escuela acadÉmico profesional de microbiologia y

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

Evaluación del crecimiento micelial de Ganoderma Spp. en suero de leche.

“

AUTORA: Br. BLANCA INES SANJURJO JIMENEZ

ASESOR: Ms C. JULIO CÉSAR ARELLANO BARRAGÁN

TRUJILLO-PERÚ

2015

TESIS

PARA OBTENER POR EL TÍTULO DE:

BIÓLOGO MICROBIÓLOGO

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.

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DEDICATORIA

A mis padres, Sergio y Patricia, a mis hermanos, por su

inmenso amor, sus sabios consejos, su gran confianza,

constante apoyo y su comprensión, por estar siempre a mi

lado. Gracias por su esfuerzo y dedicación, me enseñaron a

nunca darme por vencida ante las adversidades que se me

han presentaron en la vida. Gracias por regalarme la

oportunidad de ser alguien y de ser profesional.

¡LOS AMO MUCHO!

A Dios porque nunca me abandonó en el largo

andar de mi aprendizaje, porque aun cuando

tuve muchos obstáculos, nunca dudaste en

darme fuerzas e hiciste más llevadero mi

caminar.

¡MUCHAS GRACIAS!



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A mis profesores, los cuales me brindaron e

inculcaron conocimientos para lograr los

mejores resultados en mi vida profesional.



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AGRADECIMIENTO

Expreso mi especial agradecimiento a mi asesor de tesis; al Mg. Maestro Julio

César Arellano Barragán; por su valioso apoyo y haberme brindado la

oportunidad de aprender nuevos conocimientos, así mismo por orientarme en

la realización y culminación del presente estudio, muchas gracias profesor por

su calidad humana brindarme su amistad desinteresada.

A la Universidad Nacional de Trujillo, a la Facultad de Ciencias Biológicas y de

manera especial a la Escuela Académico Profesional de Microbiología y

Parasitología, por haberme brindado el espacio y el lugar para crecer

profesionalmente y conocer buenas personas, momentos inolvidables y

terminar mi carrera.

A mis amigos y compañeros de la universidad que me permitieron compartir

cosas y momentos inolvidables, jamás olvidare esos años que convivimos,

gracias por su amistad.



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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. Orlando Moisés Gonzales Nieves

VICERRECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVRSIDAD NACIONAL DE

TRUJILLO

Dr. Rubén Vera Veliz

VICERECTOR DE INVESTIGACION

Dr. Weyder Portocarrero Cardenas

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Dr. José Mostacero León

DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADEMICO PROFSIONAL D MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

Dra. Bertha Soriano Bernilla



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CERTIFICACION DEL ASESOR

El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la tesis Evaluación del

crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de leche.

CERTIFICA

Que la presente tesis ha sido ejecutada conforme a los objetivos propuestos y

con las orientaciones pertinentes al Tesista.

En cuanto al informe, éste ha sido revisado y acogidas a las observaciones y

sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo a la bachiller BLANCA INES

SANJURJO JIMENEZ para continuar con los trámites correspondientes.

……………………………………………………………..

Ms C. Julio César Arellano Barragán

Profesor Principal D.E.

Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal



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PRESENTACIÓN Señores miembros del jurado:

En cumplimiento con las disposiciones de reglamentos de grados y títulos de la

Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la

Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado

criterio, el presente trabajo de investigación titulado.

Evaluación del crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de leche.

Con el cual cumplo uno de los requisitos indispensables para obtener el título

de Biólogo Microbiólogo.

Trujillo, 15 de Mayo del 2015

……………………………………………………………..

Br. BLANCA INES SANJURJO JIMENEZ



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JURADO DICTAMINADOR

PRESIDENTE

Dr. Marco Salazar Castillo

SECRETARIO

Mg.C. Julio César Arellano Barragán

VOCAL

Mblgo. Gerardo Alayo Espinoza



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APROBACION

Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaramos

que el presente informe de la tesis ha cumplido con los requisitos

fundamentales exigidos; siendo aprobado por unanimidad.

PRESIDENTE

Dr. Marco Salazar Castillo

SECRETARIO

Mg.C. Julio César Arellano Barragán

VOCAL

Mblgo. Gerardo Alayo Espinoza



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RESUMEN

La gran demanda de producción de hongos comestibles, por su poder

nutricional y medicinal, ha llevado a buscar nuevos sustratos económicos y

ecológicos, es una alternativa confiable para el tratamiento de diversas

enfermedades que afectan al humano. El uso suero de leche, como medio de

cultivo, puede suministrar gran cantidad de fuentes de carbono y de energía

necesaria para el desarrollo de muchos microorganismos. Por esta razón, con

el finalidad de evaluar el crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de

leche, se establecieron ocho medios de cultivo que permitieron la medición del

crecimiento radial del hongo en agar papa dextrosa (APD), agar suero de leche

más extracto de levadura (ASLEL), agar suero de leche (ASL), agar sabouraud

dextrosa (ASD) y a la vez, se midió el peso seco del micelio formado en caldo

papa dextrosa.(CPD), caldo suero de leche más extracto de levadura (CSLEL),

caldo suero de leche (CSL) y caldo sabouraud dextrosa (CSD) para determinar

la biomasa desarrollada. Los medios donde la cepa presentó el mayor

crecimiento radial fue con el agar suero de leche (ASL) con 52.88 mm y mayor

biomasa fue el caldo de suero de leche (CSL) con 1.6 g. a los 14 días de

incubación.

