PERGILLUS NIGER SOBRE SUS-

TRATOS AMILACEOS POR EL ME -

TODO KOJI "

q.b3b

'\ EVOLUCION EN LA PRODUCCION

DE PROTEASAS ACIDAS POR AS-

,

ALFmDO&SSI GUERRERO INGENIERIA BIOQUIMICA INDUSTRIAL DIVISION DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD. UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA UNIDAD I ZTAPALAPA .

., _, ",. .." .~*"

I N D I C E

Objetivo - - - - - " " " - - " " ^ " " "~""""""""""""" 7

Metas

Sistema de - fermentacih

Pardmetros

Material

Método

Esquema de - trabajo

cslculos

Resultados

Discuci4n de Resultados

Conclusión

Referencias

"~"""""""""""""""""""""""" 7

""""""""" """"_ "" """""""""" 8

""""""""""" - """_ - """ """"""" 9

- - - - - - - - - - - - - - " " " " " """""""""_"""" 10

-----"""-"" """""""""_"""""""" 1 2

"" """"""""""""-""""""""""" 1 5

1 7

19

""""""""""""-"""""""""""""

""""""""""""""""-"""""""""

"""""""""""""~"""""""""""" 31

33 """"""""""~ """""""""""""""

------"-"-"""""""""""""""""""~ 3 4

h " " _" "̂ .. . -

INTRODliCCION .. \ . 1

Tradicionalmente las fuentes de enzimas proteolfticas han sido - de origen animal ti vegetal, entre las primeras pueden citarse algunas

plantas tropicales como la papaya, el h i g o v la piña, que producen - - respectivamente la papaina, la ficina y la hromelina, Las de origen-

animal provienen de organos como el estomago A el páncreas, de donde-

pueden extraerse respectivamente pepsina y renina, asi como tripsina,

quimotripsina y carboxipeptidasas.

Actualmente el campo 'de las fermentaciones ha abierto horizontes

muy importantes en la producción de enzimas de origen microbiano, las

cuales Dresentan muchas ventajas para ciertos fines, dado que en gene

ral, son muy inespecjficas; no requieren cofactores, muy rara vez se-

encuentran como zimógenos, etc. (Hagihara, 1960)

-..

.

Se sabe que son muchas las clases de microorganismos que poseen

la capacidad de producir enzimas, entre ellas se encuentran las enzi

mas que hidrolizan proteínas y que reciben el nombre de enzimas nro-

teolíticas o proteasas, siendo uno de los primeros reportes, la iden - tificaci5n de proteasas alcalinas producidas por Asperqillus oryzas-

(Oshima, 1922).

Ikeda, ( 1 9 4 7 ) demostr6 que cuando Bacillus suhtilis se hace crecer - en un medio conteniendo como fuente de carbono 5cido acético produce

grandes cantidades de proteasas alcalinas,

En los iíltimos años ha tenido gran auge el estudio de enzimas - proteolíticas producidas por microorganismos, ya que son de ,gran uti I

lidad en los procesos industriales, tales como:

a.- Industria farmaceutica, sirven para la elaboracihn de preparacio c

nes a base de enzimas proteolfticas para combatir algunas infla-

maciones (Reed, 1966).

b.- Industria cervecera, se utilizan para ayudar a clarificar y madu - rar la cerveza, durante el perfodo de almacenamiento (Reed,1966),

c.- Industria cinematogr5.fica y fotogriifica, se utilizan para recue-

perar la plata empleada tanto en las cintas de pel4culas como en

cintas de fotograffa, solubilizando la gelatina que engoma a di-

chas cintas (Boidin and Effront, 1930).

d . - Industria alimenticia, sirven para la elaboracidn de hidroliza--

dos de proteínas de pescado, de cereales, y de leche; tambien se

utilizan para fabricar ablandadores de carnes,

J

c_ . . . - . _, "e

e.- Industria textil, con frecuencia s e usan amilasas y proteasas - dependiendo de la fabricacian y los tipos de engomado; por ejem - . plo durante el proceso de desengomado del ray6n se emplean enzi

mas proteolíticas porque por lo general esta tela se engoma - - con gelatina o caseína (Gale, 1941 ) .

-

f.- Otros usos incluyen el curtido de pieles (Jorgensen,' 1959) ; y - el empleo de éste tipo de enzimas en la D'roducci6n de,detergen-

tes biológicos (Keay y Col., 1973)

;La investigaci6n de estas enzimas ha sido enfotada .para tratar-

de encontrar nuevas aplicaciones y nuevas cepas de microorganismos-

que tengan la capacidad de producir grandes cantidades de enzimas - proteolíticas, ya que la demanda de éstas aumenta año con año,

Las enzimas proteolíticas se pueden dividir en tres grupos de - acuerdo al rango de pH en el que s u actividad es Bntima y son: prc

teasas ácidas, proteasas neutras y proteasas alcalinas,

Las proteasas ácidas son producidas por hongos, teniendo un m$-

ximo de actividad y estabilidad a un nH 2 a 5 , tienen un peso mole-

cular alrededor de 35000 y contienen una baja cantidad de aminofici-

dos básicos, Entre los microorganismos que las producen estbn: - - Aspergillus oryzae, Mucor pusillus y Aspergillus niRer, y su uso se

limita a las industrias ldcteas y de alimentos,

Las proteasas neutras son producidas nor dos tipos de microorg%

nismos: bacterias y hongos, su pH de actividad est5 entre 7 y 8 , y

presentan un peso molecualr aproximado de 40 O00 a 45 000, algunas*

de éstas enzimas requieren Zn y Mg, para incrementar s u actividad - (Griffin, 19731,

Las proteasas alcalinas, también l a s producen bacterias y hon ?

gos, s u m5xima actividad est5 entre ?I-l 10 y 11, tienen un peso

lecular de 20 O00 a 30 0 0 0 , s u uso se ha extendido enormemente en-

la industria de los detergentes, al curtido de pieles y en la in--

dustria alimenticia, Las enzimns mSs estudiadas son: ,Suhtilisina

Carlberg y Subtilisina Novo, producidas nor Bacillus subtilie (Ke-

ay y Col., 1972) .

También se han dividido las enzimas proteolZticas en: protef - nasas y peptidasas.

Las proteínasas catalizan la degradaci6n de proteEnas,'dando-

origen a la formación de peptonas y polipétidos a combinaciones - - m5s simples, como los amino5cidos.

Al grupo de las protefnasas, pertenece la pensina que se encu L)

entra en el jugo gástrico, con un pH ÓDtimo de 1,2 a2, la tripsina

que se halla en el intestino y tiene un pH óptimo de 8 a 9 , y la - papaina, que se encuentra en el jog0 lcicteo de Carica paDaya, que-

tiene un pH Bptimo de 4 a S .

El pH 6ptimo de las peptidasas se encuentra por lo general - - cerca de 7, éstas enzimas son sintetizadas por vegetales, animales

y por varios microorganismos (jorgensen, 1959) .

La produccidn mundial de enzimas proteolíticas s e lleva a ca-

bo principalmente por algunas compañ.;las Europeas, de Estados Uni--

dos de Norteamérica y Jap6n (Keay y C o l . , 1972) .

Los procesos de producci6n de enzimas involucran fermentacio m

nes líquidas 6 fermentaciones sólidas, de esta iíltima podemos enten - . derla como el crecimiento de microorganismos y la formacirjn de pro-

ductos que ocurre en la superficie de sustratos sdlidos, es decir - con bajo contenido de humedad, (Mudgett, 1 9 8 6 ) . La fermentaci6n s6-

lida se ha venido utilizando desde hace muchos siglos en los passes

orientales para la producci6n de alimentos fermentados albase de - cereales como el arroz y la soya, en estos procesos intervienen al-

gunas enzimas extracelulares (Carrizales; 1982) .

Una gran cantidad de enzimas extracelulares son producidas - comercialmente a travez de una fermentaci6n sólida de origen japo-

nes llamado Koji, que es la preparaci6n de hongos filamentosos cre-

cidos en salvado u otro sustrato como arroz, trigo, etc. (Blain, - - 1 9 7 5 1 .

