bacterias (formas

vegetativas y esporuladas), virus y hongos en las superficies inanimadas.

Mtodos de esterilizacin:

a) Fsicos:

Calor seco: - Incineracin ( mechero)

- Horno Pasteur

Calor hmedo: - Ebullicin

- Autoclave

- Pasteurizacin

Luz ultravioleta

Radiaciones ionizantes

Ondas snicas y ultrasnicas

Filtracin

b) Qumicos:

Oxido de etileno

2. Tcnica asptica:

En el laboratorio de microbiologa es esencial trabajar con tcnicas estriles que eviten la

contaminacin de las muestras clnicas.

Dado que los medios de cultivo estn diseados para favorecer el crecimiento microbiano,

las bacterias y los hongos del ambiente (provenientes de los materiales, manos y faringe del

operador, etc.) depositados sobre el medio crecern y contaminarn los cultivos. Esto debe

ser evitado para tener la certeza que los microorganismos desarrollados correspondan a los

de la muestra.

Por lo tanto los medios de cultivo se esterilizan antes de su uso y se manipulan con tcnica

asptic

AUTOCLAVE

En trminos de Fsica experimental se define el punto de ebullicin de un lquido como la

temperatura a la cual se iguala el valor de la presin de vapor del fluido con el que

corresponde a la presin atmosfrica. El autoclave est formado por una vasija cilndrica de

hierro forjado, de paredes gruesas y con una tapa resistente que se cierra hermticamente

mediante la accin o giro de un tornillo conectado a una abrazadera. En un comienzo, antes

de que se alcance la temperatura de 100C, se elimina la presin del vapor de agua

(Flowing steam), de modo que suba la temperatura junto con la presin, sin alcanzar el

punto de ebullicin del agua. Este procedimiento aplicado sobre material resistente a la

temperatura elimina las bacterias, virus y esporas, es decir, queda estril.

1.4 Precauciones en el laboratorio y durante el trabajo prctico - Para evitar posibles contaminaciones, es esencial la limpieza y el orden en el laboratorio.

- Antes de comenzar a trabajar se debe limpiar el mesn con un algodn embebido en

alcohol etlico 70%.

- Se recomienda trabajar en forma cmoda en un mesn material sinttico duro y no

inflamable. Este mesn debe estar ubicado en un sitio con menor corriente de aire (las

ventanas deben estar cerradas), alejado de las zonas de circulacin de otras personas y debe

contar con un mechero.

- Los tubos de ensayo o matraces que contengan medios de cultivos o cultivos de

microorganismos, nunca deben abrirse en posicin vertical, sino lo ms horizontalmente

posible (inclinados) y para quitar el tapn de algodn se mantendrn inclinados con una mano

y se abrirn con la otra, la que sostendr a su vez el asa (con el dedo meique, se retira el

tapn de algodn que obtura el tubo). Una vez abierto de la forma sealada, se flamea por

algunos segundos el orificio, repitiendo dicha operacin una vez realizada la siembra (el tapn

nunca debe dejarse sobre el mesn).

- Antes de utilizar las asas con hilos de platino, que sirven para las siembras y/o repiques,

stas deben flamearse al rojo en posicin vertical bajo la accin de la llama. Antes de

efectuar la siembra y/o repique debe esperarse algunos segundos a que se enfren,

pudiendo enfriarse tambin en el borde de la placa de Petri que contiene el medio de

cultivo. Inmediatamente despus de haberlas utilizado, deben flamearse nuevamente,

evitando diseminar el microorganismo en el medio ambiente. 9

Partes de la llama

1.- Cono fro: no llega oxgeno

2.- Cono de reduccin: poco oxgeno

3.- Cono de oxidacin: abundancia de oxgeno

4.- Zona de fusin: alcanza los 1500 C (Zona

que esteriliza por calor)

El asa se flamea en la zona 4, hasta lograr la

Incandescencia.

- Las placas de Petri deben abrirse mantenindolas en lo posible en posicin vertical.

- El material de vidrio destinado a esterilizacin debe prepararse previamente (placas de

Petri envueltas en papel, etc.), estar bien lavado y seco. El lavado se realiza con

detergentes y/o soluciones especiales, luego debe enjuagarse con H2O corriente y

posteriormente con H2O destilada.

- Las observaciones microscpicas, tinciones y las diferentes pruebas bioqumicas deben

realizarse en el momento oportuno. 1.5 NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO a) Dejar la ropa innecesaria en las perchas del laboratorio y usar delantal (blanco).

b) Nunca deben llevarse a la boca lpices, etiquetas o cualquier otro material. c) Los mesones del laboratorio deben limpiarse antes y al final de cada laboratorio con un

desinfectante apropiado.

d) Las asas con los hilos de platino deben esterilizarse a la llama del mechero en toda su

extensin antes y despus de su uso. El salpicado se evita sosteniendo el hilo alrededor

de la llama antes de flamearlo.

e) No se distraiga conversando mientras trabaja, as evitar quemarse con el mechero o

sufrir otros accidentes. 10

f) Si se derrama un cultivo en el mesn o piso, cubrir el rea con un desinfectante y

notificar al Instructor.