Palabras claves: crecimiento micelial, Ganoderma spp., micelio,



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ABSTRACT

The whey demand for production of edible fungi, for its nutritional and medicinal

power, has led to seek new economic and ecological substrates, It´s a reliable

alternative for the treatment of various diseases that affect human The use of

milk serum as culture medium can supply many sources of carbon and energy

to the development of many microorganisms. Therefore, in order to evaluate the

mycelial growth of Ganoderma spp. in whey. Eight half culture allowed

measurement of radial growth of the fungus on potato dextrose agar (PDA)

were established, more whey agar yeast extract (WYEA), whey agar (WA),

sabouraud dextrose agar (SDA) and while, the dry weight of the mycelium

formed in potato dextrose broth was measured. (PDB), milk whey broth plus

yeast extract (WYEB) broth milk serum (WB) and sabouraud dextrose broth

(SDB) to determine biomass developed. Were obtained which means that the

strain had the highest growth rate were whey agar (WA) with 52.88 mm and

whey broth (WB) with 1.6 g. at 14 days of incubation.

Key words: mycelial growth, Ganoderma spp., mycelium.



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INDICE

DEDICATORIA.................................................................................................... ii

AGRADECIMIENTO .......................................................................................... iv

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO .................. v

CERTIFICACION DEL ASESOR ....................................................................... vi

PRESENTACIÓN .............................................................................................. vii

JURADO DICTAMINADOR .............................................................................. viii

APROBACION ................................................................................................... ix

RESUMEN .......................................................................................................... x

ABSTRACT ........................................................................................................ xi

INDICE .............................................................................................................. xii

I. INTRODUCCION ..........................................................................................1

II. MATERIALES Y METODOS ........................................................................7

2.1. MATERIAL .........................................................................................7

2.1.1. Material Biológico. ..............................................................................7

2.1.2. Medios de Cultivo. ..............................................................................7

2.1.3. Reactivos. ..........................................................................................7

2.2. METODO ...........................................................................................7

2.2.1. Reactivación de las esporas de Ganoderma spp. ..............................7

2.2.2. Obtención de cultivo monospórico de Ganoderma spp. .....................8



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2.2.3. Preparación de suero de leche. .........................................................8

2.3. EVALUACION DEL CRECIMIENTO RADIAL Y BIOMASA. ...............9

2.3.1. Medición de crecimiento radial ...........................................................9

2.3.2. Medición de la biomasa (peso seco). ...............................................10

2.4. ANÁLISIS ESTADISTICOS. .............................................................10

3. RESULTADOS ...........................................................................................11

4. DISCUSION................................................................................................19

5. CONCLUSIONES .......................................................................................22

6. RECOMENDACIONES ..............................................................................23

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...........................................................24

ANEXOS ...........................................................................................................28



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I. INTRODUCCION

Los hongos son organismos que se encuentran en todos los ambientes y

sobre una gran variedad de sustratos. La existencia de los hongos se registra

en zonas desérticas, tropicales, templadas incluyendo ambientes acuáticos 1,

siendo un grupo muy variado y polimórfico 2. Mientras que, cuando se hace

referencia a ellos se habla de organismos con núcleo portadores de esporas,

que a diferencia de las plantas carecen de clorofila y se reproducen sexual y

asexualmente, poseen un cuerpo formado por un conjunto de filamentos

llamados hifas, que en conjunto forman una masa algodonosa blanca llamada

micelio 1.

Existe gran cantidad de hongos que han sido identificados, entre los

cuales, muchos se consideran comestibles. De las 150 especies conocidas de

hongos comestibles, algunos contienen propiedades medicinales solo la mitad

es cultivada, con fines comerciales, mientras que la otra mitad se encuentra de

manera silvestre 3. Sin embargo, es poco conocido su gran potencial como

alimento funcional con propiedades nutricionales y medicinales que promueven

la salud. Estas propiedades son únicas y diferentes a las aportadas por otros

alimentos ampliamente consumidos 4.

El interés por los hongos con propiedades medicinales en especial los

que se refieren al género Ganoderma,spp. representa un grupo perteneciente a

la división Basidiomycotina. Crecen sobre la madera en descomposición

absorbiendo los nutrientes a través en pequeños tubos conocidos como hifas y



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que desarrollan los cuerpos fructíferos sobre los troncos. Este género de

hongos puede crecer en condiciones elevadas de calor y humedad 1.

En la actualidad en algunas partes del mundo el hongo Ganoderma spp.

se cultiva artificialmente como en china, país que ocupa el primer lugar en

cuanto a su producción – 4.300 toneladas anuales siguiéndole Corea, Taiwán,

Japón, Estados Unidos, Malasia, Vietnam, Indonesia y Sri Lanka, siendo los

más conocidos en occidente el Shiitake (Lentinula edodes) y el Reishi

(Ganaderma spp.). Este último, ha sido estudiado intensamente en los últimos

años, por la gran cantidad de propiedades medicinales y compuestos

bioactivos que se le atribuyen a los carpóforos, en los que se encuentran

incluidos más de 119 tipos de tripertenos diferentes y varios tipos de

polisacáridos 5.