L a fermentaci6n Kojl s e na reallzado en diversos sistemas de

bandejas, tambores rotatorios, lechos fijos, etc, Generalmente el =

sustrato es colocado en condiciones asépticas en las bandejas e incu - bad0 a una temperatura adecuada,

Para la elaboracidn de productos fermentados en los países ori-

entales se utiliza la bandeja; de igual forma a nivel industrial se-.

utilizan estas con el fondo agujerado en donde la temperatura y la - humedad son controladas (Cannel y Moo-Young, 1 9 8 0 ) .

El presente trabajo est6 enfocado a la evoluci6n en la produ---

cciBn de prote5sas Scidas por el método Koji sobre diversos sustra--

tos amiliiceos; la técnica de Koji se ha implementado en columnas de-

vidrio, empacadas con el sustrato inoculado. Cada una de las colum.

nas se encuentran conectadas a un humidificador, a trdvez del cual -

Y

I

Y

U

*

.

se hace circular aire para mantener un contenido de humedad en el - sustrato y remover el calor generado durante In fermentaci6n. Todo

este sistema se encuentra sumergido en un baño de agua a temperatu-

ra controlada (Raimbault et al., 1985).

Se dispone para este trabajo de un2 cepa dc Aspergillus Niger-

lliperproductora de proteasa Bcida. Dicha cepa fue obteniga en'los-

laboratorios de Biotecnología de la Universite. de Technologie de - - Compiegne, desarrollada por el Doctor Chow y nroduce'una proteasa - cuyos ó?timos son: pH de 2.5 y temperatura de 47"grados. centígra"

dos.

1

7 U

OBJETIVO: E l obje t ivo de es te proyecto c s c l c s t u d i o clc la Evoluciiin . m en l a p r o d u c c l ó n de proteasas ficldas por Aspergillus Niger

sobre d is t intos sust ra tos r~mil5ceos .

m

METAS : i I . lmplementaci5n de l a t é c n i c a Koj i para la producci6n de-

Proteasa Acida en e l l a b o r a t o r i o ,

11. ProducclBn de Proteasa 5cida en fermentadores tubulares- s o b r e d i f e r e n t e s s b s t r a t o s a111ilaccos.

111. Evaluación de la Producclón de Proteasa de l o s s u s t r a t o s amllaceos.

n

2

W 01

ii >

I.

3

-. " "I

9

YARAME'lRO S ,

CONSTANTES:

Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ~ . b 3 3 0 C pM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . * . . . . * . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ~ . . S . S

Flujo de aire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . , . . . . . . . . . . . . . . . . ~ . . . . , 4 I/min. Tamaño de partícula del sustrato. sus trato. malla 10/20

Cantidad empacada por columna ...................,.......~..lO gr.

Hbmedad . . . . . . . . . . , . . . . . . . . . . . . . , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . e . . . . . * e 5 ~ ~

Inoculo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . , . . . . . . . . . . . . . . . e , , , . . , , l X l ~ 8 esp.

VARIABLES :

1'iempo de fermentaci6n ...................................... 24,36 y 48Hr. Sustratos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . , , . , ,a~~~~, soya -

trigo, mafz - ' quebrado, sor go y salvador de trigo,

. .l.l .11...-. - UI . . ....... I__*_,""".7

10

L

I

1

SISTEMA DE FERMENTACION - Columnas de vidrio (long. 20 cm., diam. lnt. a 2 cm.) humidlficadores de vidrio (long. I O cm., diam, int. Z cm) peseya (60X35X45 cm,) control de temperatura Haake e52 termometro vslvulas de bronce rotametro Cole-l'almer '

regulador de f l u j o Collhose Pneumatics flltro para. aire Collhose Pneumatics tapones de hule no. 4

ACUNDlCIUNAMIENTO UE SUSTIUTU Y CEPA

tamices malla 10 y 20 licuadora balanza granatarla esp5tulas pinetas de 5 ml. nacroscopio cgmara de Neubauer incubadora autoclave

- ANALlSIS

matraces hrlenmeyer de 1 0 0 0 , 500 v 2 5 0 ml, 11 atorados de .IO0 ml.

probetas de 25U, lU0 y 2 5 ml. cristalizadores pipetas de 25,lO y 1 ml. tubos de ensaye incubadora

. . "_ - 11

parrilla con agitacl6n msgn6tica espectrofot6metro Spectronic mini 20 potenci6mentro Corning termobalanza balanza analitlca macerador Ultraturrax balanza granataria

SUSTANCIAS.

HCL CH3COONa Nazco3

N aOH 6CidO tricloroacetico reactlvo de Folin Ciocalteau caselna tirosina agua destilada

METODO. 12

. -Preparacl6n del sustrato

~.-~etermlnar el % de humedad (Hl) a una.muestra de 10 gr. de Cada s u s trato.

2.-A otra fracclBn de I O gr agregar un volumen (le solucl6n 0.01 N - de HCL (AL), para. obtener un pll de 5.5

3.-Esterilizar a 15 lb, por 15 min. 4.-Agregar un volumen de suzpensión de.es.poras (El),, t a l que la SE

ma Al + Al + El dé un su% d e humedad final.. s.-~omogeinizar la mezc1.a y dejar reposar 2 U min. 6.-Empacar la columna.

-Preparaci6n de la columna

1.- Colocal. un algoddn y un circulo de papel filtro en el fondo de la columna.

2. - Tapar la colcmna con algodón. 3 . - Marcarla 4.- ksterilizar a 1 5 lb. por 15 min.

-Tratamiento de las muestras

1.- Sacar el product0 y pesar 3 gr. 2.- diluir 1/10 con agua destilada 3.- Homogeinlzar en ultraturrax por 2 min. 4 . - tiuardar en refrigeración.

-

13 ANALISIS DE ACTIVIDAD PROTEASICA:

1, - Tomar 3 g r . de s u s t r a t o y hacer una d i l u c i ó n 1 : l O en agua 2 , - Coloc.ar en un tubo de ensaye y Homogenizar en u l t r a t u r r a x 3 . - D e j a r p r e c i p i t a r 10 minutos 4 . - Tomar 1 m l . de sobrenadante. 5 . - Adic iocer 1 m l . de c a s e í n a a l 2%

6 . - Incubar l U minutos a 3 O o C 7 . - Adicionar 2 m l . de TCA 8 . - F i l t r a r con papel Whartman No. 2 9 . - Tomar 1 m l . de f i l t r a d o

l o . - Adicionar 5 m l . de Na2 Cug 0.4M. t i o i o 5 1 . - Adic ionar 1 IPI. de s o l u c l 6 n F o l l i n , d e j a r a 4OO.C

1 2 . - Leer en Spectronic: 20 a b60 nm.

MODIFICACION AL METODO:

3 , - Tomar 1 ml. de so luc l6n de case ina y aa i . c lonar 2 m l . de TCA ( t r i c l o r o a c e t i c o )

2.- P e r m i t i r l a c o a g u l a c i 6 n 3 . - Adic ionar 1 ml. de sobrenadante 4 , - D e j a r r e a c c i o n a r 1 O minutos 5.- F i l t r a r con papel Whartman No. 2

b. - Tomar I m ] . de t i l t r a d o .

d 7 . - A d l c i o n a r 5 m l . d e Nazco3 ( C a r b o n a t o de s o d l o ) u Q 4 M

8 . - A d i c i o n a r lml. d e s o l u c i 6 n d e f o l l i n .

u 9 . - Leer a 66U n m . c

i

T r a t a m i e n t o de la curva s t d . d e t i r o s i n a I

Tu bo S o l . Sta. T l r o s i n a 1 m l 1

10

1 . - Tomar 1 m l . de cada tubo 2 . - A . d i c i o n a r 1 m l . de agua 3 , - A d i c i o n a r 2 m l . (le TCA 4 . - Tomar I m l . 5 . - A d i c i o n a r 5 m l . d e Sol. de Nazco3 6 . - A d i c i o n a r 1 ml. de SOI. F o l l i n (1 :2 J

7 . - Leer a 660 nm.

