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I
Estudios de estabilidad física y
química de una preparación
extemporánea de enalapril maleato
para uso hospitalario
JAVIER ENRIQUE ARIZA PABA
Universidad Nacional de Colombia
Facultad de Ciencias
Departamento de Farmacia
Maestría en Ciencias - Farmacéuticas
Bogotá, Colombia
2013
Estudios de estabilidad física y
química de una preparación
extemporánea de enalapril maleato
para uso hospitalario
JAVIER ENRIQUE ARIZA PABA
Tesis presentada como requisito para optar al título de:
Magister en Ciencias Farmacéuticas
Director:
MSc. Helber de Jesús Barbosa Barbosa
Facultad de Ciencias
Departamento de Farmacia
Maestría en Ciencias - Farmacéuticas
Bogotá, Colombia
2013
Agradecimientos
Gracias a Dios por darme la sabiduría y la fuerza necesaria para continuar y haberme
permitido cumplir con este gran sueño. Siempre estarás en mi corazón.
A mis hijos y a mi esposa por tener la paciencia de no haber disfrutado los ratos familiares
cuando estaba en desarrollo de la maestría, quienes me inspiran a seguir luchando.
A la profesora Mary Trujillo por asesorarme en todo momento y ayudarme a resolver los
momentos de adversidad que se presentaron en el proyecto de la maestría.
A mis compañeros Jorge Martínez, Alexander Sulbarán, Axel de la Rosa, Eric Nieto,
Roberto Lara y Reinaldo Sotomayor por su colaboración en este gran proyecto.
A la Universidad Nacional de Colombia y Universidad del Atlántico por permitirme ser
parte de tan prestigiosas instituciones
Resumen El enalapril es un derivado de dos aminoácidos, L-alanina y L-prolina, que inhibe la
hipertensión actuando sobre la enzima convertidora de angiotensina, bloqueando la
producción de la angiotensina II, como resultado de la unión directa de su grupo funcional
carboxilo en el sitio del ión zinc de la enzima. El enalapril es un profármaco de amplio uso,
altamente selectivo y no interactúa directamente con otros componentes del sistema
renina angiotensina (SRA).
La elaboración de una preparación extemporánea de maleato de enalapril a partir de
tabletas, es una alternativa en la práctica hospitalaria, por presentar ventajas como
permitir la individualización de la dosis para los pacientes que lo requieran y poder cumplir
los tratamientos establecidos, evitando así los errores de dosificación cuando se
administran dosis por fractura de tabletas.
En la presente investigación se validó una metodología analítica que demostró ser
selectiva, lineal, precisa y exacta. Posteriormente, se llevó a cabo el estudio de estabilidad
física y química de la preparación extemporánea durante 15 días, de muestras
almacenadas a 5 y 25 ± 2°C y utilizando dos vehículos de uso hospitalario: el primero, una
solución de agua – dextrosa al 5% 1:1 y el segundo, una solución agua - dextrosa al 5%
1:1 ajustado a pH 3.0 con ácido ascórbico. La preparación extemporánea fue envasada
en recipientes plásticos transparentes y de color ámbar con tapa rosca plástica y expuesta
a las condiciones de estudio. La cuantificación del fármaco se realizó utilizando la
metodología analítica por HPLC.
Los resultados del estudio de estabilidad, indican que el vehículo dextrosa al 5% - agua
en proporción 1:1, mostró una mayor estabilidad respecto al segundo vehículo que fue
ajustado a un pH de 3.0.
El pH ácido de la preparación extemporánea es el factor de mayor incidencia sobre la
estabilidad.
Palabras Claves: Enalapril Maleato, L-alanina, L-prolina, Hipertensión, Angiotensina,
Preparación Extemporánea, Estabilidad.
Abstract
Enalapril is derived from two amino acids, L-alanine and L-proline, which inhibits
hypertension converting enzyme acting on the angiotensin, blocking the production of
angiotensin II, as a result of its direct binding to the carboxyl functional group site zinc ion
of the enzyme. This drug is widely used and highly selective and do not interact directly
with other components of the renin angiotensin system (RAS).
The extemporaneous preparation of enalapril maleate from tablets has been a great
alternative in hospital practice, for the countless benefits it brings, such as: allow
individualization of dosage for patients in need and meet established treatments. Not like
the fractures that are administered to the tablet dosage dose.
In this research the analytical methodology was validated this being selective linear,
accurate and precise. Subsequently, a study was conducted for the stablishement of
physical and chemical stability of the extemporaneous preparation for 15 days when
stored at 5 ± 2 °C and 25 ± 2 °C prepared in solutions of water - 5% dextrose dextrose
water 1:1 to 5 % 1:1 adjusted to pH 3.0 with ascorbic acid. Extemporaneous preparations
were packaged in plastic containers and transparent amber plastic screw cap exposed to
the experimental conditions. The quantification of the drug was performed using the
validated analitycal methodology.
The results of stability studies show that the vehicle 5% dextrose water 1:1 showed better
stability. They also indicated that the time and pH are the most critical factors which affect
the lifetime of extemporaneous liquid preparations developed.
Keywords: Enalapril Maleate, L- alanine, L-proline, Hypertension, Angiotensin,
Extemporaneous preparation, Stability.
Contenido
Pág.
Resumen 5
Abstract 6
Lista de Anexos XI
Lista de Figuras XII
Lista de tablas XIII
Lista de símbolos y abreviaturas XV
Introducción 3
Justificación 6
1. Capítulo 7
1.1 Objetivo general 7
1.2 Objetivo específicos 7
2. Capítulo 8
2.1 Preparaciones extemporáneas 8
2.2 Inestabilidad química 8
2.3 Inestabilidad microbiológica 9
2.4 Inestabilidad física 9
2.5 Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) 10
2.6 Validación analítica 13
2.6.1 Selectividad - especificidad 13
2.6.2 Linealidad 14
2.6.3 Precisión 14
2.6.4 Exactitud 15
2.6.5 Limite de detención (LOD) 15
2.6.6 Limite de cuantificación (LOQ) 15
2.7 Aspectos farmacológicos del maleato de enalapril 16
2.7.1 Mecanismo de acción 16
2.7.2 Farmacocinética 17
2.7.3 Contraindicaciones y precauciones 18
2.7.4 Interacciones 18
2.7.5 Efectos secundarios 19
2.7.6 Intoxicaciones y su tratamiento 19
2.8 Propiedades fisicoquímicas del enalapril maleato 19
3. Capítulo 23
3.1 Materiales y método 23
3.1.1 Localización del estudio 23
3.2 Estandarización del sistema cromatográfico 23
3.2.1 Condiciones cromatográficas 23
3.2.2 Soluciones empleadas en la preparación del estudio y
muestras 23
3.2.2.1 Hidróxido de sodio 0.1N 23
3.2.2.2 Ácido clorhídrico 0.1 N 24
3.2.2.3 Peróxido de hidrógeno al 3% 24
3.2.2.4 Buffer fosfato 0.01 M pH 24
3.2.2.5 Mezcla diluente 24
3.2.2.6 Solución de ácido ascórbico al 20% (P/V) 24
3.2.3 Materiales y equipos 24
3.2.4 Estandares y reactivos 25
3.3.1 Selectividad 26
3.3.1.1 Selectividad frente a los excipientes 26
3.3.1.2 Descripción de la formulación 26
3.3.1.3 Selectividad frente a los componentes de degradación 26
3.4 Linealidad 27
3.4.1 Linealidad del sistema 27
3.4.2. Linealidad del método 27
3.5 Precisión 28
3.5.1 Repetibilidad instrumental 28
3.5.2 Precisión intermedia 28
3.6 Exactitud 28
3.7 Estudio estabilidad 28
3.8 Elaboración del protocolo de preparación extemporánea 29
4. Capítulo Resultados y Discusión 30
4.1 Resultados y discusión 30
4.1.1 Validación de la metodología analítica 30
4.1.1.1 Idoneidad del sistema 30
4.2 Validación de la metodología 31
4.2.1 Selectividad 31
4.2.1.1. Selectividad frente a los excipientes 31
4.2.1.2 Selectividad para el método indicador de estabilidad 32
4.2.1.3 Hidrolisis 33
4.2.1.4 Oxidación 35
4.2.2 Linealidad 36
4.2.2.1 Linealidad del sistema 37
4.2.2.2 Linealidad del método 39
4.2.3 Precisión 42
4.2.3.1 Precisión del sistema 42
4.2.3.2 Precisión del método 42
4.2.3.3 Precisión intermedia 43
4.2.4 Exactitud 44
4.2.4.1 Exactitud del método 44
4.2.6 Precisión instrumental 45
4.2.6.1 Repetibilidad del método 46
4.3 Resultados y discusión de la estabilidad de la preparación
extemporánea 47
4.4 Determinación del tiempo de vida media de la preparación
extemporánea en el vehículo dextrosa – agua 1:1 59
4.5 Análisis general de los resultados 66
4.6 Protocolo para la elaboración de la preparación 70
extemporánea de enelapril maleato
4.6.1 Propósito 70
4.6.2 Consideraciones importantes 70
4.6.3 Materiales 70
4.6.4 Materia prima 71
4.6.5 Procedimiento 71
4.6.5.1 Alistamiento 71
4.6.5.2 Preparación de la suspensión 71
4.6.6 Acondicionamiento del producto 72
4.7.7 Recomendaciones 72
5. Conclusiones 73
5.1 Recomendaciones 73
Bibliografía 74
Lista de Anexos pág Anexo 1 Cromatograma perteneciente al blanco de fase móvil 77
Anexo 2 Cromatograma perteneciente al blanco con dextrosa agua 1:1 pH 3.0 77
Anexo 3 Cromatograma perteneciente al blanco con dextrosa agua 1:1 78
Anexo 4 Cromatograma perteneciente al sistema de idoneidad 78
Anexo 5 Cromatograma perteneciente a la pureza de la degradación básica 80
Anexo 6 Cromatograma perteneciente a la pureza de la degradación ácida 80
Anexo 7 Figura 4-11 Dextrosa 5%- agua 1:1 frasco transparente, temperatura 5°C 81
Anexo 8 Figura 4-12 Dextrosa 5%- agua 1:1 frasco ámbar, temperatura 25°C 81
Anexo 9 Figura 4-13 Dextrosa 5%- agua 1:1 frasco transparente, temperatura 25°C 84
Anexo 10 Figura 4-14 Dextrosa 5%- agua 1:1 frasco transparente, temperatura 5°C pH
3.o 86
Anexo 11 Figura 4-15 Dextrosa 5%- agua 1:1 frasco ámbar, temperatura 5°C pH 3.o 88
Anexo 12 Figura 4-16 Dextrosa 5%- agua 1:1 frasco transparente, temperatura 25°C pH
3.o 90
Anexo 13 Modelo etiqueta 92
Anexo 14 Resultado estudio microbiológico de las preparaciones extemporáneas 93
Lista de Figuras pág. Figura 2-1 Esquema de los componentes del HPLC 10
Figura 2-2 Mecanismo de acción del maleato de enalapril 17
Figura 2-3 Inhibidores de la ECA 20
Figura 2-4 Estructura química del maleato de enalapril 21
Figura 2-5 Obtención de enalapril dicetopiperacina (DKP) 21
Figura 2-6 Estructura de ácido enalaprílico 22
Figura 4-1 Cromatograma perteneciente a la degradación ácida 32
Figura 4-2 Cromatograma perteneciente a la degradación básica 33
Figura 4-3 Cromatograma perteneciente a la degradación acuosa 34
Figura 4-4 Cromatograma perteneciente a la degradación oxidativa 34
Figura 4-5 Gráfica lineal del sistema 36
Figura 4-6 Gráfica lineal del método 38
Figura 4-7 Cromatograma perteneciente a la degradación del blanco placebo 40
Figura 4-8 Gráfica lineal y vida útil frasco ámbar 5°C dextrosa al 5% agua 1:1 51
Figura 4-9 Gráfica lineal y vida útil frasco ámbar 25°C dextrosa al 5% agua 1:1 62
Figura 4-10 Gráfica lineal y vida útil frasco transparente 5°C dextrosa al 5% agua 1:1
62
Figura 4-11 Gráfica lineal y vida útil frasco transparente 25°C dextrosa al 5% agua 1:1
81
Figura 4-12 Gráfica lineal y vida útil frasco ámbar 5°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
81
Figura 4-13 Gráfica lineal y vida útil frasco ámbar 25°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
84
Figura 4-14 Gráfica lineal y vida útil frasco transparente 5°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
86
Figura 4-15 Gráfica lineal y vida útil frasco transparente 25°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
88
Lista de Tablas pág. Tabla 3-1 Formula tabletas del maleato de enalapril 26 26
Tabla 4-1 Datos de idoneidad del sistema 30
Tabla 4-2 Datos linealidad del sistema 31
Tabla 4-3 Prueba t student para la linealidad del sistema 32
Tabla 4-4 Prueba F de Fisher y Anova para la linealidad del sistema 37
Tabla 4-5 Datos linealidad del método 38
Tabla 4-6 Prueba t student para la linealidad del método 38
Tabla 4-7 Prueba F de Fisher y Anova para la linealidad del método 39
Tabla 4-8 Datos precisión del sistema 39
Tabla 4-9 Datos selectividad para método control de calidad 40
Tabla 4-10 Datos selectividad para método indicadores de estabilidad 40
Tabla 4-11 Datos exactitud del método 41
Tabla 4-12 Datos precisión instrumental 42
Tabla 4-13 Datos repetibilidad del método 42
Tabla 4-14 Datos precisión intermedia 43
Tabla 4-15 Prueba F de Fisher y Anova para la precisión intermedia 44
Tabla 4-16 Datos de estabilidad frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 44
Tabla 4-17 Prueba F de Fisher frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 45
Tabla 4-18 Datos de estabilidad frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 46
Tabla 4-19 Prueba F de Fisher frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 47
Tabla 4-20 Datos de estabilidad frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 49
Tabla 4-21 Prueba F Fisher frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 51
Tabla 4-22 Datos de estabilidad frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1
53
Tabla 4-23 Prueba F Fisher frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 55
Tabla 4-24 Datos de estabilidad frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
56
Tabla 4-25 Prueba F de Fisher frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0 57
Tabla 4-26 Datos de estabilidad frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
58
Tabla 4-27 Prueba F de Fisher frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
61
Tabla 4-28 Datos de estabilidad frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
64
Tabla 4-29 Prueba F Fisher frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
67
Tabla 4-30 Datos de estabilidad frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5% agua pH 3.0
67
Tabla 4-31 Prueba F Fisher frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
69
Lista de Símbolos y abreviaturas
Símbolo Término ECA Enzima convertidora de angiotensina
HPLC Cromatografía de alta resolución
CL Cromatografía líquida
C18 Sustituyente alquílico con 18 carbonos
C8 Sustituyente alquílico con 8 carbonos
AEFI Asociación española de farmacéuticos de la industria
SD Desviación estándar
RSD Coeficiente de variación o desviación estándar relativa
LOD Límite de detención
LOQ Límite de cuantificación
IECA Inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina
SRA Sistema renina angiotensina
AT1 Receptor de angiotensina 1
AT2 Receptor de angiotensina 2
AINES Antinflamatorio no esteroideo
DKP Dicetopiperacina
USP Farmacopea de los Estados Unidos
RP-18 Columna fase reversa sustituyente alquílico con 18 carbonos
µL Microlitros
µm Micras
mm Milímetros
°C Grados centígrados
pH Potencial de Hidrógeno
M Molar
N Normal
NaOH Hidróxido de sodio
HCl Ácido Clorhídrico
H2O2 Peróxido de Hidrogeno
g Gramos
mL Mililitros
P/V Peso/Volumen
ref Referencia
min Minutos
IUPAC Unión internacional para la química pura y aplicada
SR-FA Sustancia de referencia
UNESP Universidad estadual paulista
CV Coeficiente de variación
KH2PO4 Fosfato monobásico de potasio
2
K´ Factor de capacidad
r Coeficiente de correlación
r2 Coeficiente de determinación
TR Tiempo de retención
t(exp) Valor experimental calculado u observado con la prueba t de Student
t(tab) Valor tabulado con la prueba de Student
(SRAA) Sistema renina angiotensina aldosterona.
(SRA) Sistema renina angiotensina.
AT1 y AT2 Receptores principales de la angiotensina II
(LOD) Límite de Detención
(LOQ) Límite de Cuantificación
(IECA) Inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina.
3
Introducción La elaboración de preparaciones extemporáneas a nivel hospitalario, es una práctica
frecuente con el fin de facilitar la dosificación y entrega de medicamentos a pacientes,
que por sus estados patológicos, no los pueden usar en forma directa o con el fin de no
invadirlo vascularmente, recorriéndose a la transformación de medicamentos comerciales
fundamentalmente tabletas, en preparaciones para ser usadas en forma inmediata o en
períodos cortos (1).
A través del tiempo se ha demostrado la importancia de las preparaciones
extemporáneas, pero muchos fármacos transformados pueden ser inestables y es
escasa la información respecto la forma adecuada de preparación, condiciones de
almacenamiento y tiempo de uso (2).
En las dos últimas décadas, el control de la hipertensión arterial en infantes, niños y
pacientes de la tercera edad, que no pueden deglutir tabletas, se ha realizado a través de
la administración de preparaciones extemporáneas de maleato de enalapril y se ha
convertido de gran utilidad en los centros hospitalarios para el tratamiento de dicha
patología (3).
