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• GONIGYT COMISIÓN NA(IONAt DE INVES1I(ACI6N

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GOBIERNO DECHILE

COMISION NACIONAL DE INVESTIGACION CIENCIA Y TECNOLOGIA

VERSION OFICIAL

FECHA: 04/03/2010

PROYECTO REGULAR N°1070368

INVESTIGADOR RESPONSABLE: JAIME JULIO EYZAGUIRRE PHILIPPI

FONDO NACIONAL DE DESARROLLO CIENTIFICO Y TECNOLOGIC() (FONDECYT) Bernarda Morín 551. Proidcncia - casilla 297- y . Santiago 21

Telefono: 435 43 50 FAX 365 4435

Ernail: infiwmes.fondecyt(a conicyt.cI

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N° PROYECTO: 1070368

INVESTIGADOR(A) RESPONSABLE: JAIME JULIO EYZAGUIRRE PHILIPPI

RUT: 3.316.924-8

TÍTULO PROYECTO: ANALISIS DEL SECRETOMA DEL HONGO PENICILLIUM PURPUROGENUM: FUNCION Y

PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS QUE DEGRADAN EL XILANO . ¿PARA QUE PRODUCE

NUMEROSAS ISOENZIMAS?.

DISCIPLINA PRINCIPAL: BIOQUIMICA

CÓDIGO DE TRANSACCIÓN: 354AA6DDBA76 1 ADE9AD2D7327D II CEC 1

FECHA DE RECEPCIÓN: 04/03/2010

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INFORME FINAL

PROYECTO FONDECYT REGULAR

N° PROVECTO: 1070368 DURACIÓN: 3 años AÑO ETAPA: 2009 TÍTULO PROYECTO: ANALISIS DEL SECRETOMA DEL HONGO PENICILLIUM PURPUROGENUM: FUNCION Y

PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS QUE DEGRADAN El. XlI.AN() ¿PARA Q111` PROIN ('E NUMEROSAS ISOENZIMAS?.

DISCIPLINA PRINCIPAL: BIOQUIMICA GRUPO DE ESTUDIO: BIOLOGIA 3 INVESTIGADOR(A) RESPONSABLE: JAIME JULIO EYZAGUIRRE PHILIPPI DIRECCIÓN: República 217 COMUNA : Santiago CIUDAD: SANTIAGO REGIÓN: METROPOLITANA FONO: 6618070 EMAIL : jeyzaguirreunah.cI

INFORME

OBJETIVOS

Cumplimiento de los Objetivos planteados en el Proyecto. Recuerde que los ohetivos del proyecto no se refieren a listar actividades desarrolladas sino a los ob j etivos desarrollados

No OBJETIVOS CUMPLIMIENTO FUNDAMENTO 1 Electrofuresis hidiniensional del Penicillium TOTAL

purpurogenum en distintas fuentes de carbono 2 Identificación de las proteínas en los geles TOTAL

hidimensionales 3 Purificación de feruloil esterasas TOTAL 4 Caracterización de furuloil estcrasas TOTAL 5 Secucnciación de la acetil xilano esterasa III PARCIAL Se ha logrado secuenciar. uitili,ando la t&nica 3

(AXE III) RACE. sobre 700 bases del eDNA y actualmente se trabaja en seeueneiación tanto del resto del cDNA como del DNA gcnómico

6 Secuenciación de la arahinofuranosidasa 3 TOTAL (AB F3)

7 Propiedades de las arabinofuranosidasas y TOTAL, posibles aplicaciones hiotecnológicas

Otro(s) aspecto(s) que Ud. considere importante(s) en la evaluación del cumplimiento de objetivos planteados en la propuesta original o en las modificaciones autorizadas por los Consejos.

RESULTADOS OBTENIDOS: Para cada uno de los objetivos específicos, describa o resuma los resultados. Relacione las

publicaciones y /o manuscritos enviados a publicación con los objetivos específicos. En la sección Anexos incluya información adicional que considere pertinente para efectos de la evaluación.

La extensión máxima de esta sección es de 5 páginas (letra tamaño 10, Anal o Verdana).

El proyecto se fundamenta en la siguiente hipótesis: Las xilanasas actúan en forma sinérgica y están sometidas a finos mecanismos regulatorios. La expresión de las distintas enzimas xilanoliticas está fuertemente influenciada por la fuente de carbono en que se desarrolla el hongo. El análisis del secretoma del hongo permitirá diferenciar la expresión de las distintas enzimas e isoenzimas del sistema xilanolitico. Esto ayudará a comprender como se adapta el hongo a variadas condiciones ambientales y como regula la producción de las enzimas. Nuestro laboratorio usa como modelo el hongo Penicillium purpurogenum.

Se formularon así dos objetivos generales: a) Análisis del secretoma del Penicillium purpurogenum. b) Caracterización de las esterasas y arabinofuranosidasa producidas por el hongo

Objetivos específicos abordados en el Proyecto:

1) Electroforesis bidimensional del secretoma del hongo crecido en distintas fuentes de carbono

Se realizaron análisis por electroforesis bidimensional de sobrenadantes de cultivo utilizando las siguientes fuentes de carbono: a) xilano acetilado: el hongo secreta alta actividad xilanásica y acetil esterásica. b) Coseta de remolacha: rica en pectina; el hongo secreta fuerte actividad feruloil esterásica y arabinofuranosidásica. c) Pectina: sirve como comparación con la secreción observada en coseta. d) Glucosa: es un potente represor catabólico y la secreción de proteínas es escasa. Las Figuras 1 a 4 presentan los resultados obtenidos con estas fuentes. Con excepción del cultivo en glucosa, que muestra una sola mancha, el hongo crecido en las otras fuentes secreta un gran número de proteínas diversas. Destaca el patrón de expresión que es muy diferente según la fuente, indicando la existencia de procesos regulatorios que condicionan la expresión de proteínas según la fuente utilizada.

2) Identificación de proteínas en los geles bidimensionales mediante espectrometría de masas

Las manchas numeradas de los geles de las Figuras 1 a 4 fueron cortadas, y mediante una colaboración con el Dr. Eduardo Callegari (Universidad de Dakota del Sur, Estados Unidos) fueron sometidas a análisis por espectrometria de masas en tandem acoplado a HPLC (nano LC-MS/MS). Los datos obtenidos se sometieron a una búsqueda en las base de datos utilizando el programa Mascot con el fin de determinar secuencias de proteínas similares a los péptidos obtenidos por masas y proponer así una posible función. Las Tablas 1 a 4 muestran los resultados obtenidos. Se observa que un porcentaje importante de las proteínas no tiene homólogos en las bases de datos (proteínas hipotéticas o proteínas no estudiadas bioquímicamente a las que se le asigna una posible función). En el caso del xilano acetilado, (Tabla 1) un porcentaje importante de las enzimas identificadas actúan sobre el xilano (beta xilosidasas, arabinofuranosidasas, glucuronidasas), mientras que hay menor contenido de enzimas celuloliticas (beta glucosidasa, celobiohidrolasa). Por su parte, en el cultivo con coseta (Tabla 2), que tiene un alto contenido en pectinas (50 %) y celulosa (20 %) las proteínas identificadas corresponden, en su mayor parte, a enzimas que actúan sobre estos sustratos. El cultivo en pectina (Tabla 3) muestra enzimas características de la degradación de este polisacárido, como también proteasas, cuya función no está clara. El gel de la fuente con glucosa (Tabla 4) muestra sólo una proteína lo que es concordante con la fuerte represión catabólica que ejerce este metabolito. Esta proteína podría corresponder a una oxidasa. Actualmente se trabaja en la identificación de su posible actividad enzimática.