Ganoderma spp. tiene una amplia distribución y poder medicinal, sobre

todo a partir de la toma de conciencia por su valor en la prevención y

tratamiento de enfermedades 3, sin efectos secundarios a diferencia de los

fármacos sintéticos, convirtiéndolo en un producto natural y beneficioso para la

industria. Investigaciones recientes demostraron el efecto a nivel molecular en

la prevención y terapia del cáncer 6. Así como la actividad en la protección del

hígado, hipoglucemia e inhibición en la agregación plaquetaria posee también

la capacidad de regular la respuesta inmunológica. Además de su uso en la

hipertensión y neoplasia 7.

Estas observaciones han generado el cultivo masivo de Ganoderma spp.

4. La creciente demanda que han generado los carpóforos de Ganoderma spp.

por sus comprobadas propiedades y para la obtención de sus metabolitos, ha



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creado la necesidad de encontrar alternativas a las desventajas que presenta el

cultivo sólido convencional, tales como, tiempo de fructificación, dificultad para

controlar las plagas y elevados costos de los substratos. El uso de medios de

cultivo para el crecimiento y desarrollo de organismos, tales como bacterias y

hongos ha ido en aumento, debido a que hoy en día existen organismos, de los

cuales es indispensable su aislamiento para su estudio fisiológico, morfológico,

entre otros 8.

Así mismo, los medios de cultivo convencionales como agar papa

dextrosa, agar sabouroud dextrosa, han ayudado en la investigación en el

campo de la micología. El medio de cultivo agar papa dextrosa (APD), ha

demostrado en una investigación ser un medio eficaz en la evaluación del

crecimiento y esporulación de Aschersonia aleyrodis webber 9. Estudios

realizados con Botrytis cinerea y Monilia fructicula en el año 2006 indicaron

que estos hongos presentan un crecimiento rápido en un medio libre de

compuestos o sustancias que puedan alterar o impedir su crecimiento, y que a

cambio de esto, le aporta los nutrientes necesarios para continuar con su

normal desarrollo, siendo el medio utilizado agar papa dextrosa 8.

Los hongos desempeñan un papel muy importante en la naturaleza en

especial los saprobios, ya que ayudan a la degradación de la materia orgánica

y la reincorporación de los nutrientes al suelo ,además algunos contienen

potentes compuestos bioactivos tales como: los polisacáridos del tipo β-

glucanos y los ácidos ganodérmicos 3 los cuales se producen en mayor

cantidad, los triterpenoides ;los cuales se han utilizado en la medicina

tradicional y moderna por muchos países para el tratamiento y prevención del

cáncer y tienen la capacidad de regular el sistema inmune; se han identificado



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proteínas bioactivas, adenosinas, ácidos nucleicos y otras sustancias. Hay un

grupo de interés particular, que son proteínas inmuno-moduladora, las que se

han aislado de Ganoderma spp. y otros hongos con efectos inmunológicos 10.

Los medios de cultivo utilizados para la producción de Ganoderma spp.

son los medios convencionales que nos permiten el ahorro de tiempo y costos

y lo más importante la obtención de metabolitos para lo cual tenemos el agar

papa dextrosa (APD). La aplicación del agar papa dextrosa como medio de

cultivo, para hongos, ha resultado muy eficiente por poseer los componentes

nutricionales y esenciales para el crecimiento de hongos, tal es así que se han

realizado innumerables trabajos de investigación, referente al aislamiento,

producción de micelio, entre otros que ha permitido a la ciencia avanzar en el

campo de la micología, al igual que el agar sabouroud ; ya que gracias a estos

medios convencionales se ha encontrado buenos resultados 11, 12, 13. La

utilización de materiales orgánicos agroindustriales para los cultivos de los

hongos es el reflejo de su extraordinaria actividad metabólica 13.

La búsqueda de nuevas alternativas para la gestión y la utilización de los

residuos derivados de las actividades agrícolas y pecuarias han generado la

necesidad de transformar los residuos en beneficio de la producción de

hongos a partir de la descomposición de restos orgánicos o procesos

agropecuarios, los cuales son altamente contaminantes para el medio

ambiente. Los sustratos más utilizados recientemente para el crecimiento y

desarrollo de los hongos son las maderas, cáscaras, pajas de cereales 9, los

cuales resultan económicos, ecológicos y de fácil acceso.



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El suero de leche es uno de los residuos orgánicos representativo del

sector lechero y además uno de los contaminantes más severos a nivel

ambiental 14. En ocasiones el suero es vertido directamente en ríos u otros

cuerpos de agua. Esta práctica causa serios problemas de contaminación en

dichos afluentes acuíferos, ya que posee una alta demanda biológica de

oxígeno (DBO) y un alto contenido de sólidos totales. En otros casos el suero

es utilizado como complemento en la dieta de algunos animales pecuarios,

debido a que posee alto contenido de nutrientes, tales como carbohidratos y

proteínas. El suero se destina también para la alimentación de cerdos 15.

Debido al alto valor nutricional, el suero puede ser utilizado en la manufactura

de algún sub-producto lácteo 16.

El suero de leche es un líquido obtenido en el proceso de fabricación del

queso y de la caseína, después de la separación de la cuajada o fase miceliar.