El enalapril es un profármaco con un grupo éster en su estructura, por lo tanto es
susceptible a degradarse. El enalapril se absorbe rápidamente y sufre biotransformación
en el hígado generando el metabolito activo. Este fármaco se encuentra comercialmente
en forma de tabletas, pero no en forma líquida para administración peroral; debido a su
inestabilidad en solución acuosa donde sufre degradación.
La estabilidad de una preparación farmacéutica está relacionada con su potencia y su
influencia en la respuesta terapéutica. La degradación química del principio activo trae
como consecuencia una pérdida de su potencia, o la generación de productos de
degradación que pueden ser tóxicos, siendo un riesgo para el paciente el consumo de
éste.
Existen varios factores que pueden afectar la estabilidad de un principio activo y de una
forma farmacéutica, como la estructura molecular del fármaco y factores ambientales,
como la temperatura, la luz, la humedad y el oxígeno (4).
4
En 1970 se descubrió que en el veneno de la víbora “Bethrops jaracaca” existía una
sustancia con actividad hipotensora y en 1972 se aisló una sustancia denominada
Teprotide, cuya actividad hipotensora obedecía a su acción bloqueadora sobre la
enzima convertidora de angiotensina (ECA). A partir de entonces se han realizado
múltiples investigaciones que ha permitido el desarrollo de diversas sustancias
inhibidoras de la ECA, convirtiéndose en un valioso arsenal terapéutico de hipotensores.
Los IECA han presentado un gran desarrollo en los últimos años. En 1975 fue sintetizado
el captopril y en 1977 se reportó como un nuevo IECA sintético. Cuatro años más tarde
fue comercializado como prototipo de los IECA. Posteriormente aparecieron el enalapril y
el Lisinopril como soluciones terapéuticas (3).
Los IECA se encuentran actualmente entre los fármacos de primera elección en el
tratamiento de la hipertensión arterial, debido a su gran eficacia y escasos efectos
secundarios.
Clasificación de los IECA.
Los ECA se clasifican según diferentes criterios:
Según el orden de aparición en la práctica médica.
a. De primera generación: captopril.
b. De segunda generación: enalapril.
c. De tercera generación: lisinopril, quinapril, fosinopril, perindopril y otros.
Según la estructura química:
a. Con grupo carboxilo: enalapril, lisinopril, ramipril, quinipril y benazepril.
b. Con grupo sulfihidrilo: captopril.
c. Con grupo fosfodrilo: fosinopril, alacepril (5).
La utilización de una preparación extemporánea, elaborada a partir de tabletas de maleato de
enalapril brindará por lo tanto una alternativa para el control de la dosificación y se podrá
administrar dosis más exactas y controladas, que las administradas por la fractura de tabletas.
Por tal razón se desarrolló el estudio de estabilidad física y química que demuestre la eficacia,
potencia y seguridad de la preparación extemporánea a partir de tabletas de maleato de
5
enalapril, así como determinar las mejores condiciones para su almacenamiento y
recomendaciones de uso.
6
Justificación
La posibilidad de utilizar una preparación extemporánea elaborada a partir de tabletas
de enalapril maleato y ser administrada por vía peroral para el tratamiento de la
hipertensión arterial, es otra alternativa que tiene el médico, específicamente en
pacientes que por su estado fisiopatológico no pueden deglutir las tabletas. La
transformación de comprimidos es cada día mayor para el tratamiento de la hipertensión
arterial, la insuficiencia cardiaca y el déficit funcional asintomático del ventrículo izquierdo
en neonatos, niños y adultos mayores que no pueden deglutir tabletas.
El maleato de enalapril, por sus propiedades fisicoquímicas, requiere de la utilización de
vehículos compatibles y de condiciones específicas de manipulación y almacenamiento,
teniendo en cuenta su importancia como antihipertensivo; requiriéndose de estudios de
estabilidad que lo permitan para garantizar su eficacia y uso seguro.
Por lo tanto, en la presente investigación se realizaron los estudios de estabilidad física y
química de una preparación extemporánea de maleato de enalapril, elaborada a partir de
tabletas de 20 mg del mercado nacional, utilizando vehículos de uso hospitalario y se elaboró
el protocolo de preparación, estableciendo las mejores condiciones de almacenamiento con el
fin de usar en forma segura y racional la preparación en beneficio del paciente.
7
1. Capítulo
1.1 Objetivo general
Determinar la estabilidad física y química de una preparación extemporánea de maleato
de enalapril, partiendo de una tableta del mercado nacional.
1.2 Objetivos específicos
Validar la metodología analítica para la cuantificación de una preparación
extemporánea de maleato de enalapril mediante cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC)
Determinar la influencia de los vehículos: agua estéril – dextrosa al 5% (1:1) y
agua estéril – dextrosa al 5% (1:1) ajustado a pH 3 con ácido ascórbico, sobre la
estabilidad de las preparaciones extemporáneas y determinar el tiempo de vida útil.
Elaborar un protocolo para la preparación extemporánea de enalapril maleato, así
como recomendaciones para su almacenamiento y uso racional.
8
2. Capítulo
2.1. Preparaciones extemporáneas
Dentro del ámbito hospitalario, las preparaciones magistrales se clasifican en formulaciones
normalizadas y preparaciones extemporáneas. Las primeras, son aquellas aprobadas por el
comité de farmacia y terapéutica para uso general en el hospital. Las segundas, son aquellas
que no se preparan de forma rutinaria, sino solamente para atender las necesidades de un
paciente específico. La transformación de estos medicamentos forma parte de una de las
responsabilidades más antiguas del farmacéutico de hospital, la cual se ve sustentada en las
necesidades o requerimientos específicos de pacientes que por sus características no pueden
hacer uso de formas farmacéuticas comercialmente disponibles. Por lo tanto es necesario
recurrir a la transformación de medicamentos, que es definido como el procedimiento por el
cual una forma farmacéutica se adapta para que pueda ser administrada a pacientes en las
dosis prescritas por el médico, cumpliendo los siguientes requisitos:
Contener la cantidad de fármaco por unidad de volumen, para una dosificación
adecuada.
Proporcionar una adecuada protección del contenido frente al medio ambiente.
Tener una completa identificación y recomendaciones de uso.
Solo debe usarse por el tiempo recomendado por el médico (6,7).
2.2. Inestabilidad química
Los fármacos en preparaciones extemporáneas líquidas pueden ser susceptibles a
reacciones químicas que conducen a la degradación. Las reacciones más comunes son
la hidrólisis, la oxidación y la reducción (8). Por lo general, la velocidad o el tipo de
reacción es influenciada por el pH y otros factores que pueden aumentar la velocidad de
reacción, como la presencia de trazas de metales que catalizan la oxidación y la
exposición a la luz que cataliza la degradación oxidativa. La tasa de degradación química
por lo general aumenta con la temperatura, un factor que es la base para los ensayos de
estabilidad acelerada de formulaciones farmacéuticas. Las preparaciones a base de
comprimidos contienen excipientes como aglutinantes y desintegrantes, los cuales
9
pueden reducir la estabilidad del principio activo al cambiar el pH a un valor en el que se
produce la degradación más rápidamente (8).
El fármaco en una preparación extemporánea puede estar parcial o totalmente en
solución o en estado sólido en suspensión. Si se encuentra en la solución es más
susceptible a la degradación química que en el estado sólido en que se encuentra en una
suspensión, pero no se puede asumir en todos los casos, que una preparación
extemporánea en forma de suspensión es más estable que aquella en forma de solución.
2.3. Inestabilidad microbiológica
El crecimiento microbiano en una preparación extemporánea puede causar mal olor y
turbidez, afectando adversamente la apariencia y estabilidad. Además, un alto número de
microorganismos pone en riesgo a los pacientes especialmente a los inmunodeprimidos.
Los subproductos del metabolismo microbiano pueden causar un cambio en el pH de la
preparación y reducir la estabilidad química y solubilidad del fármaco. La contaminación
microbiana durante la preparación debe ser minimizada mediante el uso de equipo
limpio, agua estéril y evitar la contaminación de materias primas y envases. Cuando se
utiliza un conservante para la preparación extemporánea como el benzoato de sodio o el
ácido benzoico es necesario considerar el pH final de la preparación, que debe ser
inferior a 5 de manera que la forma no ionizada activa predomine, pero que a su vez no
afecte la estabilidad (9).
Los sistemas de conservación requieren de una evaluación rigurosa, que rara vez se
realiza en las preparaciones extemporáneas, ya que existen factores que pueden reducir
la eficacia del preservativo como el uso de materiales contaminados, la degradación
química, la unión del conservante con otros agentes de la suspensión, almacenamiento
incorrecto o uso poco higiénico del producto final.
2.4. Inestabilidad física
Las preparaciones extemporáneas pueden ser susceptibles a la sedimentación de los
fármacos insolubles y de los auxiliares de formulación, causando endurecimiento y
dificultad para la redispersión y pueden conducir a dosificaciones erráticas. Es
importante tener en cuenta el cambio de color y olor como manifestación de inestabilidad
así como el cambio del pH y el posible impacto en la estabilidad.
10
2.5. Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
Según define la IUPAC, “La cromatografía es un método, usado principalmente para la
separación de los componentes de una muestra, en la cual los componentes se distribuyen en
dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras la otra es móvil. En HPLC, la fase móvil
es el parámetro que gobierna la separación. Con una sola columna es posible separar
sustancias polares, iónicas, ionizables y no polares simplemente modificando la composición
de la fase móvil. Además, la selectividad aportada por la amplia variedad de solventes aptos
para ser empleados como fase móvil en HPLC, le otorgan mucha mayor versatilidad. Si la fase
estacionaria es un sólido y la fase móvil un líquido la cromatografía, se denomina
cromatografía líquido-sólido (LSC).
Figura 2-1. Esquema de los componentes del HPLC
Básicamente, los equipos HPLC pueden clasificarse en integrados y modulares.
En los primeros, cada una de las partes (reservorio de solventes, bomba, inyector, horno y
detector) están reunidas en un gabinete. En los segundos, los módulos son instrumentos
individuales que permiten no solo armar el equipo según la necesidad del analista sino
aumentar su complejidad según varíe.
El reservorio es el recipiente que contiene la fase móvil. Puede emplearse como reservorio
cualquier frasco de laboratorio de buena calidad (de vidrio o polímero resistente), con una
11
buena tapa para impedir el ingreso de partículas ambientales al sistema (se puede utilizar para
asegurar el no ingreso de partículas papel de aluminio. Al extremo del tubo de salida de
solvente se conecta un filtro de acero o vidrio (buzo) con 2 a 10 μm de porosidad que impide el
ingreso de partículas a la bomba. Además el reservorio de la fase móvil debe estar bien
identificado, indicando en lo posible, las proporciones de los componentes contenidos en el
mismo así como la fecha de preparación. Es importante recalcar que la fase móvil debe ser
filtrada y desgasificada al igual que todos los solventes sin importar que sean grado HPLC,
utilizando filtros de 0.22 o 0.45 μm y sonicándolos por 10 minutos.
La fase móvil empleada en HPLC debe circular por tuberías que conectan el reservorio de
solvente con la bomba, la bomba con el inyector, el inyector con la columna cromatográfica y
éste con uno o más detectores conectados en serie, y eventualmente con un colector de
fracciones o válvulas de distribución. Los materiales más empleados para éstas son el teflón y
el acero inoxidable, estando las últimas presentes en los segmentos donde se experimenta
mayor presión, por ejemplo de la bomba al inyector. También tienen diferentes diámetros
internos, siendo menores en aquellas tuberías donde circula la muestra (hasta 0.2 mm).
Las uniones permiten conectar las tuberías y con ellas, los distintos componentes del sistema
cromatográfico.
Las bombas impulsan la fase móvil proveniente del reservorio de solvente hacia el inyector, y
de allí hacia la columna. Básicamente existen dos tipos de bomba: las de pistón (bombas
reciprocantes) y las de desplazamiento continuo (bombas jeringa). Las bombas deben entregar
caudales constantes y exactos, producir poco ruido y baja deriva y contar con sistemas de
corte de caudal en caso de presentarse caídas o aumentos drásticos de presión.
Es común que existan sistemas de desgasificación entre los reservorios de fase móvil y la
bomba que ayudan a asegurar un reducido acceso de aire al sistema.
El inyector es el dispositivo que permite introducir la muestra en solución sin interrumpir el
caudal de solvente a través del sistema. Debe ser fácil de operar, inerte al ataque químico y
capaz de soportar altas presiones, debe ser preciso en cuanto a la cantidad de muestra
introducida en el sistema, no debe provocar diluciones importantes de la solución inyectada y
operar a altas temperaturas. La muestra inyectada está contenida en viales, los cuales pueden
ser transparentes o ámbar, poseen tapa rosca y septos que evitan la evaporación de la
solución diluyente de los estándares y muestras. Cabe recalcar que antes de llevar las
soluciones de estándar o muestra a dichos viales, se deben filtrar a través de filtros de 0.45 μm
12
para evitar el taponamiento de la aguja del inyector y no se debe llenar por completo el vial sino
hasta la marca final del mismo, para permitir el desplazamiento de volumen generado por la
aguja e impedir, por lo tanto, que se inyecte aire. Se recomienda utilizar viales, tapas y septos
de la misma marca del equipo HPLC.
El horno es la parte del equipo cromatográfico donde se conecta la fase estacionaria o
columna cromatográfica. Permite calentar (o calentar y enfriar) la fase móvil antes de llegar a la
columna y a la columna misma, empleando termostatos, con el fin de optimizar la resolución de
los “picos” cromatográficos.
Las columnas pueden ser de acero inoxidable o de otros materiales poliméricos y poseer
diferentes dimensiones, así como diferentes rellenos dependiendo de la fase cromatográfica
con la que se trabaja. Esto es, para la cromatografía en fase reversa en la cual la fase móvil en
general está constituida por un solvente polar, mezcla de agua y un modificador orgánico, a los
que se les puede agregar aditivos sales y buffers, la fase estacionaria está constituida por un
sustituyente siendo el más empleado el de tipo alquílico, especialmente C18 y en menor
proporción C8, con o sin encapado, con menor o mayor grado de cobertura.
En la cromatografía en fase normal la fase estacionaria está constituida por materiales polares
con grupos como diol, ciano, nitro, amino y la fase móvil es no polar como el hexano.
El detector es la parte del equipo cromatográfico que permite “ver” y ubicar en tiempo y espacio
la posición de cada componente de una muestra a la salida de la columna cromatográfica.
Debe tener un amplio rango dinámico de respuesta, poseer una respuesta lineal, no contribuir
al ensanchamiento de banda extracolumnar, responder a todos los solutos, tener la
sensibilidad apropiada, no afectarse por cambios de temperatura, poseer una buena relación
señal/ruido, no destruir la muestra y tener una constante de tiempo baja.
El recipiente de desechos es la parte del equipo cromatográfico donde se recogen los
solventes a su salida. Puede ser una botella de vidrio o de un material de plástico resistente,
generalmente de volúmenes iguales o mayores a 4 litros con el fin de permitir la realización del
mayor número de análisis sin que éstos se derramen. Se debe identificar de forma adecuada,
asegurándose de tachar la etiqueta de la botella si se reutiliza una que haya pertenecido, por
ejemplo, a un solvente. Las tuberías de salida provienen de la bomba (purga) y del detector.
El sistema de toma y procesamiento de datos registra y manipula la señal proveniente del
detector por medio de un registrador gráfico, un integrador y una computadora (10, 11,12).
13
2.6. Validación analítica
La validación de un método analítico se define como el proceso mediante el cual se establece
por estudios de laboratorio que la eficiencia del método satisface los requisitos para posteriores
y previstas aplicaciones analíticas (13,14).
Los métodos analíticos deben ser validados o verificados, evaluándose tanto la linealidad como
la precisión y la exactitud. Por supuesto estos métodos también deben incluir pruebas para los
compuestos relacionados o productos de degradación, evaluándose así la selectividad (15). En
algunos casos, y dependiendo del tipo de aplicación, se hará necesario evaluar igualmente el
límite de detección y el límite de cuantificación de la metodología.
Una vez desarrollado un método de análisis por HPLC, al igual que para toda técnica analítica,
deberá validarse, es decir, se debe confirmar y documentar que los resultados por él
producidos sean confiables.
Evidentemente, todo nuevo método analítico debe validarse para demostrar su idoneidad, pero
frecuentemente nos encontramos con metodologías antiguas, aplicadas durante mucho
tiempo, con las que tiene poco sentido encarar una validación como si fuera una metodología
desconocida. Para estos casos, puede definirse una validación retrospectiva, donde se pueden
combinar los nuevos criterios de validación con toda la experiencia ya adquirida. En
contrapartida, para diferenciarla de la anterior, llamaremos validación prospectiva a la que
encaramos frente a un producto nuevo (11,12).
2.6.1. Selectividad o especificidad
Este parámetro se refiere a la propiedad del método de producir una señal medible debida solo
a la presencia del analito, libre de interferencia de otros componentes, en la matriz de la
muestra. Estos componentes pueden ser excipientes de un fármaco, productos de
degradación, subproductos o productos laterales de síntesis de un fármaco, metabolitos del
mismo analito en un fluido biológico, etc.
En el caso del análisis de un fármaco, resulta de gran utilidad contar con las materias primas,
subproductos de síntesis y productos de degradación. De ser así, la selectividad puede
controlarse simplemente por la adición de, por ejemplo, 1% de cada posible interferente al
estándar del fármaco, verificando la separación cromatográfica.
14
2.6.2. Linealidad
La linealidad de un método analítico se refiere a la proporcionalidad entre la concentración de
analito y su respuesta. Además, conjuntamente se determina el rango lineal, es decir, el
intervalo comprendido entre la concentración mínima y máxima de analito para el cual el
método ha sido probado y dentro del cual se puede efectuar su cuantificación por interpolación
en una curva estándar.
