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EVALUACIÓN DE DIFERENTES MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN
(INFORME)
INTRODUCCIÓN
Los conceptos sobre infecciones y los métodos para combatirlas se han mantenido
vigentes desde los tiempos de Hipócrates, quién ya 400 años antes de Cristo, promulgaba
medidas para el control de las infecciones, hoy en día se emplean métodos más
sofisticados y de alta tecnología. Son muchas las ciencias que frecuentemente se ven
enfrentadas a seleccionar el método de esterilización y desinfección adecuados para
evitar la contaminación de sus materiales y objetos de trabajo, destrucción total de todos
los microorganismos y agentes infecciosos los que por sus características de precisión,
termolabilidad, costo elevado, y que además presentan cavidades, lúmenes,
sinuosidades, válvulas, anillos y otros, dificultan la decisión.
Es importante precisar que eliminar por completo los gérmenes es un imposible. Ya que
muchos de los microorganismos que acaban provocando una contaminación conviven de
forma pacífica con el personal. Estos casos abundan más en las ciencias de la medicina.
Sin embargo, y a pesar de que estos campos abonados para estos microorganismos, las
autoridades sanitarias de todos los países batallan para reducir las consecuencias que
pueden traer, mediante la aplicación de ciertas normas preventivas conocidas
mundialmente como precauciones universales. Precauciones como el simple lavado de
manos de todo el personal. De igual forma la utilización de barreras protectoras
((mascarilla, guantes, etc), la desinfección y la esterilización de materiales (Normas de
Higiene). La lista de medidas preventivas son innumerables.
Generalmente se utilizan métodos de desinfección de alto nivel que sólo destruyen
microorganismos en las formas vegetativas y no en las formas esporuladas. Estos
desinfectantes provocan corrosión y alteración en su estructura en el tiempo.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Evaluar la efectividad de algunos métodos de esterilización y desinfección.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Evaluar la esterilidad del medio ambiente del laboratorio
Evaluar la contaminación de la cavidad oral.
Evaluar la desinfección de los mesones.
Evaluar la efectividad de la esterilización en un cultivo bacteriano.
Evaluar el isodine como antiséptico en la piel.
Determinar el método de desinfección más apropiado para la industria alimentaria.
TEORÍA RELACIONADA
DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN
La desinfección es la eliminación de todos los gérmenes dirigida a evitar totalmente la
transmisión de determinados microorganismos indeseables, mediante la transmisión de
determinados agresiones a su estructura o a su metabolismo sin considerar su estado
funcional.
La esterilización, por otra parte, implica la destrucción de todas las formas de vida de los
microorganismos, sobre todo de esporas, especialmente resistentes a las condiciones
externas.
Desinfección química
Una desinfección total no puede alcanzarse realmente con medios químicos solamente,
puesto que las esporas raramente se destruyen así. Generalmente tampoco puede
esperarse acción viricida y para la destrucción de hongos patógenos deben emplearse
igualmente medios especiales. Se diferencia una desinfección grosera para cuerpos,
paredes, vehículos, establos, excrementos, letrinas, etc.
Condiciones que influyen en la acción antimicrobiana
Temperatura: a mayor temperatura mayor acción.
Tipo de microorganismo: las células vegetativas en desarrollo son mucho más
susceptibles que las esporas.
Estado fisiológico de las células: las células jóvenes son más vulnerables que las
viejas.
Ambiente: El calor es más eficaz en un medio ácido que en uno alcalino.
La consistencia del material, acuoso o viscoso, influye marcadamente en la penetración
del agente.
Las concentraciones altas de carbohidratos aumentan, por lo general, la resistencia
térmica de los organismos.
La presencia de materia orgánica extraña reduce notablemente la eficacia de los agentes
químicos antimicrobianos por inactivar éstos o proteger al microorganismo.
Criterio de muerte de un microorganismo
Pérdida irreversible de la capacidad de reproducción en un medio adecuado. Para poder
determinar la eficacia antimicrobiana (la muerte de los microorganismos) se utilizan
técnicas que descubran a los sobrevivientes es decir, a los capaces de reproducirse; ya
que los incapaces de reproducirse están muertos. Esto se determina generalmente
mediante métodos cuantitativos de siembra en placa en los que los supervivientes se
detectan porque forman colonias.
Cuando una población microbiana se expone a un agente letal, la cinética de la muerte es
casi siempre exponencial ya que el número de supervivientes disminuye de forma
geométrica con el tiempo. Para establecer los procedimientos de esterilización hay que
tener en consideración dos factores: la tasa de mortalidad y el tamaño de la población
inicial. En la práctica de la esterilización la población microbiana que ha de ser destruida
es mixta. Como los microorganismos difieren ampliamente en su resistencia a los agentes
letales, los factores que se hacen significativos son el tamaño de la población inicial y la
tasa de mortalidad de los miembros más resistentes de la población mixta. Para asegurar
la fiabilidad de los métodos de esterilización se utilizan suspensiones de esporas de
resistencia conocida. Los procedimientos rutinarios de esterilización se diseñan siempre
de forma que proporcionen un amplio margen de seguridad.
ESTERILIZANTES FÍSICOS
El calor húmedo (autoclave a vapor) y el óxido de etileno (gas) son los principales
sistemas de esterilización. Algunos compuestos químicos considerados como
desinfectantes pueden utilizarse como esterilizantes si se usan adecuadamente. Los
procedimientos empleados para tales propósitos deben ser efectivos contra toda clase de
microbios y ser relativamente insensibles a su estado metabólico.
Altas Temperaturas
La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los métodos
más efectivos para destruir microorganismos. En este caso la esterilización por calor se
basa en la desnaturalización proteica y la desorganización de las membranas lipídicas. La
acción letal del calor es una relación de temperatura y tiempo afectada por muchas
condiciones.
Esterilización por calor húmedo: (121 a 132º C durante diversos intervalos de
tiempo). La esterilización por calor húmedo destruye los microorganismos por
coagulación irreversible, desnaturalización de enzimas y proteínas.
El Autoclave es el aparato más comúnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar
cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a
temperaturas mayores a 100°C. Una temperatura de 121°C (una atmósfera de
sobrepresión). El tiempo de exposición depende del volumen del líquido.
Tindalización: Se utiliza cuando las sustancias químicas no pueden calentarse por encima
de 100° C sin que resulten dañadas. Consiste en el calentamiento del material de 80 a
100° C hasta 1 hora durante 3 días con sucesivos períodos de incubación. Las esporas
resistentes germinarán durante los períodos de incubación y en la siguiente exposición al
calor las células vegetativas son destruidas.