3) Purificación de feruloil esterasas secretadas por P. purpurogenum

En informes anteriores se señaló que mediante zimogramas se detecta la presencia de varias feruloil esterasas en sobrenadantes de cultivo. Así, en un medio con coseta de remolacha como fuente de carbono se aprecian 5 actividades enzimáticas. Se desarrolló una estrategia (informada anteriormente) utilizando distintas técnicas cromatográficas que ha permitido la separación de hasta 5 esterasas a partir de sobrenadantes de cultivos crecidos en coseta de remolacha como fuente de carbono y se ha logrado la purificación total, en pequeñas cantidades, de todas ellas (denominadas FAE 1 a 5). La Figura 5 muestra un gel-SDS indicando la pureza de estas enzimas.

4) Caracterización de las feruloil esterasas

Todas ellas muestran actividad tanto acetil esterasica como feruloil esterásica. En el informe anual 2009 se incluyeron detalles de las propiedades físicas de estas enzimas: peso molecular, punto isoeléctrico, pH óptimo y temperatura óptima, como también la presencia o no de un módulo de unión a carbohidratos (CBM).

Se analizó la especificidad de sustrato de las FAEs utilizando los metí¡ derivados de varios ácidos hidroxicinámicos (ferúlico, p-cumárico, cafeico y sinapínico), que han sido utilizados para la clasificación de las feruloil esterasas por Crepin y cols, (2004). Se analizó la cinética de estas enzimas con los sustratos mencionados. Un aporte de sustratos por parte del Dr. Craig Faulds permitió analizar con mucho más detalle la especificidad de sustrato de estas enzimas. De estos resultados se deduce que tres enzimas son FAEs (1, 2 y 3), una enzima es p-cumaroil esterasa (FAE4) y una es acetil esterasa (FAE5). FAE 1 es del Tipo A de la familia de las feruloil esterasas, FAE 2 y 3 son del tipo B. Detalles de estos resultados se incluyeron en el informe de avance de 2009.

5) Secuenciación de la acetil xilano esterasa III (AXE III)

Mediante una banda obtenida por electroforesis unidimensional de la enzima purificada se pudo realizar (Dr. Callegari) un análisis de ella por espectrometria de masas. Se obtuvo así un péptido con la secuencia: KFTGAIMQSNLGGLAYGTTYSKY. A partir de ella se diseñó un partidor degenerado. Con la técnica 3'RACE se obtuvo un producto de PCR que fue enviado a secuenciar a Macrogen Inc (Seoul, Corea). Se obtuvo una secuencia de 721 bases. Al analizar la secuencia proteica deducida mediante BLAST, se observa una identidad de 80 % con una proteína no identificada de Penicillium ct'rysogenum (cuyo genoma está secuenciado) y, con un "score" algo inferior, con posibles fosfolipasas y proteínas hipotéticas de varios hongos (Figura 6). Estos resultados, aunque incompletos, indican que la AXE III es una proteína bastante novedosa. Se continúa el trabajo de secuenciación.

6) Secuenciación de la arabionofuranosidasa 3 (ABF 3) y su promotor

En los informes anteriores (2008 y 2009) se presentó la estrategia usada en la secuenciación del gen y cDNA como la obtención de un trozo del promotor de 482 pb río arriba del codón de inicio. Allí se indicó también la presencia de posibles sitios de unión al promotor de varios factores de transcripción. Al realizar una re-secuenciación de la región 3' del gen se detectó un error en la secuencia anterior, donde en vez de un codón de término corresponde un codón para triptófano, estando el codón de término ubicado más abajo. La secuencia corregida se incluye en la Figura 7.

7) Propiedades de la ABF 3 y posibles aplicaciones biotecnológicas

En un manuscrito enviado a publicación (ver Anexo) se detallan y analizan las propiedades de la enzima. Se trata de una enzima muy novedosa. Es una enzima bifuncional (a-L- arabinofuranosidasa-I-D-xilosidasa), y posee una similitud de secuencia con enzimas de la familia 43 de las glicosil hidrolasas.

En cuanto a sus posibles aplicaciones biotecnológicas, se estudió su utilización en la liberación de terpenos aromáticos a partir de glicósidos en el proceso de vinificación. Los resultados obtenidos se incluyeron en el Informe de Avance 2009. Los datos demuestran en forma indirecta la liberación de terpenos, sugiriendo así que esta enzima podría utilizarse con el propósito indicado.

Referencias

Crepin, V.F., Faulds C.B., Connerton, lE. 2004. Functional classification of the microbial feruloyl esterases. Applied Microbiology and Biotechnology 63: 647-652.

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Figura 1. Gel bidimensional de sobrenadante de cultivo de P. purpu/ogenum crecido en coseta de remolacha como fuente de carbono. Las proteínas de las manchas numeradas fueron analizadas e identiflcadas por espectrometría de masas.

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Figura 2. Gel bidimensional de sobrenadante de cultivo de P. purpurogenurn crecido en xilano acetilado corno fuente de carbono. Las proteínas de las manchas numeradas fueron analizadas e identificadas por espectrometría de masas.

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Figura 3. Gel bidimensional de sobrenadante de cultivo de P. purpurogenurn crecido en pectina corno fuente de carbono. Las proteínas de las manchas numeradas fueron analizadas e identificadas por espectrometria de masas.

Figura 4. Gel bidimensional de sobrenadante de cultivo de P. purpurogenurn crecido en glucosa como fuente de carbono. Las proteínas de las manchas numeradas fueron analizadas e identificadas por espectrometría de masas.

170 KDa » 130 KDa » 95KDa » 72KDa »

56KDa »

43KDa »

34KDa »

26KDa » « 25 9 KDa

« 199 « 713 « 67.9

« 56.8 KD

MCr F3 F2 Fi F4 F5

17KDa »

Figura 5. Gel SDS mostrando las feruloil esterasas purificadas a partir de un cultivo de P. purpurogL'num en coseta de remolacha. Pista M: standards de peso molecular; pista Cr: sobrenadante de cultivo en coseta. Pistas F3 a F5: feruloil esterasas purificadas.