Sus características corresponden a un líquido fluido, de color verdoso

amarillento, turbio, de sabor fresco, débilmente dulce, de carácter ácido, con un

contenido de nutrientes o extracto seco del 5,5 al 7% proveniente de la leche 17.

Conteniendo en promedio 4.9% de lactosa, 0.9% de proteína, 0.6% de cenizas

18.

La utilización de este residuo orgánico como el lacto suero es una

alternativa biotecnológica, además como medio de cultivo, suministra las

fuentes de carbono y de energía necesaria para el desarrollo de diferentes

microorganismos y la producción de la industria alimentaría reduciendo así los

problemas ambientales que generan sus componentes 19.



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El crecimiento micelial de Ganoderma spp. en suero de leche, presenta

una alternativa de estudio para la obtención de nuevos medios de cultivo de

bajo costo y alta eficiencia en el crecimiento micelial de hongos comestibles. Es

una buena oportunidad de darle un valor agregado importante a este producto

residual de la industria láctea ya que contiene casi todos los nutrientes

necesarios entre carbohidratos y proteínas para el crecimiento de un organismo

y evitando así un potencial contaminante ambiental.

Con la finalidad de evaluar el efecto del suero de leche como sustrato en

el crecimiento micelial In vitro de Ganoderma spp. en la presente investigación

se realizó la evaluación del crecimiento micelial, en ocho medios de cultivos en

condiciones de laboratorio.



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II. MATERIALES Y METODOS

2.1. MATERIAL

2.1.1. Material Biológico.

En el presente estudio se utilizó 5 litros de suero de leche, la

muestra de Ganoderma spp. y esporas fueron donadas por el

Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal de la

Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Nacional de Trujillo.

2.1.2. Medios de Cultivo.

Los medios de cultivo empleados fueron preparados en el laboratorio

de Tecnología enzimática, entomopatógenos y productos naturales

de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de

Trujillo.

2.1.3. Reactivos.

Ácido láctico, fenol, azul de lactofenol.

Alcohol etílico al 70%, KOH 10%, Hipoclorito de Na al 1%,

clorofenicol, agua destilada estéril, Cuajo “torero”

2.2. METODO

2.2.1. Reactivación de las esporas de Ganoderma spp.

Se pesó 20 mg de esporas en un volumen de 5 mL de agua

destilada estéril (ADE) más cloranfenicol (50ug/mL). Luego se

centrifugó a 500-600 rpm por 10 minutos. Se eliminó el sobrenadante

y al sedimento obtenido, se diluyó en 5 mL de ADE más

cloranfenicol. Se centrifugó nuevamente a 500-600 rpm por



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10minutos. El paquete de esporas obtenido fue sometido a un

tratamiento de limpieza y desinfección con lejía al 1% durante 5

minutos. Se centrifugó a 500-600 rpm por 10 minutos; se realizó un

lavado con 5 mL de ADE y se centrifugó nuevamente a 500-600 rpm

por 10 minutos. Seguidamente, se sometió a un tratamiento con

alcohol al 70% durante 5 minutos. Seguidamente se centrífugo y lavó

con ADE. Finalmente, al paquete de esporas obtenidas se le sometió

a un tratamiento térmico (60-70ºC) por 5 minutos enfriado en agua

helada y nuevamente se centrifugó y lavó con ADE.

2.2.2. Obtención de cultivo monospórico de Ganoderma spp.

Se determinó el número de esporas/mL con la cámara de

Neubauer. Finalmente se sembró por superficie 0.1mL.

Concentración de esporas 102, se suspendió las esporas en placas

con agar sabouraud, agar papa dextrosa, agar extracto de levadura y

agar suero de leche más extracto de levadura.

Se dejó incubar por 5 días. Transcurrido este tiempo se encontró

una espora germinada la cual se cortó en un cuadradito de agar y se

trasladó a una placa con Agar sabouraud Se sembró por puntura

central dejándose a incubación por 7 días a temperatura ambiente

(27ºC±1) en un ambiente oscuro hasta la formación de la colonia de

Ganoderma spp 20, 21.

2.2.3. Preparación de suero de leche.

Se utilizó 10 litros de leche fresca calentándola a 40°C y luego se

agregó un ¼ de pastilla de cuajo (Torero). Se dejaron en reposo por

30 minutos y se produjo la separación de la caseína del suero, el



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mismo que fue separado de la fase liquida. El suero que presento un

color amarillento fue separado en frascos de 500 mL, tindalizados y

guardados en congelación hasta su uso.

2.2.4. Selección de los medios de cultivo para el crecimiento micelial

del hongo Ganoderma spp.

Se utilizaron ocho medios de cultivo. Cuatro sólidos y

cuatro líquidos. Los medios solidos fueron: el agar suero de leche

(ASL), el agar suero de leche con extracto de levadura (ASLEL),

agar sabouraud dextrosa (ASD) y agar papa dextrosa (APD).Los

medios líquidos fueron: Caldo suero de leche (CSL), caldo suero

de leche más extracto de levadura (CSLEL), caldo de papa

dextrosa (CPD),y caldo sabouraud dextrosa (CSD).