10 . o 8 *

6 *

6

2 Q

O 18,l

1 4

,

15

E S Q U E M A D E T R A B A J O

FERMENTACION SUSTRATO

ARROZ

TR I GO

SOYA

FERMEN'IACION SUSTRATO

1

2

3

SALVADO DE

TRIGO

MAIZ QuEBKADu sORtiO

MUESTRE0 PARA CADA FERMENTACION

NO. DL COLUMNA 'I IEMPO (HRS. )

O

2 4 36

4 8

COLUMNAS

' 4 4

4,

COLUMNAS

4

4

4

PARAMETROS

. . - ~._. - 16

-ANALISIS.

ACTIVIDAD PROTEASICA

-CRONOGRAMA

ACTIVIDAD

A) INOCULACION

B) MJESTREO

C) ANALISIS

DIA . -

1

2 , 3

4

1 7 d CALCULOS

LOS c % l c u l o s r e a l i z a d o s de l a s diferentes csntidades se basar6n en las s iguientes ecuaciones .

i

-SUSTRATO SECO: I

A=B ( O . 5 )

DONDE B=Sustrato que se desea tener un 5 0 % de humedad, un pH de 5,s y

1 X 1 O ESPORAS G R . MAT. SECA

-SUSTRATO FRESCO A EMPLEAR:

C=B (l+D)

DONDE

D= % de húmedad d e l s u s t r a t o I

í

-CANTIDAD TE AGUA ADICIONAL TOTAL PARA OBTENER UN 5 0 % DE HUMEDAD: I I

F = ( 6 ) B / 1 0

DONDE :

G= Cántidad de HCL 0 , O l N necesar io p a r a l l e v a r a un pH de 5 . 5 a 10 g r . de s u s t r a t o .

18

TAMAN0 DEL INOCULO:

H=I(lX108)/J(SOX104)K

DONDE :

K = D i l u c l 6 n

J = E s p o r a s c o r , t a d a s en c a d a c u a d r o

AJUSTE DE LA HUMEDAD AL 509,

E=F+kl+L

DONDE : L = C g n t l d a d d e a g u a n e c e s a r i a p a r a a j u s t a r a l 5 0 9

. .

.-"" -.__...,. ".- ...._... '"

R E S U L T A D O S .

FERMENTACION NO.l

CONDICIONES DE FERMBNTACION:

ESPORAS : I S O ( 2 S X I 0 4 ) ( 1 0 ) = 3 . 7 S X 1 0 8

Los siguientes cSlculos estan básados en 40gr. de sustrato ( a r r o z , soya - '

trigo) e indicar la cántidad de sustrato seco, sustrato. fresco, H20 t o t a l HCL en diferentes concentraciones, in6culo para sustrato y y,O a aditio-- nar para ajuste.

SUSTRATO SECO SIJSTRATO FRESCO NOTA 0 . 0 9 ES LA HUMEDAD DEL VOLUMEN DE H20; VOLUMEN DE I-ICL; TAMARO DEL INOCULO;

H20 PARA AJUSTAR HUMEDAD

ARROZ

X = 4 0 ( 0 . 5 ) = 2 0 g r . Y = 2 0 ( 1 + 0 . 0 9 ) = 2 1 . 7 g r .

ARROZ DEL 9 % H 2 0 = 4 0 - 2 . 1 . 7 = 1 8 . 3 m l ,

tlCL= ( 2 , O ) ( 4 0 ) / 10=8ml, T 1 = 2 0 ~ 1 X l o 8 ~ / 1 5 0 (25x104) ( 1 0 ) = 5 , 3 3 m l . H 2 0 T = 1 8 . 3 - 1 0 - 5 . 3 3 = 2 . 9 7 ml.

" - - 20

FEKMENTAC ION NO, 2

CONDICIONES LA FERMENTACION:

ESPORAS : 25O(25XlO4) (1O)=6.25XlO8 ESPORAS/ml.

SUSTRATO SECO SUSTRATO FRESCO VOLLIMEN UE f-1 ,O VOLUMEN DE HCL 'I'AMANO DEL lNOCULO H20 PARA AJUSTAR HUPIEDAD

I

SUS'I'RA'I'O SECO SUSTRATO FRESCO VOLUMEN DE H20 VULUMEN DE HCL TAMANU DEL INUCULO H20 PARA AJUSTAR HUMEDAD

SUSTRAI'O SECO SUSTRATO FRESCO VOLUMEN DE H20 VOLUMEN DE HCL TAMARO DEL INOCULO H20 PARA AJUSTAR HUMEDAD

ARROZ

x=4u(O.S)=20grs.. ~=Zu(I+O.u9)=21 .7gr. H20=4.0-21.7gr.=r8.3m1. HCL=2,0(40)/10=8ml, T2=20~1Xlo8)/2500(25xlo4)=3,20ml, ~~OT=18.3-3.20-8ml.=7.lml.

TRIGO

x=4~(0,5)=20gr. Y=L0(1+0.09)=21.7gr. H20=40-21.7=18.3ml. HLL=L.5~40)/~U=~Um~, TI=LO(IXlU )/25UOXlO )=5.33ml. HZOT=18.3-~10-5,33=Z.97ml.

8 4

SOYA

X=40(0,5)=20grs, Y=20(1+O.U75)=21 .Sgrs. H20=40-21.5=18.S HCL=3(40)/10=12ml. TI=20(1X108)/2SOO(25X104)=5.~3ml. H20T=18.3-12-5.33=0.97ml.

21

FERMENTACION N O . 3

C O N D I C I O N E S DE LA FERMENTACION:

E S P O R A S :

1 6 0 ( 2 5 X 1 O 4 ) ( 1 0 ) = 4 , 0 X 1 0 8

SUSTRATO SECO SUST!!.Ll'O FRESCO VOLUMEN DE H20 VOLUMEN DE HCL TAMARO DEL 1 NOCULO H z O PARA AJUSTAR MlJMEDAD

SUSTRATO SECO SUSTRATO FRESCO VOLUMkN DE 1I2O VULUMEN UE HCL TAMARO DEL I NOCULO lizo PARA AJUSTAR HUMEDAD

SUSTRATO SECO SUST.RAT0 FRESCO VOLUMEN 1IE H 2 U VOLUMEN DE I-ICL

TAMAiJO DEL INOCULO H20 PARA A J U S T A R HUMEUAJI

ARI<OZ . . X = 4 0 ( 0 , 5 ) = 2 0 g r s . Y = 2 0 ( 1 + 0 . 0 9 ) = ? 1 . 7 g r s . 1 I 2 1 1 = 4 O - 3 1 . 7 = 1 8 . 3 m l , t-ICL=2 .O (413) / 1 0 = 8 m l , T I : 2 0 ( 1 X 1 0 ) / l h 0 0 ( 2 5 X 1 0 ) = 5 . 0 m l . H O T = l 8 . 3 - 8 - 5 . 0 = 5 . 3 m l .

8 4

2

X = 4 ~ ( 0 . 5 ) = 2 0 g r : , Y = 2 ~ ( 1 + 0 . 0 ! ) ) = 2 1 . 7 g r s ,

1 1 2 0 = 4 0 - 2 1 . 7 = 1 8 . 3 m l .

T I = 2 0 ( 1 X 1 0 ) 1 6 0 0 ( 2 5 X 1 0 ) = 5 . 0 ml. 8 4

H 2 0 T = : 1 8 . 3 - 1 O - s . O = 3 . 3 ml.

t - ¡ c L = 2 5 [ 4 0 J / l U = l U ml.

SOYA

X = 4 0 ( ~ . 5 ) = 2 u g r s . Y = 2 0 ( 1 + 0 . u 7 5 ~ = 2 1 , 5 q r s , 1-1 U = 4 0 - 2 1 . 5 = 1 8 . 5 ml.

IIC1,=3, O ( 4 0 ) / 1 0 = 1 2 m l , T I = 2 0 [ l X ~ 0 8 ~ / 2 5 0 0 ( ~ 5 X 1 0 4 J=5.33 ml, H 2 0 T = 1 8 . 3 = 1 2 - 5 . 3 3 = 0 . 9 7 0 ml.