Pasteurización: La leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y vino) se someten a
tratamientos de calor controlado que sólo matan a ciertos tipos de microorganismos pero
no a todos. La temperatura seleccionada para la pasteurización se basa en el tiempo
térmico mortal de microorganismos patógenos.
Esterilización por calor seco: (se utiliza para materiales sólidos estables al calor)
El calor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos por niveles elevados de
electrolitos, procesos oxidativos y fusión de membranas. Estos efectos se deben a la
transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en contacto
con éstos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra más lentamente
que el vapor de agua en materiales porosos. La acción destructiva del calor sobre
proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad
de agua del medio es baja. Esto se debe a que las proteínas se estabilizan mediante
uniones puente de hidrógeno intramoleculares que son más difíciles de romper por el
calor seco.
La Estufa de esterilización es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por
calor seco. Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodón no pueden ser
esterilizados a más de 160°C.
Horno Pasteur: El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y
otros materiales sólidos estables al calor.
Incineración: La destrucción de los microorganismos por incineración es una práctica
rutinaria en los laboratorios. Las asas de siembra se calientan a la llama de mecheros
Bunsen.
Acción directa de la llama: Se lleva al rojo el material de metal como hansas, lancetas,
agujas de disección.
Bajas Temperaturas
El metabolismo de las bacterias está inhibido a temperaturas por debajo de 0° C. Sin
embargo estas temperaturas no matan a los microorganismos sino que pueden
conservarlos durante largos períodos de tiempo. Esta circunstancia es aprovechada por
los microbiólogos para conservar los microorganismos indefinidamente.
Radiaciones: También denominado esterilización en frío. Su fundamento se basa
en el poder ionizante de la radiación que reduce o inhibe el poder multiplicador de
los microorganismos por su interacción con su DNA. La esterilización en frío
consiste en usar soluciones que contiene sustancias químicas, que diluídas en
agua destilada, provocan la destrucción de las bacterias vegetativas y esporas.
Afecta las proteínas de la membrana celular dañando su función.
Ultravioletas: Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos debido a
que forman dímeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la
duplicación y por lo tanto la pérdida de la viabilidad de las células. Son
escasamente penetrantes y se utilizan para superficies. Se usan para reducir la
población microbiana en quirófanos, cuartos de llenado asépticos en la industria
farmacéutica y para tratar superficies contaminadas en la industria de alimentos y
leche.
Filtración
Algunos materiales como los líquidos biológicos son termolábiles. Los microorganismos
quedan retenidos en parte por el pequeño tamaño de los poros del filtro y en parte por
adsorción a las paredes del poro durante su paso a través del filtro debido a la carga
eléctrica del filtro y de los microorganismos. Debido al pequeño tamaño de los virus,
nunca es posible tener certeza de que, por los métodos de filtración que dejan libre de
bacterias una solución, se van a eliminar también los virus.
Desecación
La desecación de las células vegetativas microbianas paraliza su actividad metabólica. El
tiempo de supervivencia de los microorganismos después de desecados depende de
muchos factores, entre ellos la especie microbiana. En general, los cocos Gram (-) son
más susceptibles a la desecación que los cocos Gram (+). Las endoesporas bacterianas
son muy resistentes a la desecación pudiendo permanecer viables indefinidamente.
ESTERILIZANTES QUÍMICOS
Los gases y vapores se utilizan para esterilizar objetos e instrumental que no soportan el
calor. Se utilizan como desinfectantes químicos a bajas temperaturas los aldehídos
(glutaraldehído), ácido peracético y peróxido de hidrógeno.
Esterilización mediante gas (óxido de etileno)
Las dos desventajas más importantes de este método son que el material precisa de un
tiempo de aireación antes de ser utilizado, lo que enlentece el proceso, y su elevado
coste. La efectividad de la esterilización se monitoriza con esporas de B. subtilis.
Gas plasma
El gas plasma, que se obtiene al aplicar determinadas ondas a los vapores de peróxido de
hidrógeno, posee actividad esporicida. Los productos finales de su descomposición son el
oxígeno y el agua. Los controles de eficacia del proceso pueden ser químicos o
biológicos, y en este último caso se utilizan esporas de B. subtilis niger. La principal
ventaja es que puede aplicarse a materiales sensibles a calor, no corroe los metales y no
es preciso airear el material esterilizado.
DESINFECTANTES
Son aquellas sustancias químicas que matan las formas vegetativas y no necesariamente
las formas de resistencia de los microorganismos patógenos, se aplica sobre material
inerte sin deteriorarlo. No necesariamente elimina las esporas bacterianas.
Espectro de actividad de los desinfectantes
Las sustancias con actividad biocida tienen grados variables de actividad sobre los
diferentes grupos de microorganismos. Se pueden clasificar en tres categorías según su
potencia y efectividad de acción contra los microorganismos: baja, intermedia y alta.
Los desinfectantes de bajo nivel pueden destruir la mayor parte de las formas vegetativas
bacterianas, tanto grampositivas como gramnegativas, algunos virus (virus con envoltura
lipídica) y hongos (levaduras), pero no Mycobacterium spp, ni las esporas bacterianas.
Los desinfectantes de nivel intermedio consiguen inactivar todas las formas bacterianas
vegetativas, incluyendo Mycobacterium tuberculosis, la mayoría de los virus (virus con y
sin envoltura) y hongos filamentosos, pero no destruyen necesariamente las esporas
bacterianas. En cambio, los desinfectantes de alto nivel matan bacterias vegetativas,
bacilo de tuberculosis, hongos, virus lipídicos y no lípidos, pero no necesariamente alto
número de esporos bacterianos.
Las propiedades que ha de reunir un desinfectante ideal son: amplio espectro
antimicrobiano, rápida acción microbicida, facilidad de uso, escasa capacidad para alterar
el instrumental, solubilidad en agua, estabilidad de la forma concentrada y diluida del
producto, toxicidad reducida para el hombre de las soluciones de uso, ininflamabilidad y
coste bajo o moderado.
La eficacia de los desinfectantes se puede ver alterada por varios factores. Entre éstos se
incluyen las sustancias interferentes, el tipo y grado de contaminación microbiana, la
concentración y pH de la solución desinfectante, el tiempo de exposición, el diseño y
composición del objeto a desinfectar y la temperatura a la que se realiza el proceso de
desinfección.
A continuación se describen los desinfectantes más utilizados en la actualidad,
agrupándolos según el grupo químico al que pertenecen.
