evaluacion de la actividad antimicotica de algunas …

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICOTICA DE ALGUNAS PLANTAS MEDICINALES UTILIZADAS EN LA COMUNIDAD NASA COLOMBIA EN

TRATAMIENTOS DE MICOSIS CUTAacuteNEAS SUPERFICIALES Y OTRAS INFECCIONES GENERADAS POR HONGOS

TATIANA VILA TORRES

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

SANTAFE DE BOGOTA DC

2012



TATIANA VILA TORRES

DIRECTORA MARIA XIMENA RODRIGUES

CO-DIRECTORA SILVIA RESTREPO

TABLA DE CONTENIDO

INTRODUCCIOacuteN

1 FORMULACION DE PROBLEMA Y JUSTIFICACIOacuteN

2 MARCO TEORICO

21 ESPECIES DE PLANTAS DE ESTUDIO

211 Gliricidia sepium

2111 DESCRIPCIOacuteN BOTAacuteNICA

2112 USOS ETNOMEDICOS

2113 FARMACOLOGIA Y ACTIVIDAD BIOLOGICA

2114 COMPOSICIOacuteN BIOQUIMICA

212 Psidium guajava





213 Lippia alba





214 Senna occidentalis





215 Alteranthera albotomentosa





22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES

222 ETIOLOGIA

223 DESCRIPCION DE LAS ESPECIES

2231 Trichophyton mentagrophytes

2232 Microsporum canis

2233 Candida albicans

23 EVALUACIOacuteN DE ACTIVIDAD ANTIFUacuteNGICA ndash DIFUSIOacuteN EN AGAR TEacuteCNICA

DIFUSIOacuteN EN AGAR CON DISCO

3 OBJETIVOS

31 GENERAL 32 ESPECIFICOS

4 MATERIALES Y METODOS 41 AREA DE ESTUDIO 42 MATERIAL VEGETAL 43 PREPARACIOacuteN DE EXTRACTOS 431 EXTRACCIOacuteN ALCOHOacuteLICA TOTAL 432 EXTRACCIOacuteN ALOCHOacuteLICA FRACCIONADA 44 POBLACIOacuteN DE ESTUDIO 441 MICROORGANISMOS 442 CONDICIONES DE CRECIMIENTO 45 MONTAJE DE PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD 5 RESULTADOS 51 OBTENCIOacuteN DE EXTRACTOS ETANOLICOS TOTALES Y FRACCIONADOS DE CADA ESPECIE DE PLANTA 52 EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIFUNGICA EN LOS MICROORGANISMOS ANALIZADOS PARA CADA UNO DE LOS EXTRACTOS OBTENIDOS 521 INHIBICION DE CRECIMIENTO PARA Calbicans 522 INHIBICION DE CRECIMIENTO PARA Tmentagrophytes 523 INHIBICION DE CRECIMIENTO PARA Mcanis 53 EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIFUNGICA PARA LA INHIBICIOacuteN DE CRECIMIENTO POR ANTIFUNGICO COMERCIAL 54 EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIFUNGICA PARA LA INHIBICIOacuteN DE CRECIMIENTO POR SOLVENTES 6 CONCLUSIONES

LISTA DE ANEXOS

ANEXO 1 FOTOS DE CADA ESPECIE VEGETAL

ANEXO 2 FOTOS DE CADA ESPECIE DE PLANTA EN EXTRACCIOacuteN ALCOHOLICA

FRACCIONADA

ANEXO 3 MEDIO AGAR MUELLER HINTON MODIFICADO COMPONENTES Y

PREPARACIOacuteN

ANEXO 4 DIAGRAMA DE FLUJO DE EXTRACCION CON ETANOL ANEXO 5 DIAGRAMA DE FLUJO DE FRACCIONAMIENTO LIQUIDO-LIQUIDO ANEXO 6 FOTOS MONTAJE PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD ANEXO 7 FOTOS MONTAJE PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD

INTRODUCCIOacuteN

Los remedios naturales hacen parte de una muy difundida tradicioacuten empiacuterica en

nuestro paiacutes apoyada en elementos culturales y en la notable diversidad de nuestra

flora estimada en maacutes de 50000 especies de plantas Sin embargo las investigaciones

farmacoloacutegicas en esta aacuterea han sido relativamente bajas (12)

Las infecciones por hongos superficiales son las micosis maacutes comunes en todo el

mundo y constituyen un problema de salud puacuteblica especialmente en paiacuteses tropicales

(3) Las micosis cutaacuteneas son infecciones causadas por dermatofitos estos son un

grupo de hongos filamentosos que tienen la capacidad de producir infecciones en la

piel pelo y untildeas tanto en humanos como en animales (4) La incidencia de las micosis

muestra un aumento notable debido a diferentes factores que favorecen la aparicioacuten

de estas enfermedades como lo son el clima huacutemedo la sobrepoblacioacuten y las malas

condiciones higieacutenicas que han conducido a un aumento de la prevalencia de estos

patoacutegenos (1) y que unido a la resistencia que presentan estos microorganismos a los

antimicoacuteticos disponibles conduce a una constante buacutesqueda de alternativas

terapeacuteuticas como parte de la solucioacuten al problema Medicamentos tales como

imidazoles butenafina y terbinafina son utilizados pero presentan periodos

prolongados de tratamiento alta toxicidad resistencia fuacutengica y algunas veces altos

costos (5)

Los extractos naturales de plantas son una alternativa para encontrar soluciones a

estas infecciones Se obtienen normalmente mediante la separacioacuten de porciones

bioloacutegicamente activas presentes en los tejidos de plantas mediante el uso de un

solvente (agua alcohol mezcla de estos u otro solvente selectivo) y un proceso de

extraccioacuten (6)

La comunidad Nasa en el municipio de Paacuteez Tierradentro se encuentra ubicada en

una de las regiones maacutes biodiversas de Colombia en la zona nor-oriental del

departamento del Cauca en las estribaciones de la Cordillera Central en liacutemites con

los departamentos del Huila y Tolima (7) Estudios etnobotaacutenicos sobre el uso y

manejo de los recursos vegetales de esta comunidad caracterizada por una fuerte

tradicioacuten indiacutegena han demostrado que las plantas empleadas con fines medicinales

constituyen el recurso terapeacuteutico fundamental de esta cultura la cual es suministrada

a la comunidad por los meacutedicos tradicionales Tewualas quienes poseen un gran

conocimiento botaacutenico el cual forma parte de la herencia cultural de este pueblo y el

cual se encuentra seriamente amenazado (8)

Por esta razoacuten en el presente estudio se evaluoacute actividad antimicoacutetica de diferentes

extractos vegetales de plantas seleccionadas por la comunidad Nasa y se realizaron

pruebas de susceptibilidad por la teacutecnica de difusioacuten en disco para diferentes agentes

causales de micosis superficiales


El aumento en el nuacutemero de casos por infecciones fuacutengicas y su creciente incidencia

diversidad de las infecciones y el incremento de resistencia a los tratamientos

convencionales ha despertado el intereacutes por mejorar el conocimiento que se tiene

acerca de las micosis y las posibilidades de nuevas terapias alternativas (3)