Para su determinación se prepara una serie de al menos cinco diluciones de un estándar,
comprendiendo los ámbitos estimados de trabajo. Normalmente el intervalo de
concentraciones se utiliza entre el 50 y el 150% de la concentración de trabajo, aunque ello
puede depender del tipo de ensayo. Se recomienda el trabajo con dos o más réplicas.
Estas soluciones se inyectan al menos por duplicado y se determina la curva de regresión, Y =
bX + a, sobre los puntos individuales de las réplicas sin promediar por el método de los
cuadrados mínimos. Posteriormente, se grafica para su documentación.
2.6.3. Precisión
La precisión describe la concordancia entre los valores numéricos de dos o más medidas
replicadas o medidas que se han realizado exactamente de la misma forma. En general, la
precisión de un método analítico se obtiene fácilmente mediante la simple repetición de la
medida (16).
La precisión se expresa matemáticamente como la desviación estándar σ, estimada
analíticamente por “s” o más comúnmente como la desviación estándar relativa (RSD) o
coeficiente de variación (CV).
Generalmente la precisión se evalúa a tres niveles de concentración.
La precisión de un método analítico deberá estudiarse sobre:
El sistema, evaluando la dispersión de al menos 6 inyecciones del estándar.
El método, evaluando la dispersión de varias preparaciones de la muestra final homogénea. La
evaluación corresponde a todo el procedimiento, desde la preparación de la muestra hasta la
medición del analito por parte del instrumento. Así por ejemplo, resulta necesario considerar la
imprecisión causada por las pesadas y las diluciones, factores frecuentemente olvidados.
En este caso, la precisión debe medirse en condiciones repetitivas mismo analista, mismo día,
mismo instrumento y en condiciones de precisión intermedia, diferente analista, diferente día,
diferente instrumento (11).
15
2.6.4. Exactitud
La exactitud de un método, también conocida como error sistemático o tendencia, corresponde
a la diferencia entre el valor obtenido (media) y el valor verdadero o que se supone como
verdadero.
Matemáticamente, suele expresarse de los siguientes modos:
Desviación: B = X – X’
Desviación relativa: %B = B / X *100
Recuperación: R = X / X’ *100
Donde X es el valor medio y X’ el valor verdadero.
De todas ellas la más utilizada es, sin lugar a dudas, la recuperación. En algunos casos no se
conoce el verdadero valor, por lo cual se trabaja con muestras adicionadas o mediante
comparación con un método de referencia o un método indexado.
2.6.5. Límite de detección
El límite de detección es el nivel más bajo de analito que puede detectarse, pero no
necesariamente determinarse en forma cuantitativa, empleando un método específico bajo las
condiciones experimentales exigidas. Dicho límite generalmente se expresa en términos de
concentración de analito, por ejemplo, en microgramos por litro. Como generalmente la
medición final se basa en la lectura de un instrumento, se deberá tener en cuenta la respuesta
de fondo o ruido.
2.6.6. Límite de cuantificación
El límite de cuantificación es la concentración más baja de analito, que puede ser determinada
con precisión y exactitud aceptables cuando se emplea el procedimiento exigido. Se mide
mediante el análisis de muestras que contengan cantidades conocidas y cada vez más bajas
de analito y la determinación del nivel más bajo al cual pueden alcanzarse grados aceptables
de exactitud y precisión. De nuevo, es a veces necesario evaluar y tener en cuenta la magnitud
de la respuesta de fondo (ruido). En muchos casos el límite de cuantificación es
aproximadamente dos o tres veces el límite de detección (11).
16
2.7 Aspectos farmacológicos del enalapril maleato
2.7.1 Mecanismo de acción
El enalapril maleato es un derivado de dos aminoácidos, L-alanina y L-prolina, su
mecanismo de acción es inhibir la enzima convertidora de angiotensina I en angiotensina
II, bloqueando la producción de esta última, como resultado de la unión directa de su
grupo funcional carboxilo en el sitio del ión zinc de la enzima, atenuando o suprimiendo
la respuesta a la angiotensina II. El enalapril maleato es un profármaco altamente
selectivo y no interactúa directamente con otros componentes del sistema renina
angiotensina (SRA).
La angiotensina I, es una enzima que tiene dos funciones. Se encarga de sintetizar la
angiotensina II que es un octapétido conformado por 8 aminoácidos, de acción
vasoconstrictora y cataliza la eliminación del mediador bradiquinina en productos
inactivos.
La vasoconstricción mediada por la angiotensina II es rápida e intensa a nivel de
las arteriolas y no tanto a nivel de las venas. La angiotensina II aumenta la presión
arterial por su efecto renal, disminuyendo la excreción del catión sodio y agua, haciendo
que el volumen extracelular aumente.
La inhibición de la enzima que convierte la angiotensina en un vasoconstrictor activo,
hace que la concentración de angiotensina II, a nivel de los receptores de angiotensina
(AT1 y AT2), disminuya. Así, se reduce el tono vascular, lo que atenúa la resistencia
vascular sistémica y la presión sanguínea, tanto sistólica como diastólica, disminuye.
La reducción del nivel de angiotensina II conlleva a una reducción de la secreción de
la hormona aldosterona de la glándula suprarrenal y con ello determina el contenido de
agua. La bradiquinina es un potente vasodilatador por medio de la liberación del óxido
nítrico y la prostaciclina. El enalapril es capaz de mantener la acción de la bradiquinina
produciendo una disminución de la resistencia vascular periférica y, por ende, la presión
arterial figura 2-2 (17).
17
Figura 2-2. Mecanismo de acción de enalapril maleato (18).
2.7.2 Farmacocinética
El ácido enalaprílico cuando se administra por vía peroral, su absorción es de
aproximadamente 10% y es debido a la presencia de dos grupos carboxílicos en la
molécula. La conversión de estos grupos en derivado carboxílico éster de etilo del
mismo, que es más lipófilo, dio lugar a la absorción por el organismo del orden de 70%.
El éster de enalapril, una vez absorbido, se convierte en el ácido enalaprílico (18,19).
El enaprilato está disponible en solución para uso intravenoso, principalmente en casos
de urgencias hipertensivas, cuando el tratamiento peroral no es apropiado. Es una
molécula de carácter hidrófilo por lo que no atraviesa la barrera hematoencefálica y por
lo tanto el enalaprilato no entra en el cerebro. El enalapril es un profármaco y como tal
debe sufrir hidrólisis por esterasas en el hígado para producir el ácido dicarboxílico. Una
vez absorbido, el enalapril se hidroliza a enalaprilato, el verdadero inhibidor de la ECA.
Las concentraciones máximas de enalaprilato se alcanzan 4 horas después de la
administración peroral de una dosis de enalapril (17).
El enalapril se elimina con la orina (60-78%) y en menor medida con las heces (33%) en
unas 24-48 horas. La mayor parte de la dosis absorbida se elimina en forma de
18
enalaprilato y se desconoce si la eliminación fecal procede de enalapril no absorbido, o
se excreta a través de la bilis. Sin embargo, al administrar el enalapril por vía
intravenosa, alrededor del 90% de la dosis se elimina como enalaprilato en orina. La
semivida del enalapril es de 2 horas, mientras que el enalaprilato presenta una semivida
de 35-38 horas. El aclaramiento renal del enalapril y el enalaprilato es de 100-158 y 300
ml/minuto respectivamente (18).
La biodisponibilidad del enalapril y del enalaprilato en pacientes con insuficiencia renal es
similar a la de los pacientes con función renal normal hasta llegar a una filtración
glomerular 30 ml/min (15).
2.7.3 Contraindicaciones y precauciones
Hipotensión sintomática: La hipotensión sintomática tras la dosis inicial o en el curso del
tratamiento, es una eventualidad. Puede ocurrir un descenso adicional de la presión
arterial sistémica con enalapril Si la hipotensión se hiciese sintomática, puede ser
necesario reducir la dosis o suspender el tratamiento con enalapril.
Función renal alterada: Los pacientes con insuficiencia renal pueden necesitar dosis
menores o menos frecuentes de enalapril.
En pacientes con insuficiencia cardíaca congestiva, se ha presentado hipotensión
sintomática más frecuentemente en aquellos con grado más severo de insuficiencia
cardiaca, por lo que el inicio del tratamiento y el ajuste de la dosis deberán ser
monitorizados bajo una estrecha vigilancia médica.
No existen estudios adecuados y bien controlados en mujeres embarazadas. Si se
administran durante el segundo y tercer trimestre del embarazo, los inhibidores del
enzima de conversión de angiotensina pueden causar daño y muerte fetal.
2.7.4 Interacciones
Presenta interacción con antiinflamatorios no esteroideos como la indometacina y otros
AINES. La aspirina puede reducir la eficacia vasodilatadora de los inhibidores de la ECA
al inhibir la síntesis de prostaglandinas. Sin embargo, la aspirina es beneficiosa en
combinación con un inhibidor de la ECA en casos de enfermedad coronaria isquémica y
disfunción del ventrículo izquierdo. Por este motivo, los pacientes que reciban salicilatos
19
y un inhibidor de la ECA deberán ser vigilados para comprobar una adecuada respuesta
antihipertensiva.
La administración conjunta de propranolol y enalapril reduce las concentraciones séricas
de enalaprilato.
El captopril, el enalapril y posiblemente otros inhibidores de la ECA pueden exaltar la
actividad de los antidiabéticos perórales. Se ha observado hipoglucemia cuando se ha
administrado inhibidores de la ECA con metformina o gliburide a pacientes con diabetes
tipo 2.
El enalapril reduce la excreción de sales de litio y aumenta el riesgo de efectos
cardiotóxicos y neurotóxicos por litio.
Se han observado reacciones sistémicas en pacientes tratados con el complejo de
gluconato de hierro durante un tratamiento concomitante con enalapril. Es posible que el
complejo de hierro aumente el riesgo de reacciones alérgicas o anafilácticas en pacientes
tratados con inhibidores de la ECA por lo que se deberán tomar precauciones (20).
2.7.5 Efectos secundarios
Los efectos secundarios más comúnmente descritos fueron: sensación e inestabilidad,
cefalea, fatigabilidad y astenia. Se ha descrito tos seca y persistente y puede requerir la
suspensión del tratamiento. Se han observado incrementos en la urea y creatinina
séricas, reversibles con la suspensión de enalapril.
2.7.6 Intoxicación y su tratamiento
En pacientes intoxicados por sobredosificación del enalapril maleato, se presenta
hipotensión, que es tratada, mediante infusión intravenosa de suero salino normal.
También en casos de intoxicación por el enalaprilato se puede extraer de la circulación
sistémica por medio de hemodiálisis (21).
2.8 Propiedades fisicoquímicas de enalapril maleato
Nombre químico (IUPAC): L-Proline, 1-[N-[1-(ethoxycarbonyl)-3-phenylpropyl]-L-alanyl]-
, (S)-, (Z)-2-butenedioate (1:1).
1-[N-[(S)-1-Carboxy-3-phenylpropyl]-L-alanyl]-L-proline 1-ethyl ester, maleate (1:1).
Formula molecular: C20H28N2O5·C4H4O4 492.52
20
Enalapril Maleato
Figura 2-3. Estructura química del maleato de enalapril
Peso molecular: 492.5 g/mol
Punto de fusión: 144°C
Sustancias de referencia: Maleato de Enalapril SR-FA. Enalaprilato SR-FA.
Dicetopiperazina SR-FA (12).
Propiedades generales - Polvo cristalino blanco. Soluble en agua, altamente soluble en
cloruro de metileno, soluble en alcohol metílico. Se disuelve en soluciones diluidas de
hidróxidos alcalinos. Poco soluble en disolventes orgánicos semipolares y prácticamente
insoluble en disolventes orgánicos no polares. Presenta polimorfismo (12).
Estabilidad Se ha descrito que el enalapril es estable durante 56 días en líquidos orales
extemporáneos que contienen 1 mg/mL de maleato de enalapril en una serie de
vehículos.
Se han realizado estudios de estrés al enalapril maleato de acuerdo a las directrices ICH
Q1 A (R2). El fármaco en estado sólido es relativamente estable, pero muestra
inestabilidad cuando se encuentra en solución y bajo condiciones de estrés tales como
hidrólisis alcalina, acida y neutra, fotólisis y temperatura, formando productos de
degradación o secundarios. La condición acida, afectan en mayor grado o en un tiempo
más cortos la generación de productos de degradación, aunque los mismos también se
forman en otras condiciones de estrés (22,23).
21
En la Figuras 2-5 se presenta el esquema para el paso de maleato de enalapril a DKP
por efecto de la temperatura, mientras que en la Figura 2-7 las rutas de degradación del
maleato de enalapril por tratamientos ácido y básico (22, 23).
Figura 2-4 Obtención de enalapril dicetopiperazino (DKP) a partir de enalapril maleato
por ciclización térmica (24).
Dicetopiperacina enalapril. Es un producto de degradación del maleato de enalapril. Sus
propiedades no han sido ampliamente investigadas.
Figura 2-5 Estructura de ácido enalaprílico (25,26)
23
3. Capítulo
3.1 Materiales y métodos
3.1.1 Localización del estudio
La validación de la metodología, las corridas cromatográficas del estudio de estabilidad y el
almacenamiento de las muestras de estabilidad almacenadas a 5 y 25 ± 2°C se llevaron a
cabo en el laboratorio de Investigación y Desarrollo de laboratorios Procaps Barranquilla.
3.2 Estandarización del sistema cromatográfico
3.2.1 Condiciones cromatográficas
Debido a que la USP 35 no reporta un método para la valoración de enalapril maleato en
suspensión, se desarrolló y validó la metodología para este producto
Se siguieron las condiciones cromatográficas aplicadas para el estudio de estabilidad
química para el enalapril maleato por un método de cromatografía líquida, del
departamento de investigación de la Universidad de Concepción, Chile.
Las condiciones cromatográficas utilizadas fueron:
Columna: RP 18 de 150x4.6mm, tamaño de partícula 5mm.
Temperatura de la columna: 23 ± 2 °C,
Fase móvil: 55% metanol – 45% buffer fosfato 0.01 M ajustado con ácido fosfórico a pH
2.2 (26).
Flujo de la fase móvil: 1 mL/min.
Longitud de onda de detección: 215 nm.
Volumen de inyección: 20 µl
3.2.2 Soluciones empleadas en la preparación de estándares y muestras
3.2.2.1 Hidróxido de sodio 0.1 N
Se pesaron aproximadamente 2 g de NaOH G.R., se disolvieron en 400 mL de agua
destilada y se completó a un volumen de 500 mL con agua destilada.
24
3.2.2.2 Ácido clorhídrico 0.1N
Se diluyeron aproximadamente 1.5 mL de HCl fumante a 500 mL con agua destilada.
3.2.2.3 Peróxido de hidrogeno a 3%
Se diluyó aproximadamente 20 mL de H2O2 al 30% en 200 mL con agua destilada.
3.2.2.4 Buffer de fosfato 0.01 M pH 2.2
Se pesaron aproximadamente 1.36 g de fosfato monobásico, se disolvieron en 800 ml de
agua destilada, se ajustó el pH con acido fosfórico a pH 2.2 y se completó con agua
destilada a 1000 mL.
3.2.2.5 Mezcla diluyente
Se mezcló 550 mL de metanol con 450 mL de buffer fosfato 0.01 M pH 2.2
3.2.2.6 Solución de ácido ascórbico al 20% (P/V)
Se pesaron aproximadamente 20 g de ácido ascórbico, se disolvieron en 80 mL de
agua destilada y se completó a un volumen de 100 mL.
3.2.3 Materiales y equipos para el estudio de estabilidad
Frascos plásticos ámbar de 60 ml, viales transparentes y ámbar para HPLC.
Tapas rosca plástica
Jeringas desechables
Filtro para muestra 0.45 µm
Membrana 0.45 µm y 0.22 µm para solventes
Mortero de porcelana con pistilo
Soporte universal
Pinzas para soporte universal.
Cromatógrafo Merck Hitachi model D-7000, Auto Sampler L-7200, column oven
L-7351, diodo array detector L-7450ª Merck Hitachi LaChrom, Interface D-7000
Balanza analítica Meltter Toledo XP 205 serie 1126300620
pH metro Metter Toledo Seven Easy
Ultrasonido US-0061 Elma E 300H Elmasonic
Termohigrómetro Digital Traceable VWR
25
Nevera PHILIPS Polarix
Baño maría Precisión Scientif modelo TS-66618 AZ-1
Estufa de calentamiento IKA C-MA6-HS7
3.2.4 Estándares y reactivos
Estándar de enalapril maleato USP lote J1C267 cat. N°1235300
Concentración 99.2%
Agua destilada
Metanol calidad HPLC lote 1667707 301 marca Lichrosolv Merck
Fosfato de potasio KH2PO4 lote A0383573 230 marca Merck
Ácido clorhídrico fumante lote K43320717215 marca Emsure Merck
Hidróxido de sodio grado reactivo lote B0702988 141 marca Emsure Merck
Ácido Ascórbico reg. 57810/120141123 concentración 100.4% fabricante
Research Pharmaceutical S.A
Ácido orto fosfórico lote 42745373 143 marca Merck
Peróxido de hidrogeno al 30% lote K42259210 119 marca Emsure Merck
Dextrosa al 5% USP lote SX12FG8 marca Baxter
3.2.5 Sistema de Idoneidad
Antes de llevar a cabo la validación de la metodología analítica se verificó la
idoneidad del sistema cromatográfico, para lo cual se realizaron 5 inyecciones del
estándar de enalapril maleato USP a una concentración aproximada de 0.1 mg/mL y
con base en los cromatogramas obtenidos se determinaron los siguientes
parámetros:
Repetibilidad
Asimetría
Platos Teóricos
Factor de capacidad
26
3.3 Validación de la metodología
Luego de la idoneidad del sistema, se procedió a la validación de los siguientes
parámetros.