2

2 2 FERhlIiNTAC ION N O , 4

CONDICIONES DE LA FERNENTACION

CONTEO : 2 1 0 ( 2 5 X 1 0 ) 1 0 = 5 . 2 5 X l U 4 8

SUSTIIATU SECO SUS'I'I4ATU FRESCO VOLUbtkN DL: H 2 U

VOLUMEN DE t l C L 10. U 1 )

TAMARU DEL INOCULO 1I2O PAPA AJUSTAR HuMEuAD

SUSTPATO SECU SUSTKATO FRkSCO

VOLUMhN Ilk I I Z O VOLUMEN DE I-ICI.

TAMANO DEL 1NOCULO 1120 PARA AJUSTAR HUMEUAD

SUSTI'ATU SECO

SUSTKATO FRESCO VULUNEN UE 1H20 VOLUMEN DE l l C L

'I'AMANO DEL l N O C U L U

H 2 0 PARA AJUSTAR HUMEDAD

X = 4 0 ( C . 5 ) = 2 0 g r . Y.=20 (1 + U , !)9) =2 1 . 7 p r s , 1 I 2 ~ ~ = 4 0 - 2 1 . 7 = I 8 . 3 1 1 C 1 , = 2 . ~ ~ ( . l u ) / 1 0 = n n l l ; ~ ~ ~ I = 2 0 ( 1 X l u y ) / 2 1 u O ( ~ S X l X l u 4 )=3,80m1. H20T=l8.3-8-3.YO=6.5n~1,

SOYA

n o a n

O

rr)

O O w

PD t

o I$

U

O

1 1 1 1

w c)

z O u 3 A O E w

/

O

* O

. .

5 . 5

5 . 0

P H 4 . 0

3 . 0

e .O

1 . 0

O

- FERNEWTACION 1

- FEIIYEUTACIOW L - FfUYEWTACIOW b - C f mYEU TACION 4

O

- O O n w

t w

O

o b ü

I

m 0 a m

O

t

O n

O Y

t u

O

X a

- f

/

/ i

O

t

\ \ '\

1.

O

n O

(Y

O

O

t

2 . 0

1 . 5

n

O

' 0 o a

1 a \ 1 . 0 L

0 . 6

O

3 . 5

3 . 0

2 . 5

2 . 0

I . S

I . o

0 . 6

O

NITROGENQ SOLUBLE EN TRIGO

2 4 36

- FERYENTACION I . "FERMENTACION 3 f (hora81

-- FERYENTACION 2 - FERYENTACION 4

.............. I."Y.. .. , . . . . . . . . . . ill.""".."-^^ -

NITROGEN0 S O L U B L E EN S O Y A

2 . 0

1 . o

0 . 5

o . I

O . O 6

o . O 0 8

O

- FERYENTACIOW I

8 4 36

-FE RYENTACION 3 T f h o t o r )

- FERYCNTACION 2 - FERYCNTACION 4

3 . 6 3 . 5

8 . 0

2 . 5

2 . 0

I . 5

I . o

0 . 8

o . I o . o *

O

NITROGEN0 SOLUBLE EN ARROZ, TRIGO Y S O Y A

/ /i

i

2 4

- T R I O 0 - S O V I - A R q O Z

\, '\

\

\

\

.FERMENTAGION I

2 . o

1 . 5

I . o

0 . 8

o . I * . O S

0 . 0 I

TRIGO Y SOYA

/ J

O

- A R R O Z - SOYA - T R I O 0

;" . " -

\..

2 4

FERMENTACIOM 2

O # O 0

0.250

o . 200

o . I 5 0

o . 100

060

010

, "

/ o . O O P

O

- T R I O 0 - S O Y A - A R R O Z

I

..""

25 w

b- z

\

\ 7

\ \ \

\ \ \

o t

?-*Y, . . . " - O - o N 7 9 O 0 0

R

Y

*

a c w

.I ..

O *$Q

o .so

O. 40

0 .30

0.20

o . I O

o .O@

o . O 8

O . O 7

0.06

O .O5

0.04

0.03

0 6 02

0.01

0 . 0 0 5

o .ooooe

UYIDAQES DE ACTIVIDAD PROTEA@lCA EW ARROZ

í

E

,/“

/ dl’ / \

/‘

/ // / /

, \

O 2 4 36 46

T ( h o r a 8 1

- FERM((JfAClOW I - FERYENTACION 3

- F Q R Y E N W W 2 - FERULNTACIOW 4

, . . .

.

-91

,

\ \.,

I

'\ '\ I;$o

1.09 i

I

,

II

D .

1 '0.30

.. . .

I. .

. . . ..

ili( . . " -

I '

1 .op

'1

c

9 m a a

m t i=

i r

'1

'I Y

?

2

QA. q

0 . 0 S

L

"

"

,/

/ . . . I ,

. " . """ __.~_ . ,." .... .. .. . . .. . ." I . ,.

c "

0 . Q

o * o

Q . 9 '

o . 2

o . I

o . O $

@ * O !

cs o

/ "" _" ""--" _ .

, . . . I o 2 4

, ,. , .

.

23

FERMENTACION NO. 5

CONDICIONES DE FERMENTACION

ESPORAS :

2O0(25x1O4) (10)=5.0X10~

SORGO

SUSTRATO SECO : SUS'lRA'lO FKESCO : VOLUMEN DE H20: VULUMEN UE HCL: TAElAmO DEL INOCULO : Hz@ PARA AJUSTAR HUhEUAD

SUSTRATO SECO: SUSTRATO FRESCO : VOLUMEN DE H2U : VULUMEN UE HCL: TMíARO DEL INOCULO: H20 P A W AJUSTAR HUFIEDAU:

X=4U(0,5)=20gr. Y=20(1+0.08)=21 . 6gr , . H20=40-21.6=18.4ml. I I

~CL=2.3(40)/10=9,2ml. TI=í!O(lklO )/2~00(25~10~,=4,0~1. 8

H20T=18.4-9.2-4.0=5.2rnl. , !

MAIZ QUEBRADO i

x=:40 (O, 5) =20gr, ~=:2O(~+U.0~)=21 . 7 g r , HZO=40-21.7=18.3ml, ~cL=2.4 (40)/10=9,6ml. TI=20(1Xlu~)/2~00(25X10 4 )=4,0ml. H20T=18,3-9.6-4.0=4.7ml.

2 4

SALVADO DE TRIGO

SUSTKATu SECO:

SUSTRATO FRESCO:

VOLUMEN DE H20:

VOLUMEN LIE HCL:

x = 4 0 ( O . S)=20gr.

~=20(1+O.u75)=21,5gr.

TAMARO DkL INOCULO: T I = 2 0 ( l X l o 8 ~ / 2 0 0 ~ ( 2 5 X l ~ 0 4 ~ = 4 . 0 m l .

H 2 0 PARA AJUSTAR HllMEUAD: H20T=~8.5-10-4=4.Sml.

"I

2 5

FERMENTACION NO, 6

CONDICIONES DE FERMENTACION

180 (25x1 04) (1 O) =4,5X'I O8

SORGO

SUSTRATO SECO: SUSTRATO FRESCO : VOLUMEN DE H 2 0 : VOLUMEN DE HCL: TAMANO DLL INOCULO: H20 P A R A AJUSTAR HUMEDAD:

X=40 (O. 5) =20gr. Y=2~(1+0.~8)=21,hgr, . H20=40-21-6=18.4ml. HCL=L.3(40)/lu=9,2ml, TI=20(1X10 )/180(,!5X10 )(10)=4.44ml, 8 4

€I20T=18.4-9.2-4,4=4.75

MAIZ QUEBRADO

SUS'lRAlO SECO : X=40(U.5)=2Ugr. SUSTRATO FRESCO: Y=zO(1+0.09)=21.7gr. VOLUMEN DE H20: M20=4u-?1.7=18.3ml. VULIJMEN DE HCL: HCL=2,4(4U)/I0=~,6ml. TAMARO DEL INOCULO: *rI=zO(lXlu )/18u(25X104) (10)=4,44ml. €izo PARA AJUSTAR HUMEDAD: H20T=18.3-9.6-4.44=4.26ml.