Tierradentro se encuentra ubicada en una de las regiones maacutes biodiversas de Colombia

con una gran riqueza de especies vegetales y presenta factores que favorecen la

aparicioacuten de infecciones cutaacuteneas debido al clima tropical a las condiciones de vida y

al trabajo de los habitantes La comunidad Nasa posee un gran conocimiento

etnobotaacutenico de la zona Es por esto que el propoacutesito de este estudio fue evaluar

actividad antimicoacutetica de diferentes extractos vegetales de hojas de cinco plantas de

uso medicinal para los Tewualas La determinacioacuten de dicha actividad antimicoacutetica

puede servir para futuros estudios que aporten a la continua buacutesqueda de nuevas

alternativas de tratamiento para el manejo de las micosis los cuales beneficien a los

pacientes que estaacuten siendo afectados por estas infecciones

2 MARCO TEORICO

21 ESPECIES DE PLANTAS DE ESTUDIO (Anexo 1) 211 Gliricidia sepium


Arboles perennes de tamantildeo medio hasta 10 m de alto Hojas de 30 cm de largo

aproximadamente 5-19 foliolos ovalados a eliacutepticos 2-7 cm de longitud 1-3 cm de

ancho Flores rosadas y lilas a blancas en racimos de 4-15 de longitud Legumbre

oblonga aplanada hasta 15 cm longitud y 2cm de ancho (9)

Esta especie es originaria de Centroameacuterica y en Colombia se cultiva para sombra y como postes vivos en los climas caacutelidos Crece en climas huacutemedos a subhuacutemedos hasta una altura de 2000m Es tolerante al fuego despueacutes de este rebrota (10) Familia Fabaceae

Nombre comuacuten Mataratoacuten madreado acacia


La hoja fresca o cocida se aplica toacutepicamente sobre el impeacutetigo y otras enfermedades

de la piel El cocimiento de las hojas y corteza se usa para tratar afecciones

gastrointestinales (diarrea dolor de estoacutemago) Las hojas semillas y raiacuteces se usan

para matar ratas y como insecticida Las hojas en emplasto se aplican para granos y

erisipelas y la infusioacuten de ellas como expectorante Las hojas mediante decoccioacuten se

usan como bantildeos en algunas afecciones epideacutermicas (9)


Estudios de la actividad antimicrobiana in vitro demuestran que la maceracioacuten hidroalcohoacutelica de las hojas y corteza no inhibe enterobacterias patoacutegenas (11)

2114 COMPOSICIOacuteN BIOQUIMICA Se ha reportado la presencia de los compuestos Astragalina 27 dihidroxi-3metoxi-isoflavano gliricidina robinina robinetina sepinol sepiol canavanina pinitol y sacarosa (9)

212 Psidium guajava


Hojas eliacutepticas u oblangas 4-12 cm de longitud y 35-45 cm de ancho venacioacuten

prominente 12-16 nervios laterales de cada lado Peduacutenculos axilares pubescentes 1-

3 flores pubescentes El caacuteliz envuelve las yemas peacutetalos 15-2 cm de longitud Baya en

forma de pera globosa La madera es chocolatosa o rojiza (9)

Esta especie es nativa de Ameacuterica Tropical Se encuentra distribuida desde Meacutexico y

Centroameacuterica hasta Sudameacuterica Antillas y el sur de Florida Habita en climas caacutelido

semicaacutelido y templado Es una especie con potencial para reforestacioacuten productiva en

zonas degradadas y se encuentra a la orilla de los caminos y senderos (13)

Familia Myrtaceae

Nombre comuacuten Guayaba blanca


Las hojas son empleadas tradicionalmente para tratar la diarrea aguda simple Es

utilizada por sus actividades farmacoloacutegicas como hipoglicemiantes antimicrobianos

antivirales antiinflamatorios antioxidantes antidiarreicos antialeacutergicos e

hipotensores (14) Se utilizan emplastos de esta especie junto con otras plantas sobre

infecciones en la piel y untildeas


La maceracioacuten hidroalcohoacutelica de las hojas es activa contra Shigella dysenteriae

Escherichia coli Salmonella typhi Staphylococcus aureus y Streptococcus pneumoniae

(12) En la decoccioacuten de las hojas se encontroacute actividad contra Epidermophyton

floccosum (15)

Las hojas han demostrado actividad contra hongos fitopatoacutegenos (Drechslera oryzae

Dysdercus cingulatus Ustilago hordei y Ustilago tritici) y virus del mosaico del tabaco

(16)


Se encuentra en las hojas y caacutescaras en aceite esencial flavonoides y alcoholes

sesquiterpeacutenicos y aacutecidos triterpenoides Se ha reportado la presencia de arabinosa

aacutecido asiaacutetico aacutecido protobaacutesico B-bisaboleno aacutecido brahmico cadideno

calameneno oxalato de calcio canfeno B- cariofileno casuarinina 18- cineol acido-

trans-cinaacutemico curcumeno A y B-copaeno daucosterol aacutecido gaacutelico farmeseno

guaiijaveriana (flavonoide) guavina ABCD Leucociadinina humulento (9)

213 Lippia alba


Hierba perenne erecta algunas veces arbusto hasta 2 m de alto con un fuerte olor a

limoacuten lima o menta densamente pubescente Hojas decusadas opuestas laacutemina

ovada u oblonga 2- 7 cm de longitud maacutergenes serrados Inflorescencias axilares

solitarias o raras veces en pares Flores hicrateriformes de color azul a rosado lila a

violeta algunas veces blanca o amarillenta en la superficie interna (9)

Nativa de Ameacuterica Es una planta aromaacutetica que crece en la las laderas a la orilla de

caminos y riberas de los riacuteos en alturas hasta 1800 Msmm (17)

Familia Verbenaceae

Nombre comuacuten Pronto alivio


Se usa como sedante y para la diabetes Se utilizan emplastos de las hojas frescas y

cocidas junto con otras plantas sobre infecciones en la piel cuero cabelludo y untildeas La

infusioacuten de las hojas y flores se emplea para trastornos gastrointestinales y digestivos

como antiespasmoacutedico en coacutelicos hepaacuteticos como expectorante y febriacutefugo Ademaacutes

se le atribuyen actividades antiseacutepticas y astringentes (9)


El aceite esencial posee actividad contra Trichophyton mentagrophytes Candida

albicans y Neurospora crassa (18) La tintura en Guatemala ha demostrado actividad

antimicrobiana contra Staphylococcus aureus (19) La maceracioacuten hidroalcohoacutelica de

las hojas tiene actividad contra hongos fitopatoacutegenos (Dreschlera oryzae Fusarium

moniliforme) (9)

2134 COMPOSICIOacuteN BIOQUIMICA Los principales componentes del aceite esencial son alcanfor dihidrocarvona

cariofileno 18-cineol acetato de citronelol p-cimeno metildecilcetona lipiona

mirceno neral metiloctil-cetona piperitona y sabineno En un estudio de tamizaje

foitoquiacutemico de esta especie se determinoacute la presencia de alcaloides e iridoides en las

hojas y los tallos y flavonoides en los tallos (9)