Alcoholes: Los alcoholes poseen una rápida acción bactericida, actuando sobre
bacterias gramnegativas y grampositivas, y virus con envuelta, siendo por tanto
considerados como desinfectantes de bajo nivel. La concentración bactericida
óptima se sitúa en el 70%. Los alcoholes actúan desnaturalizando las proteínas
disolviendo las capas lipídicas, lesionan la membrana celular de los
microorganismos, desorganizan la estructura fosfolipídica y como agentes
deshidratantes, pero no tienen actividad residual. Los alcoholes se inactivan en
presencia de materia orgánica.
Aldehídos: Son agentes alquilantes que actúan sobre proteínas, lo que provoca
modificación irreversible de enzimas e inhibición de la actividad enzimático
(Adición nucleofílica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desinfectantes y
esterilizantes. Destruyen esporas.
Formaldehído (formalina o formol). Se utiliza como desinfectante de alto nivel en
estado líquido y gaseoso. En solución acuosa (formaldehído al 37%); posee
actividad bactericida, fungicida, virucida, tuberculicida y esporicida. Tiene poco
poder de penetración en las células, pero su actividad aumenta con la temperatura
y la humedad relativa (combinación de formaldehído gas con vapor a 70-75ºC).
Glutaraldehído: El glutaraldehído es el único esterilizante efectivo en frío. Es un
dialdehído saturado aceptado como desinfectante de alto nivel y esterilizante
químico. En solución acuosa el glutaraldehído es ácido, poco estable y no posee
actividad esporicida. Sin embargo, cuando la solución se alcaliniza (pH 7,5-8,5), se
activa y posee actividad esporicida. Su actividad biocida se debe a la alteración del
RNA, DNA y síntesis de proteínas.
Fenoles y derivados: Son desinfectantes de tipo orgánico que provocan lesiones
en la membrana citoplasmática porque desordenan la disposición de las proteínas
y fosfolípidos. Esto causa filtración de compuestos celulares, inactivación de
enzimas y lisis. Los derivados del fenol más utilizados son el hexaclorofeno
(compuesto difenílico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos son muy efectivos a
bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias.
Metales: Los más efectivos son el mercurio, plata ,cobre y zinc. Actúan inactivando
las proteínas celulares al combinarse con ellas. Entre los compuestos de mercurio
que se emplean como antisépticos en heridas superficiales de la piel y mucosas
están el mercurocromo (mercromina) y el mertiolato. Entre los compuestos de
plata utilizados como antisépticos está el nitrato de plata (AgNO3) que en solución
al 1% se ha utilizado para prevenir infecciones gonocócicas en los ojos de los
recién nacidos aunque actualmente se está reemplazando por antibióticos como la
penicilina. Entre los compuestos de cobre se encuentra el sulfato de cobre
(CuSO4) que se utiliza como algicida en los recipientes abiertos que contienen
agua. También es fungicida por lo que se utiliza para controlar las infecciones
fúngicas de plantas. Los compuestos de zinc también son fungicidas por lo que se
utilizan para tratar el pié de atleta.
Ácidos y álcalis: Actúan alterando la permeabilidad y coagulando las proteínas. En
general los ácidos son más eficaces que los álcalis. Dentro de estos compuestos
se encuentran el sulfúrico (H2SO4), nítrico (HNO3), hidróxido sódico (NaOH) e
hidróxido potásico (KOH). Tienen aplicación limitada debido a su naturaleza
cáustica y corrosiva. Aún así el NaOH se utiliza en la industria del vino para limpiar
las cubas de madera.
Compuestos inorgánicos oxidantes: actúan oxidando los componentes de la
membrana y enzimas. El agua oxigenada (H2O2) al 6% (20 volúmenes) se utiliza
como antiséptico en pequeñas heridas de la piel.
Ácido peracético (ácido peroxiacético): Es un desinfectante corrosivo frente a
metales, pero este efecto puede disminuirse modificando su pH. Su acción biocida
se debe a la desnaturalización de proteínas y enzimas y cambios de permeabilidad
de la pared celular.
Derivados de amonio cuaternario: El cloruro de benzalconio tiene una buena
actividad bactericida frente a grampositivos, pero es poco activo frente a bacterias
gramnegativas. Las bacterias gramnegativas pueden crecer en las soluciones de
estos productos. También presentan actividad fungicida y virucida sobre virus con
envoltura, pero ésta es escasa frente a virus sin envoltura y casi nula frente a
micobacterias y esporas. Poseen una buena actividad como detergentes.
Halógenos: Los halógenos especialmente el cloro y el iodo son componentes de
muchos antimicrobianos. Los halógenos son agentes fuertemente oxidantes por lo
que son altamente reactivos y destructivos para los componentes vitales de las
células microbianas.
Cloro: La muerte de los microorganismos por acción del cloro se debe en parte a la
combinación directa del cloro con las proteínas de las membranas celulares y los
enzimas. Así mismo en presencia de agua desprende oxígeno naciente (O) que oxida la
materia orgánica:
Cl2 + H2O ----------------> HCl + HClO (ácido hipocloroso)
HClO ----------------> HCl + O (oxígeno naciente)
El gas cloro licuificado se utiliza en la desinfección del agua de bebida y piscinas. El
hipoclorito sódico (lejía) al 1% se puede utilizar como desinfectante doméstico.
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actúan sobre proteínas y
ácidos nucleicos de los microorganismos.
Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, índoles y al hidroxifenol de la tirosina.
Iodo: Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de proteínas y ácidos
nucleicos. Inactiva proteínas y enzimas por oxidación de los grupos -SH a S-S, pudiendo
atacar también grupos amino, indoles, etc. Además la habilidad que tiene el iodo para
combinarse con el aminoácido tirosina resulta en la inactivación de enzimas y otras
proteínas. El iodo se puede utilizar como antiséptico bajo dos formas: i) tintura de iodo, es
una solución alcohólica (tintura) de iodo (I2) más ioduro potásico (KI) o ioduro sódico
(NaI). ii) iodóforos, son mezclas de iodo (I2) con compuestos que actúan como agentes
transportadores y solubilizadores del iodo. Los iodóforos tienen la ventaja de que no tiñen
la piel, es efectivo contra esporas en una concentración de 1600 ppm de iodo libre. Las
preparaciones de iodo se utilizan principalmente para desinfectar la piel así como en la
desinfección de pequeñas cantidades de agua. Los vapores de iodo se utilizan a veces
para desinfectar el aire.
ANTISÉPTICOS
Son aquellas sustancias químicas que previenen el crecimiento o acción de los
microorganismos ya sea destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se
refiere a sustancias que se aplican sobre el cuerpo.
La selección de un antiséptico se debe hacer teniendo en cuenta el espectro de actividad,
concentración, aceptación de los usuarios, rapidez de acción, inactivación por materia
orgánica, coste y toxicidad, entre otros.