8

i

~~~ ~

SALVADO DE TRIGO

26

SUS'I'RAI'O SECO : X = 4 0 ( ~ . 5 ) = 2 u g r .

SUSTRATO FRESCO:

VULUMEN UE H z O : .H20=40-21.5=18,5 m l . ,

VULUMEN UE I-ICL: H C ~ = 2 . 5 ( 4 0 ) /lot10 ml,

TAMANO DEL INOCULO: TI=20 (1x10 ) / 1 8 0 ( 2 5 ~ 1 0 ~ ) ( 1 0 ) = 4 . 4 r n l . 8 - hl2O PARA AJUSTAR HUMEDAD: H Z u T = i 8 . 5 - I O - 4 . 4 = 4 . 1 ml.

FERMENTACION NO, 7

27

CONDICIONES DE FERMENTACION

ESPORAS :

Z I O ( Z S X I U ~ ) 1 1 O ) = 5 . 2 5 X 1 O 8

SORGO

SUSTRATO SECO:

SUSTRATO FRESCO:

VULUMEN UE H 2 0 :

VOLUbiEN DEs HCL:

TAMARO uEL 1NOcULu:

H20 PAKA AJUS'1P.K HUMLDAU:

SLhTRATO SECo :

SUS'I'RA'I'O FKEScO :

VULUMEN UE H20:

V O L L I W N DB HCL :

TAMARO DEL INOCULO:

H2u PARA AJUSTAR HUMEUAI):

y = 2 0 ( 1 + 0 . 0 8 ) = 2 1 . 6 g r .

H 2 0 = 4 0 - 2 1 . 6 = 1 8 . 4 ml,

H C L = ~ . 3 ( 4 0 ) / 1 0 ~ 9 . 2 m1

M A l Z QuEBKADU

x = 4 0 I(!, 5) =20gr.

~ ~ 0 = 4 0 - 2 1 , 7 = 1 8 . 3 ml.

T I = 2 0 ( 1 X l u ) ~ ( 2 1 0 ) ( 2 5 ~ 1 0 ~ ) ( l 0 ) = 3 , ~ ml. 8

- Ir

2 0

SALVADO DE TRIGO

i i

SUSTRATO SECO:

SUSTRATO FRESCO:

VOLUMEN DE H Z O :

VULUMEN uE I-ICL:

'I'AMANO UEL INOCULU:

H20 PARA AJUSTAR HUMEDAD:

y = 2 u ( 1 + 0 . u 7 5 ) = 2 1 J g r .

~ ~ 0 = 4 0 - 2 1 ; 5 = 1 8 . 5 m l .

' H C L = 2 . 5 ( 4 0 ) / 1 0 = 1 0 m l .

TI=20(1X1~~)/21'0(25X10~) 1 1 0 ) = 3 . 8 m l .

H 2 0 T = 1 8 . 5 - 1 0 - 3 - 8 = 4 . : ml,

I

FERMENTACION NO. 8

CONDICIONES UE FhRMkNTACIUN

ESPORAS :

1 7 0 ( 2 5 X 1 0 4 ) ( 1 0 ) = 4 . 2 5 X 1 0 H

' SORGO

SUSTRATO S E C O : SUSTRATO F R E S C O : VOLUMEN DE l 1 7 C l :

VOLUMEN m I I C L :

TAMAflO DEL INUClJLO :

H 2 0 PARA AJIJSTAH IIIJMEDAII :

X = 4 0 ( 0 . S) = 2 O g r . Y = 2 0 ( 1 + 0 . 0 ~ ) = 2 1 .O g r .

I I 0 = - 1 0 - 2 l . O= I H . 4 m1 , l l C L = 2 . 3 ( 4 0 ) 1 O=!>. 2 m1 , T I = 2 0 ( 1 X 1 0 ) / 1 7 0 ( 2 5 X 1 0 ) ( 1 U ) = 4 . 7 ml.

M 2 0 T = l X . 4 - ~ ~ . 7 - 4 . 7 = 4 , 5 m l .

2

8 4

Y A 1 2 QUEBI<ADO

29

SUSTRATO SECO : SUS'I'RA'I'O FKESCO : VOLUMEN 1)E 1I2O: VOLUMEN DL.; 1ICL:

'I'AMAÑO DEL T 'JOCULO : H20 PARA AJIIS'I'AR MIJMLDAU :

X=:40 ( O . 5 ) = ? 0 g r . Y=í!u(1+0.[1?)=21 . 7 g r .

f l , C l = 4 0 - 2 1 . 7 = 1 8 . 3 n i J .

I l l ; L = 2 , 4 ( 4 O ) 1 O=!>. 6m1 , T I = 2 0 ( 1 X 1 0 ' ) / ( 1 7 0 ) ( 2 5 x 1 0 ) ( 1 0 ) = 4 . 7 m l .

4 4

SU5TRATO SECU:

SUS'I'RA'I'O FRESCO :

V O L W l t N Dt H 2 0 :

30

SALVADO DE TRIGO

X=40 10.5) =20 gr. b

Y = 2 u ( l + O . u 7 5 ) = 2 1 . S g r .

~ ~ 0 = 4 0 - 2 1 . 5 = 1 8 . 5 ml.

VULUMEN UE HcL: H C L = ~ . S (40) 10-1 O m l .

H 2 0 PllR.4 AJUSTAR HUMEDAD: H 2 0 = 1 8 . 5 - 1 0 - 4 . 7 = 3 . 8 m l .

Y

1.30

1.10

0.7 S

0.60

0.25

O

O

CURVA P A T R O N

/” ,/

/’

/ O /’

,/’ /

O

/’ O

O

/

3.62

Y = 0.0 7924x+ 0.01952

r r0.9937

7.2 4 10.86 IC46 16.10 (MOIL 1

F E R M E N T A C I O N I

z O

i- U Q1

a

a a > 3 u

* - O t -

\ \ "

8

'\ \

a

"\ '..

n

S O z tu

2 O

(u

+ Q CDO m b - a

O 0

> L

x

? ? * u

1.30

1.18

0.70

0328

O. 33

O

C U R V A P A T R O N

' / /

o

," /""

O

,,/" O

/' ./ /"

I .' /"

O 3.62 7.2 4 IO. 86 14.4 8

( M O I L 1 Y = 0.07924 x +O.O1BU2 r ,=0.993 F E R M E N T A C I O N 3

,

- X 18.10

Y C U R V A P A T R O N

1.30

1.10

0.725

0.625

0.325

O

O

O

O

N‘ ,’ I ,..’

,, ”

,/’ /’

,

3.62

Y 8 0.01275~ t 0.04166 c 8 0.8931

, ’ o

Z24 10.86

F E R M E N T A C I O N 4

- x

2 O IBC t- U Q,

U 3) L a c)

* -

o '\,

\ '\..,,

\

0 ,

O

Q

O

2 O

X O

lrll k

Ei

a : W '

95 W tb

a

+ M

13 O

t a

a a

a

a > 3 o

t -

\

O

Q

O

\ \ \,

X

(P

2

X

2 O

k U e

a

U > K 3 c)

o (u

?

\ b

\ \

'\ \

O

".

'.. 9 '\

I

n O (Y

- o (Y z a,

O

Y)

o

n (c (u

o

/ \

! I

EVOLUCION DE PH EN MA12 QUEBRADO I

!

5 . 5

5 . 0

P H 4 . 0

3 . 0 -

2 . 0

1 . 0

O

I I

1

I

i

'... -1.. ._

" .- "_ \\

W

2 4 36 4 8

-. FERMENTACION I - FERMENTACION 2

- FERMENTACION 3

- FERMENTACION 4

T ( h o r o r )

P H

5 . 5

5 . O

4 . O

3 . 0

2 .o

I . o

O

EVOLUCION DE PH EN SALVADO DE TRIGO

2 4

- FERMENTACION I

- FERMENTACION 2 - FERMENTACION 3 - FERMENTACION 4

4 0

P H

5 . 5

5 . 0

4 . O

3 . 0

2 . 0

I . o

O

EVOLUCION DE PH €N SORGO

2 4

- FERMENTACION I - FERMENTACION 2

- FERMENTACION 3 - FERMENTACION 4

4 8

O

> J

u3 )..

O

o a

a

o a m K

W 3 o N

0

O m 2 W

a

I e W n 2 O c) 3 J O > W

-

I :i c - n o n n

O

4

L S

-0

m O

(Y

O -

n 0 O c O c

c c.

m w W Q

EVOLUCION DE PH 'EN SORGO, M A E QUEBRADO Y SALVADO DE TRIGO

s . S

s . o

P H 4 . O

3 . O '

2 . o

I . o

O 2 4

- - S O R O O - MA12 Q U E B R A D O - S A L V A D O D E TRIGO F E R M E N T A C I O N 6

PH

S . 8

s . 0

4 . 0

3 . 0 '

2 . 0

1 . 0

O 2 4 1 6 4 8

- S O R O O - MA12 OUEBRADO

- S A L V A D O DE TRIO0 FERMENTACION 7

T ( h o r a r )

I