2.3. EVALUACION DEL CRECIMIENTO RADIAL Y BIOMASA.

2.3.1. Medición de crecimiento radial

A partir de un cultivo joven se extrajo en una porción de micelio

(inóculo, consistente en un pequeño fragmento de la colonia de

aproximadamente 5mm de diámetro). El cual se sembró por puntura

en la parte central de las placas. Se incubó en medio ambiente (26-

28°C) y en oscuridad. Luego se midió interdiariamente, un total de 4

diámetros de crecimiento de cada colonia, a partir del segundo día de

siembra hasta el decimocuarto día de siembra, obteniendo el

diámetro promedio de crecimiento para los días 2, 4,6, 8, 10, 12 y 14

respectivamente y finalmente el radio promedio de crecimiento para



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los mismos días de siembra 11 (se midieron los crecimientos radiales

de 5 placas por medio de cultivo investigado).

2.3.2. Medición de la biomasa (peso seco).

De una placa Petri con crecimiento micelial se tomó una muestra

de la parte más externa del crecimiento radial de 5mm de diámetro

con un sacabocado estéril, que luego se siembra en el medio líquido.

Se inoculó en matraces conteniendo el medio líquido con las

concentraciones de los tratamientos. Se incubó los matraces en

forma estacionaria bajo las condiciones de temperatura y tiempo

requerido por el hongo. Una vez desarrollado el micelio se filtró con

una bomba al vacío a través de un papel de filtro previamente

pesado y sobre un embudo Buchner de porcelana. Luego se colocó

en un horno a una temperatura de 75 y 80°C manteniendo y pesando

varias veces hasta alcanzar un peso constante. Luego se determinó

el peso seco de la biomasa fúngica obtenida por la diferencia entre el

peso inicial y el final 22 (se determinó el peso (biomasa) de 5

matraces por cada medio de cultivo líquido utilizado).

2.4. ANÁLISIS ESTADISTICOS.

Los promedios obtenidos de los crecimientos y de peso seco de la

biomasa micelial, fueron analizados mediante el t student comparativo

entre las muestras y la prueba de comparación múltiple Diferencia

Mínima Significativa – DSM (para saber que media difiere de la otra);

utilizando el programa estadístico SPPS Ver. 21, para comparar si

existió diferencia significativa en el crecimiento micelial de Ganoderma

spp. en los medios usados.



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3. RESULTADOS

Tabla 1. Promedio del crecimiento radial del micelio (mm) de Ganoderma spp.

en medios de cultivo sólidos: Agar Papa Dextrosa (APD), Agar suero

de leche más Extracto de Levadura (ASLEL), Agar Suero de leche

(ASL) y Agar Sabouraud dextrosa (ASD) a los 14 días de incubación.

Los datos representan el promedio de cinco repeticiones en cada

medio de cultivo.

* Si = siembra inicial 5 mm.

Xi = Promedio inicial

Xf = Promedio final

MEDIO

DE

CULTIVO

Crecimiento radial (mm) PROMEDIO

(xf = xi – Si) REPETICIONES

1 2 3 4 5 xi Si

ASL 50.5 56.8 57.3 61.3 63.5 57.88

5

52.88

APD 51.5 52.3 55.3 64 65.5 57.72 52.72

ASLEL 48 48.3 51.3 54.8 55.8 52.24 47.24

ASD 45.8 47.5 48.8 52 56 50.02 45.02



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Tabla 2. Promedio del peso seco (g) de la biomasa formada por Ganoderma spp.

en medios de cultivo líquidos : Caldo Papa Dextrosa (CPD), Caldo suero de

leche más Extracto de Levadura (CSLEL), Caldo Suero de leche (CSL) y Caldo

Sabouraud dextrosa (CSD) a los 14 días de incubación. Los datos representan

el promedio de cinco repeticiones en cada medio de cultivo.

MEDIOS

DE

CULTIVO

Peso seco en gramos (biomasa)

PROMEDIO REPETICIONES

1 2 3 4 5

CSL 1.54 1.56 1.59 1.64 1.67 1.60

CPD 1.52 1.52 1.54 1.55 1.56 1.54

CSLEL 1.24 1.47 1.49 1.51 1.56 1.45

CSD 1.49 1.51 1.53 1.55 1.58 1.53



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La Figura 1: Se muestra el crecimiento radial del micelio de Ganoderma

spp., a los 14 días de incubación, alcanzangdo 52.88 mm de diámetro

micelial en el agar de suero de leche, 52.72 mm en agar papa dextrosa,

47.24 mm agar suero de leche con extracto de levadura, 45.02 mm en

Agar Sabouraud dextrosa.

-

8.00

16.00

24.00

32.00

40.00

48.00

56.00

2 dias 4 dias 6 dias 8 dias 10 dias 12 dias 14 dias

Crec

imie

nto(

mm

)

Tiempo (Días)

ASL

APD

ASLEL

ASD



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La Figura 2: Se muestra el promedio del peso seco de la biomasa formada

por Ganoderma spp., en Caldo Papa Dextrosa (CPD), Caldo suero de leche más

Extracto de Levadura (CSLEL), Caldo Suero de leche (CSL) y Caldo Sabouraud

dextrosa (CSD), obteniendo el mayor valor en caldo suero de leche, a los 14

días de incubación.