Clorhexidina
Aunque la actividad de la clorhexidina es más lenta que la de los alcoholes, se ha
comprobado su eficacia para reducir la flora de la piel tras unos segundos de aplicac ión.
Poseen buena actividad frente a bacterias grampositivas, pero ésta es menor frente
bacterias gramnegativas y hongos. Tiene una acción remanente superiora 6 h. Su
actividad se reduce por alteración de pH (actividad máxima a pH 5,5-7), dilución con agua
corriente, jabones con aniones orgánicos o inorgánicos.
Paraclorometaxilenol
Posee una buena actividad frente a bacterias grampositivas, pero ésta es menor frente a
bacterias gramnegativas, hongos y virus. La actividad aumenta en presencia de EDTA. No
es agresivo para la piel y produce una actividad residual que perdura durante varias
horas. Sin embargo, este antiséptico se neutraliza en presencia de detergentes no
iónicos. Las concentraciones de uso son del 0,5-3,75%.
Yodóforos
Las formulaciones de yodóforos utilizadas como antisépticos contienen menos yodo libre
que las formuladas como desinfectantes (entre 0,75-1,2% de yodo disponible). Su
actividad residual es mínima, inferior a otros antisépticos, y su actividad antimicrobiana es
neutralizada por materia orgánica. El yodo penetra fácilmente en los microorganismos a
través de sus membranas celulares, destruyendo las proteínas. Son bactericidas de
potencia intermedia, poseen actividad frente a bacterias grampositivas y gramnegativas,
pero tienen escasa actividad frente a micobacterias. Son activos frente a virus con y sin
envoltura. Sin embargo, su actividad se reduce en presencia de sustancias alcalinas y
materia orgánica. Son corrosivos para los metales.
Agentes iónicos y anfóteros
Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la disposición
de las proteínas y de los fosfolípidos, por lo que se liberan metabolitos desde la célula, se
interfiere con el metabolismo energético y el transporte activo. No son esporicidas ni
tubercolicidas aún en altas concentraciones.
Su principales ventajas se hallan en que son inodoros, no tiñen, no son corrosivos de
metales, estables, no tóxicos y baratos.
Organo Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las proteínas, inactivando
enzimas. Dentro de los mercuriales orgánicos se encuentran el metafen y el merthiolate.
Colorantes
Interfieren en la síntesis de ácidos nucleicos y proteínas (acridina) o interfieren en la
síntesis de la pared celular (derivados del trifenilmetano).
La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separándolas físicamente. Esto
provoca errores en la duplicación del DNA.
EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS DESINFECTANTES Y
ANTISÉPTICOS
Técnica de dilución en tubo: Primero se realizan diferentes diluciones del agente
químico. El mismo volumen de cada dilución se dispensa en tubos estériles. A cada tubo
se le añade la misma cantidad de una suspensión del microorganismo utilizado como
prueba. A determinados intervalos de tiempo se transfiere una alícuota de cada tubo a
otro tubo que contenga medio de cultivo. Estos tubos inoculados se incuban a la
temperatura óptima de crecimiento del microorganismo utilizado como prueba durante 24
a 48 horas. Al cabo de este tiempo se examina el crecimiento del microorganismo
mediante la aparición de turbidez en el tubo (crecimiento +) o ausencia de turbidez
(crecimiento -). Aquellos tubos que presenten crecimiento negativo indican la dilución a la
cual ese agente químico mata al microorganismo utilizado como prueba cuando este
microorganismo es expuesto al agente químico durante ese período de tiempo.
Técnica de la placa de agar: Se inocula una placa que contenga medio de cultivo sólido
con el microorganismo utilizado como prueba. El agente químico se coloca en el centro de
la placa, bien dentro de un cilindro o impregnado en un disco de papel. Al cabo de 24 a 48
horas se observan zonas de inhibición alrededor del agente químico. Una modificación de
esta técnica es la incorporación del agente químico en el medio de cultivo antes de
verterlo sobre la placa. Una vez solidificado se inocula con el microorganismo utilizado
como prueba, se incuba y se examina el crecimiento microbiano.
Técnica del coeficiente fenólico: Es una técnica estandarizada que se utiliza para
comparar el poder desinfectante de un agente químico frente al del fenol. Es una
modificación de la técnica de dilución en tubo tal como se describe a continuación: (i) Se
prepara una serie de tubos conteniendo cada uno 5 ml de diferentes diluciones del
desinfectante. (ii) A la vez se prepara una segunda serie de tubos que contengan
diferentes diluciones de fenol. (iii) Cada tubo de las dos series se inocula con 0,5 ml de un
cultivo de 24 horas del microorganismo utilizado como prueba. (iv) A los 5, 10 y 15
minutos se recoge una alícuota de cada tubo que se inocula en otro tubo que contenga
medio de cultivo estéril. (v) Estos tubos inoculados se incuban durante 24 a 48 horas y se
observa el crecimiento del microorganismo (aparición de turbidez). (vi) La mayor dilución
del desinfectante que mate a los microorganismos en 10 minutos pero no los mate en 5
minutos se divide por la dilución mayor de fenol que dé los mismos resultados. El número
obtenido es el coeficiente fenólico de ese desinfectante.
PRINCIPIOS DE LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN
La desinfección de superficies inanimadas pueden llevarse a cabo por medio de
agentes físicos o químicos ( desinfección domestica: pisos, paredes, muebles,
equipos médicos, etc; desinfección de instrumentos quirúrgicos ).
Durante la higiene debe minimizarse la turbulencia para prevenir la dispersión del
polvo que puede contener microorganismos.
Los productos de limpieza y desinfección deben seleccionarse en base a su uso,
eficacia, aceptabilidad, seguridad y costo.
La naturaleza de la contaminación microbiana, influye en los resultados de la
desinfección química. Las bacterias, virus, esporas, hongos están presentes en el
aire y la superficie del ambiente.
La aplicación directa de la solución desinfectante ( domestico o inmersión de
instrumental) es muy efectiva que por rocío con aerosol .
La desinfección es inactivo en presencia de materia orgánica. No penetra los
aceites o grasas adheridos al instrumental.
Los desinfectantes deber ser bactericidas, pseudomonacida, fungida y esporocida.
Para la desinfección de instrumental o equipos se seleccionaran las soluciones
según nivel desinfección que uno quiere alcanzar.
La calidad de los desinfectantes se controlará según sus especificaciones
técnicas.
El almacenamiento debe efectuarse en un lugar fresco ( temperatura inferior a los
25 °C y oscuro, envases herméticos y tiempo de almacenamiento no debe superar
los 120 días.
