fosfatasa alcalina recombinante en insecto

8/17/2019 Fosfatasa Alcalina recombinante en insecto

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Instituto Politécnico Nacional.

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología.

Ingeniería Enzimática.

“Producción de fosfatasa alcalina para diagnostico

medico de cáncer”

rupo! "B#$

E%uipo!

Integrantes!

• arcía &c'ac't Brenda (izet'• )amora )ecua (eonardo

Profesor!

• *. en +. ,a-id (ule +'a le

Fecha de entrega: 10 de marzo del 2016


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Contenido

INTRODUCCIÓN.............................................................................................. 2DE !RRO""O..................................................................................................2CONC"U IÓN..................................................................................................#E$tr%ct%ra 1r&a 2r&a 'r&a ( #r&a.......................................................................#Dom&n&o$ de la enz&ma...................................................................................#

ec%enc&a gen)t&ca........................................................................................ #Cond&c&one$ o*t&ma$...................................................................................... #!.E. +$ Tem* , !.E. +$*-............................................................................#

%$trato$ co/actore$ coenz&ma$ *rod%cto$..................................................# T&*o de &nh& &c&on e &nh& &dore$......................................................................#

arametro$ c&net&co$ m ( 3ma4 teor&co$.....................................................#De5n&c&on de $% act&+&dad enz&mat&ca............................................................#C mo $e m&de e4*er&mentalmente $% !.E......................................................#Re/erenc&a$.....................................................................................................7


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Proyecto 2do Parcial

Estructura 1ria 2ria 3ria y 4ria

ara *ro/%nd&zar en el conoc&m&ento de la Fo$/ata$a alcal&na *lacentar&a $e%t&l&zaron herram&enta$ &o&n/orm8t&ca$ *ara o tener &n/ormac& n con5a le."a /o$/ata$a alcal&na *lacentar&a *ertenece al gr%*o de la$ /o$/ata$aalcal&na$ '.1.'.1 e$ %na enz&ma h&drola$a re$*on$a le de el&m&nar gr%*o$de /o$/ato$ de +ar&o$ t&*o$ de mol)c%la$ como n%cle t&do$ *rote9na$ (alcalo&de$. El *roce$o de el&m&nar el gr%*o $e denom&na de$/o$/or&lac& n.Como $%g&ere $% nom re rec& e el nom re de orto /o$/ r&co mono)$terh&drola$a.

E TRUCTUR! RI;!RI!

ara comenzar la caracter&zac& n de la Fo$/ata$a !lcal&na *lacentar&a $eacced& a la *8g&na de NCo cona(%da de la herram&enta E4 ! ( tra$late *ara o tener la e$tr%ct%ra *r&mar&acorre$*ond&ente a la $ec%enc&a de am&no8c&do$.Como re$%ltado$ $e o t%+o %na gran cant&dad de dato$ lo$ c%ale$ $e d&+&denen de ac%erdo al marco a &erto de lect%ra ?%e *re$entan ( re$altando enro>o la$ $ec%enc&a$ *e*t9d&ca$ de &m*ortanc&a. e el&g& la m8$ larga ?%econt&ene 7'7 am&no8c&do$ ?%e corre$*onde al *)*t&do enz&m8t&co ante$ de

$er mod&5cado.

MGVSTVTAARIL

KGQKKDKLGPEIPLAMDRFPYVALSKTYNVDKHVPDSGATATAYLCGVKGNFQTIGLSAAARFNQCNTTRGNEVISVMNRAKKAGKSVGVVTTTRVQHASPAGTYAHTVNRNWYSDADVP

ASARQEGCQDIATQLISNMDIDVILGGGRKYMFRMGTPDPEYPDDYSQGGTRLDGKNLVQEWLAKRQGARYVWNRTELMQASLDPSVTHLMGLFEPGDMKYEIHRDSTLDPSLMEMTEAALRLLSRNPRGFFLFVEGGRIDHGHHESRAYRALTETIMFDDAIERAGQLTSEEDTLSLVTADHSHVFSFGGYPLRGSSIFGLAPGKARDRKAYTVLLYGNGPGYVLKDGARPDVTESESGSPEYRQQSAVPLDEETHAGEDVAVFARGPQAHLVHGVQEQTFIAHVMAFAACLEPYTACDLAPPAGTTDAAHPGRSVVPALLPLLAGTLLLLETATAP

E TRUCTUR! ECUND!RI!

Con a(%da de otra herram&enta &o&n/orm8t&ca $e *roce$ la $ec%enc&a deam&no8c&do$ eleg&da ( $e o t%+o %n an8l&$&$ de la e$tr%ct%ra $ec%ndar&ade &da a la$ &nteracc&one$ entre am&no8c&do$. El an8l&$&$ &nd&ca la *re$enc&adom&nante de e$tr%ct%ra$ h)l&ce$ $eg%&da$ de l8m&na$ eta /ormando a lolargo del *ol&*e*t&do con ' g&ro$ &m*ortante$ en la e$tr%ct%ra 5nal ( #@Are$&d%o$ e4*%e$to$.


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E$tr%ct%ra Terc&ar&a"a$ /o$/ata$a$ alcal&na$ e4&$ten en /orma de d9mero cada mon mero $e*re$enta %n&do a 2 8tomo$ de B&nc ( %n 8tomo de ;agne$&o. El $&t&o act&+ode cada mon mero $e enc%entra entre lo$ am&no8c&do$ 111 11A dondedentro de la e$tr%ct%ra $e enc%entran 2 8tomo$ de B&nc ( la !rg&n&na 166.