Arbusto aromaacutetico anual o perenne de hasta 2 m peciolo con glaacutendulas en la base

foliolos de 4 a 6 pares aovados- lanceolados racimos axilares seacutepalos de 6-9 mm

peacutetalos de hasta 2 cm amarillos legumbre linear plana de 6 ndash 10 cm (9)

Originaria de Meacutexico y distribuida por Centroameacuterica y Surameacuterica Habita en clima

semicaacutelido templado y huacutemedo desde el nivel del mar hasta los 1600 m (20)

Familia Caesalpiniaceae

Nombre comuacuten cafecillo


Las hojas estrujadas se usan localmente para afecciones cutaacuteneas y el zumo de hojas

se frota sobre la piel para la ldquomala calidad de la sangrerdquo La raiacutez se emplea como

contraveneno Las infusiones sirven como diureacutetico y antihisteacuterica Para curar las

afecciones respiratorias se utiliza en forma de un jarabe La infusioacuten de hojas y frutos

combinada con achiote (Bixa orellana) se utiliza para la inflamacioacuten estomacal (9)


La hoja tiene actividad depurativa y laxante Las hojas y semillas muestran propiedades

antimicrobianas La decoccioacuten de la hoja tiene actividad inhibidora de los dermatofitos

Epidermophyton floccusom y Microsporum gypseum (20)


La hoja contiene glicosidos flavonoides y antraquinonas crisofanol emodina fiscion y

sus derivados En un estudio de tamizaje fitoquiacutemico de esta especie se determinoacute la

presencia de alcaloides e iridoides en las hojas y los tallos y flavonoides en los tallos

(9)

215 Alteranthera albotomentosa 2151 DESCRIPCIOacuteN BOTAacuteNICA

Hierba postrada o rastrera hasta 1 m de altura Tallo verde a rojizo tricomas

abietiformes blancos hasta 1 mm de largo Hojas pecioladas peciacuteolo 02-1 cm de

largo laacutemina eliacuteptica a obovada glabra en hojas adultas y tomentosa en las joacutevenes

aacutepice mucronado Inflorescencias en cabezuelas axilares solitarias o en grupos de 2-3

globosas a ciliacutendricas seacutesiles blancas estramiacuteneas o verde amarillentas braacutectea 1

coacutencava Fruto 1-2 mm de largo globoso a ciliacutendrico Semilla 1 elipsoide ca 15 mm

de largo parda rojiza (9)

Es una especie nativa del noroccidente de Surameacuterica distribuida desde Colombia hasta Peruacute Crece hasta 2500 m de altitud (17) Familia Amarantaceae Nombre comuacuten Amor seco abrojo 2152 USOS ETNOMEDICOS Las hojas son utilizadas en implastos sobre infecciones de la piel Las infusiones sirven

para el dolor estomacal y la gastritis


Esta especie se ha reportado con la capacidad de absorber metales pesados (21)

22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES

Los dermatofitos son un grupo de hongos taxonoacutemicamente relacionados que tienen la capacidad para invadir el tejido queratinizado (piel pelo y untildeas) del hombre y animales y producir una infeccioacuten dermatofitosis llamada comuacutenmente tintildea (22) El grupo de los dermatofitos comprende especies de los geacuteneros Trichophyton Epidermophyton y Microsporum (232425) ) Han sido clasificados en el grupo Deuteromicota (formas asexuales)Presentan las hifas septadas y los conidios pueden asentarse directamente en las hifas o bien en conidioacuteforos Pueden formar microconidios o macroconidios que son uacutetiles para su identificacioacuten (26) Morfoloacutegicamente los dermatofitos estaacuten clasificados en tres geacuteneros Trichophyton se caracteriza por formar macroconidios multicelulares de pared lisa y pueden existir microconidios Microsporum forma macroconidios de pared rugosa y pueden haber microconidios y Epidermophyton por producir solo macroconidios de pared lisa y delgada (22) 222 ETIOLOGIA

Se han reportado cuarenta y dos especies de dermatofitos pero la mayor parte de las

infecciones son causadas por once especies de las cuales las maacutes frecuentes en

Colombia son Microsporum canis Microsporum gypseum Trichophyton rubrum

Trichophyton mentagrophytes Trichophyton tonsurans y Epidermophyton flocosum

(2426)

Microsporum spp invade principalmente la dermis y el cabello y algunas veces las

untildeas Epidermophyton spp afecta la dermis y las untildeas pero no el cabello a diferencia

de Trichophyton spp que se desarrolla en todas las estructuras queratinizadas (2224)


2231 Tricophytum mentagrophytes

Este microorganismo causa las entidades conocidas como tineas capitis cruris

corporis pediacutes barbae y unguium inclyendo infeccioacuten directa de la placa ungueal (26)

La morfologiacutea macroscoacutepica muestra colonias planas con centro ligeramente elevado

de superficie pulvurenta o algodonosa y de color blanquecino que al envejecer se

vuelve color crema El reverso puede ser blanco amarillento anaranjado rojo o cafeacute

algunas producen un pigmento melanoide difusible (26 28)

Microscoacutepicamente se observan hifas delgadas septadas con microconidios redondos a

piriformes en racimos o a lo largo de la hifa algunos aislamientos presentan

macroconidios clavados las hifas en espiral son frecuentes (26 28)


Hongo considerado como primera causa de tineas corporis pediacutes manuum y unguium

Presenta una distribucioacuten mundial y es causante de tintildea en gatos perros y monos

Puede ser tambieacuten un colonizador del pelaje de los animales pero sin causar

sintomatologiacutea Cuando se transmite al ser humano es una especie muy contagiosa

que da lugar a brotes epideacutemicos familiares o escolares (27)

Las colonias macroscoacutepicamente son generalmente blancas y de consistencia blanda

pulvurentas o algodonosas Este hongo filamentoso presenta macroconidios

abundantes fusiformes grandes pluriseptados de paredes muy gruesas y rugosas

Microconidios piriformes en breves racimos o seacutesiles que brotan lateralmente de la

hifa (25)


Este microorganismo es una levadura colonizadora habitual de la piel y mucosas del

cuerpo humano puede causar un amplio rango de infecciones superficiales e invasivas

como las candidiasis que son infecciones fuacutengicas que afectan piel untildeas y mucosas

(32) Es un hongo no dermatofito dimorfo que forma largas seudohifas hifas y

blastoconidios Asimilan y fermentan azuacutecares Presentan numerosas clamidosporas

unicelulares redondas u ovaladas con gruesa pared refringente (8-16 microm de

diaacutemetro) situadas al final de las hifas seudohifas o laterales sobre blastoconidios

ovalados Presentan crecimiento raacutepido (31)

La morfologiacutea macroscoacutepica muestra colonias de crecimiento circulares blandas lisas

blancas o cremosas de bordes precisos y centro ligeramente prominente (32)