EVOLUCION DE PH EN SORGO, M A E Q U E B R A D O Y SALVADO DE TRIGO

5 . 5

5 . 0

P H 4 . 0

3 . O

2 . 0

I . o

O

T 2 4

-- S O R Q O - M A l Z Q U E B R A D O - S A L V A D O D E T R I O 0 FERMENTACION 8

4 8

. TIEMPO DE HUMEOAO S US TRATO

FERMENTACKlh 50 O h A R R O Z

P. H. LECTURA NOR.

I ~~

24 HRS.

48 HRS.

36 HRS. CORRIDA NUMERO I

o HRS. I ! 1

24 HRS.

48 HRS. 36 HRS.

CORRIDA NUMERO 2

O HRS. :.- 1 24 HRS.

48 HRS. 36 HRS.

CORRIDA NUMERO 3

0 HRS.

3.57

5 .50 1 . 1 5 3.02

0.87 2 .SS 0.90

0.1 2

3.3 7

5.50

0.42 3.09 0.84 3.26 0.65

O.2QS

3.95

5 .so o. 85 4.0 I

0.4 5 4.05

0.5 6

0.21

24 MRS. CORRIDA NUMERO 4 36 HRS.

48 HRS. O HRS.

I- a30c I - I lltro

U mollyr On.Mot*O

LCTURA MOD. NlTROGENO So( CONC. A S CfflC.TlROSINA

87. I 905 3.87 I 8

82.6 S3 5.9726

I 14.1 65 3.87 I 8 o. I o 6 .8868 o. 200

0.2 I 0.605

0.480

0.2 I o

43.05

O. 504 4 1.418

7.0175 2 0.7 6

3.2 I 6 3 3.391 2 . 1198

I .7438 I 1.65306

2.2633 o. I 3 7 7

0.86 I 0 .06782 0.4 I S2

0 .02836

O. 44 0.35

0.7 7 o. 19

o. S

o. 3

O. 3 0.35

6.820166

O. 7635 1 o. 5058

I , I 2 3 8 5 ,4578

O. IOOS

2.1 6143 0 .004026

47.71 22

24.1 835 4 7 . 7 1 2 9 63.0070

2 8 . I 050 67.3207

4 . 5 7 5 6

O. 684 I

O. I 3 6 4 0

o.toe1 56 0.2101 16 O. 04302

0.954244 1.3464 I

J.bSOl4 I O. 4836 7

mwDAD Prn

0.077436 0.1 1945

0.0?743 6 0.004

0.042596 0.064326 o. I 40 as 0.01008

0.0020 I

0.002 I 6 3 0.00420 2 O.OOO09 8 5

0.09 I 5 0.86 2 I 0.95 42 0.01 aoe

! I L .

TIEMPO DE ZRMEN1M;fOl

SOLIDA

S U S T R A T O T R I G O

24 MRS. 36 HRS.

48 HRS. O HRS.

24 HRS. 36 HRS. 48 HRS.

O HRS.

CORRIDA NUMERO I

CORRIDA NUMERO 2

24 HRS. 36 HRS.

48 HRS. O HRS ,

24 HRS . 36 HRS . 48 HRS. O HRS.

CORRIDA NUMERO 3

CORRIDA NUMERO 4

HUMEDAD tEMPERATUR(I 50 Orb 3 t * C

P. H. LECTURA MOD LECTURA NOR.

3.63

o. I 9 o. 22 5.50 I . 2 4 1.80 3.8 O

o. 85 o. 90 3.8 5 1 .13 I . I 6

3.55

o. I 45 O. I 70 5.50 0.4 I 5 I .375 4.0 3 I .o5 1.375 3.75

O. 64 5 O. 7 5

3.1 2

1.15 1. I50 3.95

0.30 0.830 3.89 1.00 I .I30

5.50 0.3 3 0.450

3.1 5

0.1 o 0.30 5. 50 I .20 0.40 3.95 1 . 1 o 0.90 3.90 0.65 0.6 O

SONC.TIROSINI ___ ~-

117.317 87. 905

I28.67 I 3.735

48.1 7 75.58 2 9.16 0.942 98

12.b735 3 A3962

14.2665 3.2872

35.9482 67.3207 28.1 05091

4.5786

C ON C. A S NITROQENO SO

0.91 o 3.6463

e. I239 1.;700

25.93 06 0..0348 0.02 I780 0.274703i

4.3128 0.9634 22.5877 1.8 I I6 69 .O08 8 0.58

0.06578 o.olee5

I .3944 2.6564

1.6468 1.2932

0.654 I 12.4188 43.791 3 12.4168

0.24747 O. O 7079

0.2863 0.06574

0.718964 1.3464 I 4 O.a'e2l 0.09 I8

~ ~~~ -

0.0 19 4 O. I 82478 0.5 I 8 6 0.00043 4 7

0.08625 0.45 I 6 3 4 1.380 I 0.00 I 3 7

0.02788 0.010782 0.28533 0.02886

0.013082 0.02692 8 0.875826 0.0269

TIEMPO M . S U S T R A T O : FERMENT#CK)IY S O Y A

SOLIDA

24 HRS.

48 HRS. 36 HRS.

CORRIDA NUMERO I

o HRS.

24 HRS.

48 HRS. 36 HRS.

CORRIDA NUMERO 2

O HRS.

24 HRS.

48 HRS. 36 HRS.

CORRIDA NUMERO 3

O HRS.

2 4 HRS. CORRIDA NUMERO 4 36 HRS . . 48 HRS.

O HRS.

I P. H. LECTURA NOR.

4 . 7 5 I . I O 4 .4 3 I . 3 0

O . 4 5 5 . 5 0 1 . 1 5 4 . S ?

4 . 4 5 4.40 4 . 5 0 5 . 5 0

4.3 I 4.231 4.63 5 . 5 0

~

I .485 1.350 I .378

0.850

1,145 I . I5

I .I5 O.b9

~

4.35 4.1 5

o .S5

O -60 5.50 I 30 4.25 o .S5

~-

HUMEDAD 50 %

ECTURA MOO

0.45 0.30 0.5 O

0.1 6 ~

1.325 1.350 I .375 0.710

I .I3 I .I4 1-14 O .S6

O .70 0.80 0.95 0.50

~ ~~

45.8818 30. I323 51.1400 I I .45 20

83 .9900 7 I S200 87.bl00 5. 07a0

14.01 4 I 14.2866 14.2666 6. m60 -

61.3 200 59.4160 71.2420 35.9482

TEMPERATlSA 33 .C J l mol Tyr

Gr.. Mat Soca

CONC. A S NlfROG€NOSO

8 7. 905 0.60264 6 72.849 0.0 I 7637

2 1.340 I .o22 80 o 66.807 -

10.5263 24.41 52

1.8798

0.10146 0.9064 I .S502 - I .4b84

3.16 I2 0.2 ? 8 4.2970 0.2 26

0.00314 0.157406 0.200 6 .O630

1

16.34000 1.7464 8.49120 1.18952

24.18360 0.71896 4.57S60 I ,4t404

-. "

HUMEDAD SUSTRATO

ACTIVIDAD PROl

0.2 I O S 0.4883 - 0.016 I 2

0.63224 oass40 1.21260 0.1 3692

0.32680 0.1 6890 0ue367 0.091 50

TIEMPO DE ERMENTlLCOI

-~

24 HRS.

36 HRS. 48 HRS.

O HRS.

24 MRS. 36 MRS. 48 HRS.

O HRS.

24 HRS. 36 HRS. 48 HRS.

O HRS.

24 HRS . '36 HRS. 48HRS.

O HRS.

S U S T R A T O : S O R G O

TEMPERATW I 33oc

1 P.H. ~

3.75 CORRIDA NUMERO I 3.00

5.50

2.93

$

3.92 CORRIDA NUMERO 2

3. I O 3.15

5.50

4.10 C O R R I D A NUMERO 3

2.95 3.70

5 .SO

3.60 C O R R I D A NUMERO 4

5.50 3.1 O

2.90

.ECTURA MOD. ~ ~~

o. I 5

0.35 0.90

o. I o

0.30 0.55 0.80 0.07

O. I6 0.40 0.65 0.08

0.2 5 0.60 0.98 0.0 7

.ECTURA NOR.

0.2 S

0.60 1 . 1

0.1 7

- lL mol litro

CONC.TYK)SMA

6.6929 22.440 65.74 2.7S59

CONC. A 8

0.4960

2.6220 1.0133 0.8 937

0.40 O. 75 I .O o. I5

0.35 0.60 I .20 o. I 5

0.30 0.80 o. 90 o. I5

I 8 .S00 38. I 88 57.87

1 .e685