3.3.1 Selectividad
Para evaluar la selectividad se inyectaron en el equipo las siguientes soluciones:
Solución fase móvil
Solución diluente
Solución muestra
Solución placebo
3.3.1.1 Selectividad frente a los excipientes
Metodología: se procedió a preparar una mezcla de los componentes de la formulación
de la tableta de enalapril maleato, se pesó el doble de la cantidad en que se encuentran
en la suspensión excluyendo al principio activo. Se llevó el placebo a una concentración
similar a la de las muestras durante el análisis de cuantificación del analito de interés.
3.3.1.2 Descripción de la formulación
Tabla 3-1 Composición de la tableta de maleato de enalapril
Materias primas Dosificación mg/tableta Exceso
Enalapril maleato 20.4 2%
Lactosa monohidrato 93.95
Hidróxido de sodio 4.88
Almidón pregeletanizado 20.0
Estereato de magnesio 0.77
Agua purificada 17.0
Alcohol etílico 90.0
Opadray blanco ref OY-7332 9.0
27
3.3.1.3 Selectividad frente a los compuestos de degradación
El maleato de enalapril y los excipientes que hacen parte de la matriz de las tabletas fueron
sometidos a degradación forzada. Se realizó hidrólisis acuosa, ácida, básica, oxidación y
exposición a la luz solar, bajo las siguientes condiciones:
Como medios de degradación se utilizaron HCl 0.1 N, NaOH 0.1 N y H2O2 al 3%.
Agua + calor (70ºC) por 12 horas + 8 horas a luz solar
Base (5 mL NaOH 0,1N) + 70°C por 12 horas. Neutralizar con HCl 0.1N.
Ácido (5 mL HCl 0,1N) + 70 ºC por 12 horas. Neutralizar con NaOH 0.1N
H2O2 3% 5 mL por 8 horas
3.4 Linealidad
3.4.1 Linealidad del sistema
Metodología: la linealidad del sistema se determinó analizando el estándar de enalapril
maleato a los siguientes cinco niveles de concentración: 0.10; 0.15; 0.20; 0.25 y 0.30
mg/m.
3.4.2 Linealidad del método
Metodología: la linealidad del método se determinó analizando la matriz de la suspensión
enriquecida con el estándar de enalapril maleato en concentraciones de: 0.10; 0.15; 0.20;
0.25 y 0.30 mg/mL, en las siguientes proporciones:
Nivel I Solución stock estándar enalapril maleato al 50% + alícuota de solución
placebo
Nivel II Solución stock estándar enalapril maleato al 75% + alícuota de solución
placebo
Nivel III Solución stock estándar enalapril maleato al 100% + alícuota de
solución placebo
28
Nivel IV Solución stock estándar enalapril maleato al 125% + alícuota de
solución placebo
Nivel V Solución stock estándar enalapril maleato al 150% +alícuota de
solución placebo
3.5 Precisión
3.5.1 Repetibilidad instrumental
Metodología: para evaluar este parámetro se preparó una solución de la muestra a la
concentración nominal del 100% (aproximadamente 0,2 mg/mL de maleato de enalapril
La solución se inyectó 6 veces en el cromatógrafo HPLC y se evaluó el CV de las 10
réplicas
3.5.2 Precisión intermedia
Metodología: se evaluó entre días y entre analistas, realizando determinaciones en dos
días diferentes, por dos analistas y valorando tres replicas por día. La muestra se
preparó triturando 20 tabletas (previa determinación de la variación de peso), luego se
pesaron aproximadamente 1450 mg y se llevaron a un balón aforado de 200 mL. Se
adicionó 50 mL de una mezcla dextrosa al 5% y agua en proporción 1:1, se agitó
vigorosamente y se sonicó hasta obtener una suspensión homogénea. Se completó a
volumen con la mezcla seleccionada, se homogenizó, se transfirió una alícuota de 5 mL a
un balón aforado de 25 mL y se diluyó con 20 mL de agua, se agitó vigorosamente y se
aforó con agua. La concentración obtenida fue de aproximadamente 0.2 mg/mL.
3.6 Exactitud
Metodología: se determinó la exactitud de la metodología para tres niveles de
concentración 0.1, 0.2 y 0.3 mg/mL. Para ello se utilizó la muestra de la linealidad.
3.7 Estudio de estabilidad
Para el estudio de estabilidad se utilizó un diseño factorial 2k, (Diseño 23), se utilizaron
dos vehículos, dos temperaturas y frasco ámbar y frasco transparente
Vehículo 1: Solución dextrosa al 5% - gua 1:1
Vehículo 2: Solución dextrosa al 5% - agua 1:1 ajustado pH a 3.0 con ácido
29
ascórbico.
Concentración de la suspensión 1 mg/mL
Preparación de la suspensión: Se trituraron 20 tabletas hasta obtener un polvo
fino, se pesó el equivalente a 20 mg de maleato de enalapril (previa determinación
de la variación de peso), se llevó a un balón aforado de 200 mL, se adicionó 50
mL del vehículo seleccionado, se agitó vigorosamente hasta obtener una
suspensión homogénea, se completó volumen con vehículo seleccionado y se
agitó.
Las muestras se sometieron a dos diferentes temperaturas, 5±2°C y 25±2°C.
Se determinó el pH de cada una de las muestras a todos los tiempos de
muestreo.
Condiciones de luz: ausencia (frasco ámbar) y presencia (frasco transparente).
Tiempo de exposición 360 horas (15 días), con observaciones a las 0, 12, 24, 36,
48, 72, 120, 168, 240 y 360 horas.
Envase: recipiente plástico ámbar y transparente con capacidad de 60 mL y tapa
rosca plástica.
La estabilidad física se determinó por la observación del color y olor de cada una de las
muestras en las diferentes condiciones del estudio, también se determinó el pH para
cada una de las muestras estudiadas en las diferentes condiciones de estudio
La estabilidad química se determinó teniendo en cuenta el porcentaje de degradación en
cada una de las muestras, expuestas a las diferentes condiciones del estudio.
3.8 Elaboración del protocolo de preparación de la solución extemporánea.
Una vez definido el vehículo y bajo qué condiciones de pH y temperatura es más estable
la suspensión, se procedió a elaborar un protocolo para su preparación y se
establecieron las recomendaciones para su uso y almacenamiento.
30
4. Capítulo
4.1 Resultados y Discusión
A continuación se presentan los resultados y la discusión de los diferentes parámetros de
validación del método analítico para la cuantificación del maleato de enalapril en la
preparación extemporánea. Igualmente los datos y discusión del estudio de estabilidad
de la preparación extemporánea, expuesta a las condiciones de estudio
4.1.1 Validación de la metodología analítica
4.1.1.1 Idoneidad del sistema.
Valores correspondientes al tiempo de retención para cada una de las inyecciones
del estándar de maleato de enalapril para una concentración de 0.1 mg/mL
Tabla 4-1: Datos idoneidad del sistema
Inyección Tiempo
retención Área K´
Platos Teóricos
Asimetría
1 3.32 1922620 1.46 5532 1.15 2 3.32 1930400 1.46 5439 1.14 3 3.32 1919990 1.46 5467 1.19 4 3.32 1920460 1.46 5449 1.19 5 3.32 1932080 1.46 5469 1.16
Promedio 3.32 1925110 1.46 5471.2 1.166 SD 0 5714.06 -- 36.224 0.023 CV 0 0.297% -- 0.662 1.97%
Con cada una de las 5 inyecciones del estándar de maleato de enalapril USP a una
concentración de 0.1 mg/mL, se obtuvieron los cromatográmas respectivos,
observando que el tiempo de retención del analito se encuentra en 3.32 minutos para
cada una de las inyecciones (Anexo 4). El análisis cromatográfico para comprobar la
idoneidad del sistema que se realizó para el analito, nos indica que el resultado
obtenido de coeficiente de variación para los parámetros de tiempo de retención,
área, factor de capacidad, platos teóricos y asimetría; cumplen con lo establecido por
la farmacopea USP 2012. Por tal razón el sistema cromatográfico es confiable y se
31
puede utilizar para la validación de la metodología y el análisis del producto sometido
al estudio de estabilidad.
4.2 Validación de la metodología
4.2.1 Selectividad
La selectividad se evalúo respecto a los excipientes y frente a los productos
generados por la degradación forzada del activo, así mismo se estudio el efecto de
los excipientes de la formulación. En cuanto a la selectividad relacionada con los
productos de degradación, ésta se determinó realizando la degradación forzada del
enalapril en medio ácido, alcalino, acuoso y oxidativo. Para los ensayos de hidrólisis
ácida, alcalina y acuosa se sometieron las muestras a calentamiento en cada caso a
una temperatura de 70°C por 12 horas, utilizando como medios de degradación las
soluciones de NaOH 0.1N y HCl 0.1N. Para observar el efecto de la luz solar, la
muestra acuosa se expuso por 48 horas. El ensayo de oxidación se determinó
utilizando una solución de peróxido e hidrogeno al 3% por un tiempo de 8 horas y
posterior análisis.
4.2.1.1 Selectividad frente a los excipientes
Tabla 4-2 tiempos de retencion de placebo y enalapril
TIPO DE MUESTRA TIEMPO DE RETENCION
ENALAPRIL RESPUESTA
(AREA)
Placebo ---- -----
Estándar de maleato de enalapril
3.25 9061311
Muestra 3.24 9625647
Criterio de aceptación: no debe existir interferencia entre el pico del activo y cualquier pico que eluya del placebo
32
Figura 4-1 Cromatograma perteneciente a matriz de los excipientes
Al analizar los cromatogramas del placebo y del maleato de enalapril se observan
señales a diferentes tiempos de retención, correspondientes a 1.6 y 4.2, que no
interfieren con el tiempo de retención del enalapril, que corresponde a 3.24 minutos
(figura 4-1). Lo anterior permite afirmar que la metodología es selectiva frente a los
excipientes de la formulación.
4.2.1.2 Selectividad para el método indicador de estabilidad
Tabla 4-3 Datos selectividad para el método indicador de estabilidad
Condiciones de
degradación
TIEMPO
CONCENT. DE
LA MUESTRA
(mg/mL)
RESPUESTA
OBTENIDA
(AREA)
RESPUESTA
OBTENIDA (%)
PUREZA DE
PICO
Normales
Luz 48 Horas 0.20000 9625647 100.000 99.96
Temperatura
70ºC 12 Horas 0.20000 8970480 97.5830 99.93
Sol. NaOH 0,1N
+ 70°C 12 Horas 0.20000 7449260 86.0210 99.99
Sol. H2O2 3% 5 Horas 0.20000 8306980 98.3350 99.95
HCl 0,1N + 70°C 12 Horas 0.20000 8411252 94.2760 99.97
33
4.2.1.3 Hidrolisis
Se presentan los cromatogramas de la degradación del enalapril maleato sufrida en las
condiciones de estrés. El primero corresponde la degradación sufrida en medio ácido,
figura 4-2, el segundo a medio alcalino, figura 4-3 y el tercero a la degradación ocurrida
por exposición de las muestras a la luz solar, figura 4-4. En cada uno de ellos se puede
identificar claramente el pico correspondiente del analapril maleato que corresponde a
un tiempo de retención de 3.20 y los otros picos en tiempos de retención diferentes y
que no estarían interfiriendo en la identificación del analito.
Figura 4-2 Cromatograma degradación ácida
34
Figura 4-3 Cromatograma degradación básica
Figura 4-4 Cromatograma perteneciente a la degradación acuosa + luz solar
35
Se observa que en todas las condiciones de estrés estudiadas, la degradación de
enalapril fue mayor en el medio alcalino, cuya degradación se presenta después de 12
horas a 70°C. El porcentaje de área de degradación del enalapril fue del 14%
aproximadamente. Bajo esta condición el enalapril se degrada en varios compuestos
como lo reporta la literatura y que no interfieren con el tiempo de retención del analito,
facilitando su correcta cuantificación. En un tiempo de retención de 5.59 aparece una
señal que corresponde a la diketopiperazina, mientras que la señal con un tiempo de
retención aproximado de 1.0 corresponde al ácido málico. Según la literatura los otros
picos muy posiblemente se deban a impurezas que no han sido identificadas.
Bajo las condiciones de hidrólisis ácida y luz solar, después de 12 horas y a 70°C el
porcentaje de degradación del enalapril en el medio ácido fue del 5.5% aproximadamente
y para luz solar fue del 2.5%. Bajo estas condiciones el enalapril se degrada en
enalaprilato que posiblemente es la impureza reportada como desconocida que aparece
con un tiempo de retención de 1.59 y 1.60; la diketopiperazina, aparece con un tiempo
de retención 5.59 – 5.61. Las otras señales corresponden al acido málico y productos de
descomposición. Según lo reporta la literatura en las 3 condiciones estudiadas, la
degradación hidrolítica corresponde a una cinética de primer orden (26).
Mediante el análisis cromatográfico de las diferentes muestras evaluadas, se pudo
concluir que ni los excipientes de la matriz ni los productos de degradación generan
señales que pudieran interferir con las señales debidas al principio activo. Mediante el
detector de arreglo de diodos se estudió la pureza de pico de las señales obtenidas,
indicando que la metodología desarrollada permite distinguir y diferenciar entre el
maleato de enalapril y sus productos de degradación; por lo tanto esta metodología es
adecuada para el estudio de estabilidad.
4.2.1.4 Oxidación
Como se observa en el cromatograma (figura 4-5), para la condición oxidativa se
encontró que el enalapril al parecer es más estable, con un porcentaje de área de
degradación del 1.5% aproximadamente. Se observa la señal del ácido málico a un
tiempo de retención de 1.0. También aparecen picos con menor intensidad que
posiblemente corresponda a otros productos de descomposición en pequeñas
proporciones entre los que puede encontrarse, el enalaprilato.
36
Figura 4-5 Cromatograma perteneciente a la degradación oxidativa
4.2.2 Linealidad
Se reportan los datos de la linealidad del sistema como del método, así mismo las
gráficas y ANOVA que demuestran la linealidad para cada uno de ellos.
La linealidad del sistema y del método, se estudió para cinco niveles de concentración
realizando tres réplicas de cada concentración, tal como lo establece los lineamientos. Se
emplearon concentraciones entre 0.1 y 0.3 mg/ml para el sistema y el método. Para la
linealidad del método se utilizaron muestras de placebo enriquecido con enalapril, las
cuales se sometieron al correspondiente proceso de purificación y posterior análisis.
Según el método establecido.