23 TEacuteCNICA EMPLEADA PARA DETERMINAR LA SENSIBILIDAD ANTIFUacuteNGICA DIFUSIOacuteN EN AGAR CON DISCO En los uacuteltimos antildeos se han estandarizado varias teacutecnicas in vitro para la deteccioacuten de la resistencia de agentes etioloacutegicos con el fin de conocer el perfil de susceptibilidad de las cepas y el espectro de accioacuten de los antifuacutengicos (38) La teacutecnica de difusioacuten en disco consiste en cuantificar la inhibicioacuten de crecimiento producida por el antifuacutengico comparada con el crecimiento de la levadura o moho en el mismo medio pero sin antifuacutengico (39) El medio de cultivo pH tampoacuten inoacuteculo tiempo y temperatura de incubacioacuten deben ser especificas ya que una variacioacuten de estos paraacutemetros puede afectar los resultados El CLSI estandarizoacute el meacutetodo de difusioacuten en disco (documento M44-A) y en 1997 puacuteblico un documento sobre la estandarizacioacuten de las pruebas de sensibilidad a los antifuacutengicos en las levaduras del geacutenero Candida spp con el meacutetodo conocido como M27-A en el que se incorporan los puntos de corte de fluconazol itraconazol y 5-fluorocitosina y las CMI para las cepas control de calidad (39) En esta teacutecnica se inocula el hongo en la superficie del agar a la concentracioacuten correspondiente y luego se deposita un disco de papel sobre la superficie del agar con una concentracioacuten conocida de antifuacutengico para luego incubar Se produce entonces una zona de inhibicioacuten del crecimiento del hongo alrededor del disco Dependiendo del tamantildeo de la zona de inhibicioacuten se determina si el hongo es sensible resistente intermedio o indeterminado (29) Para poder realizar estas pruebas es necesario que los antimicrobianos sean capaces de difundir de forma adecuada a traveacutes del agar (30) Entre las ventajas de este meacutetodo se encuentra que la tasa de difusioacuten de cada antifuacutengico en el agar es generalmente predecible y reproducible La concentracioacuten de los antifuacutengicos disminuye exponencialmente difundiendo desde su punto de origen siendo los gradientes relativamente estables sobre el periodo de tiempo requerido para ver el crecimiento del hongo

3 OBJETIVOS

31 GENERAL Evaluar la actividad antimicoacutetica de extractos vegetales de hojas de las especies Lippia alba Senna occidentalis Alteranthera albotomentosa Gliricidia sepium y Psidium guajava en pruebas de susceptibilidad antifuacutengica por el meacutetodo de difusioacuten en disco para los hongos Microsporum canis Trichophyton mentagrophytes y Candida albicans 32 ESPECIFICOS

a Determinar la eficiencia de los extractos usando el tamantildeo de halos de

inhibicioacuten generado por los extractos para cada uno de los dermatofitos

b Determinar si existen diferencias en el grado de efectividad entre el extracto

crudo y las partes fraccionadas

4 MATERIALES Y MEacuteTODOS

41 Aacuterea de Estudio El municipio Paacuteez estaacute localizado en el departamento del Cauca en las estribaciones de la cordillera central de los andes de Colombia en liacutemites con los departamentos de Huila y Tolima Posee una extensioacuten aproximada de 1852 Km2 forma parte del aacuterea territorial conocida histoacutericamente como Tierradentro Su cabecera Belalcaacutezar estaacute localizada a los 2deg40rsquo de latitud Norte y 75deg59acute de longitud al Oeste de Greenwich Las temperaturas medias en el municipio se han estimado para las zonas bajas en 24degC y para las maacutes altas en 18degC (7) 42 Material Vegetal Se realizaron entrevistas con cinco hombres Tewualas de la comunidad Nasa Durante el trabajo de campo con ellos se realizaron 10 salidas entre Diciembre de 2011 y Enero de 2012 en las que se colectaron e identificaron especiacutemenes botaacutenicos con base en la informacioacuten suministrada Para las entrevistas se formuloacute una lista de preguntas (Tabla No 1) que incluiacutean informacioacuten sobre nombres comunes usos etnomeacutedicos partes utilizadas forma de aplicacioacuten importancia y efectividad de cada especie La identificacioacuten taxonoacutemica de las muestras botaacutenicas se llevoacute a cabo en el Herbario de Historia Natural en la Universidad de los Andes Bogotaacute Colombia

NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA

FORMA DE APLICACIOacuteN

GRADO EFECTIVIDAD

Tabla No 1 Informacioacuten recolectada de las salidas de campo

El material vegetal fue colectado con ellos y secado naturalmente seguacuten lo hacen los hombres Tewualas colocando las hojas sobre unas esteras tejidos por ellos y puestas al aire libre durante siete diacuteas aproximadamente

43 Preparacioacuten de extractos vegetales

El material vegetal fue pulverizado y extraiacutedo por maceracioacuten en friacuteo con Etanol 96 Se realizoacute un fraccionamiento con los solventes Eacuteter de Petroacuteleo Diclorometano y Acetato de Etilo

431 Extraccioacuten Alcohoacutelica Total El material vegetal pulverizado fue macerado en friacuteo en una licuadora en Etanol al 96 durante cinco minutos y dejado en agitacioacuten constante durante 48 horas filtrando y resuspendiendo la biomasa en Etanol al 96 al inicio del segundo ciclo Los extractos fueron sometidos a tres ciclos de filtracioacuten en sistema de vaciacuteo con papel filtro de calibres diferentes hasta utilizar el filtro Whatman Ndeg1 y la fase liquida fue almacenada a 4degC Se mezclaron bien los dos extractos obtenidos (48 y 72 horas) y la mitad del volumen fue concentrado con un rotaevaporador para obtener una extraccioacuten alcohoacutelica total (Anexo 2 y 6) 432 Extraccioacuten Alcohoacutelica Fraccionada La otra mitad obtenida de la extraccioacuten total fue sometida a un fraccionamiento por el meacutetodo particioacuten liquido-liquido discontinuo con los solventes eacuteter de petroacuteleo como solvente de baja polaridad para obtener la fraccioacuten de compuestos apolares grasas y aceites el diclorometano (CH2Cl2) tiene la misma funcioacuten pero es de mayor polaridad y por uacuteltimo acetato de etilo (AcOEt) de mayor polaridad que los dos solventes anteriores Se dejoacute cada uno en agitacioacuten constante durante 10 minutos para el contacto entre fases y 24 horas de decantacioacuten para la separacioacuten El procedimiento de fraccionamiento discontinuo liacutequido-liacutequido se realizoacute dos veces por cada solvente aplicado a la fraccioacuten hidroalcohoacutelica (fase acuosa) Las diferentes fracciones obtenidas se llevaron a sequedad en rotaevaporador a presioacuten reducida tal y como fue descrito anteriormente (Anexo 3 y 7) 44 ORGANISMOS DE ESTUDIO

441 MICROORGANISMOS

Las pruebas bioloacutegicas se realizaron con la levadura Candida albicans y los

dermatofitos Microsporum canis y Trichophyton mentagrophytes obtenidos del cepario

del LAMFU de la Universidad de los Andes y del cepario de la Pontificia Universidad