PRINCIPIOS DE ESTERILIZACIÓN
La selección del agente para el logro de una buena esterilización se basa
especialmente en el material empleado. Las formas de resistencia , las esporas,
requieren de un tiempo de esterilización crítico ( calor húmedo, calor seco, oxido
de etileno, glutaraldehido activado y radiación ionizante).
El calor húmedo en la forma de vapor saturado a presión es eficaz para la
destrucción de todas las formas microbianas, incluso las esporas ( vapor a presión
– calor húmedo)..
La aplicación de altas temperaturas produce en el microorganismo
desnaturalización proteica y desorganización de las membranas lipídicas.
La presión mayor que la atmósfera es vital para acrecentar la temperatura del
vapor y favorecer la destrucción microbiana por el calor.
Al interactuar el vapor en la cámara de esterilización con artículos fríos se produce
la condensación liberando calor, humedeciendo y calentando los productos en
forma simultanea ( calor y humedad).
Las formas vegetativas de la mayoría de las bacterias son destruidas en pocos
minutos entre temperaturas de 54 y 65°C. Pero formas esporulados pueden resistir
temperaturas de 115°C por mas de 3 horas.
El vapor que entra a presión y permanece arriba del aire, desaloja el aire tanto de
la cámara como del contenido del bulto por esterilizar forzando a salir a través del
orificio de descarga.
La esterilización por calor seco de microorganismos requiere de altas
temperaturas para obtener el daño irreversible ( 160° C durante 2 horas).
Los agentes químicos producen la disolución de la capa lipídica de las membranas
celulares por acción de detergente, por alteraciones irreversibles de proteínas y
ácidos nucleicos con desnaturalizantes, oxidantes.
La velocidad de desinfección esterilizante aumenta con la concentración del
compuesto y con la temperatura.
No se consideran estériles los bordes de las envolturas una vez que se abren los
sobres
Los materiales ( batas, equipo y otros) húmedos se clasifican como contaminantes.
FLUJOGRAMAS
Procedimiento Para Evaluar La Esterilidad Del Medio Ambiente Del Laboratorio
Determinar la presencia de mohos y levaduras
Abrir caja Agar saboreaud
Exponer a ambiente 8, 16, 20, 24 min
Incubar 22ºC, 72-92horas
Determinar la presencia de bacterias
Abrir caja Agar nutritivo
Exponer a ambiente 8, 16, 20, 24 min
Incubar 37ºC, 24-48horas
Evaluar La Desinfección De Los Mesones
Efectividad del hipoclorito de sodio
Humedecer escobillón
Frotar mesón
Sembrar
Incubar
Desinfectar hipoclorito de sodio
Frotar con otro escobillón
Sembrar
Incubar
Efectividad del alcohol al 70%
Humedecer escobillón
Frotar mesón
Sembrar
Incubar
Desinfectar con alcohol al 70%
Frotar con otro escobillón
Sembrar
Incubar
Evaluar el poder antiséptico del fenol al 5%
Empapar con escobillón cultivo líquido
Sembrar
Incubar 37ºC de 24 a 48h
Empapar escobillón Cepa bacteriana
Dejar en fenol al 5% 10min
Sembrar en agar
Incubar a 37ºC de 24 a 48h
Evaluar La Efectividad De La Esterilización En Un Cultivo Bacteriano
Sembrar con asa
Incubar 37ºC de 24 a 48h
Sembrar con asa
Incubar 62ºC por 30 min
Sembrar con asa
Incubar 90ºC por 10 min
Evaluar El Isodine Como Antiséptico En La Piel
Frotar antebrazo escobillón
Sembrar Agar Sangre 37ºC de 24 a 48ºC
Desinfectar antebrazo Isodine
Frotar antebrazo escobillón
Sembrar Agar Sangre
Incubar 37ºC de 24 a 48h
Evaluar La Contaminación De La Cavidad Oral
caja de petri (Agar Sangre) Respirar y Espirar
Incubar 37º de 24 a 48h
RESULTADOS
EVALUAR LA ESTERILIDAD DEL MEDIO AMBIENTE DEL LABORATORIO
Determinar la presencia de mohos y levaduras. (medio agar saboreaud )
Caja 1. Se expuso al ambiente durante 8 min. se observó 1 UFC, no presentó cambio de
color el medio. (ver anexo 1)
Caja 2. Se expuso al ambiente durante 16min. se observó 4 UFC amarillas y 3 UFC
blancas. El medio se tornó opaco. (ver anexo 2)
Caja 3. Se expuso al ambiente durante 24 min. se observó 5 UFC colonias blancas y 5
UFC amarillas. No presentó cambio de color el medio. (ver anexo 3)
Caja 4. Se expuso al ambiente durante 30min. se observó tres colonias blancas y cuatro
amarillas, sin cambio en el medio. (ver anexo 4)
Determinar la presencia de bacterias. (medio agar nutritivo )
Caja 1. Se expuso al ambiente durante 8 min. se observó 2 UFC blancas, no presentó
cambio de color el medio. Presencia de moho. (ver anexo 5)
Caja 2. Se expuso al ambiente durante 16min. se observó 1 UFC blanca en el centro y
variedad de estas en un extremo de la caja. No presentó cambio de color el medio. (ver
anexo 6)
Caja 3. Se expuso al ambiente durante 24 min. se observó 1 UFC blanca en el centro y
variedad de estas en un extremo de la caja. No presentó cambio de color el medio. (ver
anexo 7)
Caja 4. Se expuso al ambiente durante 30min. se observó 1 UFC blanca, sin cambio en el
medio. (ver anexo 8)
EVALUAR LA DESINFECCIÓN DE LOS MESONES
Efectividad del hipoclorito de sodio. (medio agar nutritivo )
Caja 1. Sin hipoclorito de sodio, se observó 3 UFC blancas y 1 UFC amarilla. (ver anexo
9)
Caja 2. Con hipoclorito de sodio, no presentó UFC. (ver anexo 10)
Efectividad del alcohol al 70% (medio agar nutritivo)
Caja 1. Sin alcohol, se observó 1 UFC blanca y 1 UFC amarilla. (ver anexo 11)
Caja 2. con alcohol, se observó 3 UFC blancas. (ver anexo 12)
Evaluar el poder antiséptico del fenol al 5%
Sin fenol:
Caja 1. En el medio EMB se sembró E. coli, se observaron siembras de color morado. No
se pudo contar las UFC. (ver anexo 13)
Caja 2. En el medio MacConkey se sembró Shigella. Las colonias eran de un color mas
claro que el medio, este era naranja, casi no se distinguía el medio con la siembra, se
denota un margen en ella que las diferencia. (ver anexo 14)
Caja 3. En el medio BP, con S. aureus. Se observó siembra negra y medio verde oscuro.