>axe3 GAGCGGTGAGAAAGGAAGAGTATGTAGTATGGTGCTATGGAGTAGTTCAACJGAATAATCC CTCACTTGGCAGCGGGGAAAAGTTGTCGGATATCCACCAAGCATCCGGAATATGTACTGC ATTTGGTGGACTCAGACTGGGGCTGAAAATGGGTCATGTCTACGTGTACJATACTCTCCGTA ATCTGATTCACAGCCAACCCAGGCTCGGCCATCTCCGCATCGCGAACJCJAACTCCAGCGGT AACCACACCAGGTGTCCCTTGATACGATCCAATTTCTCACGCACI"FCCGCAACCGGCAGAT AAGGATCAAACAGATGACCCTGCTTGTGCGACCCACGCGGACGGAAATTATCATAATCCT CAAAGGTCTTAATATTGTCGTCTGGGTCAGCGCGGAACAACATCCGATACGTCTCGGTATT AACGCTAGCCTGTCCAGTCCAGGTGTTCCAGACCGCA1CGCTGAGCGGATCGGTCACGAA TTCGTTGTGAGTGTCCTCTAGGATCTCGTTGAGACAGACGTCCGGAGGTCGAGCGTTCGGG TGGCCTGTGGCGTCGTAGTTCTGTGCAGGTAAGAGGCCTATAGTGAGTCATAGTAATTCAG ATTCGCGAATCACTAATGGATTGCGCGGCCGCCTGCCGTCGACTATATGAGATAGCTTCGC ACGCGTGGTATTCATAI'CTTGAGTGATCTATAGTGTACATAACTACATGACG TCA

Sequences pro0uclng sujiuticant dJ.lqmTents: Cir rO heades tC scrt CÜluliursS]

AccesIon D.scVIpOfl-! ¡ 1 ce k viitia 1 • P7fl3fl1057l [Prrc3Iirrn chr '- 5lur ,Visconin 54-12551 'embiCA 44 44% 1e- 813%

• - rIhohprre PIdA. ut4te [As erIIr cIr4Pus NPPL 1] rbIEAW 737 43% 1, K, 7979

• n_ i% phcphcIipre PIdA, put4tive [Nerrrtr 7 a fIscOerI NAIL 181] >bIEf - 237 43% 2e-,0 76%

EEP403.l phosphohpose PIdA, prtative [Aspergililis fumigatus 81163] 0 236 43% 2e-60 76%

OP 740951.1 phuspholipase PIdA [AsperqlIIu5 furnigatus Af293] sg6IEAL86913.1I C 236 43% e-60 76%

•:F' oo:sssi,1 phosphohpse PIdA, putative [AspergOlus flavur NRPL33S7] 'çbIEED 7 -].i 233 44% 3e-59 73%

oP l3015174-?5 Oypothetical proteis [Aspergillus orv2ae 518401 'dhjISAE .55497 11 ul 233 44% ie-59 73%

o p ü01 71554-1 1 hppothetic& protn ATEG_06366 [Aspergillus terreus N12624] ' gOl zo 43% 2e-58 74%

.:8F71 TPA: Phospholipase O [SourceLInlProt /7rEM8LEACC:Q874F2] [Asps 7.79 227 44% 1e57 70%

BA . 71% 1 ohosehohoase O [Eruerurella rodulans] 22' 44% 1-P7 70%

F. 001991310 1 hypotheticul protein 0e07g82240 [Aspergillur ner) 90mb1C063931 :i 221 43% 7e-56 72%

OP 0916.1 hppothetical proteo 4N6712.2 [Aspergillus rodulans FGSC 04] >gbIE. 19 219 43% 3e-55 69%

OP 00:4055:;t 1 phospholipase PIdA, put5ti9e [Talaromsces utipitatos ATCC 105851) r 203 44% 2e-50 67%

•:P 5107149794 1 phosphohpase PIdA. putatise [Penicilliurri marneffer ATCC 18224] >gI : 197 44% le-48 63%

•:P s6' hypothetirul protein MGG_05804 [Magnupohe g,-,sea 78-151 rghIEC 1 ,1c. 180 44% 2e-45 60% F. 1 ,1017.74169 1 hrpothetic& protelrr CHG3_04955 ]Chaetorrnuro olobosur, CAS 1487 109 180 44% 2e-43 60%

s p :1017964141 hypothe5cal protein SII0G_06845 [Phaeosphaeria nodorum SN15] ri 172 44% 6e-41 56%

08914157 1 predicted protein [Nectria haerriatococca rnpV] 77-13-4] 15- 168 44% 7e-40 58% sp 019r134ri4 1 unnarned protein producy [Podospora anserina] rembJCAP61179 11 1 InI 168 44% 7e-48 57%

s ç0159i:1453 1 hypothetic& protein SS1G 08193 [Iclerotinia sclerotiorum 19801 'oI inc 166 44% 38-39 56%

:8153154 1 unnansed protein product [Sordaria n,acrospora] 119 164 44% 1e38 54% spi:ll:l1s%f1s1 hnpothe.tical protein AC1G 83497 ]Aotryotinia fuchelrana 805101 '3 1-4 164 44% 10-38 55%

s p 102149.1 hypothetical protein F001973 1 ]Gibberella zeae Ph-11 inI 164 44% le-38 56%

:p!:317;E9::i h,pnth,tic& protein NCIJ10480 [Nerrospora crasna 5P740] 'qbIEDC 159 44% 4e-37 53% 2hosphcy 2ase Di [Prl750ph763 trltIci-0penfi5 Pr-II -BFP] 93hE[L94 157 44% 17-30 5. -

Figura 6. Secuencia parcial del cDNA de la AXE 111 de P. purpurogenufn y resultado del análisis mediante BLAST de la proteína deducida.

ATGCGGGCAT:TGTTCTATTGTTCCGGTC:CTGCTATGCTTATCCGCGTTGC:AGGCGGCAGCAAGCTGGCTAGTGCT M 5 A E V CE 1 E 5 CE E CLSAT O CC CE K 1 A CE A 26

GATAAccc:ATCATCCAGACCATATACACAGCAGATCCAGCACCGGTCGTGCATGATGGGCGCCTTTACTGTTTACC II NP T 1 Ql 1 Y T A CEPA PV VP CE CES CE Y C 52

GATCACGATTTGCCAAACTCAACATTCTTCPJTTATGACGGACTGGCGGCTTTTTTCCACTACCGATATGGTCAATTCCECE CC 14 DE CE N sos': N CE T CE CE PL CE CE TTCE CE VN 4 78

TTGGATCAOGGCACAGTCATGAGCCTAAAGACTTTCAGCTGGGCTAGTGGTG AAGTGCCTGGGCAGGCCAAGTCATC L CE H CC TV CE CE CE E CE E CE 51 A CE U A CE A 51 A CE Q VI 104

TCTCGCAATGGCAAATTCTACTACTACGCACCGATGACCCATGGCGCAACTGGGGCTATGGCTATCGGTGTTGGTATA CE CE CE E E Y Y Y A A CE T 14 CE A T CE A CE A T CE y CC 1 130

AGCAATACAATTACCGGCCCATATGTGGATGCG TTGGTCACCCTTTCCTTGAAAATPACGAGTTTGACCCAACTGTC CE N TU CE Y VDA CE CE 1-1 P CE E N N E F CE CE CE y 156

TTTATTCACCATC,ACC,GCCAGC,CATACTTATATTCECEGCETAA000AGACCTATTGTATGTCAGGCTGAACGAGGATATCE 1 CE CE CE CE A Y CE CE 51 CE N CE CE 1, 51 Y V 5 1, 14 E :: y 182