Javeriana

442 CONDICIONES DE CRECIMIENTO

Los dermatofitos fueron cultivados durante cuatro semanas en agar avena-oat meal a

una temperatura de 23ordmC y Candida albicans fue cultivada en medio Sabouraud a una

temperatura de 37ordmC

45 MONTAJE DE PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD

a Medios de cultivo se preparoacute el medio de cultivo Mueller Hinton modificado con

2 Glucosa y 1mlL azul de metileno con el fin de aumentar el contraste del medio

para facilitar asiacute la observacioacuten de los halos de inhibicioacuten de crecimiento y dar una

mejor interpretacioacuten de los resultados obtenidos (Anexo 4)

b Inoacuteculo se preparoacute el inoacuteculo para dermatofitos a una concentracioacuten de 1x104 UFCmL y para levadura de 1x106 UFCmL utilizando la teacutecnica de recuento en caacutemara de Neubauer c Siembra se realizoacute siembra masiva de los inoacuteculos en el medio de cultivo colocando 100 microL de la suspensioacuten en la superficie del medio y con un rastrillo se distribuyoacute en toda la superficie

e Sensidiscos se utilizaron discos de 52 mm de papel Whatman Ndeg1 los cuales fueron pasados por tres ciclos de esterilizacioacuten y posteriormente activados impregnaacutendolos con 10μl de extracto por sensidisco Se utilizaron dos tipos de concentraciones por extracto 500 mgmL y 100 mgmL Los extractos fueron diluidos en DMSO Se almacenaron a 4degC (Anexo 8)

g Aplicacioacuten de los sensidiscos los sensidiscos se colocaron en la superficie y a cada lado del medio previamente inoculado Se utilizoacute las 2 concentraciones del extracto en cada caja de petri y se trabajoacute por cuadruplicado cada una de las pruebas Fueron almacenados durante 24 horas en la nevera con el fin de obtener una correcta difusioacuten del extracto

h Incubacioacuten los medios de cultivo fueron incubados a 37ordmC durante 24 horas para C albicans y a 25 ordmC durante 4 diacuteas para los dermatofitos

i Lecturas se realizaron lecturas a las 2448 72 y 96 horas teniendo en cuenta el tiempo de crecimiento Se promediaron cuatro medidas para cada halo de inhibicioacuten j Control (positivo) Para la Inhibicioacuten de crecimiento por antifuacutengico comercial se

preparoacute Itraconazol a una concentracioacuten de 25 mgmL para Calbicans y Terbinafina a

una concentracioacuten de 25 mgmL para los dermatofitos

Control (negativo) Para el control por solventes se utilizoacute 20 microL para cada sensidisco

con los solventes Eacuteter de Petroacuteleo Diclorometano y Acetato de Etilo y para DMSO se

utilizoacute 10 microL

5 RESULTADOS Y DISCUSION

51 Obtencioacuten de Extractos Etanoacutelicos Totales y Fraccionados

Se obtuvieron dos concentraciones de extractos etanoacutelicos crudos para cada una de las

especies vegetales utilizadas Se manejoacute una concentracioacuten de 500 mgmL y una

concentracioacuten de 100 mgmL Los 10 extractos obtenidos quedaron diluidos en DMSO

y en los discos Wathman (52 mm) impregnados con 10 microL

Los fraccionamientos de los extractos crudos etanoacutelicos se realizaron de acuerdo con la metodologiacutea descrita en el diagrama de flujo de fraccionamiento liacutequido-liacutequido (ver Anexo 5) Las diferentes fracciones presentaron caracteriacutesticas diferentes de color y consistencia Se obtuvieron tres tipos de extractos fraccionados (Eacuteter de petroacuteleo CH2Cl2 y AcOEt) de cada una de las muestras para un total de 15 extractos Cada una de los extractos (crudo y fracciones) obtenidos presentoacute caracteriacutesticas diferentes las cuales se describen en la tabla 1 Tabla No1 Caracteriacutesticas de cada extracto seguacuten solvente utilizado

52 Evaluacioacuten de la Actividad Antifuacutengica de los Extractos Obtenidos

Se analizaron las cajas sembradas con la suspensioacuten de conidios o ceacutelulas levaduriformes en el medio Mueller Hinton y con las diferentes concentraciones de los extractos obtenidos aplicando la prueba de susceptibilidad antifuacutengica con el meacutetodo de difusioacuten en disco

Especies Vegetales Etanol 96 Eacuteter de Petroacuteleo Diclorometano Acetato de etilo

P guajava Cafeacute oscuro seco

Cafeacute oscuro denso

Cafeacute oscuro seco

Cafeacute claro seco

G sepium Verde oscuro denso

Verde oscuro grumoso

Verde claro seco grumoso

Cafeacute claro seco liso homogeacuteneo

S occidentalis Verde oscuro denso

Verde oscuro denso

Verde oscuro denso

Cafeacute claro seco homogeacuteneo

L alba Verde oscuro denso

Verde oliva denso

Verde oscuro seco grumoso

Cafeacute muy claro seco homogeacuteneo

Aalbatomentosa Verde oscuro denso


Verde oscuro denso

Cafeacute amarillo seco homogeacuteneo

521 Inhibicioacuten de crecimiento para C albicans

Se encontraron halos de inhibicioacuten de crecimiento para C albicans en los extractos de Etanol

96 y la fraccioacuten de Eacuteter de Petroacuteleo en las plantas de las especies L alba en ambas

concentraciones G sepium y A albatomentosa en la concentracioacuten 500mgmL (Tabla 2) Para

el resto de los extractos no se observoacute halo de inhibicioacuten

Tabla No 2 Inhibicioacuten de crecimiento para C albicans

Tabla No 3 Medida promedio para halos de inhibicioacuten de crecimiento frente a C albicans

Extracto Vegetal Etanol 96

(cm)

Eacuteter de Petroacuteleo

(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463

Aalbatomentosa 08238 0

Graacutefica No 1 Actividad inhibitoria frente a Calbicans para cada tratamiento

Se observaron diferencias significativas entre todos los tratamientos analizados

excepto para los extractos A albatomentosaEtanol 96 y G sepiumEacuteter de Petroacuteleo

(ver Anexo 10)