7.480 26.3 77 46.06

1.1811

14.567 42.126 6 9 .685

0.3937

2.1 S59 10.629

10.629 1.181 I

9.8425 10.629 38.1 88

0.3937

10.62 O

1.1811

ITRWXNO SOLACTlVDAO PROl

o. I 3 0.00992

9.44 88

0.:088 I I 8 0.038266 I S 1.48 0.04624

0.007874

0.'170

0.02362 0.0363 0.2 I258 1.1574 0.21 SS8 0.76370 0.043 I I8

o. I496

0,007874 0.0236 0.76376 0.92 I2 0.21288 0.82154 o. 10685

0.'3 I34 0.84252 0.2 I8 68

0.00787 0.02362

1 CTMRAO PR

TIEMPO OE S U S T R A T O :ERMENTAC SALVADO DE TR IGO

SOLIDA

HUMEDAD 50 orb

P. H.

TEMPERATURl

- ll mol lltro

:ONC.TIROSINA C O N C. A S

2 8 .940

52 .O500 32.84s

52.0500 29.000 63.5800 36.685

13.6075

UITROGENO SU I I I

0.60

I , 35 I . I O

1.15

0.40

0.50 O. 40

0.4 5

0.57880

0.73 376 0.58~000

0.65686

O HRS. CORRIDA NUMERO I

24 HRS. 36 HRS. 4 8 HRS.

0.272 I S 1.27160 1.04100

1.04100

5 .so 4 . 8 5 4 .65 4 .70

CORRIDA NUMERO 2 0.42050 0.964256 o. 5800 O 0

0.733700

O HRS. 24 HRS. 36 HRS. 48 HRSr

O HRS. 24 HRS. 36 HRS. 48 HRS.

5 . 5 0 4 . 6 0 4 . 3 5 4 .40

S . s o 4 . 9 3

4 .51 4 .70

o. 8s 1.20 I .o0 1. I O

O. 75 I .30

0.90 I .o5

2 I .o20 48.2 I 2 8 29.00 2 7 36 A86 O

2 I .o200 63.5800

44.37 O 8 52.050 O

25.1080 40.5288 44.37oa 36.6850

I 7.4400 32.8447

21.3 16734 25,160750

0.502 1779 0.8 I05000 0.8874160 0.7337000

0.348803

0.426300 0.603200

0.5 o 0.6 5 0.4 O

0.50

0.50

0.85

0.6 O 0.70

CORRIDA NUMERO 3 0.420500 I ,27 1600

O. 807400 I e041000

0.60

1.30 0.90

1.10

0.55

0.70 0.55

0.60

2. I02700 44,370800 25. I60750

36,686700

0.497200 1.041 O00

b.8lOSOO

0.087400

O HRS. CORRIDA NUMERO 4 24 HRS. 36 HRS. “4.35

48 HRS.

2 4.860 O

52.0500 40.5990

44.3708 -

0.0 4 2050

0.8874 I6 0.5032 Id 0.73 3734

I

S U S T R A T O : M A 1 2 O U E B R A D O

24 HRS. 36 HRS. 48 HRS. o HRS;

CORRIDA NUMERO I

24 HRB. 36 HRS. 48 nRS.

O HRS.

24 MRS. 36 HRS. 48 HRS.

O HRS.

24 HRS. 36 HRS. 48 MRS.

O HRS.

CORRIDA NUMERO 2

CORRIDA NUMERO 3

CORRIDA NUMERO 4

HUM E DAD 50 orb

P. H.

5.5

5.5

5.5

5.5

ECTURA NOR. I LECTURA MOO.ICONC.TIROSINA I 0.80 '

I 4.62 b 8 0.2 7 5 0.40 16.5750 0.300 0.4 5 6.8406 0.1 75

0.1 5 3.72 24 0.1 36

umdiyr olr. Motkc0

CONC. A S 80C.KTNI)o PRO1 NITR00ENO

2.9465 O. I 3 6 8

0.06803 I 4 0.292576 2.94 6 5 0.087872 0.33 I56 4.8936 0.058936

0.0744

0.3 5

0.09 o. I 5 0.1 5 0.2 5 0.20 0.225 o. I o

O. 2 70

0.160 o. I 90

0.1 25 O. 250 0.1 50 O.2SO 0. l25

o. 20

o.os5 O. I8 O

o. I25 0 .250 O. I75 O, 28Q 0.07s

o. 999 5 8.76 76 4.8936 O. 2 207

2.94667 4.8936 2.0463

0.990 53

6.8406 2.9465

12.681 776 0 .2636 0.01990 2.0465752 0.999532 7

0.0589a O.I?5752

0.0044 0.0044 I43 0.2207 0.0 I e @BO( 0.0978 7

4.50 42 0.090084 0.058 9 0.009532 0.1eoo06 o . o o n 7 2 2.9465732

0.0 04 4 I 0.01 99 0.2207 I

0.0589 0.0S893

1.3 889 0.001 1 78 0.06893 2.9465 0.002766 O. I 3 68 12

NITROGEN0 SOLUBLE EN SORGO

2 .o

I . S

1 .0

0 . 5

o . I

0 . 0 s

o . 0 0 s

i

I

I I ! I

O 2 4 3 6

- FERMENTACION I - FERMENTACION 3 - _ T ( h o r a s 1

- FERMENTACION 2 - FERMENTACION 4

4 8

NITROGEN0 SOLUBLE EN MAIZ QUEBRADO

O . 330

O. 300

o. 250

o. 200

o. 150

o. 100

0 .050 O. 040

0.0 30 o. 020 0.010 0 . 0 0 2 t " I

O 24 36

\ \

'\ 'x.

- F E R M E N T A C I O N I - F E R M E N T A C I O N 3 - F E R M E N T A C I O N 2 - F E R M E N T A C I O N 4

T (horor)

48

w o O o > J

v)

a

. a

O z W c3 O e I- 2

\

- 3 -.

QD f

CD m

Q N

O

I

NITROGEN0 SOLUBLE EN SORGO, M A E QUEBRADO * Y SALVADO DE TRIGO

1 . 5

O u o n

c

I - O . 5 O

o. I 0.0 P

O 24

- S A L V A D O DE T R I O 0 - M A l Z Q U E B R A D O S O R O O

36

T ( h o r a e )

FERMENTACION S

4 0

I . 2 0

I . I O

o . IO

o . os 0 . 0 1 o . O 0 2

NITROGEN0 SOLUBLE EN SORGO, MAlZ QUEBRADO Y SALVADO DE TRIGO

,/

O

- S O R G O - M A 1 2 Q U E B R A D O - S A L V A D O .DE T R I O O

/

2 4 36

T ( h o r a s )

FERMENTACION 6

4 8

u O

a II)

NITROGEN0 SOLUBLE EN MAIZ QUEBRADO, SORGO

Y SALVADO DE TRIGO

1. S

1 . 0

Y

O . 5

o . I 0 . 0 2

O

-- S A L V A D O D E T R I O 0 - M A l Z Q U E B R A D O - S O R B O

2 4 4 8

FERMENTACION 7

1.20

1. IO

I :o0

o. 9

O. 8

O. 7

O .6

o. S

0 .4

0.3

o. 2

o . 1

o .os

o . O 0 2 o . o I

UTROGENO SOLUBLE EN SORGO, YAIZ//!.

,/

O

- S A L V A D O O€ TRIGO - MA12 QUEBRAOO - S O R G O

2 4 4 8

FERMENTACION 8

o. 2 50

o. 200

o . I 5 0

0.106

0.080

0.0 10 0 . 0 0 S 0 . 0 0 1

UNIDADES D E ACTIVIDAD PROTEASlCA EN MAIZ QUEBRADO

J

\ j\

O 24 3 6

- FERMENTA.CION I - FERMENTACION 3 - FERMENTACION 2 - FERMENTACION 4

T ( h o r a s )

1 . 3

I . 2

I . o

o . 5

o. I 0 . 0 5

O

UNIDADES DE ACTIVIDAD PROTEASICA EN SALVADO DE TRIGO

,/

I ,

'. \ ' .,

\ / 7

O 2 4 36 46

- FERMENTACION I -FERMENTAClON 3 - FE RMENTACION 2 - FERYENTACIOW 4

1 ( h o r a s 1

. . '"

-. ,2qt?q