ATCTCTTAAAGGGCACTCCTGCAAAGATCAACCTTACGGTTGCTGGTTTTGGGGCACGTGAAGGCAATGAAAATCGC

CE Y CE CE T CE A 1< 1 Ni, TV A CE PCE AP F. CE 14 ENTE 208

ACAACTTCCETTTGAGGAGGGCCCATGGGTCTATAAGCGAAATGGCATCTACETACATCGI'CCE'ACGC'I'GCAUAC CECECCE CEO

CE' CE CE E E, CE CE 51 y y K 14 CE CE 1 Y Y 1 V Y A A U C C 234

CECTGAGGATATTCGCTACACAATGGGTACGGGTCCCCTCGGACCTTGGAGTTATCAGGGCGTTCTCATGCCGACC AA CE CE CE E Y '1' MG TOP!. GPW CE y Q GV L CElA 'CE 260

CEGCTCGAGTTTACAAATCATCCCGGGGTCATTGATTATAAGGGCCATTCATATTTCTTTTACCATAACGGCGCT CETA os sr T N 1 DCIV CE Y KG Ti C Y F 1' Y lINCE CE 286

CcAGGAGGTGGTGGCTTCGAACGATCTGTAGOCGTTGAGCCCTTTACCTACAACCCAGATGGTACGATTCCCCAGATCE CE CE CE CC CE ElES CE V AV E CE i'o Y CE CEllO 'CE E CE O CE 312

AATATGACCEAAGAAGGGCGCTCCACGAATTGACACCTTGGACCCATACCAAC3CCAGGAGGCAGAGTTGATCG ETTGG NM T 'CE KG A PR ICE T LE! CE' Y Q CE Ç EAEL lA W 338

GAGGTTGCCGTTTCAACAGAGGTCTCECAGTGAAGGCGGTCTTAATGTCTGCAACATCAATAATGGCGATTAOATCAAA E V G y s T E V C 9 E G C L N y c N 1 N N G D Y 1 K 364

CETCAACEGGCG:CA,ACTTTGGGGGTC;C;GAACEG:000CAAGCECTGTTGAATTTCGAGTCGCCTCGGCTGCCEAAGCG00000

V x c y N F G G G E G A E 9 V E F R V A S A A S G G 390

ACAATCGAGATGCAOATCGGCAGTA000ACE00ACTCTTCTT00000TTGTACTATCCCGACTACTCGCCECATCGCAA T 1 E 11 H 1 G S T D G T II L G A C T 1 P 5 T G G W Q 416

A0ATGGACOA:GCErGCEC0TG000TCETCACE:CECITCECAAACECECEAATTCACECEA:C:GTACTTCGTCTATACCCEG:CECTCIGC T W T T y s C P y S G A E G 1 Q D L Y E V Y T C A C 442

AcTCECEGGA:cTGTTCAATGTTGA000G'1'000000TCAGCAAGGGCAACCA:'; UY 1 9 D L F N y D W W R F S E G N H * 459

Figura 7. Secuencia nucleotídica y aminoacídica de ABF3. Fn negro se muestra la secuencia nueleotídica y en azul y

mayúscula la secuencia peptídica deducida: en rojo se señala el codón de inicio y en kerde el de término: el péptido señal se

muestra en azul y subrayado: los 5 posibles sitios de N-glicosilación están en rojo N subra y ados: las 6 clsteínas que podrían

formar puentes disúlfuros están en negrita y el posible módulo de unión a carbohidratos (CRM) se muestra en cursiva y

negritas.

Tabla 1. Identificación de las manchas de proteínas provenientes de electroforesis bidirnensional de sobrenadante de cultivo de P. purpurogenun crecido en xilano acetilado mediante espectrometría de masas.

Spot n°

Protein name Microorganism Gi number Score

1 Beta-galactosidase Penki/Iiurn sp 44844271 410 2 Beta-galacrosidase Penicilliuin sp 44844271 90 3 Alpha-glucuronidase Aspergillus niger 3913023 76 4 Beta-xylosidase XyIA A spergillus trn igatus 70996610 122 5 Beta-xylosidase Xy1A Aspergillusfi,niigaíus 70996610 175 6 Beta-xylosidase Xy1A Aspergi11us/imigatus 70996610 134 7 Hypothetical protein Lodderoinvces elongisporus 149234856 58 8 Hypothetical protein Lodderoinyces elongisporus 149234856 63 9 Exo-beta-1,3-glucanasa Lentinula edades 73808014 58 10 Predicted protein Aspergil/us terreus 115387056 221 11 Alpha-L-

arabinofuranosidase 2 Penicilliuin purpurogenurn 144228145 194

12 Alpha-L- arahinofuranosidase 2

Penici/liurn purpurogenuin 144228145 69

13 Alpha-L- arabinofuranosidase 2

Penici//iwn purpurogenum 144228145 68

14 Unnamed protein product

Podospora anserina 171684547 56

1 5 Alpha-L- arabinofuranosidase

Penicillium purpurogenurn 13991905 1035

16 Alpha-L- arabinofuranosidase

Penicilliurn purpurogenun 13991905 180

17 Alpha-L- arahinofuranosidase

Penici/liurn purpurogenurn 13991905 189

18 Alpha-L- arabino fu ran o s ida se

Penicilliuni purpurogenum 13991905 161

19 Alpha-I - arabinofuranosidase

I'enici/lium purpurogenum 13991905 440

20 Alpha-L- arabino fu ra n o s id a se

Penici/liurn purpurogenum 13991905 1059


Penicilliurn purpurogenum 13991905 556


Penicil/iu,n purpurogenum 13991905 1124

23 Acetylxylan esterase 1 Penicil/iumpurpurogenurn 74697396 144 24 Tripeptidyl-peptidase 1 Pyrenophora tritici-repentis 189195764 75 25 Mannosidase 1 Aspergi/lusfurnigatus 45826518 202 26 Mannosidase 1 Aspergi/Iustiunigatus 45826518 133 27 Alpha-galactosidase Penicillium sirnplicissirnurn 3821271 184 28 Alpha-gal acto sidase Penici/Iium sirnp/icissiinurn 3821271 258 29 PcI 3g09520 Penicilliurn chrvsogenuin

wisconsin_54-1255 211583995 52

30 Pc13g09520 Penicil/iurn chrvsogenuin wiSconsin_54-1255

211583995 52

31 Pc13g09520 Penici1/iunchrvsogenum i4isconsin_54-1255

211583995 50

32 Pc13g09520 Penicilliumhrvsogenurn 11iSC()flSifl_54-1255

211583995 56

33 Predicted proten Coprinopsis cinerea 169856245 56 34 Predicted proten Coprinopsis cinerea 1 69856245 50 35 Alpha-L-

arabinofuranosidasa Penicilliurn purpurogenuin 13991905 52

36 Unnarned protein product


37 Pcl3gl 1500 Penicilliurn chrvsogenum wisconsin_54-1255

211584187 76

38 Endo-1 ,4-beta-D- xylanase_A

Penicilliu,n purpurogenurn 7960269 414

39 Acetylxylan esterase 2 PenicilIiwnpurpurogenun 74626767 105

40 Acetylxylan esterase 2 Penicilliufrn purpurogenurn 74626767 87

41 Acetylxylan esterase 2 Penicilliumpurpurogenum 74626767 378

42 Arabinofuranosidase 2 Trichodernia asperelluni 45269104 96

Tabla 2 Identificación de las manchas de proteínas provenientes de electroforesis bidimensional de sobrenadante de cultivo de P. purpurogenum crecido en coseta de remolacha mediante espectrornetría de masas.