La graacutefica No1 muestra que el tratamiento que presentoacute una mayor actividad de

inhibicioacuten frente a C albicans fue el antifuacutengico comercial Itraconazol (25mgmL)

seguido del extracto crudo Etanol 96 de las especies L alba y G sepium Los valores

corresponden al promedio de cuatro reacuteplicas y las barras de error corresponden a la desviacioacuten

estaacutendarPara los demaacutes extractos analizados es posible que el microorganismo no sea

susceptible o que la concentracioacuten utilizada haya sido muy baja y debido a esto se

obtuvo un resultado no inhibitorio

L alba ha sido reportada en la literatura como planta medicinal comuacutenmente utilizada

por comunidades indiacutegenas en el tratamiento de infecciones y de la cual se ha

obtenido aceite esencial Seguacuten Hennebelle y colaboradores (2008) los extractos de

etanol al 90 fueron efectivos contra C albicans a una CMI mayor a 1 mgmL (34) En

su estudio Holetz y colaboradores (2002) reportaron actividad anti-Candida debido al

aceite esencial de esta planta (35) Esto indica que L alba posee metabolitos que

inhiben crecimiento de C albicans y que pueden ser una buena fuente de estudio para

investigaciones futuras

Igualmente se observaron halos de inhibicioacuten de crecimiento para los extractos de las

plantas G sepium y A albatomentosa que pueden ser importantes plantas objeto de

investigacioacuten en la buacutesqueda de nuevos antifuacutengicos y de las cuales no se encontroacute

literatura reportada

522 Inhibicioacuten de crecimiento para T mentagrophytes

No se encontraron halos de inhibicioacuten de crecimiento para T mentagrophytes en

ninguno de los extractos de las plantas analizadas (Tabla 4 y 4) sin embargo en el

estudio realizado por Caacuteceres y colaboradores (1991) demostraron actividad

antimicoacutetica de la infusioacuten de las hojas de S occidentalis frente a los dermatofitos E

floccosum M gypseum y T mentagrophytes (40)

Tabla No 4 Inhibicioacuten de crecimiento para T mentagrophytes

Adamu y colaboradores (2006) demostraron actividad antifuacutengica de este

microorganismo en extractos metanoacutelicos (41)


523 Inhibicioacuten de crecimiento para M canis

No se encontraron halos de inhibicioacuten de crecimiento para M canis en ninguno de los extractos evaluados (Tabla 6 y 7) sin embargo en el estudio de Fontelle y colaboradores (2007) encontraron que extractos acuosos de L alba presentaron actividad antifuacutengica contra M canis (41)

Tabla No 6 Inhibicioacuten de crecimiento para M canis

En el estudio Caacuteceres y colaboradores (1991) comprobaron actividad antimicoacutetica de extractos hidroalcohoacutelicos frente a este microorganismo (40)


53 Evaluacioacuten de la Actividad Antifuacutengica de Medicamentos Comerciales frente a los Microorganismos en Estudio Se observoacute inhibicioacuten de crecimiento para todos los microorganismos del estudio Se observoacute un halo significativo con Terbinafina para los dermatofitos y con Itraconazol para la levadura Estas pruebas muestran efectividad antifuacutengica (Tabla 8 Graacutefica 2) Tabla No 8 Fotos de las pruebas de sensibilidad con antifuacutengico comercial

Graacutefica No 2 Actividad inhibitoria para tratamientos con antifuacutengico comercial

En el presente estudio se observoacute diferencia significativa entre los tratamientos

analizados con antifuacutengicos comerciales En la graacutefica No 2 se observoacute que el

tratamiento que presentoacute mayor efectividad frente a C albicans fue Itraconazol

(25mgmL) seguido de Terbinafina (25mgmL) frente a T mentagrophytes Los

valores corresponden al promedio de cuatro reacuteplicas y las barras de error

corresponden a la desviacioacuten estaacutendar

El Itraconazol es un derivado imidazoacutelico de uacuteltima generacioacuten usado ampliamente por

sus propiedades antifuacutengicas para el tratamiento de micosis superficiales

(onicomicosis) y sisteacutemicas (37) Quiacutemicamente es un derivado triazoacutelico de foacutermula

C35H38Cl2N8O4 con tres aacutetomos de nitroacutegeno en su anillo azoacutelico que se comporta

como una base deacutebil (36) El tratamiento para la candidiasis ha sido insatisfactorio

debido al limitado nuacutemero de drogas antifuacutengicas En este estudio se comproboacute la

susceptibilidad de C albicans por el meacutetodo difusioacuten por disco para Itraconazol y se

demostroacute al igual que en el estudio de Maldonado y colaboradores (2000) que esta

droga comercial inhibe efectivamente su crecimiento

La Terbinafina es un derivado sinteacutetico de la alilamina con actividad antimicoacutetica de

amplio espectro En este estudioacute inhibioacute significativamente el crecimiento de los

microorganismos T mentagrophytes y M canis demostrando que posee actividad

fungicida o fungistaacutetica ocasionando la muerte celular en el hongo al inhibir la siacutentesis

del ergosterol componente fundamental de la membrana del hongo y la acumulacioacuten

de su precursor el escualeno el cual funciona bloqueando la siacutentesis de ergosterol

mediante la inhibicioacuten de la enzima escualeno-epoxidasa (33) Seguacuten Rodriacuteguez y

colaboradores (2009) en su estudio por el meacutetodo de microdilucioacuten en caldo

determinaron inhibicioacuten antifuacutengica con terbinafina la cual inhibioacute los dermatofitos

T rubrum M canis y T mentagrophytes (42)

54 Control de Inhibicioacuten de Crecimiento por Solventes y DMSO

No hubo inhibicioacuten de crecimiento por parte de los solventes utilizados durante el

crecimiento de los microorganismos lo cual era de esperarse Esta prueba fue utilizada

como control negativo como se observa en tabla 9

Tabla No 9 Fotos de las pruebas control de crecimiento con solventes

6 CONCLUSIONES


especies vegetales utilizadas para un total de 20 extractos diferentes en los cuales se

observaron consistencias y colores diferentes seguacuten el tipo de planta En estos

extractos analizados se encontraron halos de inhibicioacuten de crecimiento para C albicans

en las plantas Lalba Gsepium y Aalbatomentosa en el extracto de Etanol 96 y

fraccioacuten de Eacuteter de Petroacuteleo

El extracto que presentoacute una mayor actividad antifuacutengica frente a C albicans fue el

extracto crudo Etanol 96 de L alba seguido de G sepium Estos extractos

presentaron mayor efectividad que sus fracciones Eacuteter de Petroacuteleo

Para los demaacutes extractos C albicans no mostroacute suceptibilidad Lo mismo ocurrioacute frente

a los dermatofitos M canis y T mentagrophytes ya sea porque el microorganismo no

presenta suceptibilidad o por que la concentracioacuten utilizada fue muy baja para generar

inhibicioacuten

Para los controles negativos de los solventes utilizados no se observaron halos de inhibicioacuten y para las pruebas de susceptibilidad frente a los antifuacutengicos comerciales Itraconazol y Terbinafina se observaron halos se inhibicioacuten significativos para todas las pruebas mostrando resultados inhibitorios y efectividad antifuacutengica positiva Con esto comprobando la eficacia de estas drogas frente al crecimiento de estos microorganismos Se sugiere seguir realizando investigaciones que permitan identificar cuaacuteles son los componentes responsables de causar el efecto inhibitorio

Bibliografiacutea

1 Alvarez ME Isaza G Acosta SM Yepes AG 2005 Actividad antimicoacutetica de Phenax rugosus (lam) pers y Baccharis trinervis (sw) wedd Biosalud 14 38-45