(ver anexo 15)
Caja 4. En el medio endo C se sembró Proteus sp. esta se observó incolora y el medio
fucsia. (ver anexo 16)
Caja 5. En el medio cetrimide, con Pseudomona, se observó transparente. (ver anexo 17)
Con fenol:
No se observó crecimiento alguno en los diferentes medios y con las diferentes cepas
utilizadas. (ver anexos 18 al 22)
Evaluar la efectividad de la esterilización en un cultivo bacteriano
Caja 1. En el medio EMB se sembró E. coli, se observaron siembras de color morado. No
se pudo contar las colonias. (ver anexo 23)
Caja 2. En el medio MacConkey se sembró Shigella. Las colonias eran incoloras. (ver
anexo 24)
Caja 3. En el medio BP, con S. aureus. Se observó siembra negras, lustrosas, convexas,
con borde estrecho blanquecino, rodeado por un halo claro y medio verde oscuro. (ver
anexo 25)
Caja 4. En el medio endo C se sembró Proteus sp. Se observó el medio fucsia. (ver anexo
26)
Caja 5. En el medio cetrimide, con Pseudomona. No hubo crecimiento ni cambio del
medio. (ver anexo 27)
EVALUAR EL ISODINE COMO ANTISÉPTICO EN LA PIEL(agar sangre)
Caja 1. Sin isodine. Se observó 15 UFC blancas y 8 UFC amarillas, el medio cambio de
color se tornó de color café. (ver anexo 28)
Caja 2. Con isodine. Se observó 1 UFC amarilla y 1 UFC mamon. Medio de color café.
(ver anexo 29)
EVALUAR LA CONTAMINACIÓN DE LA CAVIDAD ORAL(agar sangre)
Caja 1. Se observó 2 UFC blancas, 1 UFC amarilla y 1 UFC mamon. El medio se tornó
café. (ver anexo 30)
ANÁLISIS DE RESULTADOS
EVALUAR LA ESTERILIDAD DEL MEDIO AMBIENTE DEL LABORATORIO
La aparición de colonias indican la presencia de mohos y bacterias, esto se debe a que no
hay un grado completo de esterilidad en el laboratorio ya sea, por que no se practican
algunos principios de esterilización y desinfección.
EVALUAR LA DESINFECCIÓN DE LOS MESONES
Efectividad del hipoclorito de sodio.
Debido a que no hubo aparición de colonias al utilizar el hipoclorito de sodio indica que es
un método activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y además es efectivo en
un amplio rango de temperaturas.
Efectividad del alcohol al 70%.
Debido a la aparición de colonias se considera la actividad del al alcohol poco efectivo.
Este se considera con una rápida acción bactericida, actuando sobre bacterias
gramnegativas y grampositivas, y virus con envuelta, siendo por tanto considerado como
desinfectantes de bajo nivel. No destruyen esporas y tienen una acción germicida lenta.
Evaluar el poder antiséptico del fenol al 5%.
Se considera un desinfectante efectivo, pues no hubo aparición de colonias. La solución
acuosa al 5% de fenol mata rápidamente a las células vegetativas de los
microorganismos.
Evaluar la efectividad de la esterilización en un cultivo bacteriano.
Debido a las características que presentaron cada una de las siembras se puede decir
que hay efectividad en la esterilidad de cada uno de los medios.
EVALUAR EL ISODINE COMO ANTISÉPTICO EN LA PIEL
Debido a la presencia de UFC se considera poco efectivo, el isodine se considera como
bactericidas de potencia intermedia, posee actividad frente a bacterias grampositivas y
gramnegativas, pero tienen escasa actividad frente a micobacterias. Son activos frente a
virus con y sin envoltura. Sin embargo, su actividad se reduce en presencia de sustancias
alcalinas y materia orgánica.
EVALUAR LA CONTAMINACIÓN DE LA CAVIDAD ORAL
La presencia de UFC indica el crecimiento de gérmenes aerobios y anaerobios.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Cómo actúa, desde el punto de vista químico, cada método de esterilización
y desinfección?
Alcoholes
Los alcoholes permiten observar la interacción de los solventes orgánicos con las
membranas lipídicas. Desorganizan la estructura lipídica por penetración en la región
hidrocarbonada los alcoholes de cadena corta producen alteraciones cuantitativamente
mayores en la organización de la membrana que los homólogos superiores. Los alcoholes
y otros solventes orgánicos también desnaturalizan las proteínas celulares. Sin embargo,
su acción como desinfectante para destruir esporas a temperaturas normales es muy
limitada. Por esta razón no se debe confiar en ellos para a esterilización de los
instrumentos. Es activo contra microorganismos grampositivos, gramnegativos y
acidorresistentes y tiene mayor efectividad en concentraciones de 50-70%
Halógenos
Cloro y yodo: se encuentran entre los desinfectantes mas útiles. El yodo como
desinfectante de la piel y el cloro como desinfectante del agua.
Los compuestos de yodo son los halógenos mas eficaces disponibles para desinfección.
El yodo es un elemento altamente reactivo que precipita las proteínas y oxida enzimas
esenciales. Tiene actividad microbicida contra prácticamente todos los microorganismos,
incluyendo bacterias esporuladas y micobacterias. La actividad microbicida de las
soluciones de yodo no es afectada por la concentración del elemento ni por el pH, aunque
su eficacia aumenta en soluciones ácidas debido a la liberación de mas yodo libre. El
yodo actúa con mayor rapidez que otros halógenos y que los compuestos de amonio
cuaternario. Sin embargo, la actividad del yodo puede disminuir en presencia de algunas
sustancias orgánicas e inorgánicas, es necesario limpiar las superficies cutáneas antes de
utilizar el yodo como desinfectante. El yodo existe principalmente en la forma de I2 a
valores de pH inferiores a 6, donde se manifiesta la acción bacteric ida máxima. El índice
germicida disminuye a medida que el pH se incrementa por encima de 7.5 las mezclas de
yodo con diferentes agentes tensioactivos que actúan como transportadores para el yodo
se conocen como yodóforos. Los transportadores son polímeros neutros que sirven no
solo para aumentar la solubilidad del yodo sino también para proporcionar un reservorio
de liberación sostenida de halógeno.