Spot n° Protein name Microorganism Gi number Score 43 Unnamed protein

product Podospora anserina 171684547 52

44 Hypotethical protein Apergi/lus orvzae 169785239 122 45 Hypotethical protein Apergillus oryzae 169785239 125 46 Hypotethical protein Apergi/lus orv:ae 169785239 85 47 Conserved hypothetical

protein Aspergi/lus terreus 115443234 68

48 Glucan 1,4-alpha- glucosidase,_putative

Penicilliuni nwrnetki 212538175 302


Penicillium pulpurogenurn 144228145 605


Penicilliu,n purpurogenum 144228145 402


Penicillium purpurogenurn 144228145 72

52 Beta galactosidase Penicillium sp 44844271 421 53 Beta galactosidase Penicilliuni sp 44844271 1055 54 Polygalacturonase Aspergil/us ori'zae 404092 55 55 Conserved hypothetical

protein Aspergi/lus terreus 115436840 102

56 Unnamed protein product


57 Hypothetical protein Aspergillus orv:ae 169785239 80 58 Exo-bet' 1,3-glucanase Len/muda edades 73808014 56

59 Exo-beta-1,3-glucanase Lenuinula edades 73808014 52 60 Exocellobiohydrolase ¡ Penici/lium jan! hine/lu,n 729650 376 61 Exocellobiohydrolase 1 Penicilliumjanihinel/uin 729650 440 62 Exocellobiohydrolase 1 Penicillium janthine/lum 729650 306 63 mannosidase 1 Aspergillusfiuniga!us 45826518 99 64 mannosidase ¡ Aspergillusfi,miga!us 45826518 122 65 Alpha-L-

arabinofuranosidase Penicil/iumpuipurogenum 13991905 218


Penicillium purpurogenum 13991905 287


Penici/iium purpurogenurn 13991905 385


Penici/Iium purpurogenuln 13991905 289


Penici/liuni purpurogc'num 13991 905 129


Penicillium purpurogenum 13991905 400


Penicilliumpurpurogenuin 13991905 293


Penicilliuni purpurogenuin 13991905 91

73 predicted protein ('oprinopsis cinerea 169856245 64

74 predicted protein ('oprinopsis cinerea 169856245 53

75 unnamed protein product

Poclospora anserina 171 684547 52

76 hypothetical protein Aspergillus nidulans 67517318 58

77 polygalacturonase Aspergil/us orv:ae 404092 53

78 polygalacturonase Aspergil/us oryzae 404092 58

79 polygalacturonase Aspergillus oiy:ae 404092 63

80 pectate Iyase, putative Neosariorvatiseheri 119497763 72

81 predicted protein Coprinopsis cinerea 169856245 63 82 unnarned protein

product Podospora anserina 171684547 60

83 Acetylxylan esterase 1 Penicilliun purpurogenum 74697396 144

Tabla 3. Identificación de las manchas de proteínas provenientes de electroforesis bidimensional de sobrenadante de cultivo de P. purpurogenuni crecido en pectina mediante espectrometría de masas.

Spot n° Protein name Microorganism Gi number Score

Carboxipeptidasa 1 Aspergillus niger 145253370 62

2 Ramnosidasa Penicillium chrvsogenurn 255935171 148

3 Exoarabinanasa (haeiomiurn giobosum 116196592 69

4 Poligalacturonasa Apergi/lus orvzae 404092 68

5 Endoarabinasa Penieilliurn chrvsogenuni 255930951 133

6 Oxigenasa dependiente de FAD

Aspergillusflavus 238491442 82

7 Carboxipeptidasa Si Penicilliurn marnejjL'i 212544083 78

8 Carboxipeptidasa Si Penicillium inarnejLi 212544083 77

9 Carboxipeptidasa Si Penicilliuin inarneffei 212544083 81

10 _____

Oxigenasa dependiente de FAD

A.spergillus/lavus 238491442 146

Tabla 4. Identificación de las manchas de proteínas provenientes de electroforesis bidimensional de sobrenadante de cultivo de P. purpurogenum crecido en glucosa mediante espectrometría de masas.

Spot n° Protein name Microorganism Gi riumber Score

1-7 Ox igenasa dependiente de FAD

Aspergil/us flavus 238491442 82

DESTAQUE OTROS LOGROS DEL PROYECTO TALES COMO: - Estadías de investigación. - Actividades de difusión y/o extensión en la temática del proyecto. - Cualquier otro logro no contemplado en los ítem anteriores y que Ud. quiera destacar.

La extensión máxima de esta sección es de 1 página (letra tamaño 10, Anal o Verdana).

Además de los objetivos descritos más arriba, se trabajó en otros temas relacionados:

1) Obtención de una genoteca diferencial del hongo.

El hongo Penicillium purpurogenum, modelo de estudio utilizado por nuestro grupo, crece en diversos sustratos naturales, entre ellos coseta de remolacha, y produce una gran variedad de enzimas hemiceluloliticas, que son reprimidas por glucosa.

Se realizó un estudio, a nivel transcripcional, de las enzimas que son producidas selectivamente por el hongo cuando es crecido en coseta.

Se construyó una genoteca sustractiva de cDNA del hongo usando la técnica de supresión por sustracción de secuencias mediante hibridación (PCR-SSH), eliminándose los genes constitutivos que se expresan con glucosa. Se seleccionó 101 clones por PCR y se determinó por dot blot" que 80 tenían secuencias de cDNA expresadas diferencialmente en coseta. Estos clones fueron secuenciados, obteniéndose mediante comparación en BLAST, 62 secuencias de interés.

Entre ellas: secuencias relacionadas con la degradación de lignocelulosa, secuencias homólogas a proteínas hipotéticas y proteínas reguladoras, y otras que no presentan similitud a proteínas de las bases de datos.

Este trabajo constituyó la Tesis de Bioquímico de Carolina Klagges, cuyo resumen se adjunta. Actualmente (Tesis de Bioquímico de Wladimir Mardones) se trabaja en la obtención de la secuencia completa de dos de los genes identificados por Carolina.

2) ¿Existen en el secretoma del hongo complejos multienzimáticos (xilanosomas)?

En los Anexos se incluye un manuscrito enviado a publicación donde se demuestra que las enzimas xilanolíticas secretadas por el hongo se agrupan en varios complejos multienzimáticos. Tanto el número, tamaño y composición de estos complejos depende de la fuente de carbono utilizada en el crecimiento del hongo.

RESUMEN: Describa en forma precisa y breve el tópico general del proyecto, sus metas y objetivos y los resultados alcanzados. Utilice un lenguaje apropiado para la comprensión del público no especialista en el tema. Esta información podrá ser difundida. La extensión máxima de esta sección es de 1 página (letra tamaño 10, Anal o Verdana).