37
4.2.2.1 Linealidad del sistema
Tabla 4-4 Datos de la linealidad del sistema
CONCENTRACIÓN TEÓRICA CONCENTRACIÓN REAL
REPLICA INYECCIÓN ÁREA PROMEDIO
(mg/mL) (mg/mL)
0.1 mg/ml
0.0999 mg/ml 1 1 931520
9325767 0.0994 mg/ml 2 2 926840
0.1007 mg/ml 3 3 939370
0.15 mg/ml
0.1489 mg/ml 1 1 1382430
1392753 0.1507 mg/ml 2 2 1399650
0.1504 mg/ml 3 3 1396180
0.2 mg/ml
0.1982 mg/ml 1 1 1867990
1885370 0.20187 mg/ml 2 2 1902980
0.1999 mg/ml 3 3 1885140
0.25 mg/ml
0.2477 mg/ml 1 1 2324520
2345897 0.2501 mg/ml 2 2 2347240
0.2521 mg/ml 3 3 2365930
0.3 mg/ml
0.3005 mg/ml 1 1 2842960
2839580 0.2984 mg/ml 2 2 2824001
0.3013 mg/ml 3 3 2851780
r ≥ 0,99 0.99974
r2 ≥ 0,98% 0.99947%
CV ≤ 2,0% 1.06%
38
Figura 4-6 Gráfica de linealidad del sistema
Tabla 4-5 Prueba t de student para la linealidad del sistema
PARÁMETRO HIPÓTESIS NULA t observado t tabulado CONCEPTO
Intercepto (a) H0: α = 0 1.80 2,16 Se acepta la hipótesis
nula
Pendiente (b) H0: β = 0 157.09 2,16 Se rechaza la hipótesis
nula
Correlación(ŗ) H0: r = 0 113,90 2,16 Se rechaza la hipótesis
nula
Tabla 4-6 Prueba F de Fisher
Fuente de variación
Grados de Libertad
Suma de Cuadrados
Cuadrados medios Fexp Ftab
Regresión 1 6,82726E+12 6,82726E+12 28512,40693 4,67
Falta de ajuste
3 1,20E+09 4,01E+08 1,673277549
Error Puro 10 2,39E+09 2,39E+08
Error Residual
13 3596477560
Error total 14 6,83085E+12
39
Tabla 4-7 Análisis de varianza linealidad del sistema
ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los cuadrados F Probabilidad
Valor crítico para F
Entre grupos 3.41543E+12 14 2.43959E+11 0.1224568 0.999840844 2.424364357
Dentro de los grupos 2.98831E+13 15 1.9922E+12
Total 3.32985E+13 29
4.2.2.2 Linealidad del método
Tabla 4-8 Datos de linealidad del método
CONCENTRACIÓN TEÓRICA CONCENTRACIÓN REAL
REPLICA INYECCIÓN ÁREA PROMEDIO
(mg/mL) (mg/mL)
0.1 mg/ml
0.0999 1 1 972960
980410 0.1017 2 2 991240
0.1003 3 3 977030
0.15 mg/ml
0.1514 1 1 1475220
1488536 0.1515 2 2 1475560
0.1555 3 3 1514830
0.2 mg/ml
0.2028 1 1 1976090
1950203 0.1993 2 2 1941770
0.1984 3 3
1932750
0.25 mg/ml
0.2513 1 1 2447960
2433990 0.2491 2 2 2427080
0.2491 3 3 2426930
0.3 mg/ml 0.3039 1 1
2961040 2979093 0.3064 2 2
2985540
40
0.3069 3 3 2990700
r ≥ 0,99 0.99942
r2 ≥ 0,98% 0.99883%
CV ≤ 2,0% 1.23%
Figura 4-7 Gráfica linealidad del método
y = 9885640,000x - 10681,333R² = 0,999
950000
1950000
2950000
0,100 0,150 0,200 0,250 0,300 0,350
AR
EA
CONCENTRACION (mg/mL)
LINEALIDAD DEL METODO
Series1
Tabla 4-9 Prueba t de student para la linealidad del método
PARÁMETRO HIPÓTESIS NULA t observado t tabulado CONCEPTO
Intercepto (a) H0: α = 0 0,54 2,16 Se acepta la hipótesis
nula
Pendiente (b) H0: β = 0 105,494 2,16 Se rechaza la hipótesis
nula
Correlación(ŗ) H0: r = 0 113,96 2,16 Se rechaza la hipótesis
nula
Tabla 4-10 Prueba F de Fisher y Anova para la linealidad del método
Fuente de variación
Grados de Libertad
Suma de Cuadrados
Cuadrados medios Fexp Ftab
Regresión 1 7,32944E+12 7,32944E+12 23936,05857
4,96
Falta de ajuste
3 5,50E+09 1,83E+09 5,986779379
Error Puro 10 3,06E+09 3,06E+08
Error Residual
13 8561712213
Error total 14 7,338E+12
41
Tabla 4-11 Análisis de varianza linealidad del método
ANÁLISIS DE VARIANZA
Origen de las variaciones
Suma de cuadrados
Grados de libertad
Promedio de los cuadrados F Probabilidad
Valor crítico para F
Entre grupos 3.669E+12 14 2.62072E+11 0.120323622 0.999856071 2.424364357
Dentro de los grupos 3.26708E+13 15 2.17806E+12
Total 3.63398E+13 29
Dentro de los rangos de concentración estudiados, tanto para el sistema como para el
método, se obtuvo un comportamiento lineal. La prueba aplicada indico que los intercepto
no son estadísticamente diferentes de cero y que las pendientes son estadísticamente
diferente de cero. De la misma manera, el análisis de varianza mediante un test F,
demostró una regresión significativa y desvíos no significativos de los puntos alrededor
de la recta, e igualmente una variabilidad no significativa entre los resultados para cada
una de las diferentes concentraciones. En las figuras 4-6 y 4-7 se presentan las gráficas
de calibración, de la relación de área vs concentración, para el sistema y para el método,
en ellas se puede apreciar la proporcionalidad entre la concentración y la respuesta analítica
para el rango comprendido entre 0.1 y 0.3 mg/mL, lo que se corrobora con los resultados
expuestos en las tablas 4-4 y 4-8.
En las tablas 4-7 y 4-11, se muestran los resultados del análisis de varianza para la linealidad
del sistema y del método, las pruebas F y ANOVA correspondientes, en donde se indica que
estadísticamente no hay dispersión de los resultados entre réplicas para las distintas
concentraciones. Los F calculados tanto para el sistema como para el método son menores al
valor del F de la tabla
42
4.2.3 Precisión
4.2.3.1 Precisión del sistema
Tabla 4-12 Datos precisión del sistema
CONCENTRACION
mg/ml REPLICA No
RESPUESTA
Área CV (%)
0.2 mg/ml
1 1842340
0.50%
2 1863210
3 1857160
4 1859550
5 1870410
6 1859010
Criterio de aceptación:
CV ≤ 2,0%
4.2.3.2 Precisión del método
Tabla 4-13 Datos repetibilidad del método
CONCENTRACION mg/ml
REPLICA PORCENTAJE RECUPERADO
ENALAPRIL MALEATO CV (%)
0.2 mg/ml
1 101.180
1.11
2 101.309
3 103.306
4 103.835
5 101.697
6 101.496
Criterio de aceptación: CV ≤ 2,0 %
Para determinar la precisión o repetibilidad del sistema y del método, se realizaron seis
determinaciones utilizando concentración de 0.2 mg/ml. Los valores de los coeficiente de
variación obtenidos fueron de 0.5% para el sistema y 1.11% para el método, los cuales
43
son inferiores al valor máximo aceptado para métodos cromatográficos (2%), indicando
una adecuada repetibilidad para el sistema como para el método. Tabla 4-12 y 4-13
4.2.3.3 Precisión intermedia
Tabla 4-14 Datos precisión intermedia
CONCENTRACION mg/ml
ANALISTA DIA1 DIA2
0.2 mg/ml
1
99.3607 99.3881
101.117 98.9712
101.442 100.505
PROMEDIO 100.640 99.6214
2
98.8996 101.430
101.785 101.319
101.511 100.982
PROMEDIO 100.732 101.244
Criterio de aceptación: CV ≤2 % CV= 1.09%
Tabla 4-15 Análisis de varianza para la precisión intermedia
Origen de
las
Variaciones
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
Promedio
de los
cuadrados F Probabilidad
Valor crítico
para F
Entre grupos 6.8937039 5 1.37874078 1.33611935 0.36290231 4.387374187
Dentro de
los grupos 6.19139651 6 1.03189942
Total 13.0851004 11
ANÁLISIS DE VARIANZA
La precisión intermedia del método se evaluó a una concentración de 0.2 mg/ml, para
dos analistas en dos días diferentes, realizando tres determinaciones. El coeficiente de
variación de las respuestas fue de 1.09%. El análisis de varianza, mediante un test F,
indica que no existe diferencia significativa en los resultados por cambio de analistas o al
realizar el análisis en diferentes días. Tabla 4-15.
44
4.2.4 Exactitud
4.2.4.1 Exactitud del método
Tabla 4-16 Datos exactitud del método
CONCENTRACION
mg/ml
PORCENTAJE
RECUPERADO PROMEDIO
PROMEDIO
TOTAL
0.1 mg/ml
99.8619
100.627
100.877
101.738
100.280
0.2 mg/ml
101.410
100.082 99.6489
99.1860
0.3 mg/ml
101.304
101.922 102.143
102.319
Criterios de aceptación: El promedio total de los porcentajes recuperados debe estar entre el
rango de 98 y 102 % lo que demuestra que el método es exacto en todo el rango de las
concentraciones.
CV= 0.937%
2.301 2.306
"Al ser t exp < t tablas no existe diferencia significativa entre la recuperación media y 100,
por lo que la exactitud es correcta".
Para determinar si el factor concentración tiene alguna influencia en los resultados se
utiliza un test de igualdad de varianzas de varios grupos muéstrales del mismo tamaño
como puede ser el test de Cochran.
45
0.521 0.871
“Al ser G exp < G tablas significa que las varianzas de las tres concentraciones utilizadas
son equivalentes, es decir, que el factor concentración no influye en la variabilidad de los
resultados”.
La evaluación de este parámetro se determinó mediante el porcentaje de recuperación,
se tomaron la muestras proveniente de la linealidad del método a niveles de
concentración 0.1; 0.2; 0.3 mg/ml. equivalentes al 50% 100% y 150% respectivamente y
realizando tres replicas para cada nivel.
Los porcentajes de recuperación obtenida se encontraron en un intervalo entre 100.082 y
101.922%. El coeficiente de variación en los tres niveles de concentración fue de
0.937%. La prueba de Cochran indica que el nivel de concentración no afecta la
variabilidad de los resultados. El valor t experimental, menor que el valor t tabulado,
confirma la exactitud del método, como se puede constatar en la tabla 4-15
4.2.5 Precisión instrumental
Tabla 4-17 Datos Precisión instrumental
NUMERO DE INYECCION AREA
1 1903430 2 1923640 3 1930760 4 1893560
5 1908932
6 1918980
PROMEDIO 1913203,333
CV (%) 0.7201 %
Criterio de Aceptación: El CV de las 6 inyecciones de la muestra no debe ser mayor del 2,0%
46
Los datos muestran para el sistema de precisión coeficientes inferiores al 2% (0.7201%) lo
que indica que el sistema es preciso desde el punto de vista de la repetibilidad.
47
4.3 Resultados y discusión de la estabilidad de la preparación
extemporánea
Se analizó para cada tiempo y condición de estudio, la influencia sobre la estabilidad
física en función de la variación del pH, color y olor de la preparación extemporánea. Así
mismo la influencia sobre la estabilidad química, evaluando la cantidad remanente para
cada uno de los lotes. Los datos se sometieron al estudio estadístico, con el fin de
detectar si existen o no diferencias estadísticamente significativas entre los lotes o se
pueden combinar para estimar la degradación de la preparación extemporánea
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo dextrosa al 5%
agua 1:1, envasada en frasco ámbar y almacenada a 5±2°C.
Tabla 4-19 Datos de estabilidad frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1
Tiempo Horas
Muestra
LOTE 1
pH mg/caps
LOTE 2
pH mg/caps %
Remanente %
Remanente
0 M1 100,662
6.42 20,132 103,450
6.39 20,690
M2 100,950 20,190 102,965 20,593
12 M1 101,072
6.41 20,214 100,983
6.41 20,196
M2 100,634 20,126 101,818 20,363
24 M1 99,055
6.39 19,811 101,235
6.40 20,247
M2 98,674 19,734 101,235 20,247
36 M1 100,595
6.38 20,119 101,393
6.40 20,278
M2 100,224 20,044 100,299 20,059
48 M1 100,131
6.40 20,026 99,237
6.41 19,847
M2 97,383 19,476 99,675 19,935
72 M1 101,759
6.38 20,351 100,096
6.42 20,192
M2 100,797 20,159 100,995 20,199
120 M1 97,765
6.37 19,524 98,854
6.42 19,770
M2 97,865 19,652 98,676 19,735
168 M1 96,441
6.39 19,288 95,763
6.38 19,152
M2 97,052 19,410 96,591 19,318
48
240 M1 90,197
6.36 18,039 91,038
6.32 18,207
M2 90,774 18,154 90,517 18,103
360 M1 90,604
6.28 18,120 89,335
6.28 17,867
M2 89,760 17,952 90,035 18,007
Se observa que las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en frasco
ámbar, colocadas a la condición de 5±2°C y utilizando el vehículo dextrosa al 5% agua
1:1 en las primeras 240 horas, no presentó variación de la concentración del enalapril
maleato; lo valores de la cantidad remanente se encuentran dentro del porcentaje del 90
al 110% exigido por la norma, tanto para el lote 1 como para el lote 2, a partir de las 240
horas se presenta una disminución del porcentaje, alcanzando el 89.335%.
Estadísticamente su diferencia no es significativa, pero no cumpliría la norma del
porcentaje de la cantidad remanente, indicando que se empieza a mostrar una posible
influencia de la condición de exposición o del vehículo de la preparación. En forma
general, se podría decir que la preparación extemporánea sometida a la condición de
5±2°C, con ausencia de luz y utilizando el vehículo dextrosa al 5% agua 1:1, es estable
hasta las 240 horas desde el punto vista químico.
Igualmente, al analizar el efecto del pH, se observa que su variación es máximo de 0.14
unidades, estadísticamente no es significativa, indicando que químicamente es estable
frente a la condición durante el tiempo de estudio. No se observó cambios del color, de la
suspensión ni de olor, permaneciendo con el color y olor característico de la muestra
inicial.
Posteriormente, como se reporta en el numeral 4.4 con los datos de la tabla 4-19, se
elaboró tanto el tratamiento estadístico como la gráfica correspondiente para calcular el
tiempo de vida útil,
49
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo, dextrosa al 5%
agua 1:1, envasada en frasco transparente y almacenada a 5±2°C.
Tabla 4-20 Datos de estabilidad frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1
Muestras
Lote 1
pH mg/caps
Lote 2
pH mg/caps Tiempo Horas
% %
Remanente Remanente
0 M1 100,662
6.42 20,132 103,450
6.39 20,690
M2 100,950 20,190 102,965 20,593
12 M1 99,396
6.40 19,879 99,790
6.39 19,958
M2 98,402 19,680 101,824 20,364
24 M1 98,097
6.42 19,619 99,753
6.40 19,950
M2 99,975 99,975 100,800 20,161
36 M1 100,290
6.37 20,058 101,055
6.43 20,211
M2 99,545 19,090 996,313 19,926
48 M1 99,422
6.34 19,884 98,307
6.36 19,661
M2 100,013 20,002 98,307 19,661
72 M1 100,529
6.36 20,105 100.04
6.36 20,009
M2 99,608 19,912 99,892 19,978
120 M1 99,862
6.40 19,972 99,625
6.38 19,926
M2 99,721 19,994 99,634 19,419
168 M1 96,451
6.32 19,290 97,097
6.37 19,419
M2 97,896 19,579 97,149 19,429
240 M1 90,881
6.38 18,197 90,057
6.36 18,011
M2 91,116 18,223 89,556 17,911
360 M1 89,395
6.30 17,879 89,049
6.34 17,809
M2 90,379 18,076 90,155 18,031
Se puede observar que las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en
frasco transparente, colocadas a la condición de 5±2°C y utilizando el vehículo dextrosa
al 5% agua 1:1 durante las primeras 168 horas, no presentan variación en la cantidad
remanente del enalapril maleato, éste se enmarcan dentro del porcentaje del 90 al
110% exigido por la norma, tanto para el lote 1 como para el lote 2. En forma general, se
podría decir que posiblemente la condición que empieza afectar la estabilidad de la
muestra es la luz, si se compara con la tabla anterior donde la condición es la ausencia
50
de luz a través del envase ámbar. Solo se podría indicar que su estabilidad se mantiene
solo por 168 horas desde el punto vista químico.
Igualmente, al analizar el efecto del pH, se observa que su variación estadísticamente no
es significativa, por lo tanto es químicamente es estable frente a esta condición durante
el tiempo de estudio. No se observó cambios del color, a pesar de estar envasada en
frasco transparente lo que indicaría que la luz no está afectando la estabilidad de la
preparación de la suspensión de enalapril maleato durante el tiempo de estudio desde el
punto de vista físico pero no químico, ya que a partir de las 240 para un lote y 360 horas
para el otro lote, la cantidad remanente está por debajo del 90%. Igualmente no se
observó cambios de olor, ya que se conservó el olor característico de la muestra inicial.
51
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo, dextrosa al 5%
agua 1:1, envasada en frasco ámbar y almacenada a 25±2°C
Tabla 4-21 Datos de estabilidad frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1
Muestras
Lote 1
pH mg/caps
Lote 2
pH mg/caps
Tiempo Horas
% %
Remanente Remanente
0
M1 100,662
6.42
20,132 103,450
6.39
20,690
M2 100,950 20,190 102,965 20,593
12
M1 99,687
6.40
19,937 99,518
6.40
19,903
M2 100,982 20,193 98,819 19,764
24
M1 100,096
6.38
20,019 99,593
6.39
19,918
M2 990,994 19,819 99,083 19,816
36
M1 99,485
6.41
19,897 101,154
6.40
20,230
M2 99,531 19,906 102,059 20,411
48
M1 99,954
6.39
19,990 101,630
6.38
20,322
M2 99,365 19,873 98,730 19,746
72
M1 100,686
6.34
20,137 100,714
6.34
20,142
M2 100,686 20,137 100,115 20,022
120
M1 97,765
6.37
19,553 99,114
6.34
19,674
M2 97,865 19,573 98,372 19,012
168
M1 96,019
6.40
19,203 95,062
6.37
19,012
M2 96,032 19,206 96,654 19,330
240
M1 90,197
6.32
18,039 88,366
6.35
17,673
M2 90,774 18,154 88,940 17,788
360
M1 89,177
6.30
17,835 89,477
6.27
17,895
M2 89,285 17,857 88,215 17,643 Las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en frasco ámbar,
colocadas a la condición de 25±2°C y utilizando el vehículo dextrosa al 5% agua 1:1
en las primeras 168 horas, no presentan variación en la concentración del enalapril
maleato, sus valores se enmarcan dentro del porcentaje del 90 al 110% exigido por la
norma, tanto para el lote 1 como para el lote 2. Pero a partir de las 240 horas se
presenta una disminución del porcentaje llegando hasta valores de 89.335% indicando
que se empieza a mostrar una posible influencia de la temperatura de 25 °C. En forma
52
general, se podría decir que para esta condición de exposición de la muestra y el
vehículo utilizado, es estable hasta las 168 horas desde el punto vista, de la cantidad
remanente de la preparación.
Igualmente, al analizar el efecto del pH, se observa que su variación estadísticamente
no es significativa, lo que indica que químicamente es estable frente a esta condición.
No se observó cambios del color, de la suspensión ni de olor permaneciendo con el
color y olor característico de la muestra inicial.
53
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo dextrosa al 5%
agua 1:1, envasada en frasco trasparente y almacenada a 25±2°C.