t

UNIDADES DE- ACTIVIDAD PROTEASICA EN SORGO, MAIZ QUEBRADO Y SALVADO

DE TRIGO

I . 3

I ..2

1. I

1. o

o . 9

0 . 0

O . ?

0 . 6

0 . 5

0 . 4

0 . 3

o . 2

o; I

o. o5 0 . 0 I

O

/

,/ 1

A- i

, /

í

-- S O R O O -SALVADO DE TRIGO - YA12 QUEBRADO

2 4

FERMENTACION 5

48

0.9

O. 8

O.?

O. 6

o. S

0.4

O. 3

0.2

o. I

UNIDADES DE ACTIVIDAD PROTEASICA EN SORGO, MA12 QUEBRADO Y SALVADO

DE TRIGO b

/ /“ /’

,/

GF

/

O

- S O R G O

- S A L V A D O D E T R I G O

M A 1 2 Q U E B R A D O

2 4

FERMENTACION 6

4 8

“

Y ”-.””-

0 . 8 O

O. 7 0

0 . 6 0

I Q c -

0.5 o

0 . 4 0

0 . 3 0

0 . 2 0

UNIDADES DE ACTIVIDAD PROTEASICA EN SORGO, MAIZ QUEBRADO Y SALVADO

DE TRIGO

/ , / I'

,/ /' ,/'

b . "

\ /

i )I

0.1 o

0 . 0 5

0 . 0 I o . o o s

O 2 4 3 6 4 0

- S O R G O

- S A L V A D O DE T R I G O

- M A I Z Q U E B R A D O

F E R M E N T A C I O N 7

T ( h o r a s 1

0 .90

L.

O Y o

O L.

L o O 31

O. 8 0

0.70

O. 6 O

0.5 o

O. 4 0

O. 30

0.20

o. I o

o. o5

o . o I 0 . 0 0 5 0 . 0 0 1

UNIDADES DE ACftVIDAD PROTEMICA EN SORGO, MA12 QUEBRADO Y SALVADO

I

DE TRIGO

/ /

/ i i

/

i / i

O 2 4

- S O R G O - S A L V A D O . D E T R I G O - M A 1 2 Q U E B R A D O

\

/’ /

/’

3 6

T t h o r a r )

48

FERMENTACION 8

-. . .."A"

31

DISCUSION UE RESULTADOS

. - L a .implementación del método Soji sobre tolumnas empacadoras en

e l 1 a b o r a . t o r i o t u e s a t i s f a c t o r i o , d e b i d o a l f á c i l manejo del s istema

e n e l que a pesar de t r a t a r s e de un c u l t l v o s 6 1 i d 0 , l o s m i c r o o r g a n i s - mos tuvieron un buen d e s a r r o l l o .

La evolucidn en l a Froaucción de proteasas 5c idas a n i v e l de l a - borator io sobre d . iversos sustratos amilaceos reDorta escasa informa-

c i ó n s i n embargo l a prclduccidn a c t u a l de proteasas s e l l e v a a cabo -

sobre soya y salvado de t r i g o , e s d e c i r s u s t r a t o s cor. un a l t o c o n t e -

n ido prote ico ; l o que j u s t i i i c a l a mayor producclSn de proteasas, no

a s í en s u s t r a t o s cor; una mayor cantldad de Elmldones como e l a r r o z , -

y e l s o r g o , que los hace adecuados en l a produccio'n de ami lasas .

E l t r i g o posee un mayor contenido proteico que el arroz y e l s o r - g o , pero no a s í con e l Salvad0 de t r l g o y l a s o y a , dando p o r r e s u l t a -

do upa produccl6n de prote5sas 5cidas intermedia.

32

En estudios que deban realizarse posteriormente ser5 posible

determinar el tiempo óptimo de producci6n en sustratos tales como

el salvado de trigo y la soya y seleccionar el sustrato adecuado-

y su tiempo optimo de producci6n de proteasas’áciaas.

3 3

. CONCLUSIONES :

1 . - Es p o s i b l e l a r e a l i z a c i ó n d e l m4todo K o j i sobre columnas empacadas b

c? nive l de laborator io .

2.- E l salvado de t r i g o e s e l s u s t r a t o con e l que se obtlene una mayor

producción de proteSSas Scidas, d. i f lere en 0 . 4 3 unldades con res . - -

p e c t o a l t r i g o er? promedio a l a s 4 8 Hrs. , dicnos resultados sugie- i

ren tomar en cuenta diversos factores, dentro de l o s c u a l e s e l f a c - tor cos to en condiciones diferentes sera determinante en su s e l e c -

c ión.

3 . - Los sustratos sorgo, y arroz p o r su mayor contenido de almidones - r e s u l t a r í a n a d i f e r e n c i a de l o s demás mejores en l a producción de-

a lmi lásas , que en l a producción de proteásas ácidas.

-.

34

. REFERENCIAS :

- Actuallsima, Dpts. de Divulgaclón Técnica Fermex, b Marzo 1977

- boidin, A. , Ef front , Y . 1930. Process tor the microblo logica l Synthesis o t proteases . I . US. PA'lENT 1744 742 (Jan. 28) .

- Cannel, F . and Moo-Yung M. (1Y80) . Process biochemistry June/ J u l y , 1980; 2-7.

- C a r r i z a l e s , V. 1982. Producci6n de Enzimas E x t r a c e l u l a r e s en - cul t ivos Semis6l idos . Biotecnología de enzimas. P P - 7 0 - 8 5 . - - Ed. H u i t r o n , C . , UNAM, Néxico, D.F.

- I Keda, L . , Tobe, S . , Niwn, K . , l s h l z a k i , A,; y x i r o s e , y . 19-

74. ProductiBn and I s o l a t i o n o f a lka . l ine protease from a c e t i c a c i d . B i o l . Chem. 38: 2317-2322.

- Keay, L . Moseley, K. , Anderson, K; O ' connor, R. y W l l d l , S . - - '1972. Production and I s o l a t i o n o f m i c r o b l a l p r o t e a s e s . B i o - - technol . and Bioeng Symp. No, 3 : 63-93.

- Raimbault, M. Revan, S . ; Plña, F . ; V i l l a l o b o s , P. (1985) . Dro- t e i n Enrichment o r casava by Solid sustrate Fermentation Uslng Molds Inso la ted from Tradi k o n a l Foods. J. Fera.ent, Technology 63, 395.

- Reed, 6. knzymes in Food Precess ing. P P . 337-369, Academic - - - P r e s s , New York, 1966.