La lignocelulosa es la fuente más abundante de recursos renovables de la biósfera. Sus polisacáridos componentes, celulosa, hemicelulosas y pectinas son valiosas materias primas para la producción de biocombustibles y productos químicos.

Nuestro grupo de investigación ha estado interesado por cerca de 20 años en el estudio de la biodegradación del xilano, el componente más importante de las hemicelulosas. El xilano es un heteroglicano que consiste en una cadena principal de residuos de xilosa unidos a diversas cadenas laterales. Su biodegradación es un proceso complejo, no entendido con suficiente claridad, que requiere la participación de una variedad de glicanasas y esterasas denominadas colectivamente xilanasas. Estas enzimas actúan sinérgicamente y su expresión está sometida a regulación.

Las enzimas xilanoliticas son producidas por hongos y bacterias y son mayoritariamente extracelulares. Para nuestro trabajo hemos utilizado como organismo modelo el hongo Penicillium purpurogenum aislados de muestras de suelo de bosque del sur de Chile. Este hongo filamentoso crece en una gran variedad de fuentes naturales tales como paja de trigo, coseta de remolacha, coronta de maíz, etc., y secreta al medio una gran variedad de celulasas y xilanasas. Trabajos previos han permitido la identificación, purificación, caracterización y secuenciación de un grupo de enzimas xilanolíticas. Un resultado importante ha sido el hallazgo de grupos de isoenzimas: dos endoxilanasas (Xyn A y B), tres acetil xilano esterasas (AXE 1, 2 y 3) y tres ara bi nofura nosidasas (ABF 1, 2 y 3). Estas isoenzimas difieren en secuencia aminoacidica, especificidad de sustrato y otras propiedades, sugiriendo que ellas cumplen diferentes funciones fisiológicas. Recientemente hemos aislado 5 enzimas con actividad feruloil esterásica que presentan diferencias significativas en su especificidad de sustrato.

La expresión de proteínas por el hongo difiere en forma importante dependiendo de la fuente de carbono usada para su crecimiento, lo que sugiere una regulación selectiva de la expresión de los genes xilanoliticos. La expresión de XynA y XynB ha sido estudiada a nivel transcripcional y traduccional, encontrándose importantes diferencias. La estructura cromosómica del hongo ha sido investigada Posee 5 cromosomas con un tamaño de genoma de cerca de 21 Mpb (un genoma fúngico más bien pequeño), y los genes de las enzimas identificadas están distribuidos ampliamente en el genoma sin formar un "cluster".

El secretoma (conjunto de proteínas secretadas por una célula o tejido) depende de una gran variedad de factores: genéticos, ambientales (señales externas) y cinéticos (eventos regulatorios transcripcionales y traduccionales). Mediante un análisis del secretoma es posible comprender mejor como el hongo se adapta a un entorno variable, pues en el caso de los microorganismos celulo- y xilanoliticos, las enzimas responsables de la degradación de estos polímeros son en su gran mayoría extracelulares. El secretoma es una fracción pequeña del proteoma total, lo que facilita su estudio; en el caso de P. purpurogenum se ha determinado que, si bien su composición depende de la fuente de carbono usada, es del orden de las 90 a 100 proteínas.

En este Proyecto nos hemos abocado principalmente al estudio del secretoma del hongo con el fin de identificar las proteínas secretadas bajo diferentes condiciones de crecimiento. Se ha utilizado coseta de remolacha, xilano acetilado, pectina y glucosa como fuentes de carbono. Mediante electroforesis bidimensional y espectrometría de masas hemos obtenido secuencias peptídicas que han sido comparadas con secuencias conocidas disponibles en las bases de datos. Aunque varias de las secuencias obtenidas son similares a las de proteínas conocidas, la mayoría se relaciona con proteínas con una función asignada por analogía o son simplemente proteínas de función desconocida. También se ha trabajado en la caracterización de las esterasas y ara binofuranosidasas producidas por este hongo, en particular su especificidad de sustrato, lográndose la secuencia de las arabinofuranosidasas 2 y 3 y parcialmente de la acetil xilano esterasa III.

Se ha preparado también una genoteca sustractiva por supresión de cDNA (restando cDNAs obtenidos de un cultivo con glucosa a los obtenidos por un cultivo en coseta), encontrándose también numerosas secuencias que no tienen en las bases de datos proteínas similares de función conocida.

Paralelamente se ha demostrado que las enzimas xilanolíticas secretadas por el hongo se agrupan en varios complejos multienzimáticos. Tanto el número, tamaño y composición de estos complejos depende de la fuente de carbono utilizada en el crecimiento del hongo.

Una mejor comprensión de este proceso de biodegradación es importante en eventuales aplicaciones biotecnológicas asociadas a las enzimas que degradan el xilano.

PRODUCTOS

ARTÍCULOS Para trabajos en Prensa! Aceptados/Enviados adjunte copia de carta de aceptación o de recepción.

N O: 1 Autor (a)(es/as) : M. Fritz M. C. Ra yanaL C. Braet; J. Eyzaguirre Nombre Completo de la Revista : Mycological Research Título (I(lioma original) : A family 51 &1945-L-arahinofuranosidase from Penicillium purpurogenum: purification,

properties and amino acid sequence. Indexación : ISI ISSN: Año : 2008 Vol.: 112

8 Páginas : 933-942 Estado de la publicación a la fecha : Publicada Otras Fuentes de financiamiento, si las hay

ni\ ersidad Andrés Bello (N° 19-03. 01-05/1 03-05/R) Arcllis o impreso se adjuntó a intornie anual anterior

Envía documento en papel : si Archivo Asociado al artículo

2 Autor (a)(es/as) : M. Colomhres; J. A. Garatc C. F. Lagos R. Araya-Secchi P. Noramhuena S. Quiro, L.

1 ,arrondo: 1. Pérez-Aele: J. Evzaguirre Nombre Completo (le la Revista : Journal of Computer-Aided Molecular Dcsign Título (Idioma original) : An eleven amino acid residue deletion expands thc suhstrate speciticity of acetyl xylan

esterase II (AXE II) from Penicillium purpurogenum Indexación : ISI ISSN: Año : 2008 Vol.: 22

Páginas : 19-28 Estado de la publicación a la fecha : Publicada Otras Fuentes de financiamiento, si las hay 1 ¡lis ersidad Andrés Bello (N 19-03 y 03-05/R) Documento fue adjuntado a informe anterior


3 Autor (a)(es/as) : J. l)íai: R. Chá e,: 1.. F. I,arrondo: J. l/ /.aguirre: Paulina BulI Nombre Completo de la Revista : Current Geneties Título (Idioma original) : Functional analysis of the endoxylanase B (xynB) promoter trom Penicillium

purpurogcnum Indexación : ISI ISSN: Año : 2008 Vol.: 54 N O: 1 Páginas : 133-141 Estado (le la publicación a la fecha : Publicada Otras Fuentes de financiamiento, si las hay

niversidad Andrés Bello 03-05/R . IFS 174287-1 y I)ICYF-USACI 1 Documento incluido en informe anterior


4 Autor (a)(es/as) : Raanal, MC. Callegari, E. Eyzaguirre, J. Nombre Completo de la Revista : Applicd and Environmental Microbiology Título (Idioma original) : A novel hiíunctional &#945:-L-arahinofuranosidase/í3- 1 D-xylosidasc (A131`3) lrom

Penicillium purpurogcnum Indexación : lSI ISSN: Año Vol. N°: Páginas Estado de la publicación a la fecha : Enviada Otras Fuentes de financiamiento, si las hay Universidad Andrés Bello (N 03-05/R. 01-05/1 and 02-08/R), MECE/S1JP Fellosship (I'roject 1JA130602). NIl 1 (iran! Number 2 P20 RR016479.