2 Isasa G Fuentes J Marulanda T 2000 Fundamentos de Farmacologiacutea en

Terapeacuteutica 4ordf ed Postergraph Pereira 43 545-554

3 Rubio MC Rezusta A Gil J Ruesca RB 1999 Perspectiva micoloacutegica de los

dermatofitos en el ser humano Rev Iberoam Micol 1616-22

4 Levinson W 2004 Medical Microbiology and Immunology Examination and

Board Review Eight Edition New York McGraw-Hill

5 Zacchino S Yunes R Filho V Enriz DKouznetsov V Ribas J 2003 The need for

new antifungal drugs Screening for antifungal compounds with a selective

mode of actions with emphasis on the inhibitors of the fungal cell wall Olant-

Derived Antimycotics Current Trends and Future Prospects New York Haworth

Press 12 1-34

6 Rodina VD Palacios P Vaccaro MC Rosana F Coussio JD 1985 Metodologiacutea para la preparacioacuten y fraccionamiento sistemaacutetico de extractos vegetales con miras a su ensayo farmacoloacutegico y eventual estudio quiacutemico Acta Farmaceacuteutica Bonaerense 43-14

7 Sitio Oficial de Paeacutez Cauca Colombia Tomado el diacutea 2 de Junio de 2012 de httpwwwpaez-caucagovconuestromunicipioshtmlapc=mmxx-1921641ampm=f

8 Cruz B N P Ceroacuten N 1996 Las plantas y el territorio clasificacioacuten usos y

concepciones en los andes colombianos Ediciones Abya-Yala

9 Gupta M 1995 Doscientas Setenta Plantas Medicinales Iberoamericanas

Programa Iberoamericano de Ciencias y Tecnologiacutea para el Desarrollo Bogotaacute

10 Catie C Cohdefor M 1991 El Madreado (Gliricidia sepum) Uso y manejo en

cercas vivas Coleccioacuten materiales de extensioacuten Proyecto Madelentildea-3 Rocap-

Renarm no 596

11 Figueroa LP 1991 Accioacuten Antibacteriana de Extractos de Leguminosas Usadas en el tratamiento de Diarrea Guatemala Facultad de CCQQ y Framacia USAC 67p

12 Caacuteceres A Loacutepez BR Giroacuten MA 1991 Plants used in Guatemala for the treatment of Dermatophytic Infections Screening for antimycotic activity of 44 plants extracts J Ethnopharmacol 31(3) 263-276

13 Ji XD PuQL Garrafo HM Pannell Lk 1991 The essential oil of the leaves

of Psidium guajava J Essent Oil Res 3(3) 187-189

14 Goacutemez M Rodriacuteguez T LLanes R Sierra P 1991 Utilizacioacuten de plantas

medicinales en el aacuterea de salud ldquoBelkis Sotomayorrdquo del municipio Ciego de

Avila I Jornada

15 Caacuteceres AL Jauregui E Herrera D LogemannH 1991b Plants used in

Guatemala for the treatment of dematomucosal infections Screening of 38

plant extracts for anticandidal activity J Ethnopharmacol 33277-283

16 Grainje M AhmedsS 1988 Handbook of plants with pest control properties

New York John Wiley Sonsp 226

17 Garciacutea H 1974 Plantas Medicinales de Colombia Volumen I Instituto de Ciencias

Naturales Universidad Nacional Bogotaacute Colombia p 500

18 Caacuteceres A Giron L 1987 Actividad antimicrobiana de plantas usadas en el

tratamiento de afecciones de la piel y mucosas Resuacutemenes III Seminario

Nacional Medicina Tradicional y I Seminario Mesoamericano de

Etnofarmacologigravea Ciudad Guatemala p 104-109

19 Caacuteceres A Samayoa B Fletes L 1990 Actividad Antibacteriana de Plantas Usadas

en Guatemala para el tratamiento de infecciones Cuadernos de investigacioacuten No 4-

90 Guatemala DIGIUSAC p 72-73

20 Caacuteceres A Loacutepez B Juarez X Del aacuteguila J Garciacutea S 1993 Plants used in

Guatemala for the treatment of dermatophytic infections Evaluation of

antigungal activity of seven American plants J Ethnopharmacol 40(3)207-213

21 Ding B G Shi Y Xu J Hu and Q Xu 2007 Physiological responses of

Alternanthera philoxeroides (Mart) Griseb leaves to cadmium stress

Environmental Pollution 147(3) 800-803

22 Rubio MC Rezusta A Tomaacutes JG Ruesca RB 1999 Perspectiva micoloacutegica

de los dermatofitos en el ser humano Rev Iberoam Micol 16 16-22

23 Blank FM Mann J Reales A 1974 Distribution of dermatophytosis

according to age Journal Clinical Epidemiology 46(5) 432-429

24 Macura A 1993 Dermatophyte Infections International Journey of

Dermatology 32(5) 313-323

25 Restrepo Jorge Restrepo Angela 1991 Fundamentos de medicina

Enfermedades Infecciosas Cib ed 4ta Medellin Colombia

26 Cabezas AL Colorado AJ 1997 Comparacioacuten de dos teacutecnicas para medir la

susceptibilidad de Trichophyton rubrum y Trichophyton mentagrophytes frente

a tres antimicoacuteticos Centro dermatoloacutegico Federico Lleras Trabajo de grado

(Bacteriologiacutea)Universidad de los Andes Facultad de Ciencias

27 Rebell G Taplin D 1970 Dermatophytes Their Recognition and Identification

University of Miami Press Florida

28 Cadena AP Pentildearete L 1995 Evaluacioacuten de 3 pruebas de laboaratorio

empleadas en la diferenciacioacuten de Trichophyton mentagrophytes y

Trichophyton rubrum en el Centro Dermatoloacutegico Federico Lleras Acosta

Trabajo de grado (Bacteriologiacutea)Universidad de los Andes Facultad de

Ciencias

29 Trejos EJ 2009 Evaluacioacuten de paraacutemetros para pruebas de susceptibilidad

antifuacutengica en hongos filamentosos mediante la teacutecnica de difusioacuten en agar

Trabajo de grado (Bacteriologiacutea) Universidad Javeriana Facultad de Ciencias

30 Chavez J 2006 Susceptibilidad in vitro de hongos miceliales aislados de pacientes con caacutencer Instituto Nacional de Cancerologiacutea ESE Santafeacute de Bogotaacute Trabajo de grado (Bacterioacuteloga) Universidad Javeriana Facultad de Ciencias

31 Mesa LM Arcaya N Cantildeas O Machado Y 2004 Evaluacioacuten de los caracteres fenotiacutepicos para diferenciar Candida albicans de Candida dubliniensis Rev Iberoam Micol 21135-138

32 Suaacuterez VL Lancha MR 2004 Identificacioacuten de levaduras de exudados vaginales caracteriacutesticas cliacutenicas asociadas a la candidiasis Rev Cubana med trop 56(1)21-5

33 Nintildeo F 2010 Evaluacion de metabolitos secundarios del hongo Ganoderma lucidum con actividad antifungica frente a Fusarium spp de intereacutes cliacutenico Trabajo de grado Universidad Javeriana

