aislamiento microbiano

7/26/2019 AISLAMIENTO MICROBIANO

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AISLAMIENTO MICROBIANO:

TCNICAS DE AISLAMIENTO

M G . S O N I A H E R R E R A S A N C H E Z

03/07/2015

M I C R O B I O L O G I A 1


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INTRODUCCION(1)

En la naturaleza, la mayora de los microorganismos no seencuentran aislados, sino integrados en poblaciones mixtas.Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y desus propiedades, es necesario separar unos de otros ytrabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axnicoso puros.

Un cultivo axnico o puro es aquel que contiene un slo tipode microorganismo y que procede generalmente de una solaclula; el crecimiento de sta origina, en medio slido, una

masa de clulas fcilmente visible que recibe el nombre decolonia.



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INTRODUCCION(2)

Para obtener cultivos axnicos o puros a partir de una poblacin

microbiana mixta, se utilizan las denominadas tcnicas de aislamiento,que fueron desarrolladas durante el siglo XIX.

En un principio, Lister utiliz diluciones seriadas en medio lquido conesta finalidad, pero la presencia de contaminacin, es decir, de

microorganismos no deseados, dificult el aislamiento.La escuela de Robert Koch introdujo los medios slidos,complementados con agar, y las placas de Petri en Bacteriologa,permitiendo as la separacin fsica de las colonias sobre la superficie del

medio de cultivo o en el interior del mismo.El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especiesmicrobianas



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METODOS DE AISLAMIENTO

Para aislar clulas individuales, los microorganismos han de

ser diluidos, debido al gran numero en que normalmente estnpresentes.

La dilucin se realiza, normalmente, por uno de los siguientessistemas:

Siembra por estra en placaVertido en placaExtensin en placa.


Para que se pueda contar el nmero decolonias en la placa debe estar entre 30 y 300.


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A) EXTENSIN EN SUPERFICIE CON CAYADO 1)

Depositar sobre la superficie deuna placa con agar nutritivo unagota 0,1 mL de una determinadadilucin del cultivo demicroorganismos problema y

extenderlo con ayuda del cayado,previamente esterilizado, en todaslas direcciones hasta que estcompletamente seco. Incubar la

placa, en posicin invertida, a latemperatura deseada (durante 24,48 72 horas) segn el tipo demicroorganismo.


Siemb ra por extensin en

sup erf ic ie para recuento


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A) EXTENSIN EN SUPERFICIE CON CAYADO 2)

La posicin invertida evitar que el agua de condensacin se depositesobre la superficie del medio, dificultando la obtencin de colonias aisladas.

Es una tcnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmenteel recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos exactamente elvolumen de muestra sembrado.



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B) ESTRA MLTIPLE EN SUPERFICIE

Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo demicroorganismos y se extiende sobre un rea pequea de la superficie de la placa con

agar nutritivo, en forma de estras muy juntas, pero sin hacer presin para no daar elagar.

Se flamea el asa, se enfra y despus de rozar la siembra realizada previamente, seextiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estras. Este proceso serepite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las sucesivas

siembras en estra. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre enposicin invertida.

Mediante esta tcnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra quecontenga un elevado nmero de bacterias.



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C) DILUCIN EN MASA 1)

En una placa de Petri vaca se deposita un pequeo volumen conocido de

muestra y a continuacin se aade el medio de cultivo (agar nutritivo)fundido y atemperado aproximadamente a 45C. Se mezclan ambos porrotacin suave de la placa. De esta forma los microorganismos sedistribuirn de forma homognea en el medio de cultivo, permitiendo el

desarrollo de colonias separadas por todo el agar.Otra variacin de esta tcnica consiste en inocular el medio de cultivo,fundido y atemperado, contenido en un tubo, con un determinado volumende la muestra. La homogeneizacin de la muestra y el medio de cultivo se

realiza por rotacin del tubo entre las manos, antes de verterlo sobre laplaca.