Los hipocloritos y las eloraminas orgánicas e inorgánicas: la acción desinfectante de
todos los compuestos clorados se debe a la liberación de cloro libre. En el agua pueden
existir tres formas de cloro: cloro elemento (Cl2), un oxidante muy fuerte, ácido
hipocloroso (HOCl) e ión hipoclorito (OCl). El cloro puede actuar mediante oxidación
irreversible de grupos SH en enzimas esenciales. Se cree que los hipocloritos
interaccionan con componentes citoplasmáticos para formar derivados N-cloro tóxicos,
capaces de interferir con el metabolismo celular. la eficacia del cloro es inversamente
proporcional al pH, y la mayor actividad se obtiene a pH ácido. Eso está de acuerdo con la
mayor eficacia del ácido hipocloroso comparado con el ión hipoclorito. La actividad de los
derivados del cloro aumenta también con la concentración.
El producto clorado más utilizado en desinfección es el hipoclorito de sodio (agua
lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y además es
efectivo en un amplio rango de temperaturas.
La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al ácido hipocloroso (HClO) y al
Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ión
hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede penetrar fácilmente en
la célula a través de la membrana citoplasmática. En cambio, el ácido hipocloroso es
neutro y penetra fácilmente en la célula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.
Fenoles
Estos germicidas se emplean ahora rara vez como desinfectantes. Sin embargo, tienen
interés históricos debido a que fueron usados como patrón de comparación para evaluar
la actividad de otros germicidas. La relación de la actividad germicida entre un compuesto
bajo prueba y una concentración especifica de fenol proporcionada del coeficiente fenol.
El fenol no es esporicida a temperatura ambiente (pero si cuando la temperatura se
aproxima a 100ºC) y resulta poco activo contra los virus no lipídicos. Se cree que el fenol
actúa mediante alteración de las membranas que contienen lípidos, lo que conduce a fuga
del contenido celular. los derivados fenólicos son activos contra bacterias normalmente
resistentes, debido a que la pared celular de esos microorganismos tiene una
concentración muy alta de lípidos. El contacto con los derivados fenólicos con productos
alcalinos reducen en forma significativa su actividad, mientras que la halogenación de los
fenólicos potencian su efecto. También aumenta la eficacia la introducción de grupos
alifáticos o aromáticos en el núcleo de los fenoles halógenos.
2. Qué tipo de desinfectante utilizaría en las empresas alimentarias?, sustente
su respuesta.
Los hipocloritos son los compuestos clorados más útiles y se encuentran disponibles en
forma líquida o en polvo, como sales de calcio, litio y sodio. Los hipocloritos se emplean
en gran escala en la industrias láctea y alimenticia para el saneamiento del equipo
utilizado en el procesamiento de alimentos.
3. Fundamento de las pruebas realizadas
BAIRD PARKER AGAR
Para el aislamiento y la diferenciación de estafilococos en materiales y materiales
farmacéuticos.
Este medio de cultivo contiene cloruro de lítio y telurito para la inhibición de la flora
acompañante, en tanto que el piruvato y la glicocola actúan favoreciendo selectivamente
el crecimiento de estafilococos.
Sobre el medio de cultivo, opaco por su contenido en yema de huevo, las colonias de
estafilococos muestran dos características diagnósticas por lipólisis y proteolisis, se
producen halos y anillos característicos y, debido a la reducción del telurito a teluro, se
desarrolla una colonia negra. La reacción con la yema de huevo y la reducción del telurito
se presentan con notable paralelismo con la coagulasa-positividad, y por tanto, pueden
utilizarse como índice de esta última.
Colonias Microorganismos
Negras, lustrosas, convexas, con borde estrecho blanquecino, rodeado por un halo claro.
Staphilococcus aureus.
Negras, lustrosas, pero de forma irregular. Staphilococcus epidermis. Crecimiento ocasional: muy pequeñas, pardas hasta negras, ausencia de halos de clarificación.
Micrococcus.
Pardo-oscuras, mates, presencia a veces de halos de clarificación.
Bacillus.
Blancas sin halos de clarificación. Levaduras.
MacConkey Medio selectivo para BGN. Lactosa+indicador
El agar MacConkey es una medio selectivo y diferencial para la detección de organismos
coliformes y patógenos entéricos.
La fórmula del agar MacConkey II se diseñó especialmente para mejorar su capacidad de
inhibir el “swarming” de Proteus spp y para alcanzar una definitiva diferenciación entre
fermentadores y no fermentadores de la Lactosa.
Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales Biliares, que inhiben
el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relación con otros
medios similares. Se incluye también cristal violeta para inhibir el crecimiento de las
bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos.
La diferenciación de organismos entéricos se lleva a cabo con la combinación de Lactosa
con el indicador Rojo neutro. Se producen colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de
fermentar la Lactosa y colonias sin color en caso contrario.
LECTURA:
colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la Lactosa). Salmonella, Shigella, Pseudomonas
colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. E. coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa)
ENDO-C AGAR
Medio selectivo para la demostración y aislamiento de E. Coli fecal y coliformes.
El sulfito sódico y la fucsina inhiben a las bacterias grampositivas. E. Coli y coliformes
consumen lactosa formando aldehído y ácido. Por otra parte, el aldehído libera fucsina a
partir de la combinación fucsina-sulfito, lo cual da lugar a la coloración roja de las
colonias. En el caso de E. Coli, esta reacción es tan intensa que la fucsina llega a
cristalizar y por este motivo, confiere a dichas colonias un brillo metálico estable, de reflejo
verde (típico de la fucsina cristalizada).
Las placas con medio de cultivo son claras y casi incoloras. Si una placa con medio de
cultivo muestra, tras la solidificación, un tono rojo demasiado intenso, puede eliminarse
dicho exceso de rojo añadiendo algunas gotas de una solución recién preparada al 10%
de sulfito sódico anhidro.
Por la acción del oxigeno atmosférico y debido a la consiguiente oxidación del sulfito, el
medio de cultivo vertido en placas se vuelve paulatinamente rojo y, por lo tanto, inservible.
Incluso conservando en la oscuridad y a la temperatura de nevera, solo es utilizable
durante pocos días.
AGAR SANGRE (= Tsa= Trypticase Soja Agar) medio enriquecido estándar
El AS al 5% con base de Tripticasa-Soja es un medio de uso general que permite el
crecimiento tanto de microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen
bacterias aerobias y anaerobias, aunque no es medio de elección para anaerobios.
Permite visualizar reacciones hemolíticas que producen muchas especies bacterianas.
Tiene por base una fuente proteica (digeridos trípticos, digeridos proteicos de soja) con
una pequeña cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro sódico y 5% de sangre.
La aportación de caseína y peptonas de soja al agar de Tripticasa-soja hace el medio en
muy nutritivo por el suministro de nitrógeno orgánico, particularmente aminoácidos y
péptidos de cadena más larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el
cultivo de una gran variedad de gérmenes aerobios y anaerobios que crecen rápidamente,
así como los del género Candida. También permite el crecimiento de algunos gérmenes
exigentes como Estreptococos, Pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y
Pasteurella.