34 Hennebelle T Sahpaz S Joseph H Bailleul F 2008 Ethnopharmacology of

Lippia alba Journal of Ethnopharmacology 116211ndash222 France

35 Holetz FB Pessini GL Sanches NR Cortez DAG Nakamura CV Filho

BPD 2002 Screening of some plants used in the brazilian folk medicine for

the treatment of infectious diseases Memorias do Instituto acuteOswaldo Cruz 97

1027ndash1031

36 Alvarado D Diacuteaz MC Silva V 2002 Identificacioacuten y susceptibilidad

antifuacutengica de Candida spp aisladas de micosis invasora Influencia

del porcentaje de inhibicioacuten del crecimiento para la determinacioacuten de CIM

Rev meacuted Chile 130(4) 65-69

37 MaldonadoB ReviaacutekinaV PanizoM Dolande M 2000 Susceptibilidad in

vitro de candida albicans a itraconazol y fluconazol estudio comparativo por

tres meacutetodos Susceptibility in vitro of candida albicans to itraconazole and

fluconazole comparative study by three methods Antibiot infecc 8(3)111-115

38 Torres NA Aacutelvarez C Rondoacuten MA 2009 Evaluacioacuten mediante tres teacutecnicas de susceptibilidad a fluconazol en especies de Candida aisladas en pacientes con infecciones invasoras Rev Chil Infect 26 (2) 135-143

39 Lacasa E Mazuelos EM Ingroff A 2007 Meacutetodos estandarizados por el CLSI para el estudio de la sensibilidad a los antifuacutengicos (documentos M27-A3 M38-A y M44-A) Revista Iberoamericana de Micologiacutea - ISBN 978-84-611-8776-8

40 Caacuteceres A Lopez BR Giron M 1991 Plants used in Guatemala for the treatment of dermatophytic infections 1 Screening for antimycotic activity of 44 plant extracts J Ethnopharmacol 31 (3) 263-76

41 Adamu H AbayeOJ Kafu SE 2006 Antifungal activity of extracts of some Cassia detarium against dermatophytes Natural product radiance 5 (5) 357-360

ANEXO 1

FOTOS DE PLANTAS DE ESTUDIO

Gliricidia sepium Senna occidentalis

Lippia alba Alteranthera albotomentosa

Psidium guajava

ANEXO 2

FOTOS DE CADA ESPECIE DE PLANTA EN EXTRACCIOacuteN ALCOHOLICA FRACCIONADA

Tipo de extraccioacuten seguacuten solvente (de izquierda a derecha) Eacuteter de Petroacuteleo

Diclorometano y Acetato de Etilo

Psidium guajava

Alteranthera albatomentosa

Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3

MEDIO AGAR MUELLER HINTON MODIFICADO

Mueller Hinton 38 gL

Glucosa 2

Azul de metileno 1 mlL

En 1 litro de agua destilada se agrega el polvo Mueller Hinton la glucosa y el azul de

metileno Se mezcla muy bien y se calienta lentamente hasta que se disuelva y

homogenice Se esteriliza a 120ordmC durante 40 min

Para el azul de metileno se mezcla 1 g de Azul de Metileno en polvo en 200 ml de agua

destilada y se pone en agitacioacuten hasta homogenizar la muestra

ANEXO 4

MICROORGANISMOS CULTIVADOS

Tmentagrophytes en agar Oatmeal

Mcanis en agar Oatmeal

Calbicans en agar Sabouraud

ANEXO 5

DIAGRAMA DE FLUJO EXTRACCION CON ETANOL

ANEXO 6

DIAGRAMA DE FLUJO FRACCIONAMIENTO LIacuteQUIDO ndash LIacuteQUIDO

ANEXO 7

FOTOS MONTAJE PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD

Dos concentraciones utilizadas por extracto de izquierda a derecha (1 mgmL y 5

mgmL)

Reacuteplicas de 4 cajas por extracto analizado



TATIANA VILA TORRES

DIRECTORA MARIA XIMENA RODRIGUES

CO-DIRECTORA SILVIA RESTREPO

TABLA DE CONTENIDO

INTRODUCCIOacuteN


2 MARCO TEORICO







212 Psidium guajava





213 Lippia alba















22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES

222 ETIOLOGIA







3 OBJETIVOS



LISTA DE ANEXOS



FRACCIONADA


PREPARACIOacuteN


INTRODUCCIOacuteN


















costos (5)





extraccioacuten (6)






























2 MARCO TEORICO



















212 Psidium guajava










Familia Myrtaceae












floccosum (15)



(16)








213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


TABLA DE CONTENIDO

INTRODUCCIOacuteN


2 MARCO TEORICO







212 Psidium guajava





213 Lippia alba















22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES

222 ETIOLOGIA







3 OBJETIVOS



LISTA DE ANEXOS



FRACCIONADA


PREPARACIOacuteN


INTRODUCCIOacuteN


















costos (5)





extraccioacuten (6)






























2 MARCO TEORICO



















212 Psidium guajava










Familia Myrtaceae












floccosum (15)



(16)








213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)




3 OBJETIVOS



LISTA DE ANEXOS



FRACCIONADA


PREPARACIOacuteN


INTRODUCCIOacuteN


















costos (5)





extraccioacuten (6)






























2 MARCO TEORICO



















212 Psidium guajava










Familia Myrtaceae












floccosum (15)



(16)








213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


LISTA DE ANEXOS



FRACCIONADA


PREPARACIOacuteN


INTRODUCCIOacuteN


















costos (5)





extraccioacuten (6)






























2 MARCO TEORICO



















212 Psidium guajava










Familia Myrtaceae












floccosum (15)



(16)








213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


INTRODUCCIOacuteN


















costos (5)





extraccioacuten (6)






























2 MARCO TEORICO



















212 Psidium guajava










Familia Myrtaceae












floccosum (15)



(16)








213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)

















2 MARCO TEORICO



















212 Psidium guajava










Familia Myrtaceae












floccosum (15)



(16)








213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


212 Psidium guajava










Familia Myrtaceae












floccosum (15)



(16)








213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


213 Lippia alba









Familia Verbenaceae













moniliforme) (9)





























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)

























(9)













22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)








22 MICROORGANISMOS

221 GENERALIDADES






(2426)

























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


























hifa (25)













3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)





3 OBJETIVOS








NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)




NOMBRE COMUN

USO ETNOMEDICO

PARTE UTILIZADA


GRADO EFECTIVIDAD






441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)



441 MICROORGANISMOS




Javeriana







































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)




































Verde oscuro denso

Verde oscuro denso



Verde oliva denso





Verde oscuro denso










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)










(cm)


(cm)

Lalba 11875 04913

Gsepium 11056 08463





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)





(ver Anexo 10)



































































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)
























































6 CONCLUSIONES













inhibicioacuten


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


Bibliografiacutea












Press 12 1-34









Renarm no 596







Avila I Jornada







































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)








































Ciencias













1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)














1027ndash1031













ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


ANEXO 1




Psidium guajava

ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


ANEXO 2




Psidium guajava


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


Gliricidia sepium

Senna occidentalis

Lippia alba

ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


ANEXO 3



Glucosa 2







ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


ANEXO 4





ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


ANEXO 5


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


ANEXO 6


ANEXO 7



mgmL)


ANEXO 7



mgmL)


evaluacion de la actividad antimicotica de algunas …

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