Tabla 4-22 Datos de estabilidad frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1
Tiempo Horas
Muestras
Lote 1
pH mg/caps
Lote 2
pH mg/caps % %
Remanente Remanente
0 M1 100,662
6.42 20,132 103,450
6.39 20,690
M2 100,950 20,190 102,965 20,593
12 M1 100,100
6.41 20,019 98,669
6.39 19,733
M2 100,546 20,109 98,861 19,772
24 M1 97,780
6.41 19,556 100,924
6.41 20,184
M2 99,028 19,085 100,691 20,138
36 M1 100,317
6.42 20,063 100,365
6.37 20,073
M2 99,219 19,843 101,250 20,250
48 M1 99,458
6.40 19,891 99,176
6.40 19,835
M2 98,198 19,639 99,176 19,835
72 M1 100,430
6.37 20,086 100,183
6.41 20,036
M2 100,430 20,086 100,020 20,004
120 M1 98,346
6.35 19,669 98,356
6.36 19,671
M2 97,429 19,485 98,820 19,764
168 M1 94,764
6.38 18,925 95,143
6.39 19,028
M2 94,408 18,881 95,120 19,024
240 M1 90,008
6.34 18,001 89,092
6.38 17,818
M2 90,729 18,156 89,146 17,829
360 M1 89,686
6.28 17,937 90,008
6.25 18,001
M2 90,246 18,049 90,078 18,015
Se observa que las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en frasco
ámbar, colocadas a la condición de 25±2°C y utilizando el vehículo dextrosa al 5%
agua 1:1 en las primeras 240 horas no presentó variación de la concentración del
enalapril maleato, sus valores se encuentran dentro del porcentaje del 90 al 110 %
exigido por la norma, para el lote 1 pero para el lote 2 solo se conserva el porcentaje
dentro de los límites permitidos las primera 168 horas y a partir de las 240 horas el
54
porcentaje se sale de lo estimado, que es del 90% alcanzando un porcentaje de
88.3215%, quiere decir que se empieza a mostrar una posible influencia de la condición
de exposición. En forma general, se podría decir que la preparación extemporánea
sometida a la condición de 25±2°C, con presencia de luz y utilizando el vehículo dextrosa
al 5% agua 1:1, es estable hasta las 168 horas desde el punto vista de la cantidad
remanente que queda y que se podría recomendar para su uso durante este tiempo.
Igualmente, al analizar el efecto del pH, se puede observar que su variación es máximo
de 0.17 unidades que estadísticamente no es significativa, indicando que químicamente
es estable frente a esta condición. Además no se observó cambios del color, de la
suspensión ni de olor, permaneciendo con el color y olor característico de la muestra
inicial.
55
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo, dextrosa al 5%
agua 1:1, pH 3.0 envasada en frasco ámbar y almacenada a 5±2°C
Tabla 4-23 Datos de estabilidad frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
Tiempo Horas
Muestras
LOTE 1
pH mg/caps
LOTE 2
pH mg/caps % %
Remanente Remanente
0 M1 101,740
3.05 20,347 101,111
3.02 20,222
M2 101,510 20,302 102,796 20,559
12 M1 98,737
3.05 19,747 100,961
3.04 20,192
M2 98,982 19,796 100,120 20,025
24 M1 92,947
3.02 18,599 98,567
3.01 19,713
M2 93,304 18,660 97,586 19,517
36 M1 88,562
3.05 17,712 94,594
3.03 18,918
M2 86,986 17,397 94,594 18,918
Las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en frasco ámbar, colocadas a la
condición de 5±2°C y utilizando el vehículo dextrosa al 5% agua 1:1 ajustada a pH 3.0 con
ácido ascórbico en las primeras 24 horas, no presentan variación en la concentración del
enalapril maleato; sus valores se enmarcan dentro del porcentaje del 90 al 110% exigido por la
norma, tanto para el lote 1 como para el lote 2. Pero a partir de las 36 horas se presenta una
disminución del porcentaje llegando hasta valores de 86.986% en el lote 1, indicando que se
empieza a mostrar una posible influencia de la condición del vehículo de la preparación, pero no
ocurre lo mismo con el lote 2, que cumple con la concentración del activo para una respuesta
terapéutica. En forma general, se podría decir que para esta condición de exposición de la
muestra y el vehículo utilizado, es estable hasta las 24 horas desde el punto vista de la
cantidad remanente.
Igualmente, al analizar el efecto del pH, se observa que su variación estadísticamente no es
significativa y químicamente es estable frente a esta condición porque su pH no varió del valor
ajustado. Pero al comparar el comportamiento del vehículo sin ajustar el pH cuyo valor promedio
es de 6.37, con el vehículo con ajuste de pH de 3.0, el pH si afecta la estabilidad de la
preparación extemporánea, la cantidad remanente a partir de la 24 horas se sale del valor
establecido del 90%, dicho comportamiento no ocurre en el vehículo sin ajuste de pH, la
cantidad remante permanece por un tiempo más prolongado.
56
No se observó cambios de color, ni olor de la suspensión, permaneciendo con el color y olor
característico de la muestra inicial.
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo, dextrosa al 5% agua 1:1,
pH 3.0 envasada en frasco transparente y almacenada a 5±2°C
Tabla 4-24 Datos de estabilidad frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
Tiempo Horas
Muestras
Lote 1
pH mg/caps
Lote 2
pH mg/caps % %
Remanente Remanente
0 M1 101,740
3.05 20,347 101,111
3.02 20,222
M2 101,510 20,302 102,796 20,559
12 M1 97,928
3.03 19,585 99,616
3.02 19,923
M2 98,144 19,628 99,427 19,885
24 M1 92,247
3.04. 18,449 96,542
3.00 19,308
M2 91,993 18,398 97,344 19,468
36 M1 91,064
3.04 18,212 94,599
3.02 18,919
M2 89,167 17,833 93,231 18,175
Las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en frasco transparente,
colocadas a la condición de 5±2°C y utilizando el vehículo dextrosa al 5% agua 1:1
ajustada a pH 3.0 con ácido ascórbico en las primeras 36 horas no presentan variación
en la concentración del enalapril maleato, sus valores se enmarcan dentro del porcentaje
del 90 al 110% exigido por la norma, para el lote 2, pero no para el lote 1, donde se
disminuye la cantidad remanente. Posiblemente el vehículo ajustado a pH 3.0 influye en
la estabilidad de la preparación extemporánea En forma general, esta condición de
exposición de la muestra y el vehículo utilizado, es estable hasta las 24 horas desde el
punto vista de la cantidad remanente que queda para la respuesta terapéutica
Al analizar el efecto del pH, se puede observar que su variación estadísticamente no es
significativa y químicamente es estable frente a esta condición porque su pH no varió del
valor ajustado, pero indicando que afecta la estabilidad de la muestra. No se observó
cambios de color, de la suspensión ni de olor permaneciendo con el color y olor
característico de la muestra inicial.
57
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo, dextrosa al 5%
agua 1:1, pH 3.0 envasada en frasco ámbar y almacenada a 25±2°C.
Tabla 4-25 Datos de estabilidad frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
Tiempo Horas
Muestras
Lote 1
pH mg/caps
Lote 2
pH mg/caps % %
Remanente Remanente
0 M1 101,740
3.05 20,347 101,111
3.02 20,222
M2 101,510 20,302 102,796 20,559
12 M1 97,949
3.05 19,589 98,345
3.02 19,669
M2 99,484 19,896 99,329 19,865
24 M1 91,629
3.01 18,325 97,216
3.02 19,443
M2 91,125 18,225 95,133 19,027
36 M1 92,548
3.02 18,509 94,935
3.01 18,987
M2 89,647 17,929 94,935 18,987
Se observa que las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en frasco ámbar,
colocadas a la condición de 25±2°C y utilizando el vehículo dextrosa al 5% agua 1:1 ajustada
a pH 3.0 con ácido ascórbico en las primeras 320 horas no presentan variación en la
concentración del enalapril maleato, sus valores se enmarcan dentro del porcentaje del 90 al
110% exigido por la norma, tanto para el lote 1 como para el lote 2. Se sigue mostrando la
influencia en la estabilidad de la preparación extemporánea cuando el vehículo se ajusta a un pH
de 3.0. Se podría decir que para esta condición de exposición de la muestra y el vehículo
utilizado, es estable hasta las 24 horas desde el punto vista cantidad remanente que queda para
la respuesta terapéutica
58
Datos de estabilidad de la preparación extemporánea en el vehículo, dextrosa al 5% agua 1:1,
pH 3.0 envasada en frasco transparente y almacenada a 25±2°C
Tabla 4-26 Datos de estabilidad frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0
Tiempo Horas
Muestras
Lote 1
pH mg/caps
Lote 2
pH mg/caps % %
Remanente Remanente
0 M1 101,740
3.05 20,347 101,111
3.02 20,222
M2 101,510 20,302 102,796 20,559
12 M1 98,380
3.04 19,676 98,276
3.02 19,655
M2 98,695 19,739 100,647 20,129
24 M1 97,073
3.05 19,414 96,400
2.99 19,280
M2 96,205 19,241 95,097 19,019
36 M1 92,730
3.04 18,546 96,229
3.02 19,246
M2 91,714 18,343 94,318 18,863
Las muestras de la suspensión de enalapril maleato, envasada en frasco transparente,
colocadas a la condición de 25±2°C y utilizando el vehículo dextrosa al 5% agua 1:1
ajustada a pH 3.0 con ácido ascórbico en las primeras 36 horas, no presentan variación
en la concentración del enalapril maleato, sus valores se enmarcan dentro del porcentaje
del 90 al 110% exigido por la norma, tanto para el lote 1 como para el lote 2.
Al analizar de forma integral el efecto del pH sobre la estabilidad, se puede afirmar que
la suspensión con el vehículo de pH cercano a 6.0 permanece estable durante más
tiempo, que el vehículo con ajuste de pH de 3.0, confirmado los reportes de la literatura,
que entre menos ácida sea la preparación se incrementa su estabilidad, específicamente
en pH de 4.6 a 4.8
No se observó cambios del color, de la suspensión ni de olor permaneciendo con el color
y olor característico de la muestra inicial.
59
4.4 Determinación del tiempo de vida útil de la preparación extemporánea en el
vehículo dextrosa –agua 1:1
Con los datos de la tabla 4-19 se realiza el análisis de regresión lineal para los lotes, uno
y dos, en el vehículo dextrosa al 5% agua 1:1, en frasco ámbar y temperatura de 5±2°C
(Ver tabla 4-27). De igual manera se realiza la gráfica correspondiente
Figura 4.8 Grafica determinación de la vida útil en frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5%
agua 1:1 de la preparación extemporánea
Para cada uno de los lotes se realizó el tratamiento estadístico y las gráficas
correspondientes. En la figura 4.8 se puede deducir que la pendiente es negativa, lo que
indica la degradación del activo en función del tiempo bajo la condición de estudio, pero
tomado como límite de confianza el 90% de la concentración remanente se logra que
en un tiempo cercano, pero inferior a 250 horas, la preparación extemporánea cumpla lo
establecido por la norma de la cantidad de activo con posibilidades de respuesta
terapéutica.
Al analizar los datos de la combinación de los lotes 1 y 2 se puede observar que, no se
detectan diferencias estadísticamente significativas entre lotes (tabla 4-27). Lo que nos
estaría indicando que se pueden combinar para poder estimar la degradación de la
preparación extemporánea en la condición de estudio establecido para la muestra
60
Tabla 4-27 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco ámbar 5±2°C
dextrosa al 5% agua 1:1 datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,925457539
Coeficiente de determinación R^2 0,856471656
R^2 ajustado 0,848497859
Error típico 1,568404164
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadradosPromedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 264,218851 264,218851 107,410769 5,13788E-09
Residuos 18 44,27804921 2,459891623
Total 19 308,4969002
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,1636665 0,489822467 206,5312912 7,8418E-32 100,1345877 102,1927454 100,134588 102,192745
Variable X 1 -0,032814505 0,003166226 -10,36391668 5,1379E-09 -0,0394665 -0,026162511 -0,0394665 -0,02616251
Lote2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,967609426
Coeficiente de determinación R^2 0,936268001
R^2 ajustado 0,932727334
Error típico 1,165331052
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Gdos de lib S de cuadrados Promde los cuad F Valor crítico de F
Regresión 1 359,0986567 359,0986567 264,43269 3,3138E-12
Residuos 18 24,44393628 1,35799646
Total 19 383,542593
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 102,3410651 0,363940203 281,2029674 3,0376E-34 101,5764551 103,1056751 101,576455 103,105675
Variable X 1 -0,038255233 0,00235252 -16,26138647 3,3138E-12 -0,043197693 -0,033312772 -0,04319769 -0,03331277
Resumen
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,943912046
Coeficiente de determinación R^2 0,89096995
R^2 ajustado 0,888100738
Error típico 1,41265313
Observaciones 40
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadradosPromedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 619,6857567 619,6857567 310,527768 7,0197E-20
Residuos 38 75,83237692 1,995588866
Total 39 695,5181336
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,7523658 0,311961682 326,1694362 4,0866E-67 101,1208324 102,3838993 101,120832 102,383899
Variable X 1 -0,035534869 0,002016529 -17,62179809 7,0197E-20 -0,039617119 -0,031452619 -0,03961712 -0,03145262
L1 44,27804921
L2 24,44393628
L1+L2 75,83237692
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 36 1,862388649 3,232 se acepta Ho Ho: L1=L2
Suma de cuadrados de resíduos (SCR)
61
Continuación tabla 4-27 Resumen
Comparación entre Lotes SCR
Lote 1 44,2780492
Lote 2 24,4439363
Lote 1 + 2 75,8323769
Comparación gln gld F Calculado F tabla con
Alfa=0.05
Modelos 2 36 1,862 3,232
Pendientes 1 36 3,735 4,085
interceptos 1 37 3,828 4,085
Como se puede observar en la tabla 4-27 los valores de los F calculados son menores
que los F de tabla, donde se acepta la hipótesis, mostrando que no existen diferencias
estadísticamente significativas.
Utilizando el mismo vehículo, tipo de frasco y condición de temperatura pero ajustando el
pH a 3.0, se realiza el análisis correspondiente con el fin de comparar este cambio sobre
la estabilidad de la preparación extemporánea (Figura 4-9 y tabla 4-28). En el análisis de
la tabla 4-28, encontramos que la hipótesis se rechaza al encontrar que los valores del F
calculado son mayores al F de la tabla, para lo cual es necesario realizar las gráficas por
separado para cada uno de los lotes.
62
Figura 4.9 Grafica determinación de la vida útil en frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5%
agua 1:1 pH 3.0, de la preparación extemporánea. Gráfica correspondiente al lote 1
Figura 4.10 Grafica determinación de la vida útil en frasco ámbar 5±2°C dextrosa al 5%
agua 1:1 pH 3.0, de la preparación extemporánea. Gráfica correspondiente al lote 2
Al realizar el análisis de varianza se obtienen la suma de cuadrados de los residuos y se
calcula el F con los correspondientes grados de libertad, de esta manera se encuentra
que el F calculado es mayor al F tabulado, por la cual se rechaza la hipótesis, en donde
el lote 1 y el lote 2 son equivalentes, razón por la cual se se construyeron las gráficas
63
para cada lote y se determinaron los límites de confianza superior e inferior y escoger el
peor caso para determinas el tiempo de vida útil
En las figuras 4.9 y 4-10, tomado como límite de confianza el 90% de la concentración
remanente y la gráfica correspondiente del límite inferior, se puede observar que hasta
aproximadamente las 24 horas la preparación extemporánea muestra el porcentaje
remante que permitía su uso. Si comparamos con la condición anterior se puede concluir
que el factor que está afectando de manera considerable la degradación del activo dentro
de la preparación extemporánea es el ajuste del pH cercano a 3.0 siendo concordante
con los reportes de la literatura que indica que el pH de estabilidad de una solución de
Maleato de enalapril se encuentra entre 4.6 y 4.8. Esta información es de gran
importancia, porque nos permite recomendar a los centros hospitalarios que realizan la
preparación extemporánea colocando el total de la ampolleta de ácido ascórbico, que el
valor alcanzado del pH se sale del pH de estabilidad y que la degradación del maleato de
enalpril se acelera a pH por debajo de 4.5
Al comparar el comportamiento de la preparación extemporánea para el mismo
vehículo, el mismo ajuste de pH 3.0 pero variando la temperatura a 25°C se presenta el
mismo comportamiento de degradación, como se puede observar en el anexo 11,
confirmando que el vehículo ajustado a pH 3.0 con ácido ascórbico es el más afectando
en su estabilidad, reduciendo de manera significativa el tiempo de uso.