g) Nunca deben sustraerse cultivos de microorganismos del laboratorio. h) Los medios inoculados deben colocarse en las cmaras de cultivo con su identificacin

respectiva, ej.: nombre, naturaleza del espcimen, sustrato del cual se asla, fecha,

identificacin del manipulador.

i) Cuando no se utilizan los mecheros, stos deben guardarse y se debe estar seguro que

se les ha apagado al final de cada laboratorio.

j) Oculares, objetivos, como tambin otras partes del microscopio, debern limpiarse

antes despus de su uso. Los lentes deben limpiarse con papel especial para lentes o un

pao de batista.

k) Todos los reactivos y equipos deben dejarse en su lugar de origen al trmino de cada

laboratorio.

l) Todos los tubos, placas de Petri, pipetas, portaobjetos, etc., deben dejarse en los

recipientes adecuados una vez terminado el laboratorio.

m) Todos los materiales de desecho como trozos de papel, algodn, etc., deben colocarse

en los basureros adecuados y no en los mesones o suelo.

n) Accidentes personales, tales como derrame de reactivos, cortes y quemaduras, deben

comunicarse inmediatamente al Instructor.

o) Todos los estudiantes deberan lavarse las manos con jabn o con un desinfectante si es necesario, antes de dejar el laboratorio.

EVITE ACCIDENTES TRABAJANDO ORDENADAMENTE Y CON

PRECAUCION. Si en forma accidental entra en contacto con este material, avise

inmediatamente a su Instructor indicndole el origen de la contaminacin

TRABAJO PRCTICO N1: TCNICAS BSICAS DE MICROBIOLOGA

OBJETIVOS GENERALES

1. Identificar material bsico empleado durante la prctica bacteriolgica. 2. Adquirir la destreza para manipular materiales y cultivos bacterianos. 3. Adquirir la destreza y el cuidado para trabajar en esterilidad. 4. Conocer los diferentes medios de cultivo. 5. Conocer la utilidad de los medios de cultivo ms usados. 6. Conocer el concepto de siembra y aislamiento de bacterias. 7. Practicar diferentes tipos de siembra. 8. Practicar aislamiento bacteriano. 9. Conocer distintos tipos de tinciones y la utilidad de stas.

El primer trabajo prctico tiene como objetivo principal que el alumno adquiera los

conocimientos bsicos en lo que respecta a la manipulacin de cultivos bacterianos

poniendo nfasis en los conceptos de esterilidad, siembra en medios lquidos y slidos

(diferenciales, selectivos y enriquecidos) y manejo de microorganismos aerbicos.

El Laboratorio de Microbiologa cumple la misin de identificar el agente

etiolgico de una determinada patologa. Para lograr esto, es fundamental la obtencin de un

CULTIVO PURO, ya que por lo general la muestra que contiene al patgeno ha evaluar

viene contaminada con bacterias de la flora normal. Por otra parte, luego de la identificacin del

microorganismo, el Laboratorio de Microbiologa puede orientar respecto al tratamiento

antibitico a seguir, si este corresponde, ya que se puede evaluar la susceptibilidad del

patgeno a diferentes agentes antimicrobianos.

Como primera actividad prctica el alumno(a) debe concentrarse en realizar los

procedimientos microbiolgicos bsicos de manera adecuada, manteniendo siempre las

condiciones de esterilidad necesarias para un buen anlisis. Por lo tanto, como primeras

actividades el alumno deber familiarizarse con el material ESTRIL con el que trabajar

(Tabla N1) y los procedimiento de siembra y aislamiento de microorganismos desde

diferentes muestras.

. La siembra implica proporcionar a los microorganismos un ambiente que contenga todos los

nutrientes necesarios para su desarrollo y multiplicacin. En el laboratorio este medio

ambiente lo constituyen los medios de cultivo, cuyas caractersticas varan de acuerdo a los

requerimientos de los microorganismos o a los procedimientos experimentales que sea

necesario realizar a lo largo de su proceso de identificacin.

Debido a que el cuerpo humano es un lugar donde cohabitan un sin nmero de

microorganismos distintos, generalmente las muestras contienen una flora mixta, la que se

manifiesta por el desarrollo de distintas especies bacterianas. Por este motivo es de suma

importancia obtener una cepa bacteriana aislada para poder estudiar sus caractersticas

morfolgicas y bioqumicas y as lograr una identificacin correcta (Figura N2). Por lo

tanto, en una primera instancia, para obtener un cultivo puro se debe lograr primero el

AISLAMIENTO de UNA COLONIA en medio slido, puesto que por definicin una

colonia proviene de una sola bacteria y por ende correspondera a un cultivo puro. En el

caso de los medios lquidos, una vez obtenido el crecimiento bacteriano (enturbiamiento),

se debe realizar el aislamiento de UNA gota a un medio slido para obtener colonias

aisladas y puras

Colonia A

Colonias A y B se encuentran mezcladas Colonia B

Figura N 2: Aislamiento por estras o en cuadrantes en placa de agar MacConkey.

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