Envía documento en papel : si Archivo Asociado al artículo : ManuscriptsuhmissionjAEMüü2 14-1 0_Vcrsion_l )- Blocdcnotas.pdf hti1' e\;tIc\t.cnIe\ .InflormecIcI1Ic:1I1de\.phpin\ esiigIIrI4 ttcLII:dcscaIg;I D 10924, 10-06K

N°: 5 Autor (a)(es/as) : González-Vogel. A.: l/ytaguirre. i.: ()leas (i.: Naarretc. M. Nombre Completo (le la Revista : Applied Microbiology and Biotechnology Título (Idioma original) : Multienzyrnatic complexes in thc secretome of Penicillium purpurogenurn when grown on

different carbon sources. Indexación : ISI ISSN Año Vol.

Páginas Estado de la publicación a la fecha : Enviada Otras Fuentes de financiamiento, si las hay

IJNAB Grant DI-07-06/l. NIH Grant Number 2 P20 RR016479.

Envía documento en papel : no

Archivo Asociado al artículo : Paper complejosl.pdf

hLlp; e%,¡] e Iie\teI ¡Ti ton11e acadelilickInde\.p]1pin\egdert4 aiiicul sdescaia3/ 1 6)24

OTRAS PUBLICACIONES

Sin intorniac ion ingresada.

CONGRESOS

N°: 1

Autor (a)(es/as) : J. Eyzaguirre; M. C. Ra yana!; M Fritz

Título (Idioma original) : Dift'erential properties of thrce alpha-L-arahinofuranosidases secreted by the fungus

Peo ici lii uni purpurogenum

Nombre del Congreso : 7th Carboh ydrate Bioengineering Mecting

País: ALEMANIA

Ciudad : Braunschweig

Fecha Inicio : 22/04/2007

Fecha Término : 25/04/2007

Nombre Publicación

Año

Vol.:

Páginas

Envía documento en papel : si

Archivo Asociado

2

Autor (a)(esfas) : M. Fritz; M. C. Ravanal; J. Eyzaguirre

Título (Idioma original) : La arahinofuranosidasa 2 de Penicillium purpurogenum:

Nombre del Congreso : 30 Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de ('hile

País: CHILE

Ciudad : 1 ermas de C'hilln



Nombre Publicación

Año

Vol.

Páginas


Archivo Asociado

3

J. Lyzaguirre: A. González-VogeI

Penieillium purpurogenum produces a set of teruloyl esterases when grown in sugar beet pulp

5th European Symposium on Enzymes in Grain Processing

REINO UNIDO DE GB E IRLANDA DEL NORTE

N orw i ch

31/03/2008

02/04/2008

Autor (a)(es/as)

Titulo (Idioma original)

Nombre del Congreso

País

Ciudad

Fecha Inicio

Fecha Término

Nombre Publicación

Año

Vol.

Páginas

Envía documento en papel

SI

Archivo Asociado

4

Autor (a)(es/as) : M. C. Ravanal: J. Eyzaguirre

Título (Idioma original) : Bifiinctional f'amily 43 glycosyl h ydrolase from Penicillium purpurogenum with

13-D-xvlosidase and & g 945:-L-arahinofuranosidase activity: puriOcation. properties and amino acid sequence.

Nombre del Congreso : 1 lth Congress ofthe Pan American Society br Biochemistry and Molecular Biology.

País : BRASIL

Ciudad : Aguas de 1,indóia



Nombre Publicación

Año

Vol.

Páginas


Archivo Asociado

5

Autor (a)(es/as) : M. Naarrete: A. Gonzilez-Voge1: J. E/ iaguirrc

'título (Idioma original) : Production of multienzymatic complexes by Penicillium purpurogenum growing on sugar

hect pulp. corn cob and acetylated xylan.

Nombre del Congreso : ENZITEC 2008

País: BRASIL

Ciudad : Río de Janeiro

Fecha Inicio : 13/0812008


Nombre Publicación

Año

Vol.

Páginas

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N°: 6 Autor (a)(es/as) : J. Eyzaguirre

Título (Idioma original) : The esterases from Penicillium purpurogenum Nombre del Congreso : Ferulate -08

País: ESTADOS UNIDOS DE AMERICA Ciudad : Minneapolis Fecha Inicio : 25/08/2008 Fecha Término : 27/08/2008 Nombre Publicación

Año

Páginas Envía documento en papel : si Archivo Asociado

7 Autor (a)(eslas) : M. Navarrete, E. Callegari; M. Zhang; G. Black J. Eyzaguirre

Título (Idioma original) : 1/1 secretoma de Penicillium purpurogenum: análisis por electrol'ores j s hidímensional acoplado a espectronictría (le ma(ks. Nombre del Congreso : 31' Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica N Biología Molecular de ('hile

País: CHILE Ciudad : 1 ermas de Chillón Fecha Inicio : 23/09/2008 Fecha Término : 26/09/2008 Nombre Publicación

Año Vol.


8 Autor (a)(es/as) : C. Klagges J. Eyzaguirre

Título (Idioma original) : Expresión diferencial de genes del hongo Penicillium purpurogenum crecido en glucosaN una fuente de carbono natural, coseta de remolacha. Nombre del Congreso : 31 Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica Biología Molecular de (hile

País: CHILE Ciudad : Termas de Chillón Fecha Inicio : 23/09/2008 Fecha Término : 26/09/2008

Nombre Publicación

Año

Vol.

NO:

Páginas


SI

Archivo Asociado

9

Autor (a)(es/as) : M. C. Ravanal: J. Eyzaguirre

Título (Idioma original) : Enzima bifuncional de la famila 43 de las glicosil hidrolasas de Penicillium purpurogenuni

con actividad l3-D-xilosidasa N &#945:-L-arahinofuranosidasa. Purificación, propiedades y secuencia aniinoacídic

Nombre del Congreso : 3 V Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de chile

País: CHILE

Ciudad : Termas de Chillón



Nombre Publicación

Año:

Vol.:

Páginas


Archivo Asociado

N°:

Autor (a)(es/as)

Título (Idioma original)

purpurogenum.

Nombre del Congreso

País

Ciudad

Fecha Inicio

Fecha Término

Nombre Publicación

Año

Vol.