64
Tabla 4-28 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco ámbar 5±2°C
dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3.0, datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,987215994
Coeficiente de determinación R^2 0,974595419
R^2 ajustado 0,970361323
Error típico 0,985621048
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 223,6060369 223,6060369 230,17788 5,1733E-06
Residuos 6 5,8286931 0,97144885
Total 7 229,43473
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 102,43905 0,583101276 175,6796877 2,2948E-12 101,0122526 103,8658474 101,0122526 103,8658474
Variable X 1 -0,394058333 0,025973395 -15,17161429 5,1733E-06 -0,457612942 -0,330503725 -0,457612942 -0,330503725
Lote2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,965392206
Coeficiente de determinación R^2 0,931982112
R^2 ajustado 0,920645798
Error típico 0,855955047
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 60,23343063 60,23343063 82,2120894 0,000100953
Residuos 6 4,39595425 0,732659042
Total 7 64,62938488
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 102,4725 0,506389835 202,3589199 9,8266E-13 101,2334087 103,7115913 101,2334087 103,7115913
Variable X 1 -0,204520833 0,022556396 -9,067088253 0,00010095 -0,259714346 -0,149327321 -0,259714346 -0,149327321
Resumen
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,869095047
Coeficiente de determinación R^2 0,7553262
R^2 ajustado 0,7378495
Error típico 2,44315087
Observaciones 16
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 257,9738535 257,9738535 43,2190402 1,2409E-05
Residuos 14 83,56580642 5,968986173
Total 15 341,5396599
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 102,455775 1,022043336 100,2460184 2,1141E-21 100,2637101 104,6478399 100,2637101 104,6478399
Variable X 1 -0,299289583 0,045525429 -6,574118969 1,2409E-05 -0,396931916 -0,20164725 -0,396931916 -0,20164725
L1 5,8286931
L2 4,39595425
L1+L2 83,56580642
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 12 43,0378613 19,412 se rechaza Ho Ho: L1=L2
65
De igual manera se procedió para el tratamiento estadístico y análisis respectivo, para las
diferentes condiciones de estudio, encontrándose el mismo comportamiento que el
anteriormente analizado. (Anexos 7 a 12)
Anexo 7: Figura 4-11 Gráfica y vida útil frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua
tabla 4-31
Anexo 8: Figura 4-12 Gráfica y vida útil frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua tabla
4-32
Anexo 9: Figura 4-13 Gráfica y vida útil frasco transparente 25±°C dextrosa al 5% agua
1:1 tabla 4-33
Anexo 10: Figura 4-14 Grafica y vida útil frasco transparente 5°C dextrosa al 5% agua
1:1 pH 3.0 tabla 4-34
Anexo 11: Figura 4-15 Gráfica y vida útil frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1
pH 3.0 tabla 4-35
Anexo 12: Figura 4-16 Gráfica y vida útil frasco transparente25±2°C dextrosa al 5%
agua 1:1 pH 3.0 tabla 4-36
66
4.5. Análisis general de los resultados:
Se demostró que la validación de la técnica analítica para la cuantificación de principio
activo enalapril maleato; tanto del sistema como del método son lineales; además la
metodología es: exacta, precisa y selectiva; por ende se procedió a implementarla en la
cuantificación del analito de interés, en las preparaciones extemporáneas expuestas a las
condiciones de estabilidad propuesta en la metodología.
Durante el tiempo de estudio de estabilidad física y química, no hubo cambios
significativos en el pH en la preparación extemporánea. El valor aproximado del
porcentaje de degradación no fue mayor del 10% en un tiempo de 360 horas. Igualmente
no se pudo asignar con exactitud un orden cinético y una constante de velocidad de
degradación por lo que se asumió cinética de orden uno, se asegura que para el tiempo
de uso asignado, teniendo en cuenta la aceptación habitual del límites de 90 – 110% de
la cantidad nominal de ingrediente activo, el paciente recibirá la dosis del fármaco pero,
siguiendo los procedimientos establecidos y condiciones de almacenamiento
recomendada
El efecto de un auxiliar de formulación como es, el ácido ascórbico utilizado para el
ajuste del pH, es el factor que más incide sobre el porcentaje de la cantidad remanente,
lo que indica su incidencia sobre la estabilidad. Los factores como, la temperatura y la
luz, no presentan variación en un valor mayor al 1 %, Por lo tanto podemos concluir que
el efecto de la temperatura +1 0 -1 aporta igual variabilidad en los resultados del
porcentaje remanente, de igual manera para el efecto de la luz +1 o -1 son
equivalentemente iguales ( Ver tabla 4-32).
Se determina que la preparación en el vehículo de dextrosa al 5% agua 1:1, es la que
presenta un mejor comportamiento fisicoquímico, con una estabilidad de 360 horas, no
sucediendo igual con la preparación cuando se utiliza dextrosa al 5% agua 1:1 y
ajustada con ácido ascórbico a pH 3.0, a las 24 horas ya presenta un grado de
degradación que afecta la concentración del activo dentro de la preparación y por ende la
estabilidad de la preparación extemporánea
Se realizó el análisis estadístico basado en el diseño factorial 2k, (Diseño 23), Se
muestran los niveles de los factores, con los cuales se realizó el análisis factorial, para
determinar cuál factor presenta mayor influencia en la estabilidad de la muestra de
enalapril maleato.
67
Tabla 4-29 Niveles de los factores estabilidad enalapril maleato
Factor Nivel
Bajo (-1) Alto (+1)
Temperatura -5 ºC 25 ºC
Vehículo Ajuste de pH Sin ajuste de pH
Luz Sin proteger Protegido
Tabla 4-30 Análisis de Varianza para %Remanente
Fuente
Suma de
Cuadrados
Gl Cuadrado
Medio
Razón-F Valor-P
A:Diluyente 47,6566 1 47,6566 108,30 0,0000
B:Temperatura 0,00205889 1 0,00205889 0,00 0,9474
C:Luz 0,00142695 1 0,00142695 0,00 0,9562
AB 0,376413 1 0,376413 0,86 0,3858
AC 0,331056 1 0,331056 0,75 0,4145
BC 0,62667 1 0,62667 1,42 0,2716
ABC 0,10626 1 0,10626 0,24 0,6382
bloques 12,2467 1 12,2467 27,83 0,0012
Error total 3,08034 7 0,440048
Total (corr.) 64,4275 15
R-cuadrada = 95,2189%
Error estándar del test. = 0,6634
Error absoluto medio = 0,3834
Estadístico Durbin-Watson = 1,89 (P=0,6101)
Mediante el análisis de varianza se observó de los tres factores en estudio solo el
vehículo de preparación presento influencia significativa en la estabilidad de la solución
de enalapril maleato. De igual forma el modelo, así ajustado, explica 95,21% de la
variabilidad en %Remanente de enalapril maleato, nos confirma que el modelo es el
ajustado para el estudio.
El error estándar del estimado muestra que la desviación estándar de los residuos es
0,66, esto indica que la dispersión de los datos al tener un valor tan bajo, el error es
68
mínimo, con respecto al modelo lo que refuerza la idea que es el mejor modelo para
estimar los datos.
El error medio absoluto (MAE) de 0,38 es la diferencia entre el valor de la medida y el
valor tomado como exacto, este valor pequeño nos da una idea, que los datos están muy
próximos al valor central no hay dispersión entre los datos. Además este es el valor
promedio de los residuos y no se evidencia auto correlación entre los factores verificada
con el estadístico de Durbin-Watson (DW) = 1,89. Observando que existe diferencia
significativa entre los lotes de enalapril maleato. Confirmando que las variables entre si
son independientes, ninguna depende de la otra por lo tanto no puede haber correlación
entre ellas.
Se evidenció una diferencia marcada entre los niveles del factor Vehículo referido al
cambio del pH, más la poca diferencia entre los niveles para los factores temperatura y
luz comparada frente al factor vehículo.
Figura 4-10 Efectos de los parámetros en la estabilidad de la solución de enalapril
maleato
-1,0Temperatura
1,0 1,0
Gráfica de Efectos Principales para %Remanente
97
98
99
100
101
%Re
man
ente
Diluyente1,0 -1,0
Luz-1,0
.
En las figuras 4-8,4-9 y 4-10 se aprecia los efectos principlales de los factores sobre la
variable % Remanente. Se observa que el vehiculo con ajuste del pH a 3.0 es el factor
69
que mas inside en el % Remanente, tanto la luz como la temperatura aparentemente
tienen los mismo efectos.
Tabal 4-31 Condiciones para optimizar respuesta la estabilidad de la solución enalapril
maleato.
Factor Nivel
Bajo Alto Óptimo
Temperatura -1 1 -1
Vehículo -1 1 1
Luz -1 1 1
En la tabla 4-23 se muestran las condiciones óptimas para maximizar el % Remanente
de Enalapril Maleato. Se debe tener en cuenta las siguientes condiciones: emplear el
diluyente 1 (Dextrosa al 5% en agua sin ajusta pH; solución protegida de la luz y
mantener la solución a una temperatura de 5°C)
4.6 Protocolo para la elaboración de la preparación
extemporánea de enalapril maleato
4.6.1 Propósito
Establecer el procedimiento para realizar la preparación extemporánea líquida de
enalapril maleato via peroral utilizada en pacientes con hipertensión en centros
hospitalarios a la concentracion de 10 mg/5 ml o 20 mg/10 ml a partir de la presentación
comercial de tabletas de 20 mg de acuerdo a los resultados de los estudios de
estabilidad realizados.
4.6.2 Consideraciones importantes
La adecuación de la forma farmacéutica debe realizarse en un área limpia, ya que
requiere la maniopulación directa del producto, los estudios de estabilidad que dieron
origen a este protocolo fueron realizados con los materiales e insumos aquí presentados,
se recomienda hacer uso de lo descrito. La estabilidad del principio activo permite el
70
almacenamiento a temperatuta ambiente, pero se recomienda almacenar la preparacion
bajo refrigeración y en frasco ámbar, a fin de evitar degradacion del preparado
extemporáneo. El uso está programado para un periodo no mayor de 360 horas.
4.6.3 Materiales
1. Mortero de porcelana
2. Jeringa desechable
3. Frasco ámbar de 60 ml con tapa rosca
4. Guantes de látex
5. Tapaboca
6. Matraz aforado de 50 ml
7. Pesa sustancia
8. Etiqueta de identificación del medicamento (dosis, concentración, recomendaciones,
etc).
4.6.4 Materia prima
1. Tableta de enalapril maleato de 20 mg
2. Vehículo dextrosa al 5% (bolsa por 500 ml), agua.
4.6.5 Procedimiento
4.6.5.1 Alistamiento de los materiales posterior a la recepción de la solicitud por
parte del médico prescriptor.
Recepción de la orden médica
Adecuación (alistamiento y verificación de la limpieza) de los materiales a utilizar
Alistamiento del personal encargado para la realización de esta labor.
4.6.5.2 Preparación de la suspensión
71
Con base a los resultados obtenidos se estableció el siguiente protocolo para elaborar la
suspensión de enalapril maleato de concentración de 10 mg/5 ml o 20 mg/10 ml
1. Extraer 10 tabletas de enalapril maleato (etiquetadas en el blíster con dosis de 20 mg
de enalapril maleato), teniendo cuidado de no quebralas.
2. Pesar las tabletas individualmente utilizando guantes de látex y anotar el peso
promedio.
3. Llevar las tabletas a un mortero de porcelana y triturar hasta obtener un polvo fino con
la ayuda de un pistilo, teniendo cuidado de no botar el polvo.
4. Pesar aproximadamente el equivalente a 100 mg de enalapril maleato (0.7 gramos
aproximadamente), utilizando un papel o un pesa sustancia adecuado.
5. Transferir el polvo a un balón aforado de 50 ml, lavar el pesa sustancia o papel con
10 ml de vehículo (dextrosa al 5%, agua 1:1), adicionar 20 ml más de mezcla de vehículo
selecionado.
6. Agitar vigiorosamente hasta obtener una suspensión homogénea y completar volumen
con el vehículo hasta el aforo.
7. Transferir la suspensión a un frasco plástico ámbar o trasparente de 60 ml con tapa
rosca plástica.
8. Almacenar en un lugar limpio y seguro a una temperatura de 5±2°C o en un lugar
fresco a temperatura ambiente (no mayor de 30°C) por un período máximo de 360 horas.
4.6.6 Acondicionamiento del producto
Garantizar que todas las preparaciones estén previamente etiquetadas antes de
abandonar la zona de adecuación del área de preparación.
Retirar las agujas de las jeringas con capuchón y depositarlas en el sitio
demarcado para su almacenamiento.
Colocar las jeringas en la caneca de residuos de jeringas.
4.6.7 Recomendaciones
72
Verificar antes y después del proceso, que no queden residuos del medicamento y
depositar en las canecas respectivas todos los elementos empleados en la
preparación de la suspensión extemporánea.
Se debe homogenizar la suspensión antes de la administración de la dosis. Se le
debe indicar al paciente o acudiente, la manera correcta de agitar la preparación
extemporánea que le está siendo entregada, sobre todo si se va a mantener en
condiciones de refrigeración (tiempo de agitación vigorosa aproximado de veinte
segundos).
Seguir con rigurosidad el protocolo de elaboración de la preparación
extemporánea.
Garantizar que el paciente o acudiente, entienda todas las instrucciones contenidas
en la etiqueta.
No se debe ajustar el pH en valores cercanos a 3.0 de la preparación
extemporánea
73
5. Conclusiones y recomendaciones
5.1 Conclusiones
La metodología empleada para el estudio de estabilidad de la preparación extemporánea
en forma de suspensión de enalapril maleato de concentración 0.2 mg/ml, es selectiva,
lineal, precisa y exacta lo que brinda confianza en los resultados obtenidos.
La preparación extemporánea de enalapril elaborada con el vehículo No 1 conformada
por dextrosa al 5%, agua en mezcla 1:1 es químicamente más estable durante un tiempo
de 360 horas a partir de su preparación, con respecto al vehículo No 2,, teniendo en
cuenta la aceptación habitual del límites de 90 – 110% de la cantidad nominal del
ingrediente activo.
La preparación elaborada con el vehículo No 2, dextrosa al 5% agua 1:1 y ajustada a pH
3.0 es más susceptible a la degradación en las dos condiciones de temperatura
estudiada 5 y 25 ± 2°C, lo que indica que no es recomendada para su uso dicha
preparación extemporánea.
La preparación extemporáneas en forma de suspensión de enalapril maleato elaborada,
siguiendo el protocolo a partir de tabletas de 20 mg del mercado nacional, utilizando el
vehículo No 1 correspondiente a la mezcla de dextrosa al 5% agua 1:1, envasada en
frasco plástico ámbar con tapa rosca plástica y almacenada a una temperatura de 5 ±
2°C, conserva su potencia durante 360 horas y es recomendada para su uso seguro.
Durante el período de estudio no se evidencio cambios significativos del pH, olor y color
que afectaran la estabilidad de la suspensión en ningunas de las condiciones evaluadas,
lo que indica que la preparación extemporánea presenta estabilidad física.
5.2 Recomendaciones
Efectuar estudios de estabilidad, utilizando otros medios de dispersión de uso
hospitalario como la solución de cloruro de sodio, agua para inyección y jarabe.
Realizar estudios de estabilidad de preparaciones extemporáneas de otras marcas
comerciales en Colombia de enalapril maleato.
74
Bibliografía
1. Woods D.J. Extemporaneous Formulations - Problems and Solutions.
Paediatric and Perinatal Drug Therapy 1997; 1: 25-29
2. Hidalgo FJ, E. Delgado M, García P, De Juana T, Bermejo. Guía de administración de
fármacos por sonda nasogástrica. Servicio de farmacia. Hospital Severo Ochoa,
Leganés (Madrid). Farm Hosp 1995; 19 (5): 251-258
3. Bautista S E, Olaya M.Del P, Muñoz I J, Ponce L F. Estabilidad física y química de
preparaciones liquidas extemporáneas elaboradas a partir de tabletas de captopril. Rev.
Col. Cienc. Quim. Far. Vol 32 N° 1
4. Conde T M, Álvarez I C, Apan & L Martínez M G, Obtención de enalapril
dicetopiperacino como sustancia de referencia. Latin American Journal Pharmacy (2007)
5. Rodríguez R, De Castro O, Álvarez A, Guevara E. Inhibidores enzimáticos de la
angiotensina (2 Parte). Facultad Ciencias Médicas. Gaceta Médica Espirituana 2007;9 (2)
6. Borrás, C, Pérez C, & Jiménez, N.V. (1999) Unidades de Terapia Intravenosa. En:
Mezclas Intravenosas y Nutrición Parenteral. Cuarta Edición. Valencia.
7. Bonal, J, & Domínguez, A. (1992). Farmacia Hospitalaria. Segunda Edición. España:
Editorial Medica Internacional
8. Connors K A, Amidon G L, Stella V. J. Chemical Stability of Pharmaceuticals. New York:
John Wiley, 1986.
9. Hugo W B., Russell A D, (Eds). Pharmaceutical Microbiology, 4th Edition, Blackwell, 1987
10. Denko S, América Inc. Lección 1. Introducion al HPLC- columna shodex TM de HPLC
capture the essence.
11. Quattrocchi O A, De Andrizzi S. A, & Laba R. F. Introducción HPLC aplicaciones y
práctica. Artes gráficas farro S.A. Buenos Aires. (1992) Pág. 3-37
75
12. Zarceo S M, Alonso I S, Morales I Del H. Desarrollo de método analítico para la
preparación quiral y su aplicación al estudio de procesos de síntesis asimétricas.
Universidad Rey Juan Carlos. Madrid (2007).
13. Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria. Validación de método analítico
AEFI (2001)
14. USP (2012). The United States Pharmacopeial Convention. (35). Baltimore: City Press.
15. WHO. (1996). WHO Expert Committee on Specifications for Pharmaceutical
Preparations. (Thirty- fourth report). Geneve: Benteli.
16. Bhardwaj S. P, S. Singh. Study of forced degradation behavior of enalapril maleate by
LC and LC–MS and development of a validated stability-indicating. J. Phar Biomed Anal.
2008 Jan, 46(1)
17. Del Valle L, C. Pascuzzo. Lima. Inhibidores de la Enzima Convertidora de Angiotensina.
Farmacología Básica 2008: Pág 691
18. Mohr L, Hein. Farmacología Texto y Atlas. 6a Edición Editorial Médica Panamericana
Madrid España. Pág. 37
19. A. De la Peña A., Farmacocinética. Adolfoneda. Sept 3rd, 2010
20. Colegio de Farmacéuticos de Tucumá. Algunos fármacos para la presión protegerían el
cerebro. Archives of Internal Medicine, (2009).
21. Farmaguia Enalapril Maleato Wikilibros
22. Colegio de Farmacéuticos de Tucumá. Algunos fármacos para la presión protegerían el
cerebro. Archives of Internal Medicine, (2009).