1.54

1.45

1.53

1.6

1.2

1.25

1.3

1.35

1.4

1.45

1.5

1.55

1.6

CPD CSLEL CSD CSL

Biom

asa

(∛PS

g)

Tiempo (14 Días)



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Tabla 3. Analisis estadístico de T-student del crecimiento radial del micelio (mm)

de Ganoderma spp. en medios de cultivo sólidos entre Agar Suero de

leche (ASL) y el Agar Papa Dextrosa (APD), Agar suero de leche más

Extracto de Levadura (ASLEL), y Agar Sabouraud dextrosa (ASD) a

los 14 días de incubación.

* La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05.

X Desviación

(σ)

Error típ.

de la

media

95% Intervalo de

confianza para la

diferencia tcal. gl Sig.

Inferior Superior

ASL -

APD 0.16 3.01 1.34 -3.58 3.90 0.11 4 0,911

ASL -

ASLEL 6.24 2.31 1.03 3.37 9.10 6.03 4 0,012

ASL -

ASD 7.92 1.94 0.86 5.50 10.33 9.10 4 0,004



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Tabla 4. Analisis estadístico de T-student del peso seco (g) de la biomasa

formada por Ganoderma spp. en medios de cultivo líquidos entre el

Caldo Suero de leche (CSL) y Caldo Papa Dextrosa (CPD), Caldo

suero de leche más Extracto de Levadura (CSLEL), y Caldo Sabouraud

dextrosa (CSD) a los 14 días de incubación.


X Desviación

(σ)

Error típ.

de la

media

95% Intervalo de

confianza para la

diferencia tcal. gl Sig.

Inferior Superior

CSL -

CPD

-0.062 0.040 0.018 -0.011 -0.112 -3,39 4 0.27

CSL -

CSLEL

0.084 0.119 0.053 -0.064 0.232 1.56 4 0.192

CSL -

CSD

0.060 0.050 0.022 -0.056 0.068 0.26 4 0.803



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Tabla 5. Prueba DMS para determinar la diferencia significativa entre los

promedios del crecimiento radial de Ganoderma spp. en los cuatro

medios de cultivo sólidos.

(I) Grupo experimental

(II) Grupo experimental

Diferencia de medias (I-ll)

Error típico

Sig.

ASL

APD 3,40 6,37 0,95

ASLEL 11,74 6,37 0,29

ASD 19,28 6,37 0,04


La tabla 5 muestra que los grupos experimentales son estadísticamente iguales

entre sí, dado que la prueba estadística DMS, nos da un valor de significancia

(sig.) mayor que 0.05 (p = 0.001) y solo en el caso de ASL Y ASD hay una

diferencia estadística significativa lo que nos permite afirmar que ASL es

diferente a ASD.



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Tabla 6. Prueba DMS para determinar la diferencia significativa entre los

promedios de la biomasa de Ganoderma spp. en los cuatro medios

de cultivo líquidos.

(I) Grupo experimental

(II) Grupo experimental

Diferencia de medias (I-ll)

Error típico

Sig.

CSL CPD 0.068 0,044 0,447

CSLEL 0.15 0,044 0,184

CSD 0.07 0,044 0,895


La tabla 6 muestra que los grupos experimentales son estadísticamente iguales

entre sí, dado que la prueba estadística DMS, nos da un valor de significancia

(sig.) mayor que 0.05 (p = 0.001).



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4. DISCUSION

El cultivo comercial de Ganoderma spp. representa en la industria mundial

un crecimiento constante ya que sus compuestos bioactivos purificados y

aislados de los carpóforos son una alternativa confiable para el tratamiento de

diversas enfermedades que afectan al humano tales como la hipertensión,

diabetes, hipoglicemias, cáncer y algunas enfermedades producidas por virus.

En la evaluación del crecimiento radial de Ganoderma spp. en suero de

leche. El hongo presentó a los 14 días de incubación, un mayor diámetro micelial

en agar suero de leche (ASL) de 52.88 mm, tal como se observa en la tabla 1.

Al mismo tiempo de incubación se obtuvo un diámetro micelial en agar papa

dextrosa (APD) de 52.72 mm, lo cual nos indica que no se encuentra variación

dispersa y que la utilización de residuos orgánicos como el suero de leche

produce un desarrollo de los hongos Ganoderma spp. ligeramente superior al

medio APD de referencia 4.

El hongo Ganoderma spp. a los 14 días de incubación alcanzó la mayor

cantidad de biomasa micelial en el caldo de suero de leche (CSL). Presentó un

peso seco de 1.6 g como se observa tabla 2, donde en el mismo período de

incubación, el caldo de suero de leche más extracto de levadura (CSLEL) obtuvo

1.45 g , lo cual nos indica que no se necesita adicionar concentraciones de

carbohidratos (lactosa y glucosa) y nitrógeno (extracto de levadura y proteínas

del suero lácteo) para su crecimiento, como lo indica Moya (1995) quien

concluye que los carbohidratos y nitrógeno presentes como componentes

propios del suero lácteo son suficientes nutrientes para el crecimiento de los



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20

hongos. Para el experimento se usó suero dulce que puede presentar una

composición media de lactosa al 4.74 % y proteína al 0.86% 16.