El cloruro sódico proporciona electrolitos esenciales. La adición de sangre de carnero
desfibrinada enriquece la base y lo hace un medio adecuado para realizar la prueba del
factor CAMP.
Permite así mismo determinar la capacidad de algunas bacterias de producir enzimas
extracelulares que actúan sobre los glóbulos rojos, ya sea por lisis completa (hemólisis
beta, produce un halo transparente alrededor de la colonia hemolítica), parcial (hemólisis
alfa, coloración verdosa alrededor de la colonia) o por ausencia de alteración (hemólisis
gamma).
La producción de hemolisinas por las bacterias depende de muchos factores ambientales
como pH o atmósfera de incubación.
Las muestras que puedan contener Brucella o Neisseria deben incubarse en atmósfera
enriquecida en CO2.
Si se añade al medio el 0,5% de telurito potásico es muy útil par el cultivo y aislamiento
selectivo de Corynebacterium diphteriae, Candida albicans, Listeria y estreptococos.
formulación (según Becton Dickinson):
AGAR SALADO DE MANITOL
Es un medio selectivo y diferencial. AMS es selectivo porque contiene 7.5% de sal. Una
alta concentración de sal promueve el crecimiento de algunos organismos mientras inhibe
el crecimiento de otros. AMS es un medio diferencial porque contiene el azúcar manitol y
el indicador de pH rojo de fenol. Los organismos que pueden fermentar el manitol liberan
subproductos ácidos, que causan un cambio de color. El rojo de fenol presenta un color
rojo cereza por arriba de pH 8.5, un color amarillo rojizo desde un pH 6.9 a 8.5, y un
amarillo brillante por debajo de un pH de 6.9. Aunque tanto el Staphylococcus epidermidis
y Staphylococcus aureus puede tolerar el alto contenido de sal en el AMS, solamente S.
aureus puede fermentar el manitol, causando que el rojo de fenol vire al amarillo.
AGAR CETRIMIDE (agar selectivo para Pseudomonas)
Para aislamiento y diferenciación de Pseudomonas aeruginosa, a partir de diversos
materiales.
La cetrimide (cetiltrimetilamonio bromuro), sirve para conseguir una notable inhibición de
la flora acompañante. De acuerdo con una proposición hecha por Lowbury y Collins
(1955), la concentración primitiva (0.1%) de la substancia inhibidora ha sido disminuida
con el fin de interferir aun menos en el desarrollo de Pseudomonas. El desarrollo de color
a cargo de Pseudomonas aeruginosa cursa sin obstáculo en este medio de cultivo.
Las colonias de Pseudomonas aeruginosa forman un pigmento verde-azulado (piocianina)
y son fluorescentes a la luz UV.
MEDIOS DE CULTIVOS SEGÚN SABOREAUD
Para cultivo, aislamiento e identificación de hongos patógenos. Los medios de cultivo de
este tipo que contienen glucosa son especialmente adecuados para dermatofitos, en tanto
que para levaduras y mohos son preferibles los que contienen maltosa.
Estos medios de cultivos facilitan el crecimiento óptimo de hongos, merced a
concentraciones altas (2 ó 4%) de carbohidratos. No contienen ninguna substancia que
actúe selectivamente sobre la flora indeseable de acompañamiento. Para inhibir el
crecimiento de bacterias, se ajusta a 5.6 el valor de pH. Este efecto es potenciable
ajustando el pH a valores extremos (cercanos a 3.5 ó a 10).
AGAR NUTRITIVO - CALDO NUTRITIVO
Se basa en contar el número de colonias desarrolladas en una placa de medio de cultivo
sólido, donde se ha sembrado un volumen conocido de agua, transcurrido un tiempo y a
una temperatura de incubación determinados.
Transcurridas las 72 h (± 3 h) o las 48 h, según proceda en cada caso, contar todas las
colonias desarrolladas en cada placa. Si se ha sembrado más de una dilución se
seleccionará la que contenga entre 30 y 300 colonias, descartando las demás. El recuento
no se efectuará en placas que contengan menos de 30 colonias, excepto en aquellas
sembradas con agua sin diluir. El resultado se expresa como número de bacterias
aerobias totales en 1ml en 72 h a 22°C o en 48 h a 37°C
BIBLIOGRAFÍA
http://www.atl-gestion.com/Asepsia%20y%20desinfeccion.htm
http://www.med.uchile.cl/otros/laparosc/casiell.pdf
http://usuarios.lycos.es/enfermeriaperu/mistrabajos/prindesinfeccion.htm
http://www.ujaen.es/dep/ciesal/medprev_alumnos/30Ddd.pdf
Manual De Microbiología. Ed Merck
CONCLUSIONES
La esterilización, es un proceso físico o químico que destruye todo microorganismo
tanto en su forma vegetativa como sus esporas en el medio u objeto a esterilizar.
La esterilización es un término absoluto, ya que no existe medianamente estéril o
casi estéril.
Los desinfectantes son aquellas sustancias químicas que matan las formas
vegetativas y no necesariamente las formas de resistencia de los microorganismos
patógenos, se aplica sobre material inerte sin deteriorarlo. No necesariamente
elimina las esporas bacterianas.
Las propiedades que ha de reunir un desinfectante ideal son: amplio espectro
antimicrobiano, rápida acción microbicida, facilidad de uso, escasa capacidad para
alterar el instrumental, solubilidad en agua, estabilidad de la forma concentrada y
diluida del producto, toxicidad reducida para el hombre de las soluciones de uso,
ininflamabilidad y coste bajo o moderado.
La eficacia de los desinfectantes se puede ver alterada por varios factores. Entre
éstos se incluyen las sustancias interferentes, el tipo y grado de contaminación
microbiana, la concentración y pH de la solución desinfectante, el tiempo de
exposición, el diseño y composición del objeto a desinfectar y la temperatura a la
que se realiza el proceso de desinfección.
ANEXOS
ANEXO 1. ANEXO 2. ANEXO 3. ANEXO 4.
ANEXO 5. ANEXO 6. ANEXO 7. ANEXO 8.
ANEXO 9. ANEXO 10. ANEXO 11. ANEXO 12.
ANEXO 13. ANEXO 14. ANEXO 15. ANEXO 16.
ANEXO 17. ANEXO 18. ANEXO 19. ANEXO 20.
ANEXO 21. ANEXO 24. ANEXO 23. ANEXO 22.
ANEXO 25. ANEXO 26. ANEXO 27. ANEXO 28.
ANEXO 29. ANEXO 30.