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C) DILUCIN EN MASA 2)

En ambos casos, trs homogeneizacin, se dejan enfriar las placas

hasta que se solidifique el medio y posteriormente se incuban a latemperatura adecuada (siempre en posicin invertida).

Aunque con esta tcnica se obtienen colonias aisladas, generalmenteslo se utiliza para determinar el nmero de microorganismos viables

en una muestra, cuando stos son anaerobios facultativos omicroaerfilos.



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RESULTADOSA) EXTENSIN EN SUPERFICIE

Tras el perodo de incubacin se examinarn las placas. Las coloniasaparecen sobre la superficie, distribuidas uniformemente si la siembra seha realizado de forma correcta. Podrn diferenciarse las colonias deacuerdo a su tamao, forma, color, textura, etc.

Esta tcnica de siembra, adems de permitir que se distingan las coloniaspor su morfologa, permite el recuento de microorganismos viables.

La expresin de este recuento se hace en "unidades formadoras decolonias" (UFC) ya que cada una procede de un slo microorganismo (ode un grupo de microorganismos, pues en algunos casos stos tienden aformar agregados). A partir de las colonias aisladas, los microorganismospueden transferirse a otros medios de cultivo para su estudio.



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B) POR ESTRA MLTIPLE EN SUPERFICIE

Tras la incubacin, se observarn las colonias aisladas en alguna

regin de la placa inoculada. Con esta tcnica se logra la separacin delos microorganismos que se encuentran en un cultivo mixto, o bien queproceden de m u e s t r a s h o m o g n e a s , pero en las que existeun elevado nmero.

En las zonas donde existen colonias aisladas se puede estudiar lamorfologa colonial.



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C) DILUCIN EN MASA

Aparecen las colonias distribuidas por toda la masa

del agar. Aquellas que estn en la superficie tendrndistintas caractersticas, dependiendo del tipomicrobiano, mientras que las colonias que sedesarrollan en el interior, bajo la superficie del agar,tienen forma lenticular, aunque los microorganismosque formen las distintas colonias sean de distinto tipo.Por tanto, las colonias que aparecen en la profundidaddel agar son siempre biconvexas y no se diferencianunas de otras por su morfologa.

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/tecnicas-de-aislamiento/banco-de-diluciones-1/8%20%282%29.jpg?attredirects=0https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/tecnicas-de-aislamiento/banco-de-diluciones-1/8%20%282%29.jpg?attredirects=0


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ASPECTOS COMUNES DE COLONIAS MICROBIANAS



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AISLAMIENTO A PARTIR DE TEJIDO VEGETAL

A partir del tejido vegetal enfermo es posible aislar a los patgenos.

Se busca tomar trozos de la zona de avance para incrementar las chances de aislar alpatgeno.

Los trozos de tejido vegetal se someten a una desinfeccin superficial.

En el caso de bacterias es posible macerar un trozo de tejido afectado y luego sembrar

Sembrando trozos de tejido vegetal de la zona de avance del patgeno .

Ej: a partir de frutos afectados



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AISLAMIENTO A PARTIR DE TROZOS DE TEJIDOVEGETAL

Trozos de tejido afectado de la zona de avance son sembrados en medio de cultivo (ej.

Madera)



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AISLAMIENTO A PARTIR DE TEJIDO VEGETAL

Sembrando trozos de tejido vegetal de la zona de avance del patgeno



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AISLAMIENTO DE BACTERIA A PARTIR DELTEJIDO INFECTADO

Tocando con el ansa en la zona de avance de la infeccin es posible

aislar la bacteria.



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AISLAMIENTO DIRECTO A PARTIR DEL SIGNO.

Cuando la muestra vegetal presenta signo es posible tomar una

pequea porcin del mismo y sembrar en una placa con medio decultivo.



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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DELSUELO

Esquema de la metodologa utilizada para aislar a partir de suelo.


aislamiento microbiano

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