Es pertinente analizar el promedio de crecimiento de CSL y CSLEL, en este

caso el cecimiento del hongo Ganoderma spp. en CSLEL es significativamente

más bajo que CSL .Si consideramos que el extracto de levadura, se usa en

muchos medios como un potencial activador del crecimiento y en este caso

resulta contradictorio el pobre crecimiento en el CSL enriquecido con Extracto de

levadura,una tentativa explicación de este pobre crecimiento podría deberse al

extracto de levadura con muchos años en la estantería que podría estar

generando compuestos que atrasan el crecimiento del hongo.

Estudios realizados en Pleurotus perteneciente a la división

basidiomycotina, al igual que Ganoderma spp., demuestran que la glucosa,

manosa y galactosa son más preferidas entre sus fuentes de carbono a

diferencia de la xilosa y la arabinosa que producen un crecimiento lento y

deficiente. Demostrando que la mayoría de especies pertenecientes al mismo

género que Ganoderma spp tienen a un mejor crecimiento con lactosa, pectina y

almidón 1,22.

De acuerdo al análisis de t-student y comparación múltiple para comparar

el crecimiento en los cuatro medios liquidos APD, ASLEL, ASL y ASD (Tabla 3

y 5) se determinó que existen diferencias significativas (p<0.05) entre ASL y

ASD y que no hay diferencia significativa en ASL y los demás medios de cultivo,

lo que nos indica que podemos reemplazar con ventaja al APD por el ASL.



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21

En el caso del peso seco de la biomasa micelial formada en CPD, CSL,

CSLEL y CSD (Tabla 4 y 6) también se obtuvo diferencias significativas (p<0.05)

entre el CSL y CSD a diferencia de los otros medios que no hay diferencia

significativa es decir que la biomasa formada en cada uno de estos medios nos

indica que son estadísticamente iguales y que CSL es diferente a CSD.



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22

5. CONCLUSIONES

De los resultados y discusión del presente informe se concluye:

El suero de leche resulto ser el medio de cultivo más productivo para

Ganoderma spp. Que el medio papa dextrosa sólido o líquido.

Los medios de cultivo más adecuados para el crecimiento de Ganoderma

spp. en el laboratorio, son el agar y caldo suero de leche y agar y caldo

papa dextrosa.

La utilización del suero de leche para el crecimiento y producción de

Ganoderma spp. implica disminuir la contaminación en el medio ambiente

y generar mayores ingresos económicos en la producción de este hongo.

.



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23

6. RECOMENDACIONES

- Evaluar el efecto del pH, y la temperatura sobre el crecimiento del hongo

Ganoderma spp. en suero de leche, a efecto de encontrar las mejores

condiciones ambientales para su desarrollo.

- Evaluar la concentración de lactosa en suero de leche para encontrar la

dilución optima de suero de leche.

- Evaluar el crecimiento de la cepa de Ganoderma spp. en otros medios de

cultivo sólidos con la finalidad de encontrar el mejor soporte para la

producción de inóculos.



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24

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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funcional Ganoderma (Fungi, Ganodermataceae), conocido como Reishi

en los mercados internacionales y relevancia para el desarrollo regional.

Instituto de enseñanza e investigación en ciencias agrícolas. Puebla.

2010. 35p.

2. Domínguez, R. Obtención de cepas silvestres de Ganoderma lucidum y

la caracterización de una cepa nativa para la cuantificación de

exopolisacáridos en cultivo de células en suspensión. Universidad de

Guadalajara. Zapopan, Jalisco. 2012.

3. Figlas D. Curvetto N. Monografía sobre las propiedades medicinales del

hongo Reishi (Ganoderma lucidum). Laboratorio de Biotecnología de

Hongos Comestibles y Medicinales, Bahía Blanca. Argentina. 2008.

4. Guzmán G. Tropical Fungi of México. Diversity and Distribution.

Symposium Tropical Mycology. Liverpool. 1993. 25-29 p.

5. Soto C., López C., Vásquez E. y Álvarez I. 2002. Cultivation of

Ganoderma lucidum and its effect on the production of lymphocytes. In:

Sanchez et al. (Eds). Mushrooms Biology and Mushroom Products Word

Society for Mushroom biology and mushroom products. Cuernavaca,

México. 379-382 p.

6. Shufeng Z., Yihuai G., Guoliang Ch. A Phase I y II study of a Ganoderma

lucidum extract in patients with advanced cancer. Rev. Wood Science and

Technology. 2014.4(3) 80p.



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N

25

7. Suarez J., Rodríguez L., Mendoza G. Caracterización morfológica y

molecular de una cepa silvestre mexicana perteneciente al género

Ganoderma. Revista Mexicana de Micología. México. 2012.

8. Cañedo V, Ames T. 2004 Manual de Laboratorio para el Manejo de

Hongos Entomopatógenos. Centro internacional de la Papa (CIP).

9. Martínez D., Sobal M., Morales P., Martínez W., y Mayett Y. Los hongos

comestibles: propiedades nutricionales, medicinales y su contribución a la

alimentación mexicana. El Shiitake. Colégio de Postgraduados Campus

Puebla, Biotecnología de Hongos comestibles. 2004. 48 pp.

10. Mier T, Toriello C, Ulloa M. Hongos microscópicos, saprobios y parásitos:

Métodos de Laboratorio. México: Metropolitana. 2002.

11. Armando L. Hongos comestibles y medicinales de México. Editorial

Posada. 1986.

12. Suárez C., Nieto J. Cultivo biotecnológico de macrohongos comestibles:

una alternativa en la obtención de nutracéuticos Rev. Iberoam Micol.