23. Pharma editores. Guía Complete de Consulta Farmacoterapeutica. Martindale Primera
Edición
24. Caderno Questoes. Área de Ciencias Exactas Prova de Conhecimeinto Especifica
Universidad Estadual Paulista Unesp (2007)
25. Al Omari,M M,Adelah M K, A.A Badwan,. Jaber AMY. Effect of the drug-matriz on the
stability of enalapril maleate in Tablet formulations. Journal Pharmaceutical and
biomedical analysis. Elsevier. 25 (2001) 893-902
76
26. De Diego M, G. Godoy G, Mennickent S, GodoyR. Chemical Stability of Enalapril
Maleate Drug Substance and Tablets by a Stability-Indicating Liquid Chromatographic
Method. University of Concepcion Chile. Química Nova Vol. 34 Sao Paulo (2011)
27. British Pharmacopoeia Chemical. Reference substance material safety data sheet. Last
revised 13 th june 2008
28. Assay Method. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Elsevier. Vol 46 Issue
(17) January (2008)
29. B Stanisz B. Kinetics of Degradation of Enalapril maleate in Dosage Forms, Drug
Research. Vol 61 No. 6 pag. 415-418, 2004
77
Anexos
Anexo 1 Cromatograma perteneciente blanco fase móvil
Anexo 2 Cromatograma perteneciente blanco dextrosa agua 1:1 pH 3 (Acido ascórbico)
Anexo 3 Cromatograma perteneciente a blanco dextrosa agua 1:1
Anexo 4 Cromatograma perteneciente al sistema de idoneidad
Bibliografía 80
80
Anexo 5 Cromatograma perteneciente a la pureza degradación básica
Anexo 6 Cromatograma perteneciente a la pureza de la degradación ácida
Bibliografía 81
81
Anexo 7: Figura 4-11 Gráfica y vida útil frasco transparente 5±2°C dextrosa al 5% agua
Tabla 4-32
y = -0,0336x + 101,35R² = 0,9993
80
90
100
110
120
0 50 100 150 200 250 300 350 400
% R
ecu
pe
rad
o
Tiempo (Horas)
Vida útil frasco Trasparente 5°C
Anexo 8: Figura 4-12 Gráfica y vida útil frasco ámbar 25±2°C dextrosa al 5% agua
Figura 4-33
y = -0,0372x + 101,48R² = 0,9992
80
90
100
110
120
0 50 100 150 200 250 300 350 400
% R
ecu
pe
rad
o
Tiempo (Horas)
Vida útil frasco ambar 25°C
Bibliografía 82
82
Tabla 4-32 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco transparente
5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coefi de correla múltiple 0,912891654
Coefi de determ R^2 0,833371173
R^2 ajustado 0,824114016
Error típico 1,612225608
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad S de cuadrados Prom de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 233,9981756 233,9981756 90,02452555 1,99232E-08
Residuos 18 46,78688541 2,599271412
Total 19 280,785061
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 100,9646391 0,503508179 200,5223417 1,33394E-31 99,90680765 102,022471 99,90680765 102,0224705
Variable X 1 -0,030880917 0,003254691 -9,488125502 1,99232E-08 -0,03771877 -0,02404307 -0,03771877 -0,024043065
Lote
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,927515711
Coeficiente de determinación R^20,860285395
R^2 ajustado 0,852523472
Error típico 1,730366988
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 331,8560114 331,8560114 110,8340612 4,02407E-09
Residuos 18 53,89505842 2,994169912
Total 19 385,7510698
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 101,878571 0,540404473 188,5228121 4,04853E-31 100,7432233 103,013919 100,7432233 103,0139187
Variable X 1 -0,036775518 0,00349319 -10,5277757 4,02407E-09 -0,044114438 -0,0294366 -0,044114438 -0,029436599
Lote 2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,917377142
Coeficiente de determinación R^20,841580821
R^2 ajustado 0,837411896
Error típico 1,667916574
Observaciones 40
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 561,5912304 561,5912304 201,8699471 8,7291E-17
Residuos 38 105,7139365 2,781945696
Total 39 667,3051669
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 101,421605 0,3683325 275,3533968 2,54221E-64 100,6759549 102,167255 100,6759549 102,1672552
Variable X 1 -0,033828218 0,002380912 -14,20809442 8,7291E-17 -0,038648122 -0,02900831 -0,038648122 -0,029008314
L1 46,78688541
L2 53,89505842
L1+L2 105,7139365
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 36 0,899623745 3,232 se acepta Ho Ho: L1=L2
Bibliografía 83
83
Tabla 4-33 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco ámbar 25±2°C
dextrosa al 5% agua 1:1 datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,959431061
Coeficiente de determinación R^2 0,920507961
R^2 ajustado 0,916091736
Error típico 1,199337378
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 299,8190014 299,8190014 208,437769 2,43959E-11
Residuos 18 25,89138262 1,438410146
Total 19 325,710384
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 101,1900468 0,374560593 270,1566817 6,2478E-34 100,4031242 101,9769694 100,4031242 101,9769694
Variable X 1 -0,03495534 0,00242117 -14,43737403 2,4396E-11 -0,04004203 -0,02986865 -0,04004203 -0,02986865
Lote 2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,922111378
Coeficiente de determinación R^2 0,850289393
R^2 ajustado 0,841972137
Error típico 1,966482821
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 395,3365867 395,3365867 102,231962 7,5338E-09
Residuos 18 69,60698432 3,867054685
Total 19 464,943571
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 101,9365211 0,61414493 165,981214 4,0017E-30 100,6462505 103,2267917 100,6462505 103,2267917
Variable X 1 -0,040139085 0,00396985 -10,11098224 7,5338E-09 -0,04847943 -0,031798739 -0,04847943 -0,031798739
Resumen
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,935233115
Coeficiente de determinación R^2 0,87466098
R^2 ajustado 0,871362584
Error típico 1,615251721
Observaciones 40
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Suma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 691,8588139 691,8588139 265,177733 1,00085E-18
Residuos 38 99,1434487 2,609038124
Total 39 791,0022626
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Inferior 95.0% Superior 95.0%
Intercepción 101,5632839 0,356702316 284,7284118 7,1275E-65 100,8411779 102,28539 100,8411779 102,28539
Variable X 1 -0,037547212 0,002305734 -16,28427869 1,0008E-18 -0,042214927 -0,032879498 -0,042214927 -0,032879498
L1 25,89138262
L2 69,60698432
L1+L2 99,1434487
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 36 0,687042864 3,232 se acepta Ho Ho: L1=L2
Bibliografía 84
84
Considerando el límite inferior y el 90 % de la cantidad remanente, el tiempo de uso de la
preparación extemporánea sería de 240 horas. Igual comportamiento se presenta cuando
se cambia la temperatura, lo que indicaría que ésta solo comienza a mostrar su influencia
sobre la estabilidad de la preparación después de este tiempo. Como se pude observar
en los anexos 7 y 8
Anexo 9: Figura 4-13 Gráfica y vida útil frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5%
agua. Tabla 4-34
Bibliografía 85
85
Tabla 4-34 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco transparente
25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,94150652
Coeficiente de determinación R^2 0,88643453
R^2 ajustado 0,88012534
Error típico 1,38381403
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertad Su de cuadrados Prome de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 269,0471155 269,0471155 140,498887 6,15071E-10
Residuos 18 34,46894269 1,91494126
Total 19 303,5160582
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 100,712901 0,432173808 233,0379556 8,9293E-33 99,80493723 101,620864 99,8049372 101,620864
Variable X 1 -0,03311297 0,002793584 -11,85322264 6,1507E-10 -0,038982071 -0,02724387 -0,03898207 -0,02724387
Lote 2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,92440638
Coeficiente de determinación R^2 0,85452715
R^2 ajustado 0,84644533
Error típico 1,79148345
Observaciones 20
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 339,3454576 339,3454576 105,734433 5,80525E-09
Residuos 18 57,76943293 3,209412941
Total 19 397,1148906
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,590974 0,559491527 181,5773233 7,9541E-31 100,4155259 102,766422 100,415526 102,766422
Variable X 1 -0,03718818 0,003616569 -10,28272498 5,8052E-09 -0,044786314 -0,02959006 -0,04478631 -0,02959006
Resumen
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,9290203
Coeficiente de determinación R^2 0,86307872
R^2 ajustado 0,85947553
Error típico 1,59104322
Observaciones 40
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F
Regresión 1 606,355047 606,355047 239,531726 5,40017E-18
Residuos 38 96,19390373 2,531418519
Total 39 702,5489508
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,151937 0,351356258 287,889955 4,6858E-65 100,4406538 101,863221 100,440654 101,863221
Variable X 1 -0,03515058 0,002271177 -15,47681253 5,4002E-18 -0,039748334 -0,03055282 -0,03974833 -0,03055282
L1 34,4689427
L2 57,7694329
L1+L2 96,1939037
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 36 0,771907631 3,232 se acepta Ho Ho: L1=L2
Bibliografía 86
86
Anexo 10: Figura 4-14 Grafica y vida útil frasco transparente 5°C dextrosa al 5% agua
1:1 pH 3.0. Tabla 4-35
y = -0,2797x + 101,81R² = 1
80
85
90
95
100
105
110
115
120
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Series1
YC limite superior
YC limite inferior
Lineal (Series1)
VIDA UTIL TRANSPARENTE 5°C pH 3.0
%
R
ecu
pe
rad
o
Tiempo (Horas)
Calculo del T90% y T50%, con la regresión límite inferior:
tiempo propuesto (Horas): 36
T90 (Horas) = 42.2
% Porcentaje después de 36 Horas= 91.7408
Bibliografía 87
87
Tabla 4-35 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco transparente
5±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3-0. Datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,97918438
Coeficiente de determinación R^20,95880204
R^2 ajustado 0,95193572
Error típico 1,0823238
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 163,575758 163,575758 139,638291 2,2197E-05
Residuos 6 7,02854885 1,17142481
Total 7 170,604307
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,5408 0,6403114 158,580342 4,2417E-12 99,9740145 103,107586 99,9740145 103,107586
Variable X 1 -0,3370375 0,02852174 -11,8168647 2,2197E-05 -0,40682767 -0,26724733 -0,40682767 -0,26724733
Lote 2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,98037368
Coeficiente de determinación R^20,96113255
R^2 ajustado 0,95465464
Error típico 0,69300985
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 71,2569636 71,2569636 148,370821 1,8623E-05
Residuos 6 2,8815759 0,48026265
Total 7 74,1385395
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 102,08735 0,40999016 248,999515 2,8314E-13 101,08414 103,09056 101,08414 103,09056
Variable X 1 -0,22245 0,01826241 -12,1807562 1,8623E-05 -0,26713651 -0,17776349 -0,26713651 -0,17776349
Resumen
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,91031931
Coeficiente de determinación R^20,82868125
R^2 ajustado 0,8164442
Error típico 1,82432121
Observaciones 16
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 225,378909 225,378909 67,7190189 9,8425E-07
Residuos 14 46,5940703 3,32814788
Total 15 271,972979
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,814075 0,76316832 133,409725 3,8829E-23 100,177242 103,450908 100,177242 103,450908
Variable X 1 -0,27974375 0,03399422 -8,22915663 9,8425E-07 -0,3526541 -0,2068334 -0,3526541 -0,2068334
L1 7,02854885
L2 2,8815759
L1+L2 46,5940703
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 12 22,2099801 19,412 se rechaza Ho Ho: L1=L2
Bibliografía 88
88
Anexo 11: Figura 4-15 Gráfica y vida útil frasco ámbar 25±°C dextrosa al 5% agua 1:1
pH 3.0 Tabla 4-36
Calculo del T90% y T50%, con la regresión límite inferior:
tiempo propuesto (Horas): 36
T90 (Horas) = 44.2
% Porcentaje después de 36 Horas= 92.144
Bibliografía 89
89
Tabla 4-36 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco ámbar, 25±2°C
dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3-0. Datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,93391098
Coeficiente de determinación R^20,87218971
R^2 ajustado 0,850888
Error típico 1,92352106
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 151,492208 151,492208 40,9445786 0,00068636
Residuos 6 22,1995996 3,69993327
Total 7 173,691808
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,5423 1,13797041 89,2310552 1,3346E-10 98,7577867 104,326813 98,7577867 104,326813
Variable X 1 -0,32435 0,05068923 -6,39879509 0,00068636 -0,44838208 -0,20031792 -0,44838208 -0,20031792
Lote 2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,95113516
Coeficiente de determinación R^20,90465809
R^2 ajustado 0,88876778
Error típico 0,99403602
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 56,2543524 56,2543524 56,9314034 0,00028111
Residuos 6 5,9286456 0,9881076
Total 7 62,182998
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,5327 0,58807964 172,651276 2,5472E-12 100,093721 102,971679 100,093721 102,971679
Variable X 1 -0,19765 0,02619515 -7,54529015 0,00028111 -0,26174722 -0,13355278 -0,26174722 -0,13355278
Resumen
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,87455917
Coeficiente de determinación R^20,76485374
R^2 ajustado 0,74805758
Error típico 2,07564259
Observaciones 16
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 196,18848 196,18848 45,5374133 9,3472E-06
Residuos 14 60,31609 4,30829214
Total 15 256,50457
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,5375 0,86830359 116,937787 2,4532E-22 99,675174 103,399826 99,675174 103,399826
Variable X 1 -0,261 0,03867732 -6,74814147 9,3472E-06 -0,34395459 -0,17804541 -0,34395459 -0,17804541
L1 22,1995996
L2 5,9286456
L1+L2 60,31609
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 12 6,865948 19,412 se acepta Ho Ho: L1=L2
Bibliografía 90
90
Anexo 12
Figura 4-16 Gráfica y vida útil frasco transparente 25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH
3.0 Tabla 4-37
y = -0.2249x + 101.72R² = 1
80
85
90
95
100
105
110
115
120
0 5 10 15 20 25 30 35 40
Series1
YC limite superior
YC limite inferior
Lineal (Series1)
VIDA UTIL TRANSPARENTE 25°C pH 3.0
%
R
ecu
pe
rad
o
Tiempo (Horas)
Calculo del T90% y T50%, con la regresión límite inferior:
tiempo propuesto (Horas): 36
T90 (Horas) = 52.1
% Porcentaje después de 36 Horas= 93.6236
Tabla 4-27 Calculo del T90% y T50%, con la regresión límite inferior:
Bibliografía 91
91
Tabla 4-37 Tratamiento estadístico determinación de la vida útil frasco transparente
25±2°C dextrosa al 5% agua 1:1 pH 3-0. Datos de los F calculado y el F de tabla
Lote 1
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,98266033
Coeficiente de determinación R^20,96562132
R^2 ajustado 0,95989154
Error típico 0,73339885
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 90,6461556 90,6461556 168,526786 1,2865E-05
Residuos 6 3,22724325 0,53787387
Total 7 93,8733989
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,772 0,43388461 234,560059 4,0519E-13 100,710323 102,833677 100,710323 102,833677
Variable X 1 -0,25089583 0,01932676 -12,9817867 1,2865E-05 -0,2981867 -0,20360496 -0,2981867 -0,20360496
Lote 2
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,91528308
Coeficiente de determinación R^20,83774312
R^2 ajustado 0,81070031
Error típico 1,34954996
Observaciones 8
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 56,4205009 56,4205009 30,9784014 0,00142508
Residuos 6 10,9277106 1,8212851
Total 7 67,3482115
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,6722 0,79840452 127,344218 1,5813E-11 99,7185745 103,625825 99,7185745 103,625825
Variable X 1 -0,19794167 0,03556376 -5,56582441 0,00142508 -0,28496306 -0,11092027 -0,28496306 -0,11092027
Resumen
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple0,94005942
Coeficiente de determinación R^20,88371171
R^2 ajustado 0,8754054
Error típico 1,1676268
Observaciones 16
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de libertadSuma de cuadradosPromedio de los cuadradosF Valor crítico de F
Regresión 1 145,047673 145,047673 106,390452 6,3564E-08
Residuos 14 19,0869329 1,36335235
Total 15 164,134606
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95%Inferior 95.0%Superior 95.0%
Intercepción 101,7221 0,48845334 208,253466 7,6351E-26 100,674472 102,769728 100,674472 102,769728
Variable X 1 -0,22441875 0,02175744 -10,3145747 6,3564E-08 -0,27108382 -0,17775368 -0,27108382 -0,17775368
L1 3,22724325
L2 10,9277106
L1+L2 19,0869329
Comparaciones gln gld Fcalc Ftab
modelos 2 12 2,09056665 19,412 se acepta Ho Ho: L1=L2
Bibliografía 92
92
Tomado como límite de confianza el 90% de la concentración remanente, cuando se
utiliza el vehículo compuesto por dextrosa al 5% y agua, ajustando a un pH de 3.0 se
observa que a partir de las 24 horas, independientemente de la condición de temperatura
a la cual se exponga, hay una gran afectación de la estabilidad de la preparación
extemporánea, limitando el tiempo de uso de la misma. En la tabla 4-37 se puede
observar que el F calculado es menor que el F de la tabla, Lo que nos estaría indicando
que se pueden combinar los datos del lote 1 y del lote 2 para poder estimar la
degradación de la preparación extemporánea en la condición de estudio establecido para
la muestra. Como aparece en la figura 4-16 del anexo 12.
Anexo 13
Modelo de etiqueta para una forma farmaceutuca extemporanea a partir de tabletas de
enalapril maleato
Enalapril maleato 1 mg/ml
Administracion via peroral
Agitar vigorosamente por 20 segundos antes de usar. Almacenar ______°C
Proteger de la luz. Mantener bien cerrado y fuera del alcance de los niños.
Fecha de elaboracion:_____________________ Hora:_______________
Fecha de Vencimiento:____________________ Hora:________________
Lote No____________________ Firma responsable:____________________