Páginas


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10

A. González-Vogel: M. Navarrete: J. Evzagumrre

Identificación análisis de complejos multienzimóticos secretados por l'enicillium

3 V Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica y Biologma Molecular de ('hile

CHILE

I'ermas de Chillón

2309/2008

26/09/2008

SI

II

Autor (a)(es/as)

L. Rosa: A. González-Vogcl: J. 1/yzaguirre

Título (Idioma original)

Purificación \ propiedades de la 0ruloil esterasa 4 de Penicillium purpurogenum

Nombre del Congreso : 31 Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de Chile

País: CHILE Ciudad : Termas de Chillón Fecha Inicio : 2309/2008 Fecha Término : 26/091/2008 Nombre Publicación

Año Vol. N°: Páginas Envía documento en papel : si Archivo Asociado

12 Autor (a)(es/as) : J. E) ¡aguirre: A. González-Vogel: L. Rosa: C. Faulds: P. BicI)

Título (Idioma original) : Penicilliuni purpurogcnum secretes severa] enzymes with firuloyl esterase activity whcn grown in sugar hect pulp. Nombre del Congreso : 8th Carhohydrate Bioengineering Meeting

País: ITALIA Ciudad : lschia Fecha Inicio : 10105/2009 Fecha Término : 13¡05:2009 Nombre Publicación

Año Vol.:


13 Autor (a)(es/as) : M. Navarrete: E. Callegari: J. Eyzaguirre

Título (Idioma original) : Expresión dil'erencial de enzimas hemicelulolitieas por parte de l'enicillium purpurogenum crecido en coseta de remolacha y xilano acetilado Nombre del Congreso : 32 Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de Chile

País : ('HILE Ciudad : lenas de Chillón Fecha Inicio : 22/0912009 Fecha Término : 25/0912009 Nombre Publicación

Año Vol.


14 N. Prei, M. Navarrete. E. Callegari: J. EN zaguirre

La diersil'icación del seeretoma de Penicilliuni purpurogenum es debido a l'os!orilaeiones y

32 Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de ('hile

CHILE Termas de Chillón 22/09/2009 25/09/2009

Autor (a)(eslas)

Título (Idioma original) a glicosilaciones del tipo O y N. Nombre del Congreso

País Ciudad Fecha Inicio Fecha Término Nombre Publicación

Año Vol. NO:

Páginas Envía documento en papel si Archivo Asociado

TESIS/MEMORIAS

Título de Tesis

Nombre y Apellidos (lel(de la) Alumno(a)

Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a)

Título Grado Institución

País Ciudad Estado de Tesis Fecha Inicio Fecha Término Envía documento en papel Archivo Asociado

Purificación, caracterización v secuenciaeión de la &#945:-1 -arahinofuranosidasa 2 del hongo Pcnicillium purpurogenum Macarena Fritz Kelly

Jaime Eyzaguirre Philippi

Pregrado Facultad de Ciencias, Universidad de Chile

CHILE Santiago Terminada 01/03/2005 01/05/2007 si

2 Título de Tesis Expresión diferencial de genes del hongo Penicilliurnp purpurogenum crecido en

glucosa y una fuente de carbono natural, coseta de remolacha. Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Carolina Klagges Ornieño

Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) : Jaime Eyzaguirre Philippi

Título Grado : Pregrado Institución : Universidad (le Santiago de Chile

País: CHILE Ciudad : Santiago Estado (le Tesis : Terminada Fecha Inicio : 01/03/2007 Fecha Término : 01'04/2008 Envía documento en papel : si Archivo Asociado

N°: 3 Título de Tesis : Variabilidad isoenzimótica. purificación propiedades de cinamoil eslerasas de

l'enieillium purpurogenuin e identiticación y caracterización de complejos ni u lii Cii tiITl al e os.

Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Alvaro González Vogel


Título Grado Pregrado Institución Pontificia Universidad Católica de Valparaíso

País CHILE Ciudad Valparaíso

Estado de Tesis Terminada Fecha Inicio 0303/2008 Fecha Término 06/04/2009 Envía documento en papel si Archivo Asociado

4 Propiedades y posible aplicación en la industria alimenticia de las alfa-L-arahinofuranosidasas del hongo Penicillium purpurogenum. María Cristina Ravanal Espinosa

Jaime Eyzaguine Philippi

Doctorado Universidad Andrés Bello

CHILE Santiago Terminada 0103/2005 25/08/2009 si

Titulo de Tesis

Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a)

Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a)

Título Grado Institución País Ciudad Estado de Tesis Fecha Inicio Fecha Término Envía documento en papel Archivo Asociado

5 Título de Tesis Identificación caracterización de esterasas en el secrctoma de Penicitluim

purpurogenuni Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Mario Navarrete Lagos

Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) : Jaime Eyzaguirre Phiippi

Título Grado : Doctorado Institución : Universidad Andrés Bello

País : CHILE Ciudad Santiago Estado de Tesis 1/u Ejecución Fecha Inicio 01/03/2005 Fecha Término 30.06/2011) Envía documento en papel : si Archivo Asociado

N°: 6 Título de Tesis : Análisis Y secuenciacion de mRNAs de Penicilliuni purpurogenum expresados al

crecer el hongo en coseta de remolacha. Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Wladimir Mardones Opazo


Título Grado : Pregrado Institución : Universidad de Santiago de Chile

País: CHILE Ciudad : Santiago Estado de Tesis : En Ejecución Fecha Inicio : 03t0317008

Fecha Término : 30/04/2010 Envía documento en papel : si Archivo Asociado

N°: 7 Titulo de Tesis : Comparación entre el secretoma de Penicillium pururogenum al ser crecido en

medio sólido y líquido utilizando varias fuentes de carbono. Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a): Jonathan Víctor herrera Peña

Nombre y Apellidos del(de la) Tutor(a) : Jaime Eyzguirre Philippi

Título Grado : Magister Institución : Universidad Andrés Bello

País: CHILE Ciudad : Santiago Estado de Tesis : En Ejecución Fecha Inicio : 11/09/2009 Fecha Término : 31/05/2010 Envía documento en papel : si Archivo Asociado

N°: 8 Título de Tesis : Secuenciaeión expresión heteróloga de una glucuronidasa de Pcnicillium

puurogenum Nombre y Apellidos del(de la) Alumno(a) : Lorena Natalia Rosa


Título Grado : Magister Institución : 1Jniersidad Andrés Bello

País : CHILE Ciudad : Santiago Estado de Tesis : En Ejecución Fecha Inicio : 2111/2009 Fecha Término : 31/12/2010 Envía documento en papel : si Archivo Asociado

ANEXOS

A continuación se detallan los anexos físicos/papel que no se incluyen en el informe en formato PDF.

Se adjuntarán documentos no incluidos en iníi)rrnes anteriores del Provecto: - Resumen 8th Carbohydrate Bioengineering Meeting - Dos resúmenes 32 Reunión Anual de la Sociedad de Bioquímica y Biología Molecular de Chile - Resumen Tesis Carolina Klagges - Resumen Tesis Alaro González - Resumen Tesis Cristina Ravanal - Documento de inscripción de Tesis de Mario Navarrete - Documento de inscripción de l'esis de Wladimir Mardones - Documento de inscripción de lesis de Lorena Rosa - Documento de inscripción de Tesis de Jonaihan - Manuscrito eniado a publicación a Applied and Environmental Microhiology

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