2013. 30(1):1–8.

13. Moraima H., Pérez J., Faria J., Boscán F. y Luis A. Variación de los

valores proteicos en muestras de leche de la región zuliana (Venezuela).

Ver. Científica (FVC-LUZ). 1992. 2 (1):49-52.

14. Sánchez L., Gil M., Giraldo F., Milán L. y Villada M. Aprovechamiento del

suero lácteo de una empresa del norte antioqueño mediante

microorganismos eficientes. Grupo de investigación de Alimentos.

España. 2009. 4(2).



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N

26

15. Bom F. Conservación de suero de leche. Programa de Investigación en

alimentos. Departamento de Bioquímica. 2008.

16. Habijanic J., Berovic M., Boh B., Wraber B., Production of biomass and

polysaccharides of Lingzhi or Reishi medicinal mushroom, Ganoderma

lucidum (W.Curt.:Fr.) P. Karst. (Higher Basidiomycetes), by submerged

cultivation. International Journal of Medicinal Mushrooms 2013. 15(1):81-

90.

17. Baena S., Campos C. y Rojas G. Aguas residuales de la industria láctea:

naturaleza y composición de las aguas residuales. Revista Ambiente y

Desarrollo. Pontificia Universidad Javeriana. 1994. 2 (3): 83-93.

18. Boh B., Berovic M., Zhang J., Zhi-Bin L. Ganoderma lucidum and its

pharmaceutically active compounds. Rev. Biotechnoly. 2007. 13:265-301.

19. Echandi E. Manual de laboratorio para Fitopatología General; Instituto

Interamericano de Ciencias Agrícolas-Turrialba, Costa Rica. 1967. 44 p.

20. Kino k., Yamashita A., Yamaoka K., Watanabe J., Tanaka S., Shimizu K,

Tsunoo, H. Isolation and characterization of a new inmunomodulatory

protein, ling zhi-8, from Ganoderma lucidum. Biol. Chem. 1989. 264 (1):

472- 478.

21. García M, Villamizar L, Torres L, Cotes L. Efecto de subcultivos sucesivos

de Beauveria bassiana sobre sus características y actividad contra

Premnotrypes vorax. Manejo integrado de Plagas y Agroecología. 2006.

22. Raypeck V. Chemical composition of hemicellulose as a factor

participating in the substrate specificity of wood destroying fungi. Wood

Sci. Technol. 1977. 11 – 59 p.



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N

27

23. Van der Schans Valorización del suero. Universidad de Ciencias

Aplicadas del Occidente, Departamento de tecnología de alimentos,

Suiza. 2002.



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ANEXOS



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ANEXO 1. Esporas de Ganoderma spp.

Anexo 1. Se observa las esporas de Ganoderma spp. visto a 400x fue

teñido con azul de lactofenol (Fuente: Autor).



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30

ANEXO 2. Cultivo monospórico de Ganoderma spp.

ANEXO 3. Medios de cultivos líquidos CPD, CSD, CSL y CSLEL.



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ANEXO 4. Crecimiento radial de Ganoderma spp. a los 2 días (A), 8 días (B) y a los 14 días (C) (Fuente: Autor).

ANEXO 4. A. adverso y B. reverso de crecimiento radial en agar suero de leche de Ganoderma spp. a los 14 días (Fuente: Autor).

A B



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32

ANEXO 7. Medición de la biomasa del hongo Ganoderma spp.

ANEXO 5. Secado del hongo Ganoderma spp entre 70° y 80 ° por 10 minutos.



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33

ANEXO 6.Composición de los medios de cultivo utilizados en el presente

estudio.

AGAR PAPA DEXTROSA (APD)

Componentes Cantidad por litro

Infusión de papa 200 g

Dextrosa 20 g

Agar bacteriológico 15 g

Agua destilada C.S.P 1 000 mL

AGAR SUERO DE LECHE (ASL)



Suero de leche 1 000 mL

AGAR SUERO DE LECHE CON EXTRACTO DE LEVADURA (ASLEL)


Extracto de levadura 5 g





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AGAR SABOURAUD (ASD)


Agar Saburoad 3 g


CALDO SUERO DE LECHE (CSL)



CALDO PAPA DEXTROSA


Dextrosa 200 g

Papa 20 g




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CALDO SUERO DE LECHE CON EXTRACTO DE LEVADURA (CSLEL)


Extracto de levadura 10 g


CALDO SABOURAUD DEXTROSA (CSD)


Pectona 10 g

dextrosa 40 g




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ANEXO 7. Composición del suero de leche.

Fuente: Van der Schans.

ANEXO 8. Composición de la proteína del suero de leche.

PROTEÍNA CONCENTRACIÓN (g/L)

β-Lactoglobulina 3.2

a-Lactoalbúmina 1.2

Inmunoglobulinas 0.8

Lactoferrina 0.2

Lactoperoxidase 0.03

Fuente: Van der Schans.

COMPONENTE CONCENTRACIÓN

% de Agua 94- 95

% Grasa 0

% Proteína 0.9

% Lactosa 3.8 – 4.4

% Ácido Láctico 0.8

% Minerales 0.7 – 0.8

pH 4.5 – 5.0



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escuela acadÉmico profesional de microbiologia y

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