"ocal&zac& n del $&t&o act&+o en el *)*t&do del mon mero de la /o$/ata$aalcal&na *lacentar&a o ten&do de el algor&tmo de The *rote&n model *ortal .

"a d&mer&zac& n de lo$ mon mero$ e$ med&ante &nteracc&one$ ?%e $one$*ec95ca$ de ac%erdo a la e$*ec&e *ertenec&ente de la /o$/ata$a. En e$ta$&nteracc&one$ $e /orman %n&one$ 3an der aal$ rem*lazando a *%ente$ deh&dr geno.

;odelo 'D de la Fo$/ata$a !lcal&na *lacentar&a ! : El mon mero $&m*le < :El mon mero con lo$ &one$ met8l&co$ *re$ente$ C : ;odelo de la &nteracc& n

de mon mero$ d%rante la d&mer&zac&


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E TRUCTUR! CU!TERN!RI!

or Glt&mo $e acced& a la a$e de dato$ rote&n Data


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Secuencia genéticaO ten&da de NC


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A.E. vs emp ! A.E. vs p"

En %n e$t%d&o hecho *or -erman3an &do he*8t&co $eo e &nte$t&nal demo$traron?%e la &$oenz&ma &nte$t&nal e$ la m8$ a/ectada *or e$te &nh& &dor act&+&dadremanente: &$oenz&ma &nte$t&nal 7 $ea @#.7 he*8t&ca @#.7 P@ K AQ.Re$%ltado$ $&m&lare$ $e han hallado con el " tr&*t /ano. Con concentrac& nde ' m; de e$te &nh& &dor la$ &$oenz&ma$ &nte$t&nal ( *lacentar&a$ $e


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&nh& &eron a*ro4&madamente %n @0 m&entra$ ?%e la$ &$oenz&ma$ $ea (he*8t&ca $%/ren meno$ del 27 de &nh& &c& n P10Q. ! d&/erenc&a de "/en&lalan&na el le+am&$ole 7 20 m; el " * romotetram&$ol 0.10 0.2@m; ( la "homoarg&n&na K m; actGan &nh& &endo *redom&nantemente la$&$oenz&ma$ $ea he*8t&ca ( renal. Con el *r&mero la act&+&dad remanente de

la m&$ma ronda $egGn la concentrac& n %t&l&zada entre 0.@ ( 2 m&entra$?%e la$ &$oenz&ma$ de &nte$t&no ( *lacenta *re$entan %na act&+&dadremanente entre #@ ( @7 . El " * romotetram&$ol m%e$tra ' 10 deact&+&dad remanente *ara la$ &$oenz&ma$ te>&do no e$*ec95ca$ con %n K2A0 *ara la$ &$oenz&ma$ de &nte$t&no ( *lacenta P11 12 1' 1#Q. "a$&$oenz&ma$ $ea ( he*8t&ca $on relat&+amente &ne$ta le$ a la tem*erat%ra

17 m&n 76 C ( a la de$nat%ral&zac& n *or %rea 1.' ' ; ( clorh&drato deg%an&d&na 0.' ; P17 16 1@Q.

'arametros cineticos (m y )ma* teóricos+epresentación de la velocidad $rente al cociente v,-S .

/+epresentación de Eadie0"o$stee

Dato$ o ten&do$ en el e4*er&mento *or So$) !nton&o


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C lculo de )m y (m mediante las representaciones de Eadie"o$stee

De nición de su actividad enzim tica."a /o$/ata$a alcal&na h&drol&za el 1 mol de mono )$ter *or U de /o$/ata$aalcal&na. (a ?%e la enz&ma $olo *re$enta %n $&t&o act&+o. Todo e$to acond&c&one$ o*t&ma$.

Cómo se mide e*perimentalmente su A.E."a /o$/ata$a alcal&na Orto/o$/ r&co mono)$ter /o$/oh&drola$a EC '.1.'.1 e$%na enz&ma am*l&amente d&$tr& %&da ?%e h&drol&za ' el enlace )$ter 1/o$/ r&co entre %n gr%*o /o$/ato ( %n rad&cal org8n&co a *- 8$&co *-

*t&mo entre A ( 10 l& erando /o$/ato &norg8n&co.


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Como $%$trato de la /o$/ata$a alcal&na %t&l&zaremo$ %n com*%e$to art&5c&al:* N&tro/en&l /o$/ato ?%e al *o$eer %n re$to org8n&co con %n gr%*o /o$/ato%n&do *%ede $er reconoc&do *or la enz&ma. El $%$trato al $er h&drol&zadoor&g&na %n *rod%cto el * N&tro/enol com*%e$to coloreado ?%e en $ol%c& nalcal&na a $or e a %na long&t%d de onda de #07 nm *or lo ?%e $% a*ar&c& n

en el tran$c%r$o de la reacc& n *%ede $eg%&r$e color&m)tr&camente. aradetener la reacc& n $e a ad&r8 /o$/ato (a ?%e el e4ce$o de e$te *rod%cto dela reacc& n &nh& e la act&+&dad enz&m8t&ca.

E uipamiento

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+e$erencias

S%an !nton&o 39lchez !g%&lera 2011. I$oenz&ma de /o$/ata$a alcal&na*lacental l&He &m*ortanc&a cl9n&ca como marcador en t%more$ de t&*ogerm&nal. er+&c&o de !n8l&$&$ Cl9n&co$ -o$*&tal Un&+er$&tar&o 3&rgen de la!rr&4aca ;%rc&a E$*ana.

"a%ra !. alomare$ 2001. !*l&cac&one$ de la

fosfatasa alcalina recombinante en insecto

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